標(biāo)準(zhǔn)解讀

《DB32/T 3802-2020 南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)方法》是一項(xiàng)地方標(biāo)準(zhǔn)，由江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布，旨在規(guī)范南美白對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）中肝腸胞蟲(chóng)（Enterocytozoon hepatopenaei, EHP）的巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Nested PCR）檢測(cè)流程。該標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域內(nèi)對(duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行EHP感染情況監(jiān)測(cè)時(shí)使用。

標(biāo)準(zhǔn)首先定義了相關(guān)術(shù)語(yǔ)和定義，包括但不限于南美白對(duì)蝦、肝腸胞蟲(chóng)以及巢式PCR技術(shù)等關(guān)鍵概念。接著詳細(xì)描述了實(shí)驗(yàn)所需材料與試劑，如DNA提取試劑盒、特定引物序列等，并指出了這些材料的質(zhì)量要求及來(lái)源信息。

對(duì)于樣品采集部分，《DB32/T 3802-2020》給出了具體指導(dǎo)原則，包括采樣部位的選擇、樣本保存條件等細(xì)節(jié)。此外，還特別強(qiáng)調(diào)了在處理生物樣品過(guò)程中應(yīng)遵循的安全操作規(guī)程，以確保人員健康不受威脅。

在核心的操作步驟上，本標(biāo)準(zhǔn)分步介紹了從組織樣本到最終結(jié)果判定的整個(gè)過(guò)程。這包括了DNA的提取方法、第一次PCR擴(kuò)增條件設(shè)置、第二次PCR擴(kuò)增前的產(chǎn)物稀釋比例、電泳分析參數(shù)設(shè)定等內(nèi)容。每一步驟都附有詳細(xì)的參數(shù)說(shuō)明和技術(shù)要點(diǎn)提示，幫助實(shí)驗(yàn)室工作人員準(zhǔn)確執(zhí)行。

最后，《DB32/T 3802-2020》還提供了質(zhì)量控制方面的建議，比如通過(guò)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照來(lái)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性；同時(shí)推薦定期參加外部質(zhì)控項(xiàng)目或與其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)測(cè)試，以持續(xù)改進(jìn)檢測(cè)水平。

此標(biāo)準(zhǔn)為南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)提供了一套科學(xué)合理、操作性強(qiáng)的EHP檢測(cè)方案，有助于提高疾病防控能力，保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全。


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....

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  • 2020-05-25 頒布
  • 2020-06-25 實(shí)施
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DB32/T 3802-2020南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)方法_第1頁(yè)
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DB32/T 3802-2020南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)方法-免費(fèi)下載試讀頁(yè)

文檔簡(jiǎn)介

ICS65150

B51.

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3802—2020

南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR檢測(cè)方法

()

DetectionofEnterocytozoonhepatopenaeiinLitopenaeusvannameibynestedPCR

2020-05-25發(fā)布2020-06-25實(shí)施

江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3802—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位江蘇省海洋水產(chǎn)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人萬(wàn)夕和沈輝喬毅史文軍王李寶黎慧蔣葛成婕范賢平

:、、、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3802—2020

南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR檢測(cè)方法

()

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了南美白對(duì)蝦Litopenaeusvannamei肝腸胞蟲(chóng)Enterocytozoonhepatopenaei

()(,EHP)

巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)方法的原理試劑材料儀器設(shè)備操作步驟

(polymeraswchainreation,PCR)、、、

和結(jié)果判定

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于南美白對(duì)蝦樣品中肝腸孢蟲(chóng)帶蟲(chóng)情況的高靈敏定性檢測(cè)

。

其他環(huán)境生物和餌料生物以及非生物樣品中肝腸胞蟲(chóng)帶蟲(chóng)情況檢測(cè)可參照此方法

,。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒檢測(cè)法

GB/T25878—2010(IHHNV)PCR

斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒病診斷規(guī)程第部分檢測(cè)法

SC/T7202.2—20072:PCR

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

肝腸胞蟲(chóng)Enterocytozoonhepatopenaei

一種感染對(duì)蝦肝胰腺腸道等器官的微孢子蟲(chóng)可致南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢養(yǎng)殖產(chǎn)量嚴(yán)重下降

、,,。

4技術(shù)原理

南美白對(duì)蝦肝腸胞蟲(chóng)巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)方法是以樣品為模板針對(duì)其胞壁蛋

(PCR)DNA,

白基因設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性巢式寡核苷酸序列為引物在四種脫氧核糖苷三磷酸存在下利用聚合酶

,,DNA

的合成作用經(jīng)過(guò)先后兩步數(shù)十次變性退火和延伸的反應(yīng)循環(huán)使模板上介于兩對(duì)引物間的片

,、,DNA

段得到特異性巢式擴(kuò)增通過(guò)電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段是否存在

,。

5試劑材料

51在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的化學(xué)試劑

.。

52實(shí)驗(yàn)用水為無(wú)菌蒸餾水或超純水

.。

53無(wú)水乙醇

.

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