PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理新冠防控形勢核酸檢測新冠病毒新型變異株不斷出現(xiàn)，傳染性和傳播力增強(qiáng)。新冠疫情與流感等呼吸道傳染病出現(xiàn)疊加流行的風(fēng)險(xiǎn)增加，要求檢測的準(zhǔn)確度、靈敏度高。生物安全防護(hù)要求高。出報(bào)告的速度要求快實(shí)驗(yàn)結(jié)果把握不準(zhǔn)

采樣

試劑

人員

環(huán)境等實(shí)驗(yàn)室污染

防污染意識(shí)不夠人員培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境：通風(fēng)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

問題核酸檢測質(zhì)量保證面臨諸多挑戰(zhàn)新冠防控形勢與核酸檢測目錄CONTENTS01020304全面質(zhì)量管理的概念質(zhì)量體系文件的建立人員培訓(xùn)的質(zhì)量保證檢測過程的質(zhì)量控制PART

1全面質(zhì)量管理的概念COMPANYINTRODUCTION臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制理念演化01室間質(zhì)評：為客觀比較一實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。02室內(nèi)質(zhì)控：由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，目的在于監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定檢測結(jié)果是否可靠、報(bào)告是否可發(fā)出的一項(xiàng)工作。03全過程質(zhì)量管理臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制理念質(zhì)量管理要素質(zhì)量管理要素人機(jī)環(huán)測料法人員能力Man/manpower儀器設(shè)備Machine試劑材料Material試劑材料Material試劑材料Material試劑材料Material方法學(xué)、SOPMethod方法學(xué)、SOPMethod環(huán)境設(shè)施Environment測量時(shí)使用的方法標(biāo)準(zhǔn)、正確？Measurement料法PART

2質(zhì)量體系文件的建立COMPANYINTRODUCTION

質(zhì)量管理精髓

如何編寫質(zhì)量管理體系文件1、寫你應(yīng)該做的2、做你所寫的3、記錄你已做的4、分析你已做的ISO5189實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理ISO15189實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理質(zhì)量管理體系文件

文件編寫的參照和原則

文件編寫的參照和原則文件編寫的參照和原則SOP文件涉及的內(nèi)容文件編寫的參照和原則SOP的目的、應(yīng)用范圍文件編寫的參照和原則儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)的SOP

文件編寫的參照和原則標(biāo)本采集、運(yùn)送、保存SOP內(nèi)容

文件編寫的參照和原則檢測項(xiàng)目SOP內(nèi)容檢測項(xiàng)目SOP關(guān)鍵的核心在于操作步驟，越具體越好

文件編寫的參照和原則

文件編寫的參照和原則

文件編寫的參照和原則

文件編寫的參照和原則

文件編寫的參照和原則如何使用和管理SOP文件

文件編寫的參照和原則第四層文件

實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室記錄表單

PCR實(shí)驗(yàn)室記錄表單

質(zhì)量管理“六字決”文件執(zhí)行記錄PART

3人員培訓(xùn)的質(zhì)量保證COMPANYINTRODUCTION

人員培訓(xùn)“理論培訓(xùn)、技能操作、工作實(shí)踐”三駕馬車保駕護(hù)航人員配置能力與數(shù)量滿足開展檢測需求制定適宜的培訓(xùn)計(jì)劃，培訓(xùn)要有詳細(xì)記錄，分析考核成績不僅包括外部培訓(xùn)更要重視內(nèi)部培訓(xùn)定期進(jìn)行能力評估

人員培訓(xùn)對內(nèi)對外

人員資質(zhì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊(試行第二版)

為落實(shí)國務(wù)院應(yīng)對新型冠狀病毒感染肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制《關(guān)于做好新冠肺炎疫情常態(tài)化防控工作的指導(dǎo)意見》(國發(fā)明電(2020)14號(hào))要求，進(jìn)一步規(guī)范新型冠狀病毒(以下簡稱新冠病毒)核酸檢測的技術(shù)人員、標(biāo)本單采、標(biāo)本混采、標(biāo)本管理、實(shí)驗(yàn)室檢測、結(jié)果報(bào)告等工作，保證檢測質(zhì)量，提高檢測效率，滿足新冠病毒核酸檢測需求，特制定本手冊。本手冊適用于所有開展新冠病毒核酸檢測的醫(yī)療機(jī)構(gòu)。一、技術(shù)人員基本要求(一)采樣人員。從事新冠病毒核酸檢測標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)過生物安全培訓(xùn)(培訓(xùn)合格)，熟悉標(biāo)本種類和采集方法，熟練掌握標(biāo)本采集操作流程及注意事項(xiàng)，做好標(biāo)本信息的記錄，確保標(biāo)本質(zhì)量符合要求、標(biāo)本及相關(guān)信息可追溯。資質(zhì)要求(二)檢測人員。實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)具備相關(guān)專業(yè)的大專以上學(xué)歷或具有中級及以上專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有2年以上的實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷和基因檢驗(yàn)相關(guān)培訓(xùn)合格證書。實(shí)驗(yàn)室配備的工作人員應(yīng)當(dāng)與所開展檢測項(xiàng)目及標(biāo)本量相適宜，以保證及時(shí)、熟練地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和報(bào)告結(jié)果，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)量保障

實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)

實(shí)驗(yàn)室要求

性能驗(yàn)證

性能驗(yàn)證

性能驗(yàn)證

性能驗(yàn)證

性能驗(yàn)證

人員能力評估

人員培養(yǎng)分子診斷團(tuán)隊(duì)建設(shè)PART4檢驗(yàn)過程中的質(zhì)量控制COMPANYINTRODUCTION質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)

分析前的質(zhì)量保證標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存標(biāo)本容器：密閉，無菌無核酸酶采集的部位：聯(lián)合多種標(biāo)本，多次送檢標(biāo)本采集時(shí)間：患者病程和病情：早中晚標(biāo)本采集流程：采集手冊、人員培訓(xùn)運(yùn)送保存時(shí)間和溫度合格標(biāo)本：容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、處理符合要求不合格標(biāo)本：拒收要求每月進(jìn)行周期性評價(jià)，計(jì)算不合格率

分析前的質(zhì)量保證

新冠標(biāo)本管理基本要求標(biāo)本包裝。所有標(biāo)本應(yīng)當(dāng)放在大小適合的帶螺旋、蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的標(biāo)本采集管里，擰緊。容器外注明標(biāo)本編號(hào)、種類、姓名及采樣日期。將密閉后的標(biāo)本放入大小合適的塑料袋內(nèi)密封，每袋裝一份標(biāo)本。標(biāo)本送檢。標(biāo)本采集后室溫放置不超過4小時(shí)，應(yīng)在2-4h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。如果需要長途運(yùn)輸標(biāo)本，應(yīng)采用干冰等制冷方式進(jìn)行保存，嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定包裝運(yùn)輸。專人專車，辦理轉(zhuǎn)運(yùn)證標(biāo)本接收。標(biāo)本接收人員的個(gè)人防護(hù)按采樣人員防護(hù)裝備執(zhí)行。標(biāo)本運(yùn)送人員和接收人員對標(biāo)本進(jìn)行雙簽收。標(biāo)本保存。用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測；含胍鹽保存液采樣管采集的標(biāo)本可根據(jù)采樣管說明書要求的保存條件及時(shí)間要求進(jìn)行運(yùn)送和保存。24小時(shí)內(nèi)無法檢測的標(biāo)本則應(yīng)置于

-70℃或以下保存(如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存)。境外高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域人群以及新冠肺炎患者的密接者和密接者的密接者等集中隔離人員的核酸檢測標(biāo)本，檢測后，應(yīng)當(dāng)在-20℃保存7天。一般人群篩查標(biāo)本，4℃保存24小時(shí)，設(shè)專庫或?qū)９駟为?dú)保存標(biāo)本。標(biāo)本運(yùn)送期間避免反復(fù)凍融。

分析中的質(zhì)量保證

分析中的質(zhì)量保證

理想的室內(nèi)質(zhì)控品1、基質(zhì)與待測標(biāo)本一致2、所含待測物濃度應(yīng)接近試驗(yàn)的決定性水平。決定性水平可從定性和定量兩方面進(jìn)行考慮，定性測定指的是測定的陽性判斷值,定量測定指的是方法測定濃度線性范圍的下限、中間和上限3、有很好的穩(wěn)定性，在適當(dāng)貯存條件下能較長期的穩(wěn)定便于連續(xù)監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室測定重復(fù)性4、靶值或預(yù)期結(jié)果已定5、無已知的生物傳染危險(xiǎn)性6、單批可大量獲得，決定室內(nèi)質(zhì)控能否長期連續(xù)監(jiān)測以便判斷實(shí)驗(yàn)室測定重復(fù)性7、價(jià)廉對于遺傳病、惡性腫瘤、HLA基因分型等有特定基因點(diǎn)突變、缺失突變、融合基因、分型等的PCR檢測，陰性質(zhì)控應(yīng)為無相關(guān)突變的同類樣本和不含任何核酸的水樣本，陽性標(biāo)本可為已知存在特定基因突變以前檢測過的樣本或體外構(gòu)建的含已知特定突變的質(zhì)?；蚣?xì)胞系。

分析中的質(zhì)量保證

分析中的質(zhì)量保證

分析中的質(zhì)量保證陽性失控

分析中的質(zhì)量保證陰性失控

分析中的質(zhì)量保證室間質(zhì)量評價(jià)（EQA，ExternalQualityAssessment）

分析中的質(zhì)量保證

新冠核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制各醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)核酸檢測質(zhì)量控制。應(yīng)選用擴(kuò)增檢測試劑盒指定的核酸提取試劑和擴(kuò)增儀。性能驗(yàn)證。在用于臨床標(biāo)本檢測前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對由提取試劑、提取儀、擴(kuò)增試劑、擴(kuò)增儀等組成檢測系統(tǒng)進(jìn)行必要的性能驗(yàn)證，性能指標(biāo)包括但不限于精密度(至少要有重復(fù)性)和最低檢測限。建議選用高靈敏的試劑(檢測限≤500拷貝/ml)。室內(nèi)質(zhì)控。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知》(國衛(wèi)辦醫(yī)函(2020)53號(hào))要求規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)控。每批檢測至少有1份弱陽性質(zhì)控品(第三方質(zhì)控品，通常為檢出限的1.5-3倍)、3份陰性質(zhì)控品(生理鹽水)。質(zhì)控品隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中。參與從提取到擴(kuò)增的全過程。在大規(guī)模人群篩查時(shí)，因人群流行率極低(<0.1%)，一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果，對陽性標(biāo)本采用另外一到兩種更為靈敏且擴(kuò)增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核檢測，復(fù)核陽性方可報(bào)出。室間質(zhì)評。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)常態(tài)化參加國家級或省級臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)評。對檢測量大以及承擔(dān)重點(diǎn)人群篩查等任務(wù)的實(shí)驗(yàn)室，要適當(dāng)增加室間質(zhì)評頻率。不按要求參加室間質(zhì)評的，或室間質(zhì)評結(jié)果不合格的，或檢測結(jié)果質(zhì)量問題突出的，不得開展核酸檢測。

國家、省、地市、縣

分析中的質(zhì)量保證出現(xiàn)假陽性的原因？標(biāo)本間的交叉污染。試劑盒中的強(qiáng)陽性對照的污染，質(zhì)控品污染。試劑的污染（要配2種以上不同擴(kuò)增片段的試劑）。核酸提取儀的污染。擴(kuò)增產(chǎn)物的遺留污染。某種偶然誤差如加錯(cuò)樣本所致

分析中的質(zhì)量保證如何預(yù)防假陽性？加樣器加樣時(shí)，必須使用帶濾芯吸頭。加樣過程加樣器頭部污染，則即采用加樣器清潔流程進(jìn)行清潔。檢測過程中，如發(fā)現(xiàn)手套污染即丟棄換新的手套。加質(zhì)控品的核酸提取液和加樣本核酸提取液時(shí)最好用二支移液器分開加，同時(shí)貼上標(biāo)識(shí)固定使用。有條件的話分開在不同的生物安全柜中加質(zhì)控品和樣本，避免污染導(dǎo)致假陽性出現(xiàn)。做好清潔工作：每一批檢測后，用2000mg/L有效氯或75%酒精擦實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面和地面；按SOP文件清潔提取儀、離心機(jī)、擴(kuò)增儀等；室內(nèi)紫外線照射2小時(shí)，角落地方可使用移動(dòng)紫外燈，能夠通風(fēng)的實(shí)驗(yàn)室在停止實(shí)驗(yàn)后可以通風(fēng)。

分析中的質(zhì)量保證新冠病毒核酸檢測常見問題

1.新冠試劑

出現(xiàn)翹尾，怎么處理？如果是個(gè)別單一通道翹尾，不管是FAM還是VIC通道，首先按照要求復(fù)查，重采樣或使用原樣，如果復(fù)查為陰性判讀陰性，如果復(fù)查還是同一通道翹尾，就要對結(jié)果仔細(xì)審核，先排除實(shí)驗(yàn)室污染，再就是了解病人信息，也可用另一種試劑復(fù)查。如果出現(xiàn)大量的弱陽性擴(kuò)增翹尾，首要原因是考慮實(shí)驗(yàn)室污染，可以通過做環(huán)境樣本和陰性對照做驗(yàn)證排除。

2.采用生理鹽水做陰性對照，內(nèi)標(biāo)也會(huì)出現(xiàn)曲線，怎么解釋？

因?yàn)樵噭┎捎玫氖莾?nèi)源性內(nèi)標(biāo)，內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)是用人源基因標(biāo)記，此基因存在于人的表皮細(xì)胞內(nèi)，操作過程中就可能會(huì)出現(xiàn)人源性的污染，另外環(huán)境污染也有可能導(dǎo)致內(nèi)標(biāo)出現(xiàn)曲線，可以通過做環(huán)境樣本質(zhì)控。

3.新冠樣本內(nèi)標(biāo)不出現(xiàn)，如何處理？

如果新冠樣本內(nèi)標(biāo)不出，該樣本必須復(fù)查，可重新混勻該樣本提取核酸，如果重新提取該樣本內(nèi)標(biāo)還是不出，在排除提取問題的情況下，說明采樣不合格，要通知臨床重新采樣復(fù)查。

4.為什么“雙靶均檢出；靶基因和內(nèi)標(biāo)均未檢出；單靶檢出、擴(kuò)增曲線翹尾或異常”要求復(fù)檢呢？

排除實(shí)驗(yàn)室“假陽性”（排除實(shí)驗(yàn)室污染等）；排除操作誤差（排除加樣操作誤差、排除采樣操作誤差、排除核酸提取過程誤差等）；排除實(shí)驗(yàn)室“假陽性”（排除實(shí)驗(yàn)室污染、試劑盒的穩(wěn)定性及檢測限等）。

分析中的質(zhì)量保證“假陰性”的原因？

分析后的質(zhì)量保證

分析后的質(zhì)量保證臨床咨詢服務(wù)

分析后的質(zhì)量保證標(biāo)本保存方法持續(xù)質(zhì)量改進(jìn)外部反饋、內(nèi)部評價(jià)人是最關(guān)鍵的因素，在日常工作中反復(fù)改進(jìn)，優(yōu)化質(zhì)量體系凡事預(yù)則