AXL受體酪氨酸激酶：膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵角色與治療新靶標(biāo)一、引言1.1研究背景與意義膜性腎?。∕N）是一種常見的腎小球疾病，也是導(dǎo)致非糖尿病成人腎病綜合征（NS）的主要原因之一。其主要病理特征為腎小球基底膜增厚和通透性改變，大量蛋白尿、低蛋白血癥、水腫和高脂血癥等腎病綜合征表現(xiàn)是膜性腎病患者的常見癥狀。隨著病情的發(fā)展，膜性腎病可導(dǎo)致腎功能逐漸惡化，最終發(fā)展為腎功能衰竭，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和壽命，給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，膜性腎病在成人腎病綜合征中所占比例相對較高，且近年來發(fā)病率呈上升趨勢，因此，深入研究膜性腎病的發(fā)病機(jī)制，對于尋找有效的治療方法、改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。目前，膜性腎病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，一般認(rèn)為其免疫病理機(jī)制主要與抗磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體的存在有關(guān)，涉及免疫復(fù)合物的形成和沉積，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷和腎小球基底膜的破壞，進(jìn)而引發(fā)蛋白尿。然而，盡管對膜性腎病的發(fā)病機(jī)制有了一定的認(rèn)識，但現(xiàn)有的治療方法仍存在諸多局限性。例如，根據(jù)KDIGO2021指南推薦的免疫抑制治療，包括鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（CNI）、環(huán)磷酰胺（CYC）聯(lián)合皮質(zhì)類固醇，以及利妥昔單抗（RTX）等，雖對部分患者有效，但仍有約三分之一的病例對RTX產(chǎn)生抵抗，且這些治療方法可能帶來感染、肝腎功能損害等不良反應(yīng)。因此，探索膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的新靶點(diǎn)，對于開發(fā)更有效的治療策略具有迫切的需求。AXL受體酪氨酸激酶作為一種重要的信號分子，近年來在腫瘤、炎癥等領(lǐng)域的研究中備受關(guān)注。AXL受體酪氨酸激酶屬于TAM（Tyro3、Axl、Mer）受體酪氨酸激酶家族，其配體為生長停滯特異性蛋白6（Gas6）。AXL在多種細(xì)胞中表達(dá)，包括免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等，通過與Gas6結(jié)合激活下游信號通路，在細(xì)胞增殖、分化、遷移、存活以及免疫調(diào)節(jié)等過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。越來越多的研究表明，AXL與多種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。在狼瘡腎炎患者中，腎小球AxlTK表達(dá)顯著增高，且與患者的口腔潰瘍及抗核小體抗體（AnuA）相關(guān)，提示AxlTK可能參與狼瘡腎炎的發(fā)病。在慢性腎小球腎炎患者中，血漿可溶性Axl受體酪氨酸激酶（sAxl）水平明顯升高，且與腎功能具有一定相關(guān)性。然而，AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用尚未完全明確。研究AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用，有望揭示膜性腎病發(fā)病的新機(jī)制，為膜性腎病的治療提供新的靶點(diǎn)和思路。通過深入探討AXL在膜性腎病中的作用機(jī)制，可能發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，為開發(fā)更有效、副作用更小的治療藥物奠定基礎(chǔ)，從而改善膜性腎病患者的治療效果和預(yù)后，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和社會意義。1.2研究目的與方法本研究旨在深入探討AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用，具體研究目的如下：一是明確AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病患者腎臟組織中的表達(dá)情況，包括在腎小球、腎小管等不同部位的表達(dá)水平以及與正常腎臟組織的差異，分析AXL表達(dá)水平與膜性腎病患者臨床病理特征（如蛋白尿程度、腎功能指標(biāo)、病理分期等）之間的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究其在膜性腎病中的作用提供臨床依據(jù)。二是通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探究AXL受體酪氨酸激酶對足細(xì)胞功能的影響，如對足細(xì)胞增殖、凋亡、遷移以及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的影響，明確AXL激活或抑制后對足細(xì)胞相關(guān)信號通路的調(diào)控機(jī)制，揭示其在足細(xì)胞損傷中的作用機(jī)制。三是借助動物實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建膜性腎病動物模型，研究AXL受體酪氨酸激酶在體內(nèi)對膜性腎病發(fā)病過程的影響，觀察抑制或激活A(yù)XL對動物模型腎臟病理改變、蛋白尿水平、腎功能指標(biāo)等的影響，驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，并進(jìn)一步探討其在整體動物水平的作用機(jī)制。為實(shí)現(xiàn)上述研究目的，本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法。在臨床病例分析方面，收集膜性腎病患者的腎臟活檢組織和臨床資料，采用免疫組織化學(xué)、免疫熒光、Westernblot等方法檢測AXL受體酪氨酸激酶在腎臟組織中的表達(dá)水平，并分析其與患者臨床病理特征的相關(guān)性。同時(shí)，收集健康志愿者的腎臟組織作為對照，以明確AXL在膜性腎病患者中的特異性表達(dá)變化。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，選用人足細(xì)胞系或小鼠足細(xì)胞系進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過轉(zhuǎn)染AXL過表達(dá)質(zhì)粒或使用AXL抑制劑等手段，改變細(xì)胞中AXL的表達(dá)或活性。采用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell實(shí)驗(yàn)等方法檢測細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等功能的變化。利用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）等技術(shù)檢測與足細(xì)胞功能相關(guān)的信號通路蛋白和基因的表達(dá)，如PI3K/Akt、MAPK等信號通路，以闡明AXL對足細(xì)胞功能影響的分子機(jī)制。動物實(shí)驗(yàn)則選取合適的動物模型，如小鼠或大鼠，通過注射相關(guān)抗體或毒素等方法構(gòu)建膜性腎病動物模型。將動物隨機(jī)分為對照組、模型組、AXL抑制劑干預(yù)組和AXL激動劑干預(yù)組等。定期檢測動物的24小時(shí)尿蛋白定量、腎功能指標(biāo)（血肌酐、尿素氮等）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取腎臟組織進(jìn)行病理切片，通過光鏡、電鏡觀察腎臟病理改變，采用免疫組織化學(xué)、Westernblot等方法檢測腎臟組織中AXL及相關(guān)信號分子的表達(dá)，以研究AXL在膜性腎病動物模型中的作用及機(jī)制。二、膜性腎病發(fā)病機(jī)制概述2.1膜性腎病的定義與分類膜性腎病（MembranousNephropathy，MN）是一種以腎小球基底膜上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物沉積，伴隨基底膜彌漫增生增厚為特征的腎臟疾病。其病變主要累及腎小球，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障受損，進(jìn)而引發(fā)蛋白尿等一系列臨床表現(xiàn)。在光學(xué)顯微鏡下，可見腎小球基底膜均勻增厚，上皮細(xì)胞下有免疫復(fù)合物沉積，呈嗜復(fù)紅染色；電鏡下，可見電子致密物沉積于上皮細(xì)胞下，足突廣泛融合。膜性腎病根據(jù)病因可分為特發(fā)性膜性腎病（IdiopathicMembranousNephropathy，IMN）和繼發(fā)性膜性腎?。⊿econdaryMembranousNephropathy，SMN）。特發(fā)性膜性腎病是指病因不明的膜性腎病，約占膜性腎病的60%-70%。這類患者通常無明確的系統(tǒng)性疾病或其他繼發(fā)因素可尋，其發(fā)病可能與自身免疫異常有關(guān)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，約70%-80%的特發(fā)性膜性腎病患者體內(nèi)存在抗磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體，該抗體與足細(xì)胞表面的PLA2R抗原結(jié)合，形成原位免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷和蛋白尿的產(chǎn)生。此外，還有少數(shù)特發(fā)性膜性腎病患者與抗血小板反應(yīng)蛋白7A域（THSD7A）抗體等相關(guān)。繼發(fā)性膜性腎病則是由其他明確的疾病或因素所引起，約占膜性腎病的30%-40%。常見的繼發(fā)因素包括感染、自身免疫性疾病、腫瘤、藥物及毒物等。在感染因素中，乙肝病毒感染是較為常見的原因之一，乙肝病毒相關(guān)性膜性腎病在我國發(fā)病率相對較高，其發(fā)病機(jī)制可能與乙肝病毒抗原-抗體復(fù)合物沉積于腎小球基底膜，激活免疫反應(yīng)有關(guān)。自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，可導(dǎo)致狼瘡性腎炎，其中部分患者表現(xiàn)為膜性腎病，其發(fā)病與自身抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的沉積密切相關(guān)。腫瘤方面，各種實(shí)體瘤及淋巴瘤均可導(dǎo)致膜性腎病，可能是腫瘤細(xì)胞釋放的抗原或某些細(xì)胞因子引起機(jī)體免疫反應(yīng)，進(jìn)而損傷腎小球。藥物及毒物如青霉胺、金、汞等也可引發(fā)膜性腎病，其機(jī)制可能是藥物或毒物直接損傷腎小球，或誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。不同類型的繼發(fā)性膜性腎病，其治療策略和預(yù)后往往與原發(fā)疾病密切相關(guān)，因此準(zhǔn)確鑒別特發(fā)性和繼發(fā)性膜性腎病對于臨床治療具有重要意義。2.2傳統(tǒng)發(fā)病機(jī)制理論2.2.1免疫復(fù)合物沉積學(xué)說免疫復(fù)合物沉積在膜性腎病的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。目前認(rèn)為，免疫復(fù)合物在腎小球基底膜上皮側(cè)的沉積主要通過兩種方式，即原位形成和血液循環(huán)中免疫復(fù)合物的重新沉積。原位形成免疫復(fù)合物的過程與足細(xì)胞表面的抗原密切相關(guān)。以特發(fā)性膜性腎病中最常見的抗磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體為例，足細(xì)胞表面表達(dá)PLA2R抗原，當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗PLA2R抗體后，抗體與足細(xì)胞表面的PLA2R抗原特異性結(jié)合，在腎小球基底膜上皮側(cè)原位形成免疫復(fù)合物。這種原位形成的免疫復(fù)合物具有高度的特異性，直接作用于足細(xì)胞，對足細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。除PLA2R外，抗血小板反應(yīng)蛋白7A域（THSD7A）等抗原也可與相應(yīng)抗體在原位結(jié)合形成免疫復(fù)合物。這些原位形成的免疫復(fù)合物不易被清除，持續(xù)刺激腎小球，引發(fā)后續(xù)的免疫反應(yīng)。血液循環(huán)中免疫復(fù)合物的重新沉積也是膜性腎病發(fā)病的重要機(jī)制之一。當(dāng)機(jī)體受到外源性抗原（如病毒、細(xì)菌等）或內(nèi)源性抗原（如腫瘤抗原等）刺激時(shí)，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，抗原與抗體在血液循環(huán)中結(jié)合形成免疫復(fù)合物。正常情況下，血液循環(huán)中的免疫復(fù)合物可被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)清除。然而，在某些病理狀態(tài)下，如機(jī)體免疫功能異?；騿魏司奘杉?xì)胞系統(tǒng)清除能力下降時(shí)，免疫復(fù)合物不能及時(shí)被清除，它們會隨著血液循環(huán)到達(dá)腎小球，并在腎小球基底膜上皮側(cè)沉積。這些免疫復(fù)合物的大小、電荷及結(jié)構(gòu)等因素決定了其在腎小球的沉積部位和致病能力。例如，較大的免疫復(fù)合物傾向于沉積在腎小球系膜區(qū)，而較小的免疫復(fù)合物則更容易沉積在基底膜上皮側(cè)。沉積在基底膜上皮側(cè)的免疫復(fù)合物會激活補(bǔ)體系統(tǒng)，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致基底膜損傷。免疫復(fù)合物中的抗體部分可激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，而抗原抗體復(fù)合物表面的某些成分也可能激活補(bǔ)體旁路途徑，進(jìn)一步加劇補(bǔ)體的激活和炎癥反應(yīng)。補(bǔ)體激活后產(chǎn)生的一系列活性物質(zhì)，如C5b-9膜攻擊復(fù)合物等，可直接損傷足細(xì)胞，破壞腎小球?yàn)V過屏障，導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生。免疫復(fù)合物還可吸引炎癥細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等，浸潤到腎小球，釋放炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可進(jìn)一步損傷腎小球基底膜和足細(xì)胞，促進(jìn)膜性腎病的發(fā)展。2.2.2補(bǔ)體激活機(jī)制補(bǔ)體系統(tǒng)的激活在膜性腎病的發(fā)生發(fā)展中扮演著核心角色，不同類型的免疫球蛋白通過不同途徑激活補(bǔ)體，進(jìn)而對膜性腎病的進(jìn)程產(chǎn)生重要影響。在膜性腎病中，免疫球蛋白G（IgG）是最主要的參與補(bǔ)體激活的免疫球蛋白。IgG有四個(gè)亞類，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。其中，IgG1和IgG3激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑的能力較強(qiáng)，而IgG2激活補(bǔ)體的能力相對較弱，IgG4通常被認(rèn)為不能激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑。補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的啟動始于抗原抗體復(fù)合物與C1q的結(jié)合。當(dāng)IgG與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物后，其Fc段構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出C1q的結(jié)合位點(diǎn)。C1q與免疫復(fù)合物結(jié)合后，依次激活C1r和C1s，活化的C1s具有絲氨酸蛋白酶活性，可裂解C4和C2。C4被裂解為C4a和C4b，C2被裂解為C2a和C2b，C4b與C2a結(jié)合形成C3轉(zhuǎn)化酶（C4b2a）。C3轉(zhuǎn)化酶可將C3裂解為C3a和C3b，C3b進(jìn)一步與C4b2a結(jié)合形成C5轉(zhuǎn)化酶（C4b2a3b）。C5轉(zhuǎn)化酶裂解C5產(chǎn)生C5a和C5b，C5b依次與C6、C7、C8和C9結(jié)合，形成C5b-9膜攻擊復(fù)合物（MAC），MAC可插入細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞膜穿孔、細(xì)胞溶解，從而損傷足細(xì)胞，破壞腎小球?yàn)V過屏障，引發(fā)蛋白尿。除經(jīng)典途徑外，補(bǔ)體旁路途徑在膜性腎病中也發(fā)揮著重要作用。補(bǔ)體旁路途徑的激活可不依賴于抗原抗體復(fù)合物，而是由某些激活物，如細(xì)菌內(nèi)毒素、凝聚的IgA和IgG4等直接激活C3。在生理狀態(tài)下，血漿中的C3可緩慢自發(fā)裂解產(chǎn)生少量C3b。C3b在Mg2?存在的情況下，可與B因子結(jié)合形成C3bB。D因子將C3bB中的B因子裂解為Ba和Bb，Bb與C3b結(jié)合形成旁路途徑的C3轉(zhuǎn)化酶（C3bBb）。C3bBb可不斷裂解C3產(chǎn)生更多的C3b，形成正反饋放大環(huán)路。C3bBb再與P因子（備解素）結(jié)合，形成穩(wěn)定的C3bBbP，進(jìn)一步增強(qiáng)其活性。旁路途徑產(chǎn)生的C3b也可參與C5轉(zhuǎn)化酶（C3bBb3b）的形成，進(jìn)而激活C5及后續(xù)補(bǔ)體成分，產(chǎn)生MAC，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。在膜性腎病中，免疫復(fù)合物中的某些成分可能通過旁路途徑激活補(bǔ)體，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。IgG4雖不能激活經(jīng)典途徑，但在某些情況下，凝聚的IgG4可通過旁路途徑激活補(bǔ)體。此外，補(bǔ)體凝集素途徑也可能參與膜性腎病的發(fā)病，該途徑由MBL（甘露糖結(jié)合凝集素）等識別病原體表面的糖結(jié)構(gòu)而啟動，激活過程與經(jīng)典途徑類似，但不依賴于抗體。補(bǔ)體激活后產(chǎn)生的C3a、C5a等具有過敏毒素活性，可使肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞釋放組胺等血管活性物質(zhì)，導(dǎo)致血管擴(kuò)張、通透性增加，引發(fā)炎癥反應(yīng)。C3a、C5a還具有趨化作用，可吸引中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向腎小球浸潤，這些炎癥細(xì)胞釋放的蛋白酶、活性氧等物質(zhì)進(jìn)一步損傷腎小球基底膜和足細(xì)胞。2.3最新研究進(jìn)展近年來，隨著對膜性腎病發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，一些新的理論和研究成果逐漸涌現(xiàn)，為我們深入理解膜性腎病的發(fā)病過程提供了新的視角?？沽字窤2受體抗體（PLA2R）相關(guān)發(fā)病機(jī)制的研究取得了新的進(jìn)展。除了傳統(tǒng)認(rèn)知中PLA2R抗體與足細(xì)胞表面抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物激活補(bǔ)體的機(jī)制外，最新研究發(fā)現(xiàn)，PLA2R抗體還可能通過影響足細(xì)胞的代謝過程導(dǎo)致細(xì)胞損傷。有研究表明，PLA2R抗體與足細(xì)胞表面的PLA2R結(jié)合后，可抑制足細(xì)胞內(nèi)某些關(guān)鍵代謝酶的活性，如脂肪酸代謝相關(guān)酶，從而影響足細(xì)胞的能量代謝，導(dǎo)致足細(xì)胞功能障礙和損傷。此外，在PLA2R抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中，發(fā)現(xiàn)了一些新的調(diào)節(jié)因子。微小RNA（miRNA）在其中發(fā)揮了重要作用，某些miRNA如miR-126等，可通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，影響PLA2R抗體的產(chǎn)生以及免疫復(fù)合物的形成和清除過程。在膜性腎病患者的血清和腎臟組織中，miR-126的表達(dá)水平明顯異常，通過調(diào)節(jié)miR-126的表達(dá)，可以影響免疫細(xì)胞的功能和足細(xì)胞的損傷程度。關(guān)于補(bǔ)體激活機(jī)制，也有了新的發(fā)現(xiàn)。補(bǔ)體激活過程中的一些關(guān)鍵分子的修飾和調(diào)控機(jī)制被進(jìn)一步揭示。補(bǔ)體成分C3的糖基化修飾對其激活和功能發(fā)揮具有重要影響。研究發(fā)現(xiàn)，在膜性腎病患者中，C3的糖基化模式發(fā)生改變，這種改變影響了C3與其他補(bǔ)體成分的相互作用，進(jìn)而影響補(bǔ)體激活途徑的效率和強(qiáng)度。一些新的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白被發(fā)現(xiàn)，如補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白5（CFHR5）等，它們在補(bǔ)體激活的負(fù)調(diào)控中發(fā)揮重要作用。CFHR5可以與補(bǔ)體因子H競爭結(jié)合C3b，從而抑制補(bǔ)體旁路途徑的過度激活，維持補(bǔ)體系統(tǒng)的平衡。在CFHR5基因缺陷的動物模型中，膜性腎病的病情加重，補(bǔ)體激活過度，進(jìn)一步證實(shí)了CFHR5在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的重要作用。與傳統(tǒng)發(fā)病機(jī)制理論相比，這些新進(jìn)展在發(fā)病機(jī)制的細(xì)節(jié)和分子層面上有了更深入的認(rèn)識。傳統(tǒng)理論主要集中在免疫復(fù)合物沉積和補(bǔ)體激活的基本過程，而新進(jìn)展則進(jìn)一步揭示了免疫復(fù)合物形成和補(bǔ)體激活過程中涉及的具體分子機(jī)制、代謝調(diào)節(jié)以及新的調(diào)節(jié)因子。在PLA2R抗體相關(guān)發(fā)病機(jī)制中，新進(jìn)展從足細(xì)胞代謝和miRNA調(diào)節(jié)等角度補(bǔ)充了傳統(tǒng)理論中關(guān)于免疫復(fù)合物導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的單一機(jī)制。在補(bǔ)體激活機(jī)制方面，新發(fā)現(xiàn)的分子修飾和新的調(diào)節(jié)蛋白，使我們對補(bǔ)體激活的精細(xì)調(diào)控有了更全面的理解，突破了傳統(tǒng)理論中對補(bǔ)體激活過程相對簡單的認(rèn)知。這些新進(jìn)展為膜性腎病的診斷、治療和預(yù)后評估提供了新的靶點(diǎn)和思路，有望推動膜性腎病臨床治療的發(fā)展。三、AXL受體酪氨酸激酶解析3.1AXL受體酪氨酸激酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)AXL受體酪氨酸激酶屬于TAM（TYRO3、AXL、MER）受體酪氨酸激酶家族，其結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特性，由多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成，這些結(jié)構(gòu)域?qū)τ贏XL的功能發(fā)揮至關(guān)重要。從基因?qū)用鎭砜矗祟怉xl基因定位于染色體19q13.2，包含20個(gè)外顯子。外顯子1-10負(fù)責(zé)編碼細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，這一區(qū)域涵蓋了信號肽、兩個(gè)免疫球蛋白（Ig）結(jié)構(gòu)域以及兩個(gè)纖連蛋白Ⅲ型（FNⅢ）結(jié)構(gòu)域。信號肽在AXL蛋白的合成和轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，引導(dǎo)AXL蛋白向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)。免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域則參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，對于AXL與配體以及其他相關(guān)蛋白的識別和結(jié)合具有重要意義。兩個(gè)纖連蛋白Ⅲ型結(jié)構(gòu)域在維持蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及參與細(xì)胞粘附等過程中發(fā)揮作用。外顯子11編碼一段短的細(xì)胞外區(qū)域，該區(qū)域會受到蛋白水解切割，同時(shí)還編碼整個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，跨膜結(jié)構(gòu)域貫穿細(xì)胞膜，將細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域連接起來，是AXL信號跨膜傳遞的關(guān)鍵部位。外顯子12-20編碼細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，其中包含酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域是AXL發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的核心區(qū)域，能夠催化底物蛋白的酪氨酸殘基磷酸化，從而激活下游信號通路。AXL蛋白包含894個(gè)氨基酸，分子量約為104kDa，屬于Ⅰ型跨膜受體。其結(jié)構(gòu)可分為胞外結(jié)構(gòu)域、穿膜域和胞內(nèi)域。胞外結(jié)構(gòu)域由信號肽、Ig結(jié)構(gòu)域和FNⅢ結(jié)構(gòu)域組成，這些結(jié)構(gòu)域賦予了AXL與配體及其他細(xì)胞外分子相互作用的能力。穿膜域由疏水氨基酸組成，將AXL蛋白錨定在細(xì)胞膜上，確保其在細(xì)胞表面的穩(wěn)定存在。胞內(nèi)域主要是酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，當(dāng)AXL與配體結(jié)合后，酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域被激活，通過自身磷酸化以及對下游底物的磷酸化，啟動細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)過程。AXL還可以通過蛋白酶在跨膜結(jié)構(gòu)域外裂解，產(chǎn)生可溶性細(xì)胞外片段。這些可溶性片段雖然不具備完整的受體功能，但在某些情況下可能會參與調(diào)節(jié)AXL信號通路，例如它們可以競爭性地結(jié)合配體，從而影響AXL的正常激活。AXL獨(dú)特的結(jié)構(gòu)決定了其功能特性。細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和纖連蛋白Ⅲ型結(jié)構(gòu)域，為AXL與配體生長停滯特異性蛋白6（Gas6）的特異性結(jié)合提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Gas6與AXL結(jié)合后，會誘導(dǎo)AXL受體的二聚化，進(jìn)而激活細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的激活使得AXL能夠?qū)ο掠蔚孜镞M(jìn)行磷酸化修飾，激活一系列下游信號通路，如Ras-Raf-Mek-Erk、PI3K-Akt-mTOR等信號通路。這些信號通路在細(xì)胞增殖、存活、遷移、侵襲等過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。AXL與Gas6結(jié)合后，通過激活PI3K-Akt-mTOR信號通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，抑制細(xì)胞凋亡。在腫瘤細(xì)胞中，AXL的異常激活往往與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和耐藥性密切相關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌中，AXL的高表達(dá)可通過激活下游信號通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性。3.2正常生理功能在正常生理狀態(tài)下，AXL受體酪氨酸激酶對細(xì)胞的多種生理過程發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，涉及細(xì)胞增殖、分化、遷移等多個(gè)方面。在細(xì)胞增殖方面，AXL通過與配體Gas6結(jié)合，激活下游的PI3K-Akt-mTOR信號通路，促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展，從而刺激細(xì)胞增殖。在胚胎發(fā)育過程中，AXL在多種組織和器官的細(xì)胞增殖中起到關(guān)鍵作用。在小鼠胚胎發(fā)育的早期階段，AXL在心臟、肝臟等器官的祖細(xì)胞中表達(dá)，通過激活PI3K-Akt信號通路，促進(jìn)這些祖細(xì)胞的增殖，為器官的正常發(fā)育提供足夠的細(xì)胞數(shù)量。在成體組織中，AXL也參與了細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)，以維持組織的穩(wěn)態(tài)。在肝臟受到損傷后的修復(fù)過程中，AXL在肝細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，通過激活PI3K-Akt-mTOR信號通路，促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖，從而實(shí)現(xiàn)肝臟組織的修復(fù)和再生。在細(xì)胞分化過程中，AXL同樣發(fā)揮著不可或缺的作用。它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子活性，影響基因的表達(dá)，進(jìn)而引導(dǎo)細(xì)胞向特定的方向分化。在神經(jīng)干細(xì)胞的分化過程中，AXL與Gas6結(jié)合后，激活下游的Ras-Raf-Mek-Erk信號通路，調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。研究表明，在體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞中，阻斷AXL信號通路會導(dǎo)致神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的比例顯著降低，而向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例增加。在造血干細(xì)胞的分化過程中，AXL也參與了調(diào)節(jié)，它可以通過與其他細(xì)胞因子和信號通路相互作用，引導(dǎo)造血干細(xì)胞向不同類型的血細(xì)胞分化。細(xì)胞遷移對于胚胎發(fā)育、組織修復(fù)以及免疫反應(yīng)等生理過程至關(guān)重要，AXL在這一過程中也扮演著重要角色。AXL激活后，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的動態(tài)變化，影響細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動能力，從而促進(jìn)細(xì)胞遷移。在胚胎發(fā)育過程中，AXL在神經(jīng)嵴細(xì)胞的遷移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。神經(jīng)嵴細(xì)胞是一種具有高度遷移能力的細(xì)胞群體，它們在胚胎發(fā)育過程中遷移到不同的部位，分化形成多種組織和器官，如外周神經(jīng)系統(tǒng)、黑色素細(xì)胞等。研究發(fā)現(xiàn)，AXL基因敲除的小鼠中，神經(jīng)嵴細(xì)胞的遷移受到顯著抑制，導(dǎo)致外周神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常。在傷口愈合過程中，AXL在成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞中表達(dá)，通過激活PI3K-Ras-Rac等信號通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，促進(jìn)這些細(xì)胞向傷口部位遷移，參與傷口的修復(fù)。3.3在疾病中的異常表現(xiàn)AXL受體酪氨酸激酶在多種疾病中呈現(xiàn)出異常表達(dá)和功能，對疾病的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生重要影響。在腫瘤領(lǐng)域，AXL的異常表現(xiàn)尤為突出。在非小細(xì)胞肺癌中，研究發(fā)現(xiàn)AXL基因存在擴(kuò)增和過表達(dá)的情況。一項(xiàng)對非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織的研究表明，AXL的過表達(dá)與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)，過表達(dá)AXL的腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力，其細(xì)胞周期進(jìn)程明顯加快，S期細(xì)胞比例顯著增加。AXL的過表達(dá)還與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)有關(guān)，過表達(dá)AXL的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞在體外Transwell實(shí)驗(yàn)中，穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量明顯多于正常表達(dá)AXL的細(xì)胞。在乳腺癌中，AXL及其配體Gas6的表達(dá)水平明顯升高，且與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究對55例乳腺癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中AXL和Gas6的陽性表達(dá)率分別為60.0%和58.1%，顯著高于癌旁組織及良性乳腺增生組織，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中AXL和Gas6蛋白的相對表達(dá)量和陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。這表明AXL在乳腺癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，其高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，使其更容易突破基底膜，進(jìn)入淋巴管和血管，從而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在其他疾病方面，AXL也有異常表現(xiàn)。在病毒感染性疾病中，如新冠病毒感染，研究發(fā)現(xiàn)AXL可能是新冠病毒入侵人體細(xì)胞的候選受體之一。西湖大學(xué)李旭、黃晶及復(fù)旦大學(xué)陸路等團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，酪氨酸蛋白激酶受體UFO（AXL）與SARS-CoV-2病毒Spike蛋白的N末端（NTD）存在特異性相互作用。在HEK293T細(xì)胞中，AXL的過表達(dá)與ACE2的過表達(dá)可以同樣有效促進(jìn)SARS-CoV-2的入侵，且AXL不僅可以促進(jìn)病毒的入侵，還可以促進(jìn)病毒繁殖，敲除AXL則顯著降低H1299肺細(xì)胞和人原代肺上皮細(xì)胞的SARS-CoV-2感染。這表明AXL在新冠病毒感染過程中可能發(fā)揮了重要作用，其異常表達(dá)可能影響病毒的感染效率和疾病的嚴(yán)重程度。在自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，雖然AXL的異常表現(xiàn)不如在腫瘤中那么明確，但已有研究表明，TAM受體家族（包括AXL）在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，其信號異常可能與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中，TAM受體的表達(dá)和功能可能發(fā)生改變，影響免疫細(xì)胞的功能和免疫反應(yīng)的平衡，進(jìn)而導(dǎo)致自身免疫性損傷。但目前關(guān)于AXL在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。鑒于AXL在多種疾病中的異常表現(xiàn)，推測其在膜性腎病中也可能存在異常表達(dá)或功能失調(diào)。膜性腎病作為一種免疫相關(guān)性腎臟疾病，其發(fā)病機(jī)制涉及免疫細(xì)胞的活化、炎癥反應(yīng)以及腎小球細(xì)胞的損傷。AXL在免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞增殖、存活、遷移等方面的重要功能，提示其可能參與膜性腎病的發(fā)病過程。在膜性腎病患者的腎臟組織中，AXL的表達(dá)水平可能發(fā)生改變，進(jìn)而影響免疫細(xì)胞的功能和腎小球細(xì)胞的生物學(xué)行為。若AXL在膜性腎病患者腎臟組織中高表達(dá)，可能通過激活下游信號通路，促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，加重腎臟的炎癥反應(yīng)。AXL還可能影響足細(xì)胞的功能，促進(jìn)足細(xì)胞的凋亡或改變其細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障受損，從而引發(fā)蛋白尿等膜性腎病的典型癥狀。因此，深入研究AXL在膜性腎病中的異常表現(xiàn)，對于揭示膜性腎病的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。四、AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用研究4.1相關(guān)臨床研究案例分析4.1.1病例選取與數(shù)據(jù)收集在臨床研究中，為確保研究結(jié)果的可靠性和代表性，嚴(yán)格遵循既定的選取標(biāo)準(zhǔn)篩選膜性腎病患者和健康對照者。選取2018年1月至2021年12月期間，于某三甲醫(yī)院腎內(nèi)科就診且經(jīng)腎活檢確診為膜性腎病的患者60例作為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)為：年齡在18-65歲之間；符合膜性腎病的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，即光鏡下可見腎小球基底膜彌漫增厚，免疫熒光顯示IgG和C3沿腎小球毛細(xì)血管壁呈顆粒狀沉積，電鏡下可見上皮下電子致密物沉積；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他原發(fā)性腎小球疾病、繼發(fā)性腎小球疾病（如狼瘡性腎炎、糖尿病腎病、乙肝相關(guān)性腎炎等）；近期（3個(gè)月內(nèi)）使用過免疫抑制劑、細(xì)胞毒藥物或參與其他臨床試驗(yàn)；存在嚴(yán)重的心、肝、肺等重要臟器功能障礙；患有惡性腫瘤或其他全身性疾病影響研究結(jié)果的判斷。同時(shí)，選取同期在該醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的志愿者30例作為對照組。對照組的入選標(biāo)準(zhǔn)為：年齡與病例組匹配，相差不超過5歲；尿常規(guī)、腎功能、尿蛋白定量等指標(biāo)均正常；無腎臟疾病家族史；無其他系統(tǒng)性疾病。在數(shù)據(jù)收集方面，詳細(xì)記錄患者和對照者的一般臨床資料，包括年齡、性別、身高、體重、血壓等。對于膜性腎病患者，還收集其病程、臨床表現(xiàn)（如水腫程度、蛋白尿情況、血尿等）、既往病史等信息。在樣本采集上，清晨空腹采集患者和對照者的外周靜脈血5ml，置于抗凝管中，3000r/min離心10min，分離血漿，分裝后保存于-80℃冰箱待測。收集患者和對照者的晨尿10ml，3000r/min離心15min，取上清液分裝，同樣保存于-80℃冰箱，用于檢測尿液中的相關(guān)指標(biāo)。對于膜性腎病患者，在腎活檢時(shí)獲取腎臟組織標(biāo)本，一部分進(jìn)行常規(guī)病理檢查，另一部分立即置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的分子生物學(xué)檢測。4.1.2檢測指標(biāo)與數(shù)據(jù)分析在檢測指標(biāo)方面，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血漿和尿液中AXL的水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。同時(shí)，檢測患者的腎功能指標(biāo)，包括血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、估算的腎小球?yàn)V過率（eGFR），采用全自動生化分析儀進(jìn)行檢測。檢測24小時(shí)尿蛋白定量，采用雙縮脲法進(jìn)行測定。通過免疫組織化學(xué)染色檢測腎臟組織中AXL的表達(dá)，觀察其在腎小球、腎小管等部位的定位和表達(dá)強(qiáng)度。在數(shù)據(jù)分析過程中，運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，若方差不齊則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析探究AXL水平與膜性腎病患者臨床病理指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.1.3研究結(jié)果與討論研究結(jié)果顯示，膜性腎病患者血漿和尿液中AXL水平顯著高于健康對照組（P<0.05）。在腎臟組織中，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，AXL主要表達(dá)于腎小球足細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞，且膜性腎病患者腎臟組織中AXL的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，AXL水平與24小時(shí)尿蛋白定量呈正相關(guān)（r=0.568，P<0.01），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r=-0.485，P<0.01）。在不同病理分期的膜性腎病患者中，隨著病理分期的進(jìn)展，AXL的表達(dá)水平逐漸升高。這些結(jié)果表明，AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病患者中存在異常高表達(dá)，且其表達(dá)水平與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。AXL可能通過影響足細(xì)胞的功能，如促進(jìn)足細(xì)胞的凋亡、改變足細(xì)胞的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障受損，從而加重蛋白尿。AXL還可能參與了腎臟的炎癥反應(yīng)和纖維化進(jìn)程，進(jìn)一步損害腎功能。然而，本研究也存在一定的局限性，樣本量相對較小，可能存在一定的偏倚。未來需要擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、大樣本的研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證AXL在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究結(jié)果為深入理解膜性腎病的發(fā)病機(jī)制提供了新的線索，也為膜性腎病的治療提供了潛在的靶點(diǎn)。4.2動物實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證4.2.1動物模型建立與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為深入研究AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用，構(gòu)建合適的動物模型至關(guān)重要。本研究選用6周齡，健康成年雄性BALB/c小鼠，通過尾靜脈注射陽離子牛血清白蛋白（C-BSA）制備膜性腎病動物模型。具體方法為，小鼠先給予0.2mgC-BSA和等體積的弗氏完全佐劑充分乳化成乳白色懸液，進(jìn)行多點(diǎn)皮下注射。2周后，小鼠尾靜脈注射C-BSA（13mg/kg），每周3次，隔日注射。小鼠免疫后6周，收集其尿液、血液和腎標(biāo)本做進(jìn)一步的分析。將小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只：對照組（Control），給予生理鹽水注射，不進(jìn)行膜性腎病造模；模型組（Model），采用上述C-BSA注射方法構(gòu)建膜性腎病模型；AXL抑制劑干預(yù)組（AXLinhibitor），在構(gòu)建膜性腎病模型的基礎(chǔ)上，給予AXL抑制劑進(jìn)行干預(yù)，AXL抑制劑采用BGB324，通過腹腔注射給藥，劑量為5mg/kg，每日一次；AXL激動劑干預(yù)組（AXLagonist），在構(gòu)建膜性腎病模型的基礎(chǔ)上，給予AXL激動劑進(jìn)行干預(yù)，AXL激動劑選用Gas6蛋白，通過尾靜脈注射給藥，劑量為10μg/kg，每周3次。在實(shí)驗(yàn)過程中，定期收集小鼠的尿液，檢測尿蛋白含量，采用雙縮脲法進(jìn)行測定。在實(shí)驗(yàn)第2、4、6周時(shí)，采集小鼠的血液，檢測血甘油三酯、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、尿素、低密度脂蛋白、膽固醇和肌酐等指標(biāo)，使用全自動生化分析儀進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，取腎臟組織分成三部分，分別進(jìn)行過碘酸-六胺銀（PASM）染色、免疫熒光和電鏡檢查。PASM染色用于觀察腎小球基底膜的增厚情況；免疫熒光染色用于檢測小鼠IgG在腎小球的沉積情況，采用間接熒光染色方法，將切片置于避光的濕盒內(nèi)，PBS清洗后，滴加100μL自發(fā)熒光淬滅劑，37℃孵育60min。PBS清洗后，滴加兔抗小鼠的IgG（1∶200）4℃孵育過夜。待PBS清洗后，每張切片加入DyLightTM488標(biāo)記的山羊抗兔熒光二抗（1∶100），室溫下避光孵育60min。PBS清洗后，緩沖甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。電鏡檢查則是將腎樣品切成2mm×2mm的小條，放入25g/L的戊二醛固定，而后進(jìn)行脫水、置換、浸透、聚合、切片、染色、超薄切片，透射電鏡下觀察足細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。4.2.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法與流程在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，選用小鼠足細(xì)胞系進(jìn)行體外培養(yǎng)。足細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代或?qū)嶒?yàn)處理。為研究AXL對足細(xì)胞的作用，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將AXL過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至足細(xì)胞中，以構(gòu)建AXL過表達(dá)細(xì)胞模型。同時(shí)，設(shè)置對照組，轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染過程嚴(yán)格按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒說明書進(jìn)行操作。轉(zhuǎn)染48h后，采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測AXL的過表達(dá)效率。提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA法測定蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，加入抗AXL抗體（1∶1000）4℃孵育過夜。次日，加入相應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗（1∶5000）室溫孵育1h，采用化學(xué)發(fā)光法顯影。提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增，以GAPDH為內(nèi)參，采用2^-ΔΔCt法計(jì)算AXLmRNA的相對表達(dá)量。為抑制AXL的活性，使用AXL抑制劑BGB324處理足細(xì)胞。將足細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，分別加入不同濃度（0、1、5、10μmol/L）的BGB324，處理24h。采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性，按照CCK-8試劑盒說明書操作，在酶標(biāo)儀上測定450nm處的吸光度值。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況，收集細(xì)胞，用BindingBuffer重懸細(xì)胞，加入AnnexinV-FITC和PI染色液，避光孵育15min，在流式細(xì)胞儀上檢測凋亡細(xì)胞比例。采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力，將Transwell小室置于24孔板中，在上室加入無血清培養(yǎng)基重懸的細(xì)胞，下室加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后，取出小室，擦去上室未遷移的細(xì)胞，用甲醇固定，結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量。為探究AXL對足細(xì)胞相關(guān)信號通路的影響，采用Westernblot檢測PI3K/Akt、MAPK等信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。提取不同處理組細(xì)胞的總蛋白，按照上述Westernblot方法進(jìn)行操作，分別加入抗p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-ERK、ERK等抗體（1∶1000），4℃孵育過夜，次日加入相應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗（1∶5000）室溫孵育1h，化學(xué)發(fā)光法顯影，分析信號通路蛋白的磷酸化水平變化。4.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠尿蛋白含量顯著高于對照組（P<0.05），血甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白升高，總蛋白、白蛋白降低，腎功能指標(biāo)（尿素、肌酐）升高，表明膜性腎病模型構(gòu)建成功。與模型組相比，AXL抑制劑干預(yù)組小鼠尿蛋白含量明顯降低（P<0.05），血甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白水平下降，總蛋白、白蛋白水平升高，腎功能指標(biāo)改善。PASM染色顯示，模型組小鼠腎小球基底膜增厚，AXL抑制劑干預(yù)組基底膜增厚程度減輕。免疫熒光染色顯示，模型組小鼠IgG在腎小球毛細(xì)血管壁呈顆粒狀沉積，AXL抑制劑干預(yù)組沉積減少。電鏡下，模型組小鼠足細(xì)胞足突廣泛融合，AXL抑制劑干預(yù)組足細(xì)胞足突融合程度減輕。而AXL激動劑干預(yù)組小鼠上述指標(biāo)變化與模型組相比更加嚴(yán)重（P<0.05）。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組相比，AXL過表達(dá)組足細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)（P<0.05），凋亡比例降低（P<0.05），遷移能力增強(qiáng)（P<0.05）。PI3K/Akt、MAPK信號通路相關(guān)蛋白p-PI3K、p-Akt、p-ERK的表達(dá)水平升高。使用AXL抑制劑BGB324處理足細(xì)胞后，隨著抑制劑濃度的增加，足細(xì)胞增殖活性受到抑制（P<0.05），凋亡比例增加（P<0.05），遷移能力減弱（P<0.05），p-PI3K、p-Akt、p-ERK的表達(dá)水平降低。綜合動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出結(jié)論：AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。AXL的激活可能通過促進(jìn)足細(xì)胞增殖、抑制凋亡、增強(qiáng)遷移能力，以及激活PI3K/Akt、MAPK等信號通路，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障受損，加重蛋白尿和腎臟病理損傷。抑制AXL的活性可以改善膜性腎病動物模型的腎臟病變和蛋白尿情況，為膜性腎病的治療提供了潛在的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。4.3作用機(jī)制探討4.3.1對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用AXL受體酪氨酸激酶在免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其對B細(xì)胞和T細(xì)胞等免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)機(jī)制復(fù)雜且多樣，與膜性腎病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。在B細(xì)胞方面，AXL通過多種途徑影響其功能。AXL的激活能夠促進(jìn)B細(xì)胞的增殖，這一過程涉及到多條信號通路的調(diào)控。AXL與配體Gas6結(jié)合后，激活下游的PI3K-Akt-mTOR信號通路。在該信號通路中，PI3K被激活后，催化磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3），PIP3作為第二信使，招募并激活A(yù)kt蛋白。Akt進(jìn)一步激活mTOR，mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、增殖和代謝等過程。在B細(xì)胞中，mTOR的激活促進(jìn)了蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而推動B細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，促進(jìn)B細(xì)胞的增殖。研究表明，在體外培養(yǎng)的B細(xì)胞中，加入Gas6刺激AXL，可顯著增加B細(xì)胞的增殖率，而使用AXL抑制劑阻斷AXL信號通路后，B細(xì)胞的增殖受到明顯抑制。AXL對B細(xì)胞抗體分泌的影響也不容忽視。它可以通過調(diào)節(jié)B細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響抗體的類別轉(zhuǎn)換和分泌過程。在B細(xì)胞受到抗原刺激后，AXL信號通路的激活能夠上調(diào)一些與抗體類別轉(zhuǎn)換相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如激活誘導(dǎo)的胞嘧啶脫氨酶（AID）等。AID在抗體類別轉(zhuǎn)換過程中起著關(guān)鍵作用，它能夠誘導(dǎo)DNA的脫氨基作用，從而促進(jìn)免疫球蛋白基因的重排和類別轉(zhuǎn)換。AXL通過激活PI3K-Akt-mTOR信號通路，間接促進(jìn)AID的表達(dá)，使得B細(xì)胞能夠產(chǎn)生不同類型的抗體，如IgG、IgA等。在膜性腎病患者中，AXL的異常激活可能導(dǎo)致B細(xì)胞過度分泌抗體，尤其是抗磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體等致病性抗體，這些抗體與足細(xì)胞表面的PLA2R抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而激活補(bǔ)體系統(tǒng)，引發(fā)腎臟損傷。研究發(fā)現(xiàn)，膜性腎病患者體內(nèi)AXL表達(dá)水平與PLA2R抗體滴度呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了AXL在B細(xì)胞抗體分泌調(diào)控中的重要作用。在T細(xì)胞方面，AXL同樣參與了其功能的調(diào)節(jié)。AXL在T細(xì)胞的活化、分化和免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮著重要作用。在T細(xì)胞活化階段，AXL可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞受體（TCR）信號通路的強(qiáng)度。當(dāng)TCR與抗原呈遞細(xì)胞表面的抗原肽-MHC復(fù)合物結(jié)合后，會啟動一系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。AXL通過與TCR信號通路中的一些關(guān)鍵分子相互作用，如Lck、ZAP-70等，調(diào)節(jié)TCR信號的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。研究表明，AXL能夠抑制Lck的磷酸化，從而減弱TCR信號通路的激活，避免T細(xì)胞的過度活化。在T細(xì)胞分化過程中，AXL影響T細(xì)胞向不同亞群的分化。在Th1/Th2細(xì)胞分化中，AXL信號通路的激活有利于Th2細(xì)胞的分化，抑制Th1細(xì)胞的分化。這是因?yàn)锳XL激活后，通過調(diào)節(jié)一些轉(zhuǎn)錄因子的活性，如STAT6等，促進(jìn)Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-13等）的表達(dá)，抑制Th1細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（如IFN-γ等）的表達(dá)。在膜性腎病中，Th2細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子可能參與了疾病的發(fā)生發(fā)展，Th2細(xì)胞分泌的IL-4等細(xì)胞因子可以促進(jìn)B細(xì)胞的活化和抗體分泌，加重免疫損傷。AXL在T細(xì)胞調(diào)節(jié)中的異?？赡軐?dǎo)致T細(xì)胞免疫失衡，進(jìn)而影響膜性腎病的發(fā)病過程。4.3.2對足細(xì)胞的損傷機(jī)制AXL受體酪氨酸激酶對足細(xì)胞的損傷機(jī)制是其參與膜性腎病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，主要通過影響足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障破壞，進(jìn)而引發(fā)蛋白尿等癥狀。足細(xì)胞作為腎小球?yàn)V過屏障的重要組成部分，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性對于維持正常的腎小球?yàn)V過功能至關(guān)重要。足細(xì)胞具有獨(dú)特的形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞體、主突和足突，足突之間形成裂孔隔膜，與腎小球基底膜共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過屏障。AXL通過多種途徑影響足細(xì)胞的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，從而破壞腎小球?yàn)V過屏障。AXL激活后，通過下游的Rho家族小GTP酶（如RhoA、Rac1等）來調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的動態(tài)變化。RhoA被激活后，可促進(jìn)肌動蛋白微絲的聚合，導(dǎo)致足細(xì)胞足突回縮和融合。在膜性腎病的動物模型和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)AXL過度激活時(shí)，RhoA的活性升高，足細(xì)胞內(nèi)的肌動蛋白微絲發(fā)生重排，足突的形態(tài)和分布發(fā)生改變，裂孔隔膜的結(jié)構(gòu)也受到破壞，使得腎小球?yàn)V過屏障的孔徑增大，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)得以通過，從而導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生。AXL還可以通過影響細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的表達(dá)和磷酸化水平來調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。它可以上調(diào)一些促進(jìn)細(xì)胞骨架收縮的蛋白表達(dá)，如肌球蛋白輕鏈（MLC）等，同時(shí)抑制一些維持細(xì)胞骨架穩(wěn)定的蛋白表達(dá)，如α-輔肌動蛋白等。MLC的磷酸化水平升高會導(dǎo)致肌動蛋白與肌球蛋白相互作用增強(qiáng)，引起細(xì)胞骨架收縮，進(jìn)一步破壞足細(xì)胞的形態(tài)和功能。AXL對足細(xì)胞裂孔隔膜的影響也不容忽視。裂孔隔膜是足細(xì)胞足突之間的一種特殊結(jié)構(gòu)，主要由多種蛋白質(zhì)組成，如nephrin、podocin、CD2AP等，這些蛋白質(zhì)相互作用形成一個(gè)復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò)，維持著裂孔隔膜的完整性和功能。AXL激活后，通過影響裂孔隔膜相關(guān)蛋白的表達(dá)和定位，破壞裂孔隔膜的結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn)，AXL可以下調(diào)nephrin和podocin的表達(dá)水平，使得裂孔隔膜的分子組成發(fā)生改變，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性下降。AXL還可以影響這些蛋白之間的相互作用，導(dǎo)致裂孔隔膜的功能受損。在足細(xì)胞中，nephrin和podocin通過相互作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物，共同維持裂孔隔膜的正常功能。當(dāng)AXL激活后，可能通過調(diào)節(jié)一些信號通路，如PI3K-Akt信號通路，影響nephrin和podocin的磷酸化狀態(tài)，從而破壞它們之間的相互作用。在膜性腎病患者的腎臟組織中，觀察到nephrin和podocin的表達(dá)減少以及分布異常，這與AXL的異常激活密切相關(guān)。此外，AXL還可能通過影響足細(xì)胞的凋亡和自噬過程，間接導(dǎo)致裂孔隔膜的損傷。AXL激活后，通過激活PI3K-Akt-mTOR信號通路，抑制足細(xì)胞的凋亡。然而，在某些情況下，過度激活的AXL可能會打破足細(xì)胞凋亡和存活的平衡，導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡增加。足細(xì)胞凋亡后，其釋放的細(xì)胞碎片可能會破壞裂孔隔膜的結(jié)構(gòu)。AXL還可以調(diào)節(jié)足細(xì)胞的自噬過程，自噬是細(xì)胞內(nèi)的一種自我降解機(jī)制，對于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和細(xì)胞的存活具有重要作用。當(dāng)AXL異常激活時(shí)，可能會干擾足細(xì)胞的自噬功能，導(dǎo)致自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)和活性改變，使得足細(xì)胞內(nèi)的代謝產(chǎn)物和受損細(xì)胞器不能及時(shí)清除，從而影響足細(xì)胞的正常功能，間接導(dǎo)致裂孔隔膜的損傷。4.3.3與其他信號通路的交互作用AXL受體酪氨酸激酶與已知膜性腎病相關(guān)信號通路之間存在著復(fù)雜的交互作用，這種交互作用在膜性腎病的發(fā)病機(jī)制中起著重要的調(diào)節(jié)作用，深入研究它們之間的協(xié)同或拮抗關(guān)系，對于揭示膜性腎病的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。AXL與PI3K-AKT信號通路之間存在著密切的交互作用。在正常生理狀態(tài)下，PI3K-AKT信號通路在細(xì)胞的生長、增殖、存活和代謝等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞受到生長因子等刺激時(shí)，PI3K被激活，催化PIP2生成PIP3，PIP3招募并激活A(yù)KT，AKT通過磷酸化下游的多種底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)功能。AXL與PI3K-AKT信號通路之間存在著正向調(diào)節(jié)關(guān)系。AXL與配體Gas6結(jié)合后，能夠激活PI3K-AKT信號通路。在足細(xì)胞中，AXL激活PI3K-AKT信號通路后，促進(jìn)足細(xì)胞的增殖和存活。它可以通過磷酸化一些與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白，如p27等，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程，促進(jìn)足細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化。AXL激活PI3K-AKT信號通路還可以抑制足細(xì)胞的凋亡，通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，維持足細(xì)胞的存活。在膜性腎病的發(fā)病過程中，AXL的異常激活可能通過過度激活PI3K-AKT信號通路，導(dǎo)致足細(xì)胞的異常增殖和存活，打破足細(xì)胞的正常生理平衡，從而促進(jìn)疾病的發(fā)展。然而，PI3K-AKT信號通路的過度激活也可能反饋調(diào)節(jié)AXL的表達(dá)和活性。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PI3K-AKT信號通路持續(xù)激活時(shí)，會通過一些轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB等，上調(diào)AXL的表達(dá)，進(jìn)一步增強(qiáng)AXL的信號傳導(dǎo)，形成一個(gè)正反饋調(diào)節(jié)環(huán)路。AXL與MAPK信號通路之間也存在著復(fù)雜的交互作用。MAPK信號通路包括ERK、JNK和p38MAPK等多個(gè)分支，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等過程中發(fā)揮著重要作用。AXL可以激活MAPK信號通路，在不同的細(xì)胞類型和生理病理?xiàng)l件下，AXL對MAPK信號通路的激活方式和程度有所不同。在足細(xì)胞中，AXL與Gas6結(jié)合后，通過激活Ras-Raf-Mek-Erk信號通路，調(diào)節(jié)足細(xì)胞的遷移和細(xì)胞骨架的重組。研究表明，在體外培養(yǎng)的足細(xì)胞中，加入Gas6刺激AXL，可顯著增加Erk的磷酸化水平，促進(jìn)足細(xì)胞的遷移能力。然而，在某些情況下，AXL與MAPK信號通路之間也可能存在拮抗關(guān)系。在炎癥反應(yīng)過程中，JNK和p38MAPK信號通路被激活，參與炎癥因子的產(chǎn)生和細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)。而AXL的激活可能通過一些機(jī)制抑制JNK和p38MAPK信號通路的活性，從而減輕炎癥反應(yīng)。在膜性腎病中，炎癥反應(yīng)是疾病發(fā)展的重要因素之一，AXL與MAPK信號通路之間的這種交互作用可能影響著炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度和疾病的進(jìn)程。如果AXL能夠有效抑制JNK和p38MAPK信號通路的過度激活，可能有助于減輕腎臟的炎癥損傷；反之，如果AXL與MAPK信號通路之間的平衡失調(diào)，可能導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇，促進(jìn)膜性腎病的惡化。五、基于AXL的膜性腎病治療策略探討5.1現(xiàn)有治療方法局限性目前，膜性腎病的治療主要依賴免疫抑制治療，然而這些治療方法存在諸多局限性，影響了治療效果和患者的預(yù)后。鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（CNI）是膜性腎病治療中常用的藥物之一，包括環(huán)孢素和他克莫司。環(huán)孢素通過抑制T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，減少細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮免疫抑制作用。一項(xiàng)研究表明，環(huán)孢素治療膜性腎病，6個(gè)月時(shí)蛋白尿緩解率可達(dá)50%-60%。但環(huán)孢素的副作用較為明顯，它具有腎毒性，長期使用可導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮，進(jìn)而影響腎功能。有研究對使用環(huán)孢素治療的膜性腎病患者進(jìn)行長期隨訪，發(fā)現(xiàn)約30%的患者在治療1-2年后出現(xiàn)腎功能減退。環(huán)孢素還可能引起高血壓、高血糖、多毛癥、牙齦增生等不良反應(yīng)，這些副作用不僅影響患者的生活質(zhì)量，還可能導(dǎo)致患者因無法耐受而中斷治療。他克莫司的作用機(jī)制與環(huán)孢素類似，雖然在免疫抑制效果上可能略優(yōu)于環(huán)孢素，但其同樣存在腎毒性，且可能引發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如震顫、頭痛、失眠等。有報(bào)道稱，使用他克莫司治療的患者中，約15%出現(xiàn)了不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，這也限制了其在臨床中的廣泛應(yīng)用。環(huán)磷酰胺也是膜性腎病治療的重要藥物之一，它屬于細(xì)胞毒性藥物，通過抑制DNA合成，殺傷增殖活躍的淋巴細(xì)胞，從而抑制免疫反應(yīng)。環(huán)磷酰胺常與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合使用，可提高膜性腎病的緩解率。一項(xiàng)多中心研究顯示，激素聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療膜性腎病，12個(gè)月時(shí)蛋白尿緩解率可達(dá)70%左右。然而，環(huán)磷酰胺的副作用嚴(yán)重，它可導(dǎo)致骨髓抑制，使白細(xì)胞、血小板減少，增加感染和出血的風(fēng)險(xiǎn)。在使用環(huán)磷酰胺治療的患者中，約20%-30%會出現(xiàn)不同程度的骨髓抑制。環(huán)磷酰胺還可能引起性腺抑制，導(dǎo)致男性精子減少、女性月經(jīng)紊亂甚至閉經(jīng)。一項(xiàng)對使用環(huán)磷酰胺治療的女性膜性腎病患者的研究發(fā)現(xiàn)，約50%的患者在治療后出現(xiàn)月經(jīng)異常。環(huán)磷酰胺還可能引發(fā)出血性膀胱炎、惡心、嘔吐等不良反應(yīng)，這些副作用給患者帶來了極大的痛苦，也對患者的生育和生活產(chǎn)生了長遠(yuǎn)的影響。利妥昔單抗作為一種生物制劑，近年來在膜性腎病治療中得到應(yīng)用。它是一種抗CD20的單克隆抗體，能夠特異性地清除B淋巴細(xì)胞，減少抗體的產(chǎn)生。多項(xiàng)研究表明，利妥昔單抗治療膜性腎病，6-12個(gè)月時(shí)蛋白尿緩解率可達(dá)60%-80%。然而，仍有約20%-40%的患者對利妥昔單抗的第一療程無反應(yīng)，5%-28%的患者在緩解期后復(fù)發(fā)。利妥昔單抗可能導(dǎo)致感染，如呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染等，其感染發(fā)生率與既往的免疫抑制藥物類似。還可能出現(xiàn)輸注相關(guān)反應(yīng)，如發(fā)熱、寒戰(zhàn)、皮疹等。在使用利妥昔單抗治療的患者中，約10%-15%會出現(xiàn)不同程度的輸注相關(guān)反應(yīng)，這也限制了其在一些患者中的使用。5.2以AXL為靶點(diǎn)的治療藥物研發(fā)前景隨著對AXL受體酪氨酸激酶在膜性腎病發(fā)病機(jī)制中作用的深入研究，以AXL為靶點(diǎn)的治療藥物研發(fā)成為膜性腎病治療領(lǐng)域的新熱點(diǎn)，展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。R428是一種具有代表性的AXL抑制劑，在研發(fā)過程中取得了顯著進(jìn)展。R428能夠與AXL受體酪氨酸激酶的ATP結(jié)合位點(diǎn)緊密結(jié)合，從而競爭性地抑制ATP與AXL的結(jié)合，有效阻斷AXL激酶的活性。在臨床前研究中，R428表現(xiàn)出良好的抑制AXL活性的能力。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，使用R428處理表達(dá)AXL的細(xì)胞，能夠顯著降低AXL的磷酸化水平，進(jìn)而抑制下游信號通路的激活。研究表明，在人足細(xì)胞系中，R428可以有效抑制AXL激活PI3K-Akt-mTOR信號通路，減少足細(xì)胞的增殖和遷移，同時(shí)促進(jìn)足細(xì)胞的凋亡。在動物實(shí)驗(yàn)中，將R428用于膜性腎病動物模型，發(fā)現(xiàn)其可以顯著降低動物的蛋白尿水平，改善腎臟病理損傷。與傳統(tǒng)的免疫抑制劑相比，R428具有獨(dú)特的優(yōu)勢。傳統(tǒng)免疫抑制劑如環(huán)磷酰胺等，在抑制免疫反應(yīng)的同時(shí)，會對全身免疫系統(tǒng)產(chǎn)生廣泛的抑制作用，導(dǎo)致患者免疫力下降，容易發(fā)生感染等并發(fā)癥。而R428作為一種靶向AXL的抑制劑，具有較高的特異性，能夠精準(zhǔn)地作用于AXL信號通路，對其他正常細(xì)胞和信號通路的影響較小。這使得R428在治療膜性腎病時(shí)，可能具有更低的副作用風(fēng)險(xiǎn)，能夠在有效治療疾病的同時(shí)，減少對患者身體的不良影響。TP-0903也是一種高效且選擇性的Axl受體酪氨酸激酶抑制劑，其IC??值為27nM。在對多種激酶的抑制研究中，TP-0903展現(xiàn)出獨(dú)特的選擇性。在200nM濃度下，它對75種激酶中的11種，包括MER、TYRO3、JAK2、ALK和Abl1等，具有超過50%的抑制率，而對其他激酶的抑制作用相對較弱。這種選擇性使得TP-0903在抑制AXL信號通路時(shí)，能夠減少對其他非相關(guān)激酶的干擾，從而降低潛在的副作用。在針對膜性腎病的研究中，TP-0903在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出良好的效果。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，TP-0903能夠有效抑制AXL的活性，降低相關(guān)信號通路的激活水平。在GAS6刺激的血清饑餓PSN-1胰腺癌細(xì)胞中，TP-0903可以顯著降低Akt和Axl的磷酸化水平，EC??分別為305nM和222nM。在動物實(shí)驗(yàn)中，將TP-0903用于相關(guān)疾病模型，能夠顯著抑制腫瘤生長。在HCT116小鼠異種移植模型和K-Ras突變CRC患者來源異種移植（PDX）小鼠模型中，以40mg/kg劑量給藥時(shí)，TP-0903分別抑制腫瘤生長69%和44%。雖然目前TP-0903在膜性腎病模型中的研究相對較少，但基于其在其他相關(guān)疾病模型中的良好表現(xiàn)，推測其在膜性腎病治療中可能具有潛力。它有望通過抑制AXL信號通路，減少足細(xì)胞的損傷，改善腎小球?yàn)V過屏障的功能，從而降低蛋白尿水平，延緩膜性腎病的進(jìn)展。以AXL為靶點(diǎn)的治療藥物在抑制膜性腎病發(fā)病機(jī)制方面具有巨大的潛力。R428和TP-0903等AXL抑制劑的研發(fā)進(jìn)展為膜性腎病的治療提供了新的希望。然而，目前這些藥物仍處于研究階段，在臨床應(yīng)用之前還需要進(jìn)一步的研究和驗(yàn)證。未來，隨著對AXL信號通路研究的不斷深入以及藥物研發(fā)技術(shù)的不斷進(jìn)步，相信會有更多高效、安全的以AXL為靶點(diǎn)的治療藥物問世，為膜性腎病患者帶來更好的治療效果和預(yù)后。5.3聯(lián)合治療方案設(shè)想考慮到膜性腎病發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性以及現(xiàn)有治療方法的局限性，將AXL抑制劑與現(xiàn)有治療藥物聯(lián)合使用可能是一種具有潛力的治療策略，有望通過協(xié)同效應(yīng)提高治療效果，同時(shí)降低單一藥物的副作用。AXL抑制劑與免疫抑制劑聯(lián)合使用是一種可行的聯(lián)合治療方案。以利妥昔單抗為例，利妥昔單抗是一種抗CD20的單克隆抗體，通過清除B淋巴細(xì)胞，減少抗體的產(chǎn)生，從而發(fā)揮治療膜性腎病的作用。然而，部分患者對利妥昔單抗治療無反應(yīng)或出現(xiàn)復(fù)發(fā)。將AXL抑制劑與利妥昔單抗聯(lián)合使用，可能通過不同的作用機(jī)制協(xié)同發(fā)揮作用。AXL抑制劑可以抑制AXL受體酪氨酸激酶的活性，減少其對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，從而抑制免疫反應(yīng)的過度激活。利妥昔單抗則主要針對B淋巴細(xì)胞，減少抗體的產(chǎn)生。兩者聯(lián)合使用，一方面可以從多個(gè)環(huán)節(jié)抑制免疫反應(yīng)，提高治療效果；另一方面，由于減少了單一藥物的使用劑量，可能降低利妥昔單抗的副作用，如感染、輸注相關(guān)反應(yīng)等。研究表明，在某些自身免疫性疾病的治療中，聯(lián)合使用不同作用機(jī)制的藥物可以顯著提高治療效果。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療中，聯(lián)合使用抗CD20抗體和其他免疫抑制劑，能夠更有效地控制病情，減少疾病的復(fù)發(fā)。因此，推測在膜性腎病的治療中，AXL抑制劑與利妥昔單抗的聯(lián)合使用也可能產(chǎn)生類似的協(xié)同效應(yīng)。AXL抑制劑與鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（CNI）聯(lián)合使用也具有一定的優(yōu)勢。環(huán)孢素和他克莫司等CNI是膜性腎病治療中常用的藥物，它們通過抑制T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，發(fā)揮免疫抑制作用。然而，CNI存在腎毒性、高血壓等副作用，且部分患者對其治療反應(yīng)不佳。AXL抑制劑可以通過抑制AXL信號通路，減少足細(xì)胞的損傷，改善腎小球?yàn)V過屏障的功能。與CNI聯(lián)合使