飼料中玉米赤霉醇類物質(zhì)的測定上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧獸醫(yī)辦公室提出。本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海市獸藥飼料檢測所。1DB31/T578—2011飼料中玉米赤霉醇類物質(zhì)的測定酮、玉米赤霉烯酮的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。為0.01mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3方法原理4試劑和材料除方法另有規(guī)定外，試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。4.4氫氧化鈉。4.590%(體積分?jǐn)?shù))乙腈水溶液：取乙腈900mL,加水定容至1000mL。4.60.005mol/L氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉0.2g,溶于1000mL水中。4.72%(體積分?jǐn)?shù))甲酸甲醇溶液：取甲酸2.0mL,加甲醇定容至100mL。4.850%(體積分?jǐn)?shù))乙腈水溶液：取乙腈250mL,加水定容至500mL。霉酮、玉米赤霉烯酮對照品，用甲醇配成濃度各約為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，2℃~8℃冷藏保存，有效期六個(gè)月。霉酮、玉米赤霉烯酮對照品貯備液各1mL,置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。該溶液中26種對照品濃度均為10μg/mL,于2℃~8℃冷藏保存，有效期一個(gè)月。水溶液(4.8)定容至刻度。該溶液中6種玉5儀器和設(shè)備5.4天平：感量0.01mg和0.01g。6試樣制備稱取試樣5g(±0.01g),置于50mL離心管中，加入90%乙腈水溶液(4.5)25.0mL,渦旋混合均8液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定8.1液相色譜條件柱溫：40℃。流動(dòng)相、流速及梯度洗脫條件見表1。3表1流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí)間乙腈%水%08.2質(zhì)譜條件離子源模式：電噴霧負(fù)離子模式(ESI-)。檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。離子源溫度：150℃。脫溶劑溫度：500℃。脫溶劑氣、錐孔氣均為高純氮?dú)?，碰撞氣為氬氣或其他合適氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求。錐孔電壓、碰撞電壓等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度。定性離子對及定量離子對見表2。表2定性、定量離子對及錐孔電壓、碰撞能量的參考值物質(zhì)名稱定性離子對定量離子對錐孔電壓V碰撞能量玉米赤霉烯酮a-玉米赤霉烯醇β-玉米赤霉烯醇玉米赤霉酮a-玉米赤霉醇β-玉米赤霉醇4選擇1個(gè)母離子、2個(gè)以上子離子，在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測物質(zhì)的保留時(shí)間與對照品工作液中對應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)，且樣品譜圖中各組分定性離子的相對離子豐度與濃度接近的對照品工作液中對應(yīng)的定性離子的相對離子豐度進(jìn)行比較，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差%相對離子豐度允許的最大偏差士30士50取試料溶液和對照添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，外標(biāo)法計(jì)算，即得。試料溶液和對照添加標(biāo)準(zhǔn)溶液中a-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的峰面積應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。玉米赤霉醇類物質(zhì)對照品的多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)色譜圖參見8.5回收率試驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)線性工作范圍為：0.01mg/kg～2.0mg/kg。陰性樣品中添加對照品工作液，按樣品制備步驟操作，測定后計(jì)算樣品添加的回收率。在濃度范圍內(nèi)的添加回收率為80%～120%。9對照試驗(yàn)取對照試料，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。求求式單點(diǎn)校準(zhǔn)：或?qū)φ仗砑訕?biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)：由A,=aX,+b,X——供試試料中玉米赤霉醇類物質(zhì)含量，單位為毫克每千克(mg/kg);X,——基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品濃度，單位為毫克每千克(mg/kg);A——供試試料中玉米赤霉醇類物質(zhì)相應(yīng)的峰面積；m,——基質(zhì)添加試料質(zhì)量，單位為克(g);A,——基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品中玉米赤霉醇類物質(zhì)相應(yīng)的峰面積；m——供試試料質(zhì)量，單位為克(g);n——稀釋倍數(shù)。注：單點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與待測樣品實(shí)際濃度的偏差應(yīng)小于30%,計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。5在同一實(shí)驗(yàn)室由同一操作人員完成的兩個(gè)平行測定的相對偏差不大于20%。6(資料性附錄)玉米赤霉醇類物質(zhì)對照品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜圖(MRM圖)玉米赤霉醇類6種對照品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜圖(MRM色譜圖)見圖A.1。04:MRMof2ChannelsES-2:MRMof3ChannelsES-6:MRMof2ChannelsES-3:MRMof3ChannelsE5:MRMof2Channels0000A.1玉米赤霉醇類物質(zhì)對照品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜圖(濃度為10ng/mL