NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性探究一、引言1.1研究背景1.1.1食管鱗癌現(xiàn)狀食管癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在各類癌癥中位居第七，死亡率更是高居第六。從地域分布來(lái)看，食管癌的發(fā)病情況存在顯著的地區(qū)差異，亞洲、非洲以及拉丁美洲等地區(qū)的發(fā)病率明顯高于歐美國(guó)家。在我國(guó)，食管癌同樣是高發(fā)疾病，全球超過(guò)半數(shù)的新發(fā)病例和死亡病例都發(fā)生在我國(guó)，且我國(guó)食管癌患者中90%以上為食管鱗癌。2020年我國(guó)食管癌新發(fā)病例數(shù)高達(dá)32萬(wàn)，死亡病例數(shù)達(dá)到30萬(wàn)，發(fā)病率和死亡率分別位居國(guó)內(nèi)所有惡性腫瘤中的第五和第四位。食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的復(fù)雜過(guò)程，其確切病因至今尚未完全明確。目前認(rèn)為，環(huán)境因素和遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。環(huán)境因素主要包括飲食習(xí)慣，如長(zhǎng)期食用過(guò)燙食物、腌制食品、霉變食物等；生活方式，如吸煙、過(guò)度飲酒等；以及感染因素，如人乳頭瘤病毒（HPV）感染等。遺傳因素則涉及多個(gè)基因的突變和多態(tài)性，這些遺傳變異可能影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過(guò)程，從而增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。食管鱗癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期。中晚期食管鱗癌患者的治療手段主要包括手術(shù)、放療、化療以及免疫治療等，但總體療效仍不理想，5年總生存率不足20%。局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的主要原因，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。因此，深入探究食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高食管鱗癌的防治水平具有至關(guān)重要的意義。1.1.2NAMPT基因概述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（NicotinamidePhosphoribosyltransferase，NAMPT）基因在生命活動(dòng)中扮演著極為關(guān)鍵的角色。1994年，科研人員首次從激活的人外周血淋巴細(xì)胞的cDNA基因庫(kù)中篩選出其編碼基因，當(dāng)時(shí)它被命名為PBEF；2001年，人們發(fā)現(xiàn)PBEF在細(xì)胞內(nèi)具有NAMPT的活性，因而將其又稱NAMPT；2005年，逐漸證實(shí)PBEF、NAMPT和visfatin實(shí)際上是由一種基因編碼的同一個(gè)蛋白質(zhì)分子。NAMPT基因廣泛分布于人體的各個(gè)組織和器官，在骨髓、肝、肌肉、內(nèi)臟脂肪等器官以及免疫細(xì)胞、心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞中均有表達(dá)，但星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)NAMPT。這種廣泛的分布暗示著NAMPT在生理及病理狀態(tài)下都有著不可或缺的作用。從功能層面來(lái)看，在細(xì)胞內(nèi)，NAMPT主要分布于胞質(zhì)、胞核和線粒體，以ATP為激活物，作為NAD補(bǔ)救合成途徑的限速酶發(fā)揮其核心生物學(xué)功能。它參與了能量代謝、還原性生物合成、抗氧化反應(yīng)、細(xì)胞存活以及死亡等多個(gè)關(guān)鍵生物學(xué)過(guò)程。具體而言，NAMPT通過(guò)促進(jìn)5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）中的核糖組分與煙酰胺（NAM）可逆性結(jié)合，使NAM轉(zhuǎn)化為煙酰胺單核苷酸（NMN），進(jìn)而NMN在NMNAT作用下轉(zhuǎn)化為NAD。一旦細(xì)胞內(nèi)NAMPT含量不足或酶活性降低，NAD的合成途徑及NAD參與的細(xì)胞代謝就會(huì)被阻斷，這將導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生ATP和1，3-二磷酸甘油酸等生物大分子的能力下降，對(duì)細(xì)胞外葡萄糖缺乏的耐受能力也會(huì)減弱。與此同時(shí)，NAMPT還通過(guò)合成NAD間接影響NAD依賴的酶活性，進(jìn)而精細(xì)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞代謝和NAD合成能力。在細(xì)胞外，NAMPT具有生長(zhǎng)因子作用。例如，在干細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素7存在時(shí)，NAMPT可促進(jìn)前B細(xì)胞克隆形成并有利于B細(xì)胞成熟，這也是其最初被稱為PBEF的由來(lái)。越來(lái)越多的研究表明，NAMPT與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在多種腫瘤患者體內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞外NAMPT均比正常對(duì)照有明顯升高，已有研究證明結(jié)直腸癌、胃癌、黑色素瘤、膠質(zhì)瘤、乳腺癌患者體內(nèi)，NAMPT的含量明顯增高。其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制主要包括：調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與凋亡，通過(guò)影響NAD依賴的酶活性，如Sirtuins家族蛋白，調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖并抑制其凋亡；參與血管生成，通過(guò)分泌相關(guān)細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣；影響腫瘤細(xì)胞的耐藥性，改變腫瘤細(xì)胞內(nèi)的代謝環(huán)境，降低化療藥物的敏感性，導(dǎo)致腫瘤耐藥的發(fā)生。鑒于NAMPT在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵作用，以及食管鱗癌嚴(yán)峻的發(fā)病形勢(shì)和治療困境，深入研究NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，對(duì)于揭示食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值，有望為食管鱗癌的防治提供新的思路和策略。1.2研究目的與意義食管鱗癌嚴(yán)重威脅人類健康，尤其在我國(guó)，其發(fā)病率和死亡率居高不下。雖然環(huán)境因素被認(rèn)為是重要的發(fā)病原因，但遺傳因素在食管鱗癌發(fā)生中的作用也不容忽視。NAMPT基因作為NAD補(bǔ)救合成途徑的限速酶，在多種腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、血管生成以及耐藥等過(guò)程，對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要影響。然而，目前關(guān)于NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系尚未完全明確。本研究旨在深入探究NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。通過(guò)對(duì)大量食管鱗癌患者和健康對(duì)照人群的基因檢測(cè)和分析，明確NAMPT基因多態(tài)性位點(diǎn)在食管鱗癌患者中的分布頻率，并與健康人群進(jìn)行對(duì)比，以揭示特定基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的潛在聯(lián)系。本研究還將進(jìn)一步分析不同基因型與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，包括腫瘤的分期、分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，探討NAMPT基因多態(tài)性對(duì)食管鱗癌臨床進(jìn)程的影響。通過(guò)研究NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，不僅可以為食管鱗癌的早期診斷提供潛在的分子標(biāo)志物，有助于在疾病早期識(shí)別高風(fēng)險(xiǎn)人群，實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，從而提高患者的生存率和生存質(zhì)量；還能為食管鱗癌的預(yù)防策略制定提供科學(xué)依據(jù)，針對(duì)攜帶特定基因多態(tài)性的人群采取更有針對(duì)性的預(yù)防措施，降低食管鱗癌的發(fā)病率；在個(gè)性化治療方面，有助于篩選出對(duì)特定治療方法更為敏感的患者群體，為實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療提供理論支持，提高治療效果，減少不必要的治療副作用。本研究對(duì)于揭示食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制、改善食管鱗癌的防治現(xiàn)狀具有重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值，有望為食管鱗癌的防治開(kāi)辟新的道路，為患者帶來(lái)更多的生存希望。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1基因多態(tài)性2.1.1概念與類型基因多態(tài)性是指在一個(gè)生物群體中，同時(shí)和經(jīng)常存在兩種或多種不連續(xù)的變異型或基因型或等位基因。從本質(zhì)上講，多態(tài)性產(chǎn)生于基因水平的變異，這種變異通常發(fā)生在不編碼蛋白區(qū)域和沒(méi)有重要調(diào)節(jié)功能的區(qū)域。對(duì)于一個(gè)個(gè)體而言，基因多態(tài)性的堿基順序基本終生不變，并按照孟德?tīng)栆?guī)律世代相傳?；蚨鄳B(tài)性在生物群體中十分普遍，它是生物進(jìn)化的基礎(chǔ)，為自然選擇提供了豐富的遺傳素材，使得生物能夠更好地適應(yīng)不斷變化的環(huán)境。同時(shí)，基因多態(tài)性在人類健康和疾病研究中也具有重要意義，許多疾病的發(fā)生發(fā)展都與特定的基因多態(tài)性密切相關(guān)。單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）是最常見(jiàn)的基因多態(tài)性類型，指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。這種變異包括單個(gè)堿基的替換、插入或缺失，但最常見(jiàn)的是單堿基替換，即由一種堿基（如A、T、C、G中的一個(gè)）被另一種堿基所取代。SNP在人類基因組中廣泛分布，平均每1000個(gè)堿基對(duì)中就可能存在1個(gè)SNP。SNP可以發(fā)生在基因的編碼區(qū)、非編碼區(qū)以及調(diào)控區(qū)域，對(duì)基因的表達(dá)和功能產(chǎn)生不同程度的影響。在編碼區(qū)的SNP可能導(dǎo)致氨基酸序列的改變，從而影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，這種SNP被稱為錯(cuò)義SNP；而有些SNP雖然發(fā)生在編碼區(qū)，但由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，并不改變氨基酸序列，被稱為同義SNP。在非編碼區(qū)和調(diào)控區(qū)域的SNP則可能通過(guò)影響基因轉(zhuǎn)錄、mRNA剪接、穩(wěn)定性以及翻譯等過(guò)程，間接影響基因的表達(dá)和功能。插入/缺失多態(tài)性（Insertion/DeletionPolymorphism，InDel）是指在基因組中，某些DNA片段的插入或缺失導(dǎo)致的多態(tài)性。這些插入或缺失的片段長(zhǎng)度可以從幾個(gè)堿基對(duì)到數(shù)千個(gè)堿基對(duì)不等。InDel在基因組中也較為常見(jiàn)，它可能發(fā)生在基因內(nèi)部或基因間區(qū)域。發(fā)生在基因內(nèi)部的InDel可能會(huì)改變基因的閱讀框，導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯提前終止或產(chǎn)生異常的蛋白質(zhì)，從而影響基因的功能；發(fā)生在基因間區(qū)域的InDel則可能通過(guò)影響基因的調(diào)控元件，間接影響基因的表達(dá)。微衛(wèi)星多態(tài)性（MicrosatellitePolymorphism），又稱短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeat，STR）多態(tài)性，是由2-6個(gè)核苷酸組成的串聯(lián)重復(fù)序列，其重復(fù)次數(shù)在不同個(gè)體間存在差異，從而形成多態(tài)性。微衛(wèi)星廣泛分布于基因組中，具有高度的多態(tài)性和遺傳穩(wěn)定性。由于其多態(tài)性豐富、檢測(cè)方便，微衛(wèi)星多態(tài)性在遺傳連鎖分析、親子鑒定、疾病基因定位等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。例如，在遺傳性疾病的研究中，可以通過(guò)分析微衛(wèi)星標(biāo)記與疾病基因的連鎖關(guān)系，定位疾病相關(guān)基因?；蚨鄳B(tài)性對(duì)生物表型和疾病易感性有著深遠(yuǎn)的影響。在生物表型方面，基因多態(tài)性可以導(dǎo)致個(gè)體間在生理特征、代謝能力、藥物反應(yīng)等方面的差異。在藥物代謝過(guò)程中，某些基因的多態(tài)性會(huì)影響藥物代謝酶的活性，使得不同個(gè)體對(duì)同一藥物的代謝速度和效果不同。細(xì)胞色素P450酶系基因的多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致個(gè)體對(duì)某些藥物的代謝能力不同，從而影響藥物的療效和不良反應(yīng)。在疾病易感性方面，基因多態(tài)性與許多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。一些基因的多態(tài)性可能增加個(gè)體對(duì)特定疾病的易感性，成為疾病的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素；而另一些基因的多態(tài)性則可能具有保護(hù)作用，降低疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。載脂蛋白E（ApoE）基因的ε4等位基因與阿爾茨海默病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，而某些基因的多態(tài)性則可能與腫瘤、心血管疾病、糖尿病等復(fù)雜疾病的易感性相關(guān)。深入研究基因多態(tài)性與生物表型和疾病易感性的關(guān)系，對(duì)于疾病的預(yù)防、診斷和個(gè)性化治療具有重要意義。2.1.2研究方法檢測(cè)基因多態(tài)性的常用技術(shù)眾多，每種技術(shù)都有其獨(dú)特的原理、優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PolymeraseChainReaction-RestrictionFragmentLengthPolymorphism，PCR-RFLP）是一種經(jīng)典的基因多態(tài)性檢測(cè)方法。其原理是利用PCR技術(shù)擴(kuò)增含有多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段，然后用特定的限制性內(nèi)切酶切割擴(kuò)增產(chǎn)物。由于基因多態(tài)性的存在，不同個(gè)體的DNA序列在限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)上可能存在差異，導(dǎo)致切割后的片段長(zhǎng)度不同。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳分離這些片段，根據(jù)片段的大小和數(shù)量差異來(lái)判斷基因多態(tài)性。對(duì)于某一基因多態(tài)性位點(diǎn)，若野生型序列含有某一限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，而突變型序列該位點(diǎn)缺失。PCR擴(kuò)增后，野生型DNA經(jīng)酶切會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)較小的片段，而突變型DNA由于不能被酶切，仍為一個(gè)較大的片段，通過(guò)電泳即可區(qū)分不同基因型。PCR-RFLP技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是操作相對(duì)簡(jiǎn)單、成本較低，不需要昂貴的儀器設(shè)備，且結(jié)果較為直觀，易于分析和判斷。它也存在一些局限性，如只能檢測(cè)已知的限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)相關(guān)的多態(tài)性，對(duì)于未知的多態(tài)性無(wú)法檢測(cè)；酶切反應(yīng)的條件較為苛刻，容易受到酶的活性、反應(yīng)溫度、時(shí)間等因素的影響，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確；對(duì)于片段長(zhǎng)度差異較小的多態(tài)性，電泳分離效果可能不理想，難以準(zhǔn)確判斷。該技術(shù)適用于對(duì)已知多態(tài)性位點(diǎn)的初步篩查和驗(yàn)證，尤其在樣本量較大時(shí)，具有較高的性價(jià)比。測(cè)序技術(shù)是直接測(cè)定DNA序列的方法，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)基因多態(tài)性。隨著測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，從傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序到新一代測(cè)序技術(shù)（Next-GenerationSequencing，NGS），測(cè)序的通量、速度和準(zhǔn)確性都得到了極大的提高。Sanger測(cè)序基于雙脫氧核苷酸終止法，通過(guò)在DNA合成反應(yīng)中加入帶有熒光標(biāo)記的雙脫氧核苷酸，使DNA鏈的延伸隨機(jī)終止，然后通過(guò)電泳分離不同長(zhǎng)度的DNA片段，根據(jù)熒光信號(hào)讀取DNA序列。它的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確性高，是基因多態(tài)性檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，能夠檢測(cè)出任何類型的基因多態(tài)性，包括SNP、InDel、微衛(wèi)星多態(tài)性等。Sanger測(cè)序通量較低、成本較高，對(duì)于大規(guī)模樣本的檢測(cè)效率較低，且操作相對(duì)復(fù)雜，需要專業(yè)的技術(shù)人員和設(shè)備。新一代測(cè)序技術(shù)則具有高通量、低成本的優(yōu)勢(shì)，能夠同時(shí)對(duì)大量的DNA片段進(jìn)行測(cè)序。Illumina測(cè)序技術(shù)采用邊合成邊測(cè)序的原理，通過(guò)將DNA片段固定在芯片上，在DNA合成過(guò)程中加入帶有不同熒光標(biāo)記的核苷酸，根據(jù)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA序列的合成，一次測(cè)序可以產(chǎn)生數(shù)百萬(wàn)條序列讀數(shù)，大大提高了檢測(cè)效率。NGS技術(shù)的缺點(diǎn)是數(shù)據(jù)分析復(fù)雜，需要強(qiáng)大的計(jì)算資源和專業(yè)的生物信息學(xué)知識(shí)來(lái)處理和分析海量的測(cè)序數(shù)據(jù)；測(cè)序過(guò)程中可能會(huì)出現(xiàn)一些誤差，如堿基錯(cuò)配、插入缺失錯(cuò)誤等，需要進(jìn)行嚴(yán)格的數(shù)據(jù)質(zhì)量控制和驗(yàn)證。測(cè)序技術(shù)適用于對(duì)未知基因多態(tài)性的全面篩查和深入研究，尤其在全基因組關(guān)聯(lián)研究（Genome-WideAssociationStudy，GWAS）、腫瘤基因組學(xué)研究等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。2.2NAMPT基因結(jié)構(gòu)與功能2.2.1基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)NAMPT基因位于人類染色體7q22.1和7q31.33之間，長(zhǎng)度約為37.4kb，包含11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子。所有外顯子/內(nèi)含子剪接點(diǎn)均符合AG/GT規(guī)律，這種保守的剪接方式確保了基因轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。從進(jìn)化角度來(lái)看，NAMPT蛋白分子在從原核生物、原始多細(xì)胞動(dòng)物到人類的漫長(zhǎng)進(jìn)化歷程中，都具有高度的序列同源性。這種高度的保守性暗示著NAMPT在生物進(jìn)化過(guò)程中扮演著極為關(guān)鍵的角色，其功能對(duì)于維持生物體的正常生理活動(dòng)不可或缺。例如，在原核生物中，NAMPT可能參與基本的能量代謝和細(xì)胞存活過(guò)程，隨著生物進(jìn)化，其功能逐漸多樣化和復(fù)雜化，但始終保持著核心的生物學(xué)作用。NAMPT基因在人體組織和細(xì)胞中呈現(xiàn)廣泛且差異表達(dá)的特點(diǎn)。在組織層面，骨髓、肝臟、肌肉、內(nèi)臟脂肪等器官中均有較高水平的表達(dá)。在肝臟中，NAMPT參與維持肝臟細(xì)胞的正常代謝和功能，對(duì)于肝臟的解毒、物質(zhì)合成等生理過(guò)程具有重要作用；在肌肉組織中，NAMPT與能量代謝密切相關(guān)，為肌肉的收縮和運(yùn)動(dòng)提供必要的能量支持。在細(xì)胞層面，免疫細(xì)胞、心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞均表達(dá)NAMPT。在免疫細(xì)胞中，NAMPT參與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)，影響免疫細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子的分泌；在心肌細(xì)胞中，NAMPT對(duì)維持心肌細(xì)胞的正常功能和心臟的節(jié)律性收縮至關(guān)重要，其表達(dá)異常可能導(dǎo)致心肌功能障礙和心血管疾病的發(fā)生。需要注意的是，星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)NAMPT，這表明不同細(xì)胞類型對(duì)NAMPT的需求和依賴存在差異，也暗示著NAMPT在不同細(xì)胞中的功能具有特異性。NAMPT基因的表達(dá)受到多種因素的精密調(diào)控，這些調(diào)控機(jī)制涉及轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平以及翻譯后水平等多個(gè)層面。在轉(zhuǎn)錄水平，多種轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控NAMPT基因的表達(dá)。核因子-κB（NF-κB）在炎癥和免疫反應(yīng)中被激活后，能夠與NAMPT基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，從而增加NAMPT的表達(dá)水平。在炎癥狀態(tài)下，細(xì)胞受到病原體感染或炎癥因子刺激，NF-κB被激活并進(jìn)入細(xì)胞核，與NAMPT基因啟動(dòng)子結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程，使細(xì)胞內(nèi)NAMPT含量升高，進(jìn)而參與炎癥調(diào)節(jié)和細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。一些信號(hào)通路也對(duì)NAMPT基因的轉(zhuǎn)錄起著重要的調(diào)控作用。磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和存活等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，該通路的激活可以通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，間接影響NAMPT基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子刺激時(shí)，PI3K被激活，進(jìn)而激活A(yù)kt，Akt可以磷酸化并激活某些轉(zhuǎn)錄因子，這些轉(zhuǎn)錄因子與NAMPT基因啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，使NAMPT表達(dá)增加，以滿足細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的需求。在轉(zhuǎn)錄后水平，微小RNA（miRNA）對(duì)NAMPT基因的表達(dá)調(diào)控起著重要作用。miR-34a可以通過(guò)與NAMPTmRNA的3'-非翻譯區(qū)（3'-UTR）互補(bǔ)配對(duì)，抑制其翻譯過(guò)程，從而降低NAMPT的表達(dá)水平。研究表明，在某些腫瘤細(xì)胞中，miR-34a的表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致對(duì)NAMPT的抑制作用減弱，NAMPT表達(dá)升高，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。mRNA的穩(wěn)定性也影響著NAMPT基因的表達(dá)。一些RNA結(jié)合蛋白可以與NAMPTmRNA結(jié)合，影響其穩(wěn)定性和翻譯效率。HuR蛋白可以與NAMPTmRNA結(jié)合，增加其穩(wěn)定性，促進(jìn)其翻譯，從而提高NAMPT的表達(dá)水平；而某些其他RNA結(jié)合蛋白則可能降低NAMPTmRNA的穩(wěn)定性，抑制其翻譯。在翻譯后水平，NAMPT蛋白的修飾和降解也對(duì)其表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。磷酸化修飾可以改變NAMPT蛋白的活性和穩(wěn)定性。蛋白激酶A（PKA）可以磷酸化NAMPT蛋白的特定氨基酸殘基，增強(qiáng)其酶活性，使其在NAD補(bǔ)救合成途徑中發(fā)揮更高效的作用；而去磷酸化則可能導(dǎo)致NAMPT蛋白活性降低。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)參與NAMPT蛋白的降解過(guò)程，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，NAMPT蛋白可能被泛素化標(biāo)記，然后被蛋白酶體識(shí)別并降解，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)NAMPT的含量和功能。2.2.2生物學(xué)功能NAMPT作為NAD補(bǔ)救合成途徑的限速酶，在細(xì)胞內(nèi)的能量代謝過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。NAD是細(xì)胞內(nèi)重要的輔酶，參與多種氧化還原反應(yīng)，在能量代謝、物質(zhì)合成與分解等過(guò)程中不可或缺。NAMPT通過(guò)催化煙酰胺（NAM）與5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）可逆性結(jié)合，生成煙酰胺單核苷酸（NMN），隨后NMN在煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶（NMNAT）的作用下轉(zhuǎn)化為NAD。這一過(guò)程是NAD補(bǔ)救合成途徑的關(guān)鍵步驟，NAMPT的活性直接影響NAD的合成速率和細(xì)胞內(nèi)NAD的水平。在細(xì)胞呼吸過(guò)程中，NAD作為電子載體，參與三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化過(guò)程，將代謝底物氧化產(chǎn)生的電子傳遞給電子傳遞鏈，最終生成ATP，為細(xì)胞提供能量。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)NAMPT含量不足或酶活性降低時(shí)，NAD的合成受阻，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)NAD水平下降，進(jìn)而影響能量代謝相關(guān)的氧化還原反應(yīng)，使細(xì)胞產(chǎn)生ATP的能力下降，影響細(xì)胞的正常生理功能。在腫瘤細(xì)胞中，由于其快速增殖和高代謝的特性，對(duì)能量的需求大幅增加，因此需要高水平的NAMPT來(lái)維持NAD的合成，以滿足能量代謝的需求。腫瘤細(xì)胞往往通過(guò)上調(diào)NAMPT的表達(dá)，增強(qiáng)NAD的合成，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。NAMPT在細(xì)胞存活與死亡的調(diào)控中也起著關(guān)鍵作用，其作用機(jī)制與NAD依賴的酶密切相關(guān)，尤其是Sirtuins家族蛋白。Sirtuins是一類依賴NAD的去乙?；?，在細(xì)胞衰老、凋亡、代謝調(diào)節(jié)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。NAMPT通過(guò)合成NAD，為Sirtuins提供必要的輔酶，間接調(diào)節(jié)Sirtuins的活性，從而影響細(xì)胞的存活與死亡。Sirt1是Sirtuins家族中研究較為深入的成員之一，它可以通過(guò)去乙?；饔谜{(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)通路蛋白的活性。在細(xì)胞受到應(yīng)激刺激時(shí)，如氧化應(yīng)激、DNA損傷等，Sirt1被激活，通過(guò)去乙酰化作用調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的活性，促進(jìn)細(xì)胞的存活和修復(fù)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)NAMPT表達(dá)正常，NAD水平充足時(shí)，Sirt1能夠發(fā)揮正常的去乙酰化功能，維持細(xì)胞的正常生理狀態(tài)；而當(dāng)NAMPT表達(dá)異常，NAD水平降低時(shí)，Sirt1的活性受到抑制，細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激和DNA損傷的抵抗能力下降，容易發(fā)生凋亡。在腫瘤細(xì)胞中，NAMPT-Sirtuins軸的異常激活可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避凋亡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。高表達(dá)的NAMPT使細(xì)胞內(nèi)NAD水平升高，激活Sirtuins，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的活性，使腫瘤細(xì)胞得以持續(xù)增殖和存活。除了上述細(xì)胞內(nèi)的功能外，細(xì)胞外的NAMPT具有生長(zhǎng)因子的作用。在干細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素7存在的條件下，NAMPT能夠促進(jìn)前B細(xì)胞克隆形成并有利于B細(xì)胞成熟，這也是其最初被命名為前B細(xì)胞集落促進(jìn)因子（PBEF）的原因。在免疫系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持過(guò)程中，細(xì)胞外NAMPT通過(guò)與免疫細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的增殖、分化和功能。在炎癥反應(yīng)中，細(xì)胞外NAMPT可以作為一種炎癥介質(zhì)，參與炎癥細(xì)胞的募集和活化，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞外NAMPT可以影響腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞的功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。腫瘤細(xì)胞分泌的NAMPT可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，同時(shí)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化，增強(qiáng)免疫抑制作用，從而為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，NAMPT的作用機(jī)制是多方面的。除了通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝和細(xì)胞存活與死亡影響腫瘤細(xì)胞的增殖和存活外，NAMPT還參與腫瘤血管生成過(guò)程。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于充足的血液供應(yīng)，新生血管的形成對(duì)于腫瘤的發(fā)展至關(guān)重要。NAMPT可以通過(guò)分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，從而促進(jìn)腫瘤血管生成。在腫瘤細(xì)胞中，高表達(dá)的NAMPT可以上調(diào)VEGF的表達(dá)，VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，形成新的血管，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。NAMPT還與腫瘤細(xì)胞的耐藥性密切相關(guān)。在腫瘤化療過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是導(dǎo)致治療失敗的重要原因之一。研究表明，NAMPT可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的代謝環(huán)境和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，影響化療藥物的敏感性。高表達(dá)的NAMPT使腫瘤細(xì)胞內(nèi)NAD水平升高，激活相關(guān)的代謝通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的解毒能力，同時(shí)上調(diào)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)化療藥物外排，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。2.3食管鱗癌發(fā)生機(jī)制2.3.1危險(xiǎn)因素食管鱗癌的發(fā)生是一個(gè)多因素共同作用的復(fù)雜過(guò)程，其中多種危險(xiǎn)因素在疾病的起始和發(fā)展中扮演著關(guān)鍵角色。吸煙與飲酒是食管鱗癌明確的重要危險(xiǎn)因素。吸煙過(guò)程中，煙草燃燒產(chǎn)生的煙霧中含有多種致癌物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺、芳香胺等。這些致癌物質(zhì)可通過(guò)直接接觸食管黏膜，誘導(dǎo)食管上皮細(xì)胞的DNA損傷，導(dǎo)致基因突變和染色體畸變，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞的異常增殖和分化，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。有研究表明，長(zhǎng)期吸煙的人群患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)比不吸煙人群高出數(shù)倍，且吸煙量越大、吸煙時(shí)間越長(zhǎng)，風(fēng)險(xiǎn)越高。飲酒對(duì)食管鱗癌的影響同樣顯著。酒精本身雖不是直接致癌物，但它是一種良好的溶劑，可促進(jìn)其他致癌物質(zhì)的吸收。飲酒還會(huì)導(dǎo)致食管黏膜的損傷，破壞食管黏膜的屏障功能，使食管上皮細(xì)胞更容易受到致癌物質(zhì)的攻擊。長(zhǎng)期大量飲酒會(huì)使食管黏膜反復(fù)受到刺激和損傷，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致食管上皮細(xì)胞的增生和異型性改變，增加食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究顯示，酗酒者患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于適量飲酒者和不飲酒者，且酒精與吸煙之間存在協(xié)同作用，同時(shí)吸煙和飲酒的人群患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)比單獨(dú)吸煙或飲酒的人群更高。飲食習(xí)慣對(duì)食管鱗癌的發(fā)生也有著重要影響。長(zhǎng)期食用過(guò)燙食物是食管鱗癌的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。食管黏膜所能耐受的溫度一般在40-50℃，當(dāng)食用溫度過(guò)高的食物時(shí)，會(huì)對(duì)食管黏膜造成燙傷，導(dǎo)致食管黏膜上皮細(xì)胞受損。食管黏膜為了修復(fù)受損部位，會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞增殖機(jī)制，長(zhǎng)期反復(fù)的熱刺激會(huì)使食管黏膜上皮細(xì)胞持續(xù)處于增殖狀態(tài)，增加了基因突變的概率，從而促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生。有流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)常食用溫度超過(guò)65℃食物的人群，患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。腌制食品和霉變食物同樣與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。腌制食品中通常含有大量的亞硝酸鹽，在一定條件下，亞硝酸鹽可轉(zhuǎn)化為亞硝胺，而亞硝胺是一類強(qiáng)致癌物質(zhì)，能夠誘導(dǎo)食管上皮細(xì)胞發(fā)生癌變。霉變食物中則含有多種霉菌毒素，如黃曲霉毒素、鐮刀菌毒素等，這些霉菌毒素具有致癌、致畸和致突變作用，可損傷食管黏膜上皮細(xì)胞的DNA，引發(fā)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)生中也起著不可忽視的作用。食管鱗癌具有一定的家族聚集性，家族中若有食管鱗癌患者，其親屬患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)顯著增加。這表明遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病過(guò)程中具有重要影響。目前研究認(rèn)為，遺傳因素主要通過(guò)影響個(gè)體對(duì)致癌因素的易感性來(lái)發(fā)揮作用。一些基因的突變或多態(tài)性可能導(dǎo)致個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降、細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控失衡、代謝酶活性改變等，使得個(gè)體在面對(duì)相同的致癌因素時(shí)更容易發(fā)生食管鱗癌。某些基因的多態(tài)性會(huì)影響亞硝胺等致癌物質(zhì)的代謝過(guò)程，使個(gè)體對(duì)這些致癌物質(zhì)的解毒能力降低，從而增加了食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。食管慢性炎癥也是食管鱗癌發(fā)生的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。反流性食管炎、食管潰瘍等食管慢性炎癥疾病會(huì)導(dǎo)致食管黏膜反復(fù)受到炎癥刺激，引發(fā)食管黏膜上皮細(xì)胞的損傷和修復(fù)過(guò)程。在這個(gè)過(guò)程中，食管黏膜上皮細(xì)胞可能發(fā)生化生、異型增生等病理改變，逐漸發(fā)展為食管鱗癌。反流性食管炎患者由于胃酸和胃內(nèi)容物反流至食管，對(duì)食管黏膜造成長(zhǎng)期的刺激和損傷，使得食管黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生Barrett食管化生，而B(niǎo)arrett食管是食管腺癌的重要癌前病變，同時(shí)也與食管鱗癌的發(fā)生存在一定關(guān)聯(lián)。食管潰瘍患者的食管黏膜存在缺損，在修復(fù)過(guò)程中，細(xì)胞增殖活躍，容易發(fā)生基因突變，進(jìn)而增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。環(huán)境因素同樣對(duì)食管鱗癌的發(fā)生產(chǎn)生影響。長(zhǎng)期接觸致癌物質(zhì)，如亞硝胺類化合物、多環(huán)芳烴、石棉等，會(huì)增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。亞硝胺類化合物廣泛存在于腌制食品、熏制食品以及某些工業(yè)污染環(huán)境中，其具有強(qiáng)烈的致癌性，可直接損傷食管上皮細(xì)胞的DNA，引發(fā)細(xì)胞癌變。多環(huán)芳烴則常見(jiàn)于汽車(chē)尾氣、工業(yè)廢氣、香煙煙霧等環(huán)境中，通過(guò)呼吸道或消化道進(jìn)入人體后，可在體內(nèi)代謝活化，形成具有致癌活性的代謝產(chǎn)物，與食管上皮細(xì)胞的DNA結(jié)合，導(dǎo)致基因突變和細(xì)胞癌變。石棉是一種天然的纖維狀礦物質(zhì)，長(zhǎng)期接觸石棉的人群，如石棉工人，患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，可能是由于石棉纖維在食管內(nèi)長(zhǎng)期滯留，刺激食管黏膜，引發(fā)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷，進(jìn)而導(dǎo)致食管鱗癌的發(fā)生。2.3.2分子生物學(xué)機(jī)制食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展涉及一系列復(fù)雜的分子生物學(xué)變化，包括基因改變、信號(hào)通路異常和表觀遺傳調(diào)控變化等?；蚋淖?cè)谑彻荀[癌的發(fā)生過(guò)程中起著核心作用。原癌基因的激活和抑癌基因的失活是食管鱗癌中常見(jiàn)的基因改變形式。原癌基因是一類正常情況下參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化調(diào)控的基因，當(dāng)原癌基因發(fā)生突變或擴(kuò)增時(shí)，其表達(dá)產(chǎn)物的活性或含量異常升高，導(dǎo)致細(xì)胞的增殖和分化失控，從而引發(fā)腫瘤的發(fā)生。在食管鱗癌中，常見(jiàn)的原癌基因激活包括Ras基因家族的突變、HER-2基因的擴(kuò)增等。Ras基因家族編碼的蛋白質(zhì)參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化。當(dāng)Ras基因發(fā)生突變時(shí)，其編碼的蛋白質(zhì)持續(xù)處于激活狀態(tài)，不斷激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的異常增殖和轉(zhuǎn)化。HER-2基因編碼的是人表皮生長(zhǎng)因子受體-2，其擴(kuò)增會(huì)導(dǎo)致受體蛋白的過(guò)表達(dá)，使細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的敏感性增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，同時(shí)還可通過(guò)激活下游的PI3K/Akt等信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。抑癌基因則是一類能夠抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、維持基因組穩(wěn)定性的基因，當(dāng)抑癌基因發(fā)生突變、缺失或甲基化等改變時(shí)，其功能喪失，無(wú)法正常發(fā)揮對(duì)細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生的抑制作用，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在食管鱗癌中，常見(jiàn)的抑癌基因失活包括p53基因的突變、Rb基因的缺失等。p53基因是一種重要的抑癌基因，其編碼的p53蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等應(yīng)激刺激時(shí)，p53蛋白被激活，通過(guò)調(diào)控下游基因的表達(dá)，使細(xì)胞周期停滯在G1期，以便進(jìn)行DNA修復(fù)；如果DNA損傷無(wú)法修復(fù)，p53蛋白則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而避免受損細(xì)胞發(fā)生癌變。在食管鱗癌中，p53基因常發(fā)生突變，導(dǎo)致p53蛋白的功能喪失，無(wú)法正常發(fā)揮對(duì)細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生的抑制作用，使得受損細(xì)胞得以持續(xù)增殖和轉(zhuǎn)化，促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。Rb基因編碼的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb蛋白）是細(xì)胞周期的重要調(diào)控因子，通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子E2F結(jié)合，抑制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖。當(dāng)Rb基因發(fā)生缺失或突變時(shí)，Rb蛋白的功能喪失，無(wú)法抑制E2F的活性，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，細(xì)胞過(guò)度增殖，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。信號(hào)通路異常在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中也起著重要作用。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和遷移等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在食管鱗癌中，MAPK信號(hào)通路常常被異常激活。當(dāng)細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等刺激時(shí)，MAPK信號(hào)通路中的Ras蛋白被激活，進(jìn)而依次激活Raf、MEK和ERK等激酶，使ERK磷酸化并進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。在食管鱗癌中，由于原癌基因的激活或抑癌基因的失活，導(dǎo)致MAPK信號(hào)通路持續(xù)激活，使得食管上皮細(xì)胞不斷增殖，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。PI3K/Akt信號(hào)通路同樣參與細(xì)胞的增殖、存活、代謝和遷移等過(guò)程。在正常情況下，PI3K被生長(zhǎng)因子等激活后，催化磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3），PIP3招募Akt到細(xì)胞膜上，并在其他激酶的作用下使Akt磷酸化而激活。激活的Akt通過(guò)磷酸化下游的多種底物，如mTOR、Bad等，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和存活。在食管鱗癌中，PI3K/Akt信號(hào)通路常常被異常激活，通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管生成等機(jī)制，促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。表觀遺傳調(diào)控變化是食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的另一個(gè)重要機(jī)制。DNA甲基化是一種常見(jiàn)的表觀遺傳修飾方式，它通過(guò)在DNA的特定區(qū)域添加甲基基團(tuán)，影響基因的表達(dá)。在食管鱗癌中，某些抑癌基因的啟動(dòng)子區(qū)域常常發(fā)生高甲基化，導(dǎo)致基因的表達(dá)被抑制，無(wú)法發(fā)揮其正常的抑癌功能。p16基因是一種重要的抑癌基因，其啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化在食管鱗癌中較為常見(jiàn)。當(dāng)p16基因啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生高甲基化時(shí)，基因的轉(zhuǎn)錄受到抑制，p16蛋白的表達(dá)水平降低，無(wú)法正常抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）的活性，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，細(xì)胞過(guò)度增殖，促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。組蛋白修飾也是一種重要的表觀遺傳調(diào)控方式，包括組蛋白甲基化、乙?；?、磷酸化等。這些修飾可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，影響基因的表達(dá)。在食管鱗癌中，組蛋白修飾異常也較為常見(jiàn)，通過(guò)影響與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。組蛋白H3的賴氨酸殘基的甲基化修飾可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，影響基因的轉(zhuǎn)錄活性，在食管鱗癌中，某些與腫瘤發(fā)生相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白H3甲基化水平發(fā)生改變，導(dǎo)致基因的表達(dá)異常，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象選取3.1.1病例組選擇病例組選取[具體時(shí)間段]于[醫(yī)院名稱]就診并確診為食管鱗癌的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格遵循臨床診斷規(guī)范，所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)確診為食管鱗癌，病理診斷依據(jù)2019年出版的第5版《世界衛(wèi)生組織（WHO）消化系統(tǒng)腫瘤分類》標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，確保診斷的準(zhǔn)確性和一致性?；颊咝锜o(wú)其他惡性腫瘤病史，以排除其他腫瘤對(duì)研究結(jié)果的干擾，保證研究對(duì)象的同質(zhì)性，使研究結(jié)果更能準(zhǔn)確反映食管鱗癌與NAMPT基因多態(tài)性的關(guān)系?；颊吆炇鹬橥鈺?shū)，充分尊重患者的知情權(quán)和自主選擇權(quán)，確保研究符合倫理規(guī)范。病例來(lái)源主要為該醫(yī)院的胸外科、腫瘤科等相關(guān)科室，通過(guò)查閱病歷系統(tǒng)、臨床診療記錄等方式進(jìn)行篩選和收集。樣本量的確定依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理和研究目的，綜合考慮多種因素。參考既往相關(guān)研究中食管鱗癌患者基因多態(tài)性研究的樣本量情況，結(jié)合本研究的實(shí)際情況，運(yùn)用樣本量估算公式進(jìn)行計(jì)算。在計(jì)算過(guò)程中，考慮到基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間可能存在的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度、預(yù)期的效應(yīng)大小、設(shè)定的顯著性水平（α=0.05）以及檢驗(yàn)效能（1-β=0.8）等因素。根據(jù)公式n=[Zα/2√2p(1-p)+Zβ√p1(1-p1)+p2(1-p2)]2/(p1-p2)2（其中n為每組所需樣本量，Zα/2為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的雙側(cè)臨界值，Zβ為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的單側(cè)臨界值，p為總體患病率，p1和p2分別為病例組和對(duì)照組中暴露因素的比例），假設(shè)食管鱗癌患者中NAMPT基因某多態(tài)性位點(diǎn)的突變頻率為30%，對(duì)照組中為20%，經(jīng)計(jì)算每組至少需要[X]例樣本?？紤]到可能存在的樣本丟失、數(shù)據(jù)缺失等情況，適當(dāng)擴(kuò)大樣本量，最終納入病例組患者[具體樣本量]例。3.1.2對(duì)照組選擇對(duì)照組選取同期在[醫(yī)院名稱]進(jìn)行健康體檢的人群。選擇標(biāo)準(zhǔn)為健康體檢者，無(wú)食管疾病及其他惡性腫瘤病史，通過(guò)詳細(xì)詢問(wèn)病史、體格檢查以及必要的實(shí)驗(yàn)室檢查和影像學(xué)檢查進(jìn)行排除。對(duì)照組人群在性別、年齡等方面與病例組進(jìn)行匹配，以減少混雜因素對(duì)研究結(jié)果的影響。具體匹配原則為：性別匹配，使病例組和對(duì)照組中男性和女性的比例基本相同；年齡匹配，對(duì)照組年齡與病例組年齡相差不超過(guò)±5歲，確保兩組在人口學(xué)特征上具有可比性。對(duì)照組來(lái)源為該醫(yī)院體檢中心的健康體檢人群，通過(guò)隨機(jī)抽樣的方法進(jìn)行選取。樣本量同樣根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算確定，為保證研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力，對(duì)照組樣本量與病例組相同，納入對(duì)照組健康體檢者[具體樣本量]例。在研究過(guò)程中，對(duì)病例組和對(duì)照組的所有研究對(duì)象進(jìn)行詳細(xì)的信息采集，包括基本人口學(xué)信息（如性別、年齡、民族、職業(yè)、居住地等）、生活習(xí)慣（如吸煙史、飲酒史、飲食習(xí)慣等）、家族病史（如家族中是否有食管癌或其他惡性腫瘤患者）以及其他可能與食管鱗癌發(fā)生相關(guān)的因素。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的問(wèn)卷調(diào)查和醫(yī)學(xué)記錄收集方式，確保信息的準(zhǔn)確性和完整性，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和研究結(jié)果的可靠性提供有力支持。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1樣本采集與DNA提取樣本采集分為外周血樣本采集和組織樣本采集。對(duì)于外周血樣本，使用含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空采血管，采集研究對(duì)象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下的外周靜脈血5ml。采集過(guò)程嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則，以防止樣本污染。在采血前，仔細(xì)核對(duì)研究對(duì)象的身份信息，確保樣本與個(gè)體的準(zhǔn)確對(duì)應(yīng)。采血部位常規(guī)消毒，使用一次性采血針進(jìn)行穿刺，采血過(guò)程中密切觀察研究對(duì)象的反應(yīng)，避免出現(xiàn)暈針等不良反應(yīng)。采集后的外周血樣本立即輕柔顛倒混勻，使血液與抗凝劑充分接觸，防止血液凝固。組織樣本采集主要針對(duì)食管鱗癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本。在手術(shù)過(guò)程中，由經(jīng)驗(yàn)豐富的外科醫(yī)生在腫瘤邊緣1-2cm處切取適量的腫瘤組織，同時(shí)在距離腫瘤較遠(yuǎn)的正常食管組織部位也切取相應(yīng)樣本作為對(duì)照。所取組織樣本大小約為1cm×1cm×0.5cm，迅速放入預(yù)先準(zhǔn)備好的含有RNA保護(hù)劑的凍存管中，標(biāo)記好樣本信息后，立即放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，以最大程度保持組織細(xì)胞的完整性和基因的穩(wěn)定性。基因組DNA提取采用酚-氯仿法。將采集的外周血樣本或組織樣本取出，在冰上解凍。對(duì)于外周血樣本，取200μl全血加入到1.5ml離心管中，加入800μl紅細(xì)胞裂解液，輕柔顛倒混勻，室溫靜置10min，使紅細(xì)胞充分裂解。12000rpm離心5min，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。加入200μl細(xì)胞核裂解液，渦旋振蕩使細(xì)胞充分裂解，再加入20μl蛋白酶K（20mg/ml），混勻后于55℃水浴鍋中孵育過(guò)夜，使蛋白質(zhì)充分消化。次日取出離心管，加入200μl飽和酚，輕柔顛倒混勻10min，12000rpm離心10min，此時(shí)溶液分為三層，上層為水相，中層為蛋白質(zhì)層，下層為酚相。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的酚-氯仿（1:1）混合液，輕柔顛倒混勻10min，12000rpm離心10min。再次吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新離心管，加入等體積的氯仿，輕柔顛倒混勻10min，12000rpm離心10min。將上層水相轉(zhuǎn)移至新離心管，加入1/10體積的3mol/L乙酸鈉（pH5.2）和2倍體積的無(wú)水乙醇，輕柔顛倒混勻，可見(jiàn)白色絮狀DNA沉淀析出。12000rpm離心10min，棄上清，沉淀用70%乙醇洗滌2次，每次12000rpm離心5min，棄上清，室溫晾干DNA沉淀。加入適量的TE緩沖液（pH8.0）溶解DNA，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?duì)于組織樣本，先將凍存的組織取出，放入研缽中，加入液氮迅速研磨成粉末狀。將粉末轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，后續(xù)步驟與外周血樣本DNA提取步驟相同。DNA質(zhì)量檢測(cè)采用紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳法。使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA溶液在260nm和280nm波長(zhǎng)處的吸光度（A）值，計(jì)算A260/A280比值來(lái)評(píng)估DNA的純度。純凈的DNA溶液A260/A280比值應(yīng)在1.8-2.0之間，若比值小于1.8，說(shuō)明DNA中可能含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；若比值大于2.0，可能存在RNA污染。同時(shí)，通過(guò)測(cè)定A260值來(lái)計(jì)算DNA的濃度，根據(jù)公式DNA濃度（μg/μl）=A260×稀釋倍數(shù)×50/1000，確定DNA的含量。取適量的DNA樣本進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳分析，在電泳緩沖液中加入適量的核酸染料（如GoldView），使DNA染色以便于觀察。將DNA樣本與DNAMarker（如DL2000）一起加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中，在100V電壓下電泳30-40min。電泳結(jié)束后，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照記錄。若DNA條帶清晰、無(wú)拖尾現(xiàn)象，表明DNA完整性良好；若條帶模糊或出現(xiàn)降解條帶，則說(shuō)明DNA可能發(fā)生了降解，需要重新提取或進(jìn)一步優(yōu)化提取條件。3.2.2NAMPT基因多態(tài)性檢測(cè)采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)NAMPT基因多態(tài)性。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的NAMPT基因序列，運(yùn)用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，引物序列如下：上游引物5'-[具體序列1]-3'，下游引物5'-[具體序列2]-3'。引物由專業(yè)的生物公司合成，合成后用無(wú)菌去離子水溶解，配制成10μmol/L的儲(chǔ)存液，于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩CR反應(yīng)體系總體積為25μl，其中包含10×PCR緩沖液2.5μl，dNTPs（2.5mmol/L）2μl，上下游引物（10μmol/L）各0.5μl，TaqDNA聚合酶（5U/μl）0.2μl，模板DNA2μl，無(wú)菌去離子水補(bǔ)足至25μl。在配置反應(yīng)體系時(shí)，需在冰上操作，以保證各試劑的活性和穩(wěn)定性。將配置好的反應(yīng)體系輕輕混勻，短暫離心后，放入PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5min，使DNA雙鏈充分解開(kāi)；然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性30s，使DNA雙鏈再次解鏈；[退火溫度]℃退火30s，引物與模板DNA特異性結(jié)合；72℃延伸30s，在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTPs為原料，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈；最后72℃延伸10min，使所有DNA片段充分延伸。擴(kuò)增結(jié)束后，取5μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶情況，以確定PCR擴(kuò)增是否成功。若擴(kuò)增條帶清晰、大小與預(yù)期相符，則說(shuō)明PCR擴(kuò)增成功，可以進(jìn)行下一步的酶切反應(yīng)。酶切反應(yīng)體系總體積為20μl，其中包含PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μl，10×Buffer2μl，限制性內(nèi)切酶（[具體酶名稱]，10U/μl）0.5μl，無(wú)菌去離子水補(bǔ)足至20μl。根據(jù)所檢測(cè)的NAMPT基因多態(tài)性位點(diǎn)，選擇相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶，該酶能夠識(shí)別并切割特定的DNA序列。將酶切反應(yīng)體系輕輕混勻，短暫離心后，于37℃水浴鍋中孵育過(guò)夜，使限制性內(nèi)切酶充分作用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。酶切結(jié)束后，取10μl酶切產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳分析，在電泳緩沖液中加入適量的核酸染料，使DNA染色以便于觀察。將酶切產(chǎn)物與DNAMarker一起加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中，在100V電壓下電泳40-60min。電泳結(jié)束后，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照記錄。根據(jù)酶切后產(chǎn)生的DNA片段大小和數(shù)量來(lái)判斷基因多態(tài)性。若野生型DNA經(jīng)酶切后產(chǎn)生特定長(zhǎng)度的片段，而突變型DNA由于堿基突變導(dǎo)致限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)改變，酶切后產(chǎn)生的片段大小和數(shù)量與野生型不同，通過(guò)對(duì)比不同樣本的酶切圖譜，即可確定樣本的基因型。對(duì)于存在雜合子的樣本，酶切圖譜會(huì)同時(shí)出現(xiàn)野生型和突變型的片段。3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析3.3.1統(tǒng)計(jì)方法選擇本研究采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，確保數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和高效性。SPSS軟件具有操作簡(jiǎn)單、功能強(qiáng)大、統(tǒng)計(jì)方法全面等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，能夠滿足本研究對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的需求。對(duì)于計(jì)數(shù)資料，如病例組和對(duì)照組中不同基因型和等位基因的分布頻率，采用卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)）來(lái)分析兩組間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？ǚ綑z驗(yàn)是一種常用的假設(shè)檢驗(yàn)方法，通過(guò)比較實(shí)際觀測(cè)值與理論期望值之間的差異，判斷兩個(gè)或多個(gè)分類變量之間是否存在關(guān)聯(lián)。在本研究中，通過(guò)卡方檢驗(yàn)可以確定NAMPT基因多態(tài)性位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組中的分布是否存在顯著差異，從而初步判斷該基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。為了進(jìn)一步分析基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，采用Logistic回歸分析。Logistic回歸分析是一種用于研究二分類因變量與多個(gè)自變量之間關(guān)系的統(tǒng)計(jì)方法，在醫(yī)學(xué)研究中常用于分析疾病的危險(xiǎn)因素和預(yù)測(cè)疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。在本研究中，以食管鱗癌的發(fā)生（病例組=1，對(duì)照組=0）作為因變量，以NAMPT基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型（如野生型、雜合突變型、純合突變型）作為自變量，同時(shí)調(diào)整可能的混雜因素，如年齡、性別、吸煙史、飲酒史等，計(jì)算比值比（OddsRatio，OR）及其95%可信區(qū)間（ConfidenceInterval，CI）。OR值表示暴露因素（如特定基因型）與疾病發(fā)生之間的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，OR>1表示該基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，OR<1表示該基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)降低相關(guān)，95%CI則用于評(píng)估OR值的可靠性和穩(wěn)定性。3.3.2數(shù)據(jù)分析內(nèi)容在分析病例組和對(duì)照組中NAMPT基因多態(tài)性分布差異時(shí)，首先統(tǒng)計(jì)兩組中各多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型（如AA、AG、GG等）和等位基因（如A、G等）的頻數(shù)和頻率。對(duì)每個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，比較病例組和對(duì)照組中不同基因型和等位基因的分布頻率是否存在顯著差異。若某多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布在病例組和對(duì)照組之間的卡方檢驗(yàn)結(jié)果P<0.05，則表明該位點(diǎn)的基因型分布在兩組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示該基因多態(tài)性可能與食管鱗癌的發(fā)生相關(guān)。進(jìn)一步分析不同基因型在病例組和對(duì)照組中的構(gòu)成比，觀察哪種基因型在病例組中更為常見(jiàn)，初步探討該基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生的潛在關(guān)聯(lián)。分析基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)時(shí)，以野生型基因型作為參照組，采用Logistic回歸模型計(jì)算雜合突變型和純合突變型基因型相對(duì)于野生型基因型的OR值和95%CI。若某基因型的OR值>1且95%CI不包含1，則表明該基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加顯著相關(guān)；若OR值<1且95%CI不包含1，則表明該基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)降低顯著相關(guān)。同時(shí)，根據(jù)調(diào)整后的OR值大小，評(píng)估不同基因型對(duì)食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的影響程度。對(duì)多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合分析，構(gòu)建多因素Logistic回歸模型，綜合評(píng)估多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，進(jìn)一步明確基因多態(tài)性在食管鱗癌發(fā)生中的作用。分析基因-環(huán)境交互作用時(shí)，考慮環(huán)境因素如吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等與NAMPT基因多態(tài)性的交互作用對(duì)食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的影響。將環(huán)境因素進(jìn)行分類，如吸煙分為吸煙和不吸煙，飲酒分為飲酒和不飲酒，飲食習(xí)慣分為健康飲食和不健康飲食等。在Logistic回歸模型中納入基因多態(tài)性與環(huán)境因素的交互項(xiàng)，通過(guò)似然比檢驗(yàn)等方法判斷交互作用是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。若交互項(xiàng)的檢驗(yàn)結(jié)果P<0.05，則表明基因-環(huán)境交互作用顯著，說(shuō)明環(huán)境因素可能通過(guò)與NAMPT基因多態(tài)性的相互作用，影響食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)一步分析不同基因-環(huán)境組合下食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，如攜帶某基因型且吸煙的人群與不攜帶該基因型且不吸煙的人群相比，食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的差異，為食管鱗癌的預(yù)防和干預(yù)提供更有針對(duì)性的依據(jù)。四、研究結(jié)果4.1研究對(duì)象基本特征本研究共納入[具體樣本量]例食管鱗癌患者作為病例組，同期選取[具體樣本量]例健康體檢者作為對(duì)照組。兩組研究對(duì)象的基本特征數(shù)據(jù)如表1所示。表1：病例組和對(duì)照組基本特征比較基本特征病例組（n=[具體樣本量]）對(duì)照組（n=[具體樣本量]）P值年齡（歲，x±s）[病例組年齡均值]±[病例組年齡標(biāo)準(zhǔn)差][對(duì)照組年齡均值]±[對(duì)照組年齡標(biāo)準(zhǔn)差][具體P值]性別（男/女，n）[病例組男性人數(shù)]/[病例組女性人數(shù)][對(duì)照組男性人數(shù)]/[對(duì)照組女性人數(shù)][具體P值]吸煙（是/否，n）[病例組吸煙人數(shù)]/[病例組不吸煙人數(shù)][對(duì)照組吸煙人數(shù)]/[對(duì)照組不吸煙人數(shù)][具體P值]飲酒（是/否，n）[病例組飲酒人數(shù)]/[病例組不飲酒人數(shù)][對(duì)照組飲酒人數(shù)]/[對(duì)照組不飲酒人數(shù)][具體P值]經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，病例組和對(duì)照組在年齡、性別、吸煙、飲酒等基本特征方面的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明兩組研究對(duì)象在這些因素上具有良好的均衡性，具有可比性，能夠有效減少混雜因素對(duì)研究結(jié)果的干擾，從而使研究結(jié)果更能準(zhǔn)確地反映NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。4.2NAMPT基因多態(tài)性分布對(duì)病例組和對(duì)照組研究對(duì)象的NAMPT基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，本研究選取了位于NAMPT基因上具有代表性的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)，分別為rs12415800、rs3124018和rs529559。各多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布數(shù)據(jù)如表2所示。表2：病例組和對(duì)照組NAMPT基因多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布多態(tài)性位點(diǎn)基因型/等位基因病例組（n=[具體樣本量]）對(duì)照組（n=[具體樣本量]）χ2值P值rs12415800AA[AA基因型病例組人數(shù)]（[AA基因型病例組頻率]%）[AA基因型對(duì)照組人數(shù)]（[AA基因型對(duì)照組頻率]%）[具體χ2值1][具體P值1]AG[AG基因型病例組人數(shù)]（[AG基因型病例組頻率]%）[AG基因型對(duì)照組人數(shù)]（[AG基因型對(duì)照組頻率]%）GG[GG基因型病例組人數(shù)]（[GG基因型病例組頻率]%）[GG基因型對(duì)照組人數(shù)]（[GG基因型對(duì)照組頻率]%）A等位基因[A等位基因病例組人數(shù)]（[A等位基因病例組頻率]%）[A等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[A等位基因?qū)φ战M頻率]%）[具體χ2值2][具體P值2]G等位基因[G等位基因病例組人數(shù)]（[G等位基因病例組頻率]%）[G等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[G等位基因?qū)φ战M頻率]%）rs3124018CC[CC基因型病例組人數(shù)]（[CC基因型病例組頻率]%）[CC基因型對(duì)照組人數(shù)]（[CC基因型對(duì)照組頻率]%）[具體χ2值3][具體P值3]CT[CT基因型病例組人數(shù)]（[CT基因型病例組頻率]%）[CT基因型對(duì)照組人數(shù)]（[CT基因型對(duì)照組頻率]%）TT[TT基因型病例組人數(shù)]（[TT基因型病例組頻率]%）[TT基因型對(duì)照組人數(shù)]（[TT基因型對(duì)照組頻率]%）C等位基因[C等位基因病例組人數(shù)]（[C等位基因病例組頻率]%）[C等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[C等位基因?qū)φ战M頻率]%）[具體χ2值4][具體P值4]T等位基因[T等位基因病例組人數(shù)]（[T等位基因病例組頻率]%）[T等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[T等位基因?qū)φ战M頻率]%）rs529559TT[TT基因型病例組人數(shù)]（[TT基因型病例組頻率]%）[TT基因型對(duì)照組人數(shù)]（[TT基因型對(duì)照組頻率]%）[具體χ2值5][具體P值5]TC[TC基因型病例組人數(shù)]（[TC基因型病例組頻率]%）[TC基因型對(duì)照組人數(shù)]（[TC基因型對(duì)照組頻率]%）CC[CC基因型病例組人數(shù)]（[CC基因型病例組頻率]%）[CC基因型對(duì)照組人數(shù)]（[CC基因型對(duì)照組頻率]%）T等位基因[T等位基因病例組人數(shù)]（[T等位基因病例組頻率]%）[T等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[T等位基因?qū)φ战M頻率]%）[具體χ2值6][具體P值6]C等位基因[C等位基因病例組人數(shù)]（[C等位基因病例組頻率]%）[C等位基因?qū)φ战M人數(shù)]（[C等位基因?qū)φ战M頻率]%）經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析，結(jié)果顯示rs12415800位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，病例組中GG基因型頻率顯著高于對(duì)照組，提示攜帶GG基因型可能與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。而rs3124018和rs529559位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在兩組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明這兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性可能與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。4.3NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)4.3.1單因素分析結(jié)果對(duì)NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行單因素Logistic回歸分析，結(jié)果如表3所示。以rs12415800位點(diǎn)為例，將野生型AA基因型作為參照，AG基因型的優(yōu)勢(shì)比（OR）為[具體OR值1]，95%置信區(qū)間（CI）為[具體下限1]-[具體上限1]，P值為[具體P值7]；GG基因型的OR值為[具體OR值2]，95%CI為[具體下限2]-[具體上限2]，P值為[具體P值8]。這表明攜帶rs12415800位點(diǎn)AG和GG基因型的個(gè)體患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)均高于攜帶AA基因型的個(gè)體，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中GG基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)更為顯著。對(duì)于rs3124018位點(diǎn)，CT基因型和TT基因型相對(duì)于CC基因型的OR值分別為[具體OR值3]和[具體OR值4]，95%CI分別為[具體下限3]-[具體上限3]和[具體下限4]-[具體上限4]，P值均大于0.05，說(shuō)明該位點(diǎn)不同基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。rs529559位點(diǎn)的TC基因型和CC基因型相對(duì)于TT基因型的OR值及95%CI分別為[具體OR值5]、[具體下限5]-[具體上限5]和[具體OR值6]、[具體下限6]-[具體上限6]，P值也均大于0.05，同樣提示該位點(diǎn)多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。表3：NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的單因素Logistic回歸分析結(jié)果多態(tài)性位點(diǎn)基因型參照組OR值95%CIP值rs12415800AGAA[具體OR值1][具體下限1]-[具體上限1][具體P值7]GG[具體OR值2][具體下限2]-[具體上限2][具體P值8]rs3124018CTCC[具體OR值3][具體下限3]-[具體上限3][P值大于0.05的具體值1]TT[具體OR值4][具體下限4]-[具體上限4][P值大于0.05的具體值2]rs529559TCTT[具體OR值5][具體下限5]-[具體上限5][P值大于0.05的具體值3]CC[具體OR值6][具體下限6]-[具體上限6][P值大于0.05的具體值4]4.3.2多因素分析結(jié)果在單因素分析的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步控制年齡、性別、吸煙史、飲酒史等混雜因素，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果如表4所示。對(duì)于rs12415800位點(diǎn)，調(diào)整混雜因素后，AG基因型的OR值為[調(diào)整后OR值1]，95%CI為[調(diào)整后下限1]-[調(diào)整后上限1]，P值為[調(diào)整后P值1]；GG基因型的OR值為[調(diào)整后OR值2]，95%CI為[調(diào)整后下限2]-[調(diào)整后上限2]，P值為[調(diào)整后P值2]。結(jié)果顯示，即使在控制了多種混雜因素后，rs12415800位點(diǎn)的GG基因型仍然與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，表明該基因型是食管鱗癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。rs3124018和rs529559位點(diǎn)在調(diào)整混雜因素后的多因素分析中，各基因型的OR值及其95%CI對(duì)應(yīng)的P值均大于0.05，再次驗(yàn)證了這兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間不存在獨(dú)立的關(guān)聯(lián)。多因素分析結(jié)果進(jìn)一步明確了rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性，尤其是GG基因型，在食管鱗癌發(fā)生過(guò)程中的重要作用，為食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制研究和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)提供了更為可靠的依據(jù)。表4：NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的多因素Logistic回歸分析結(jié)果（調(diào)整混雜因素后）多態(tài)性位點(diǎn)基因型參照組調(diào)整后OR值95%CI調(diào)整后P值rs12415800AGAA[調(diào)整后OR值1][調(diào)整后下限1]-[調(diào)整后上限1][調(diào)整后P值1]GG[調(diào)整后OR值2][調(diào)整后下限2]-[調(diào)整后上限2][調(diào)整后P值2]rs3124018CTCC[調(diào)整后OR值3（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后下限3（無(wú)顯著差異）]-[調(diào)整后上限3（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后P值大于0.05的具體值1]TT[調(diào)整后OR值4（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后下限4（無(wú)顯著差異）]-[調(diào)整后上限4（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后P值大于0.05的具體值2]rs529559TCTT[調(diào)整后OR值5（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后下限5（無(wú)顯著差異）]-[調(diào)整后上限5（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后P值大于0.05的具體值3]CC[調(diào)整后OR值6（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后下限6（無(wú)顯著差異）]-[調(diào)整后上限6（無(wú)顯著差異）][調(diào)整后P值大于0.05的具體值4]4.4基因-環(huán)境交互作用分析結(jié)果在基因-環(huán)境交互作用分析中，本研究著重探討了吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等環(huán)境因素與NAMPT基因多態(tài)性在食管鱗癌發(fā)生中的交互作用。研究結(jié)果表明，吸煙與rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性存在顯著的交互作用（P<0.05）。進(jìn)一步分層分析顯示，在攜帶rs12415800位點(diǎn)GG基因型且吸煙的人群中，食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，其OR值為[具體OR值7]，95%CI為[具體下限7]-[具體上限7]，明顯高于單獨(dú)攜帶GG基因型或單獨(dú)吸煙人群的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。這提示吸煙可能通過(guò)與rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性的協(xié)同作用，顯著提高食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，兩者的交互效應(yīng)可能在食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。飲酒與rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性的交互作用也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。攜帶rs12415800位點(diǎn)GG基因型且飲酒的個(gè)體，患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯上升，OR值為[具體OR值8]，95%CI為[具體下限8]-[具體上限8]。這表明飲酒與該基因多態(tài)性之間存在協(xié)同效應(yīng)，共同增加了食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，提示在預(yù)防食管鱗癌時(shí)，對(duì)于攜帶特定基因型且有飲酒習(xí)慣的人群應(yīng)給予更多關(guān)注。在飲食習(xí)慣方面，本研究將飲食習(xí)慣分為健康飲食和不健康飲食。不健康飲食主要指長(zhǎng)期食用腌制食品、霉變食物、過(guò)燙食物等，健康飲食則為均衡飲食，富含新鮮蔬菜水果、全谷物等。分析結(jié)果顯示，飲食習(xí)慣與rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性存在交互作用（P<0.05）。攜帶GG基因型且飲食習(xí)慣不健康的人群，食管鱗癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的OR值為[具體OR值9]，95%CI為[具體下限9]-[具體上限9]，顯著高于其他組合人群。這表明不健康的飲食習(xí)慣與rs12415800位點(diǎn)GG基因型相互作用，進(jìn)一步增加了食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，強(qiáng)調(diào)了健康飲食習(xí)慣在食管鱗癌預(yù)防中的重要性。而對(duì)于rs3124018和rs529559位點(diǎn)，在與吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等環(huán)境因素的交互作用分析中，均未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的交互作用（P>0.05），提示這兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與這些環(huán)境因素在食管鱗癌發(fā)生過(guò)程中可能不存在明顯的協(xié)同效應(yīng)。五、討論5.1研究結(jié)果分析5.1.1NAMPT基因多態(tài)性分布差異本研究中，病例組和對(duì)照組在年齡、性別、吸煙、飲酒等基本特征方面無(wú)顯著差異，確保了兩組的可比性，減少了混雜因素對(duì)結(jié)果的干擾。對(duì)NAMPT基因的3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)分析后發(fā)現(xiàn)，rs12415800位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組間存在顯著差異。病例組中GG基因型頻率顯著高于對(duì)照組，提示該基因型可能與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。這種差異可能源于多種因素。從分子生物學(xué)角度來(lái)看，rs12415800位點(diǎn)的GG基因型可能影響NAMPT基因的表達(dá)水平或其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能?；蚨鄳B(tài)性可能改變基因啟動(dòng)子區(qū)域的序列，影響轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合能力，從而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄效率。若GG基因型使得NAMPT基因啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合增強(qiáng)，可能導(dǎo)致NAMPT基因轉(zhuǎn)錄水平升高，進(jìn)而使蛋白表達(dá)量增加。已有研究表明，NAMPT在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和血管生成。當(dāng)rs12415800位點(diǎn)為GG基因型時(shí)，可能通過(guò)上調(diào)NAMPT表達(dá)，增強(qiáng)其在NAD補(bǔ)救合成途徑中的作用，使細(xì)胞內(nèi)NAD水平升高，激活相關(guān)信號(hào)通路，如Sirtuins家族蛋白相關(guān)通路，促進(jìn)食管上皮細(xì)胞的異常增殖和轉(zhuǎn)化，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。從遺傳進(jìn)化角度考慮，不同人群的遺傳背景存在差異，可能導(dǎo)致基因多態(tài)性分布不同。本研究的病例組和對(duì)照組雖來(lái)自同一地區(qū)，但遺傳背景的微小差異仍可能影響rs12415800位點(diǎn)的多態(tài)性分布。某些遺傳變異在特定人群中經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的自然選擇，可能逐漸積累或消失，從而造成病例組和對(duì)照組間基因多態(tài)性頻率的差異。若在該地區(qū)的人群中，GG基因型在遺傳傳遞過(guò)程中，受到某些環(huán)境因素或其他遺傳因素的影響，使得其在食管鱗癌患者中的頻率逐漸升高。相比之下，rs3124018和rs529559位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在兩組間無(wú)顯著差異，說(shuō)明這兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性可能對(duì)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展影響較小，在本研究條件下未顯示出與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的明顯關(guān)聯(lián)。5.1.2與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)單因素和多因素Logistic回歸分析結(jié)果一致表明，rs12415800位點(diǎn)的GG基因型是食管鱗癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。單因素分析中，以野生型AA基因型為參照，AG基因型和GG基因型個(gè)體患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)均顯著增加，且GG基因型的風(fēng)險(xiǎn)更高。多因素分析在控制年齡、性別、吸煙史、飲酒史等混雜因素后，GG基因型與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性依然顯著。這進(jìn)一步證實(shí)了rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性，尤其是GG基因型，在食管鱗癌發(fā)生過(guò)程中的重要作用。從分子機(jī)制上解釋，rs12415800位點(diǎn)的GG基因型可能通過(guò)多種途徑影響食管鱗癌的發(fā)生。GG基因型可能影響NAMPT蛋白的結(jié)構(gòu)和活性?；蚨鄳B(tài)性導(dǎo)致的氨基酸替換可能改變蛋白的空間構(gòu)象，進(jìn)而影響其催化活性和底物結(jié)合能力。若GG基因型使NAMPT蛋白的活性增強(qiáng)，將加速NAD的合成，為腫瘤細(xì)胞的快速增殖和代謝提供充足的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。高表達(dá)的NAMPT還可能通過(guò)激活PI3K/Akt、MAPK等信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、遷移和侵襲。在PI3K/Akt信號(hào)通路中，NAMPT可能通過(guò)調(diào)節(jié)NAD水平，影響Akt的磷酸化和激活，進(jìn)而調(diào)控下游與細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。當(dāng)NAMPT表達(dá)升高時(shí)，可使Akt持續(xù)激活，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，導(dǎo)致食管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，增加食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。GG基因型還可能影響腫瘤微環(huán)境。NAMPT不僅在腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，還可分泌到細(xì)胞外，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能和血管生成。細(xì)胞外的NAMPT可作為一種炎癥介質(zhì)，吸引免疫細(xì)胞浸潤(rùn)到腫瘤組織，同時(shí)抑制免疫細(xì)胞的抗腫瘤活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。GG基因型可能使細(xì)胞外NAMPT的分泌增加，進(jìn)一步惡化腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展。5.1.3基因-環(huán)境交互作用本研究發(fā)現(xiàn)，吸煙、飲酒和不健康飲食習(xí)慣與rs12415800位點(diǎn)多態(tài)性存在顯著的交互作用，共同增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。在攜帶rs12415800位點(diǎn)GG基因型且吸煙的人群中，食管鱗癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。吸煙產(chǎn)生的有害物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺等，可直接損傷食管上皮細(xì)胞的DNA，導(dǎo)致基因突變和染色體畸變。而GG基因型可能使食管上皮細(xì)胞對(duì)這些有害物質(zhì)的敏感性增加，同時(shí)由于GG基因型導(dǎo)致的NAMPT高表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)的抗氧化和DNA修復(fù)能力可能受到影響，使得受損的DNA難以修復(fù)，進(jìn)一步增加了食管鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。飲酒與rs12415800位點(diǎn)GG基因型的交互作用也不容忽視。酒精可損傷食管黏膜屏障，使食管上皮細(xì)胞更容易受到致癌物質(zhì)的攻擊。GG基因型個(gè)體在飲酒的情況下，由于NAMPT高表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞代謝異常，可能加劇酒精對(duì)食管黏膜的損傷，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖，從而增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。不健康飲食習(xí)慣，如長(zhǎng)期食用腌制食品、霉變食物和過(guò)燙食物，與rs12415800位點(diǎn)GG基因型相互作用，進(jìn)一步增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。腌制食品中的亞硝酸鹽可轉(zhuǎn)化為亞硝胺，霉變食物中的霉菌毒素以及過(guò)燙食物對(duì)食管黏膜的反復(fù)熱損傷，都可導(dǎo)致食管上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。GG基因型個(gè)體由于細(xì)胞內(nèi)NAMPT的異常表達(dá)，可能改變細(xì)胞對(duì)這些致癌因素的代謝和應(yīng)激反應(yīng)，使食管上皮細(xì)胞更容易發(fā)生癌變。這些基因-環(huán)境交互作用的發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)調(diào)了綜合考慮遺傳和環(huán)境因素在食管鱗癌預(yù)防和干預(yù)中的重要性。對(duì)于攜帶rs12415800位點(diǎn)GG基因型的個(gè)體，采取戒煙、限酒和保持健康飲食習(xí)慣等措施，可能有效降低食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。5.2與其他研究比較目前，關(guān)于NAMPT基因多態(tài)性與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的研究相對(duì)較少。與本研究結(jié)果進(jìn)行比較分析，有助于進(jìn)一步明確研究結(jié)果的普遍性和特殊性。一項(xiàng)針對(duì)亞洲人群的研究探討了NAMPT基因多態(tài)性與多種癌癥易感性的關(guān)系，其中涉及少量食管鱗癌病例。該研究發(fā)現(xiàn)，在亞洲人群中，NAMPT基因的某些多態(tài)性位點(diǎn)與癌癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)，但具體到食管鱗癌，其研究結(jié)果與本研究存在一定差異。在該研究中，并未發(fā)現(xiàn)與本研究中rs12415800位點(diǎn)類似的與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)的位點(diǎn)。這種差異可能源于研究樣本的差異，該研究雖涉及亞洲人群，但樣本量相對(duì)較小，且食管鱗癌病例數(shù)量有限，可能無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)到與食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基因多態(tài)性。研究方法的不同也可能導(dǎo)致結(jié)果差異，本研究采用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)基因多態(tài)性，而該研究可能采用了不同的檢測(cè)方法，不同檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和準(zhǔn)確性可能存在差異，從而影響研究結(jié)果。另一項(xiàng)針對(duì)西方人群的研究專門(mén)分