ICS11.220

B41

備案號(hào)54121—2017

:

上海市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB31/T1003—2016

H7N9亞型流感病毒熒光RT-PCR

檢測(cè)方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofinfluenza

virussubtypeH7N9

2016-08-22發(fā)布2016-12-01實(shí)施

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB31/T1003—2016

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧獸醫(yī)辦公室提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉佩紅周錦萍鞠厚斌楊德全王建張維誼劉健葛菲菲李鑫李凱航

:、、、、、、、、、、

楊顯超鄧波吳秀娟

、、。

Ⅰ

DB31/T1003—2016

H7N9亞型流感病毒熒光RT-PCR

檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了亞型流感病毒的熒光檢測(cè)方法

H7N9RT-PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于禽類及其產(chǎn)品中亞型流感病毒核酸的檢測(cè)

H7N9。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

3原理

本方法是根據(jù)流感病毒的血凝素基因基因和神經(jīng)氨酸酶基因基因保守序列分別設(shè)

(HA)(NA),

計(jì)一對(duì)特異性引物和一條特異性的熒光標(biāo)記探針在反應(yīng)體系中含有對(duì)應(yīng)的流感病毒基因和或

,HA/

基因的情況下反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)利用儀器對(duì)過程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度

NA,PCR。PCR

進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析

,。

4設(shè)備和器材

41可檢測(cè)和熒光的實(shí)時(shí)熒光儀

.FAMHEXPCR。

42臺(tái)式冷凍離心機(jī)離心速度g以上

.(12000)。

43渦旋混勻器

.。

44精密天平

.(0.001g)。

45冰箱

.(2℃~8℃、-20℃、-70℃)。

46可調(diào)移液器及配套帶濾芯吸頭

.(2μL、10μL、100μL、200μL、1mL)。

47離心管光學(xué)反應(yīng)管

.(1.5mL)、PCR。

5試劑

51除特別說明以外本標(biāo)準(zhǔn)所用的試劑均為分析純實(shí)驗(yàn)室用水符合中二級(jí)水要求所

.,,GB/T6682。

有試劑用無酶污染的容器用水處理后高壓滅菌分裝

RNA(DEPC)。

52引物與探針