微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案

PanzhihuaUniversity

教案

2011—2012學(xué)年度第一學(xué)期

課程名稱微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

學(xué)時(shí)(學(xué)分)22(L5)

適用班級(jí)2010級(jí)生物工程班

授課教師慕嵐

教師職務(wù)講師

教學(xué)單位生物與化學(xué)工程學(xué)院

教務(wù)處制

實(shí)驗(yàn)教案編寫說明

1、實(shí)驗(yàn)教案的編寫要求參照《攀枝花學(xué)院教案編寫規(guī)范》（攀院教

[2007]04號(hào)）執(zhí)行。

2、實(shí)驗(yàn)教案格式可按附后“實(shí)驗(yàn)教案”格式使用手寫或者打印。

3、實(shí)驗(yàn)教案的基本內(nèi)容可包含：教學(xué)目的與要求、教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)、

儀器設(shè)備及用具、教學(xué)過程（含①實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)檢查②實(shí)驗(yàn)原理及方法③

儀器設(shè)備介紹④實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及注意事項(xiàng)⑤實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)要點(diǎn)⑥檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)

果）、實(shí)驗(yàn)預(yù)做記錄（含①原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄②數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析）、

實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)要求、實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求、參考書目、后記等有關(guān)內(nèi)容。

4、實(shí)驗(yàn)教案編寫應(yīng)在堅(jiān)持教案編寫基本要求的基礎(chǔ)上，充分考慮教

師自身?xiàng)l件與學(xué)科的差異，針對(duì)教師、學(xué)科、學(xué)生與教學(xué)情景的不一

致，編寫出形式多樣，能表達(dá)教學(xué)風(fēng)格、具有特色的教案，促進(jìn)教案

的創(chuàng)新。

5、教案編寫水平的高低，很大程度上取決于教師鉆研教材與實(shí)驗(yàn)方

法，研究學(xué)生實(shí)際狀況與設(shè)計(jì)教學(xué)方法的水平，取決于教師對(duì)本學(xué)科

知識(shí)掌握的深度與廣度與教師教育思想的端正更新。因此，教師應(yīng)努

力提高自身素養(yǎng)，提高教師教案編寫水平。

實(shí)驗(yàn)教案

J獨(dú)立設(shè)課

實(shí)驗(yàn)課程名稱微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)22

口非獨(dú)立設(shè)課

實(shí)驗(yàn)課類別1.基礎(chǔ)口2.專業(yè)基礎(chǔ)J3.專業(yè)口4.其它口

任課教師曹慕嵐職稱講師

，本科

授課對(duì)象年級(jí)：2010級(jí)專業(yè)：生物工程班級(jí)：

口?？?/p>

教材：

沈萍等主編.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].高等教育出版社.2006年.

教材

要緊參考資料：

與

1、焦瑞身，周德慶主編.微生物生理代謝實(shí)驗(yàn)技術(shù).科學(xué)出版社.

要緊參考資料

2、范秀容，李廣武.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第二版）.高等教育出版社

3、周德慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè).上?？茖W(xué)技術(shù)出版社.

教學(xué)目的與掌握顯微技術(shù)、接種技術(shù)、滅菌技術(shù)、菌種培養(yǎng)與保臧等方面的基本概

教學(xué)要求念、基本理論與基本技能，為今后學(xué)習(xí)專業(yè)方向課奠定必要的基礎(chǔ)。

教學(xué)重點(diǎn)與重點(diǎn)：各類微生物學(xué)的基本實(shí)踐技術(shù)

教學(xué)難點(diǎn)難點(diǎn)：各類微生物學(xué)的基本實(shí)踐技術(shù)

教學(xué)進(jìn)程安排

課次實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（實(shí)驗(yàn)內(nèi)容）學(xué)時(shí)備注

1顯微鏡使用、細(xì)菌簡單染色及革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)4

2放線菌、霉菌形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)4

3酵母菌形態(tài)觀察與大小測(cè)定實(shí)驗(yàn)4

4細(xì)菌培養(yǎng)基配制細(xì)菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)6

5實(shí)驗(yàn)考試4

實(shí)驗(yàn)教案

課題（項(xiàng)目）名稱：顯微鏡使用、細(xì)菌簡單染色及革蘭氏染色計(jì)劃學(xué)時(shí)：4

實(shí)驗(yàn)類型：1.演示性口2.驗(yàn)證性V3.綜合性口4.設(shè)計(jì)性口5.其它口

授課日期：2012年4月3日第二周星期二第5/6/7/8節(jié)

實(shí)驗(yàn)一顯微鏡使用、細(xì)菌簡單染色及革蘭氏染色

一、目的要求

1、學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理與使用方法

2、復(fù)習(xí)普通臺(tái)式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能與使用方法

3、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)

4、掌握細(xì)菌的簡單染色法

5、初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征

6、鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法與無菌操作技術(shù)

7、學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法

8、熟悉革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性

二、基本原理

1、顯微鏡的工作原理：

普通光學(xué)顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器。以往最簡單的顯微鏡僅由兒塊透鏡構(gòu)成，而當(dāng)前

使用的顯微鏡由一套透鏡構(gòu)成，普通光學(xué)顯微鏡通常能將物體放大1500—2000倍。普通光學(xué)顯

微鏡的構(gòu)造可分為兩大部分：一為機(jī)械裝置，一為光學(xué)系統(tǒng)。在顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中物鏡的性

能直接影響顯微鏡的分辨率。

2、細(xì)菌簡單染色及革蘭氏染色的基本原理：

用于生物染色的染料要緊有堿性染料、酸性染料與中性染料三大類。堿性染料的離子帶正

電荷，能與帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低，當(dāng)它生長于中性、堿性或者弱酸

性的溶液中經(jīng)常帶負(fù)電荷，因比通常使用堿性染料（如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅或者孔雀綠等）

使其著色。酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶止電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)

基四下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或者剛果紅等酸性染料著色。中

性染料是前兩者的結(jié)合物乂稱復(fù)合染料，如伊紅美藍(lán)、伊紅天青等。

簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)，簡單染色不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。

革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌

區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）與革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。

該染色法因此能將細(xì)菌分為G+菌與G—菌，是由這兩類菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與成分的不一致所決定

的。G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙

醇或者丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物易于

滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，

類脂質(zhì)

含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的

顏色。

三、器材

1、活材料：

培養(yǎng)12T6h枯草桿菌（Bacillussubtilis）

2、染色液與試劑：

結(jié)晶紫（附二、（一）、3）、盧哥氏碘液（附二、（一）、4）、95%酒精、蕃紅（附二、（一）、

5）、復(fù)紅（附二（一）、2）、二甲苯、香柏油

3、器材：

廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡

四、操作步驟

1、顯微鏡的使用

（1）觀察前的準(zhǔn)備

1）顯微鏡從顯微鏡柜或者鏡箱內(nèi)拿出時(shí)，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩(wěn)地將顯

微鏡搬運(yùn)到實(shí)驗(yàn)桌上。

2）將顯微鏡放在自己身體的左前方，離桌子邊緣約10cm左右，右側(cè)可放記錄本或者繪圖

紙。

3）調(diào)節(jié)光照不帶光源的顯微鏡，可利用燈光或者自然光通過反光鏡來調(diào)節(jié)光照，但不能

用直射陽光，直射陽光會(huì)影響物像的清晰并刺激眼睛。

將10X物鏡轉(zhuǎn)入光孔，將聚光器上的虹彩光圈打開到最大位置，用左眼觀察目鏡中視野的

亮度，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使視野的光照達(dá)到最明亮最均勻?yàn)橹?。光線較強(qiáng)時(shí)，用平面反光鏡，光線

較弱時(shí)，用凹面反光鏡。自帶光源的顯微鏡，可通過調(diào)節(jié)電流旋鈕來調(diào)節(jié)光照強(qiáng)弱，

4）調(diào)節(jié)光軸中心顯微鏡在觀察時(shí)，其光學(xué)系統(tǒng)中的光源、聚光器、物鏡與目鏡的光軸及

光闌的中心務(wù)必跟顯微鏡的光軸同在一直線上。帶視場(chǎng)光闌的顯微鏡，先將光闌縮小，用WX

物鏡觀察，在視場(chǎng)內(nèi)可見到視場(chǎng)光闌圓球多邊形的輪廓像，如此像不在視場(chǎng)中央，可利用聚光

器外側(cè)的兩個(gè)調(diào)整旋鈕將其調(diào)到中央，然后緩慢地將視場(chǎng)光闌打開，能看到光束向視場(chǎng)周緣均

勻展開直至視場(chǎng)光闌的輪廓像完全與視場(chǎng)邊緣內(nèi)接，說明光線己經(jīng)合軸。

（2）低倍鏡觀察

鏡檢任何標(biāo)本都要養(yǎng)成務(wù)必先用低倍鏡觀察的習(xí)慣。由于低倍鏡視野較大，易于發(fā)現(xiàn)目標(biāo)

與確定檢查的位置。

將標(biāo)本片放置在載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，移動(dòng)推動(dòng)器，使被觀察的標(biāo)本處在物鏡正下方,

轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)旋鈕，使物鏡調(diào)至接近標(biāo)本處，用目鏡觀察并同時(shí)用粗調(diào)節(jié)旋鈕慢慢升起鏡筒（或

者下降載物臺(tái)），直至物像出現(xiàn)，再用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕使物像清晰為止。用推動(dòng)器移動(dòng)標(biāo)本片，找

到合適的目的像并將它移到視野中央進(jìn)行觀察。

（3）高倍鏡觀察

在低倍物鏡觀察的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)換高倍物鏡。較好的顯微鏡，低倍、高倍鏡頭是同焦的，在正

常情況下，高倍物鏡的轉(zhuǎn)換不應(yīng)碰到載玻片或者其上的蓋玻片。若使用不一致型號(hào)的物鏡，在

轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)要從側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。然后從目鏡觀察，調(diào)節(jié)光照，使亮度適中，

緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)旋鈕，使載物臺(tái)上升（或者鏡筒下降），直至物像出現(xiàn)，再用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至

物像清晰為止，找到需觀察的部位，并移至視野中央進(jìn)行觀察。

（4）油鏡觀察

油浸物鏡的工作距離（指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離）很短，通常在0.2mm

以內(nèi)，再加上通常光學(xué)顯微鏡的油浸物鏡沒有“彈簧裝置”，因此使用油浸物鏡時(shí)要特別細(xì)心,

避免由于“調(diào)焦”不慎而壓碎標(biāo)本片并使物鏡受損。

使用油鏡按下列步驟操作：

1）先用粗調(diào)節(jié)旋鈕將鏡筒提升（或者將載物臺(tái)下降）約2cm,并將高倍鏡轉(zhuǎn)出。

2）在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。

3）從側(cè)面凝視，用粗調(diào)節(jié)旋鈕將載物臺(tái)緩緩地上升，（或者鏡筒下降），使油浸物鏡浸入香柏

油中，使鏡頭幾乎與標(biāo)本接觸，

4）從接目鏡內(nèi)觀察，放大視場(chǎng)光闌及聚光鏡上的虹彩光圈（帶視場(chǎng)光闌油鏡開大視場(chǎng)光闌），

上調(diào)聚光器，使光線充分照明，用粗調(diào)節(jié)旋鈕將載物臺(tái)徐徐下降（或者鏡筒上升），當(dāng)出現(xiàn)物

像一閃后改用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最清晰為止。如油鏡已離開油面而仍未見到物象，務(wù)必再從側(cè)面

觀察，重復(fù)上述操作。

5）觀察完畢，下降載物臺(tái)，將油鏡頭轉(zhuǎn)出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙

酸酒精混合液（乙醛2份，純酒精3份）或者二甲苯，擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙

擦拭2—3下即可，（注意向一個(gè)方向擦拭）。

6）將各部分還原，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺(tái)通光孔相對(duì)，而是成八字形位置，再

將鏡筒下降至最低，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，用一個(gè)干凈手帕將接目鏡罩好，以免

目鏡頭沾污灰塵。最后用柔軟紗布清潔載物臺(tái)等機(jī)械部分，然后將顯微鏡放回柜內(nèi)或者鏡箱中。

2、簡單染色：

（1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴蒸鐳水，按無菌操作法取菌涂片，

左邊涂蘇云金桿菌，右邊涂大揚(yáng)桿菌，做成濃菌液。再取干凈載玻片一塊將剛制成的蘇云金桿

菌濃菌液挑2-3環(huán)涂在左邊制成薄的涂面，將大腸桿菌的濃菌液取2-3環(huán)涂在右邊制成薄涂面。

亦可直接在載玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。

（2）晾干：讓涂片自然晾干或者者在酒精燈火焰上方文火烘干。

（3）固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）

（4）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加復(fù)紅染色l-2min0

（5）水洗：用水洗去涂片上的染色液

（6）干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或者用吸水紙吸干。

（7）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏

油一滴，將油鏡頭浸入油滴中認(rèn)真調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)“

3、革蘭氏染色：

（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。

（2）晾干：與簡單染色法相同。

（3）固定，與簡單染色法相同

（4）結(jié)晶紫色染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上，加適量（以蓋滿細(xì)菌涂面）的結(jié)晶紫染色

液染色1分鐘。

（5）水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。

（6）媒染:滴加盧哥氏碘液,媒染bnin。

（7）水洗：用水洗去碘液。

（8）脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色，立即水洗。

（9）復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染5min。

（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液。

（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者者用吸水紙吸干。

（12）鏡檢：鏡檢時(shí)先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并推斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性。

（13）實(shí)驗(yàn)完畢后的處理：

①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少

許二甲苯將鏡頭擦2—3次。c,再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次。注意擦鏡頭時(shí)向一個(gè)方向

擦拭。

②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

給出菌的形態(tài)圖，并注明菌的單蘭氏染色的反應(yīng)性。

六、注意事項(xiàng)

1.搬動(dòng)顯微鏡時(shí)，要一手握鏡臂，一手扶鏡座，兩上臂緊靠胸壁。切勿一手斜提，前后擺動(dòng)，

以防鏡頭或者其他零件跌落。

2.觀察標(biāo)本時(shí)，顯微鏡離實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣應(yīng)保持一定距離（5cm）,以免顯微鏡翻倒落地。鏡柱與鏡臂

間的傾斜角度不得超過45度，用完立即還原。

3.使用時(shí)要嚴(yán)格按步驟操作，熟悉顯微鏡各部件性能，掌握粗、細(xì)調(diào)節(jié)鈕的轉(zhuǎn)動(dòng)方向與鏡筒升

降關(guān)系。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)鈕向下時(shí)，眼睛務(wù)必凝視物鏡頭，

4.觀察帶有液體的臨時(shí)標(biāo)本時(shí)要加蓋片，不能使用傾斜關(guān)節(jié)，以免液體污染鏡頭與顯微鏡。

5.粗、細(xì)調(diào)節(jié)鈕要配合使用，細(xì)調(diào)節(jié)鈕不能單方向過度旋轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)焦距時(shí)，要從側(cè)面凝視鏡筒

下降，以免壓壞標(biāo)本與鏡頭。

6.用單筒顯微鏡觀察標(biāo)本，應(yīng)雙眼同時(shí)睜開，左眼觀察物像，右眼用以繪圖，左手調(diào)節(jié)焦距，

右手移動(dòng)標(biāo)本或者繪圖。

7.禁止隨意擰開或者調(diào)換目鏡、物鏡與聚光器等零件v

8.顯微鏡光學(xué)部件有污垢，可用擦鏡紙或者綢布擦凈，刃勿用手指、粗紙或者手帕去擦，以防

損壞鏡面。

9.凡有腐蝕性與揮發(fā)性的化學(xué)試劑與藥品，如碘、乙醇溶液、酸類、堿類等都不可與顯微鏡接

觸，如不慎污染時(shí)，應(yīng)立即擦干凈。不要任意取下目鏡，防備灰塵落入鏡筒。

10.使用油鏡觀察樣品后，隨即用二甲苯將油鏡鏡頭與載波片擦凈，以防其他的物鏡玻璃上沾

上香柏油。二甲苯有毒，使用后馬上洗手。

11.實(shí)驗(yàn)完畢，要將玻片取出，用擦鏡紙將鏡頭擦拭干凈后移開，不能與通光孔相對(duì)。用綢布

包好，放回鏡箱。切不可把顯微鏡放在直射光線下曝曬。

12.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌;

如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽性菌。脫色時(shí)間的長短還受涂片厚薄及

乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。

13.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去織片上的殘水，以免染色液被稀釋而影

響染色效果。

14.選用幼齡的細(xì)菌。G十菌培養(yǎng)12h-16h,E.coli培養(yǎng)24h。若菌齡太老，由于菌體死亡或者自

溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。

七、思考題

1、為什么要求制片完全干燥后才能使用油鏡？

2、假如你的涂片未經(jīng)熱固定，將會(huì)出現(xiàn)什么問題？假如加熱溫度過高、時(shí)間太長，又會(huì)如何呢？

實(shí)驗(yàn)教案

課題（項(xiàng)目）名稱：放線菌、霉菌形態(tài)觀察計(jì)劃學(xué)時(shí)：4

實(shí)驗(yàn)類型：1.演示性口2.驗(yàn)證性V3.綜合性口4.設(shè)計(jì)性口5.其它口

授課日期：2012年4月10日第2周星期二第5/6/7/8節(jié)

實(shí)驗(yàn)二放線菌、霉菌形態(tài)觀察

一、目的與要求

1、學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法

2、初步熟悉放線菌及四種常見霉菌的基本形態(tài)特征

二、基本原理

1、放線菌形態(tài)觀察

放線菌自然生長的個(gè)體形態(tài)的觀察現(xiàn)多用玻璃紙瓊脂透析培養(yǎng)法。

玻璃紙具有半透膜特性，其透光性與載玻片基本相同，使用玻璃紙瓊脂平板透析培養(yǎng)，能

使放線菌生長在玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取小片，貼放在載玻片上，用顯微鏡鏡檢可

見到放線菌自然生長的個(gè)體形態(tài)。

使用插片培養(yǎng)法也能觀察放線菌的個(gè)體形態(tài)。

2、霉菌形態(tài)觀察

霉菌的營養(yǎng)體是分枝的絲狀體。其個(gè)體比細(xì)菌與放線菌大得多，分為基內(nèi)菌絲與氣生菌絲。

氣生菌絲中又可分化出繁殖絲，不一致霉菌的繁殖菌絲能夠形成不一致的抱子。

霉菌菌絲較粗大，細(xì)胞易收縮變形，且抱子容易飛散，因此制標(biāo)本經(jīng)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)

染色液。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片的特點(diǎn)是：細(xì)胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥,

能保持較長時(shí)間，溶液本身呈藍(lán)色，有一定染色效果。

利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料，能夠得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形

態(tài)；也能夠直接挑取生長在平板中的霉菌菌體制水浸片觀察。

三、器材

1、活材料：

培養(yǎng)5-7天的紫色直絲鏈霉菌(Streptomycesviolaceorectus)的斜面菌種、吸水鏈霉菌

5102(Streptomyceshygroscopicusvar.Yingchengensis(5102))斜面菌種；在馬鈴薯瓊脂平

板上或者用玻璃紙透析培養(yǎng)法培養(yǎng)3—4天的根霉(Rhizpussp.)、青霉(Penicillumsp.)、

曲霉(.Aspergillussp.)。

2、培養(yǎng)基：

高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基(見附錄一、10)

3、染色液與試劑：

乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液(附錄二、(一)、10)、50%酒精(V/V)。

4、器材：

剪刀、鎰子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡、無菌平皿、玻璃紙、9ml無菌水若干支、

酒精燈、火柴、接種環(huán)、玻璃利鏟、1ml無菌吸管、載玻片。

四、操作步驟

U放線菌形態(tài)觀察

（1）將玻璃紙剪成培養(yǎng)皿大小，用舊報(bào)紙隔層疊好后滅菌。

（2）將放線菌斜面菌種制成10-3的抱子懸液。

（3）將高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基熔化后在火焰旁倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿倒15ml左右，待培養(yǎng)基

凝固后，在無菌操作下用鑲子將無菌玻璃紙履蓋在瓊脂平板上即制成玻璃紙瓊脂平板培養(yǎng)基。

（4）分別用1ml無菌吸管取0.2ml吸水鏈霉菌（5102）泡子懸液，紫色直絲鏈霉菌抱子懸液分

別滴加在兩個(gè)玻璃紙瓊脂平板培養(yǎng)基上，并用無菌玻璃曲鏟涂抹均勻。

（5）將接種的玻璃紙瓊脂平板置28—30℃下培養(yǎng).

（6）在培養(yǎng)至3天，5天，7天時(shí)，從溫室中取出平皿。在無菌環(huán)境下。打開培養(yǎng)皿，用無菌

鐐子將玻璃紙與培養(yǎng)基分離，用無菌剪刀取小片置于載坂片上用顯微鏡觀察。

2、霉菌形態(tài)觀察

使用制水浸制片觀察法

在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液或者蒸儲(chǔ)水，用解剖針從生長有霉菌的平板中

挑取少量帶有抱子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸饋水將浸過的菌絲洗一下，然后放入

載坂片上的液滴中，認(rèn)真地用解剖針將菌絲分散開來。蓋上蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再

移利蓋玻片），先用低倍鏡，必要時(shí)轉(zhuǎn)換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結(jié)果。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、繪出放線菌自然生長的個(gè)體形態(tài)圖。

2、給出根霉、青霉、曲霉的個(gè)體形態(tài)圖，并注明各部位名稱。

六、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、倒平板要厚一些，接種時(shí)劃線要密。

2、插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。

3、觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。

4、假如用0.1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。

七、思考題

1、為什么在培養(yǎng)基上放了玻璃紙后，放線菌仍能生長？

2、說檢時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲與氣生菌絲？

3、你認(rèn)為霉菌與放線菌菌絲的要緊區(qū)別是什么？

實(shí)驗(yàn)教案

課題（項(xiàng)目）名稱：酵母菌形態(tài)觀察與大小測(cè)定計(jì)劃學(xué)時(shí)：4

實(shí)驗(yàn)類型：1.演示性口2.驗(yàn)證性V3.綜合性口4.設(shè)計(jì)性口5.其它口

授課日期：2012年4月17日第一周星期二第5/6/7/8節(jié)

實(shí)驗(yàn)三酵母菌形態(tài)觀察與大小測(cè)定

一、目的與要求

1、觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法

2、掌握酵母菌的通常形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別

3、熟悉目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造與使用原理，掌握微生物細(xì)胞大小的測(cè)定方法

二、基本原理

1、關(guān)于形態(tài)觀察的原理

本實(shí)驗(yàn)是通過美藍(lán)染液水受片與水-碘液水浸片老觀察酵母的形態(tài)。

用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能

力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的,

而死細(xì)胞或者代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則是藍(lán)色或者淡藍(lán)色。

2、關(guān)于細(xì)胞大小測(cè)定的原理

微生物細(xì)胞大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的根據(jù)之一。微生物大小測(cè)定，

需在顯微鏡，借助特殊的測(cè)量工具一一目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有

精確等分線的載玻片，目鏡測(cè)微尺是塊可放入接口鏡內(nèi)心圓形小玻片，測(cè)量時(shí)，需將其放在接

目鏡中心的隔板上，用以測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。

球菌用直徑來表示大小，桿菌則用寬與長的范圍來表示。

目鏡測(cè)微尺

三、實(shí)驗(yàn)器材

1、菌種

釀酒酵母

2、試劑

0.05%與0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液，革蘭氏染色液用碘液。

3、儀器或者其他用具

顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片等

四、操作步驟

1、美藍(lán)浸片的觀察

(1)按無菌操作取少量酵母菌與0.1%呂式堿性美藍(lán)染色液混合均勻，放置約3mir后，先用低

倍鏡后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)與出芽情況，并用顏色區(qū)別死活細(xì)胞。

(2)染色0.5h后再次觀察，注意死細(xì)胞是否增加。

(3)用0.05%呂式堿性美藍(lán)染色液重復(fù)上述操作。

2.水一碘液浸片的觀察：

先滴加碘液后加水，取少量酵母菌混合均勻，蓋上蓋玻片觀察。

3、細(xì)胞大小的測(cè)定

(1)取一滴醉母菌菌懸液制成水浸片或者HD-1菌懸液。

(2)移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)

微尺來測(cè)量酵母菌(或者HDT)菌體的長，寬各占幾格(不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位

數(shù))，測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長與寬。通常測(cè)量菌體的大小要

在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10—2C個(gè)菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且通常是用對(duì)數(shù)

生長期的菌體進(jìn)行測(cè)定。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征，并測(cè)定其大小。

六、注意事項(xiàng)

1、加染液不宜過多或者過少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液會(huì)溢出或者出現(xiàn)大量氣泡而影響觀

察。

2、蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。

3、注意日測(cè)尺與物測(cè)尺的關(guān)系。

4、注意區(qū)分酵母菌的假絲狀體。

七、思考題

1.呂式堿性美藍(lán)染液濃度與作用時(shí)間的不一致，對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原

因？

2.在顯微鏡下，酵母菌有什么突出的特征區(qū)別于通常細(xì)菌？

實(shí)驗(yàn)教案

課題(項(xiàng)目)名稱：細(xì)菌培養(yǎng)基配制細(xì)菌的培養(yǎng)計(jì)劃學(xué)時(shí):6

實(shí)驗(yàn)類型：1.演示性口2.驗(yàn)證性口3.綜合性V4,設(shè)計(jì)性口5.其它口

授課H期：20日年4月24日第十周星期二第5/6/7/8/9/10節(jié)

實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌培養(yǎng)基配制細(xì)菌的培養(yǎng)

一、目的要求

I.明確細(xì)菌培養(yǎng)基的配制原理；

2.通過對(duì)培養(yǎng)基的配制，掌握配制細(xì)菌培養(yǎng)基的通常方法與步驟：

3.熟悉細(xì)菌在細(xì)菌培養(yǎng)基上的培養(yǎng)過程。

二、基本原理

培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或者積存代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離

鑒定、儲(chǔ)存各類微生物或者積存代謝產(chǎn)物。牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛與最普通的

細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有牛肉膏、蛋白月東與氯化鈉。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸

鹽與維生素，蛋白陳要緊提供氮源與維生素，而氯化鈉提供無機(jī)鹽。

牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基的配方如下：

牛肉膏3.0g

蛋白陳10.0g

NaCl5.0g

水1000ml

PH7.4-7.6

三、器材

1.菌種、溶液或者試劑

瓊脂，Imol/LNaOH,Imol/LHCI；

牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。

2.儀器或者其他用具

試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，天平，牛角匙，高壓蒸氣滅菌鍋，pH

試紙(pH5.5?9.0),棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。

四、操作步驟

1.稱量

按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白月東、NaCl放入燒杯中。牛肉骨常用玻棒挑

取，放在小燒杯或者表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接

放入水中，這時(shí)如略微加熱，牛肉膏便會(huì)與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白陳很易吸潮,

在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或者稱取一

種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。

2.溶化

在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。

待藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積。假如配制固體培養(yǎng)基，將稱好的瓊脂放入已溶

化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最

后補(bǔ)足所失的水分。

3.調(diào)pH

在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH值，假如pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基

中逐滴加入Imol/LNaOH,邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH值，直至pH達(dá)7.6。反之,

則用Imol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各

離子的濃度。

關(guān)于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計(jì)進(jìn)行

4.過濾

趁熱用濾紙或者多層紗布過濾，以利結(jié)果的觀察。通常無特殊要求的情況下，這一步能夠