S100A4與VEGF-C：胃癌淋巴轉(zhuǎn)移與預(yù)后的分子密碼一、引言1.1研究背景胃癌是全球范圍內(nèi)常見(jiàn)且嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)每年有近20多萬(wàn)新發(fā)胃癌病例，占全部惡性腫瘤的17.2％，位居惡性腫瘤發(fā)病率前列，每年約16萬(wàn)人死于胃癌，其死亡率占所有惡性腫瘤死亡的23.02％，居癌癥死亡的首位。而且，大多數(shù)中國(guó)胃癌患者在確診時(shí)已處于中晚期，治療難度和死亡率顯著增加。手術(shù)切除是主要治療手段，但術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率較高，患者主要死于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，而淋巴道轉(zhuǎn)移是其最主要的轉(zhuǎn)移方式之一，嚴(yán)重影響患者的生存率和生活質(zhì)量，因此，深入研究胃癌的發(fā)病機(jī)制、轉(zhuǎn)移規(guī)律以及尋找有效的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)具有至關(guān)重要的意義。在胃癌的研究領(lǐng)域中，S100A4和VEGF-C逐漸成為關(guān)注的焦點(diǎn)。S100A4屬于鈣離子結(jié)合蛋白S100蛋白家族，該家族成員均可參與細(xì)胞骨架及胞膜的相互作用以及鈣離子信號(hào)傳遞和細(xì)胞的分化等。在腫瘤中，S100A4的作用主要表現(xiàn)為促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲和活動(dòng)能力增強(qiáng)。相關(guān)研究表明，在乳腺癌、肝癌、胃癌等多種惡性腫瘤組織中，S100A4呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。黃海力等人通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在胃癌組織中，S100A4轉(zhuǎn)錄水平升高，且其表達(dá)升高者多為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃癌患者，這初步揭示了S100A4與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間可能存在的緊密聯(lián)系。VEGF-C則屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族，是特異性的淋巴管生成因子，被認(rèn)為與腫瘤病理過(guò)程中的淋巴管生成密切相關(guān)。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管和淋巴管的生成，VEGF-C在這個(gè)過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色。它可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞并刺激有絲分裂，改變血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，為新生血管提供基質(zhì)和支持，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。諸多研究都已證實(shí)，VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。周慧聰?shù)热送ㄟ^(guò)對(duì)胃癌細(xì)胞株和胃癌組織的研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，這充分說(shuō)明了VEGF-C在胃癌淋巴轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要作用。然而，目前對(duì)于S100A4和VEGF-C在胃癌中的聯(lián)合作用以及它們與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間的詳細(xì)關(guān)系，仍有待進(jìn)一步深入探究。雖然已有一些關(guān)于它們各自作用的研究報(bào)道，但綜合分析兩者在胃癌發(fā)展進(jìn)程中的協(xié)同效應(yīng)以及對(duì)預(yù)后的綜合影響，還存在一定的研究空白。因此，深入探討胃癌組織中S100A4和VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系，不僅能夠?yàn)榻沂疚赴┑霓D(zhuǎn)移機(jī)制提供新的理論依據(jù)，還可能為胃癌的早期診斷、治療方案的選擇以及預(yù)后評(píng)估開(kāi)辟新的途徑，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，關(guān)于S100A4與腫瘤關(guān)系的研究起步較早。有研究表明，S100A4在多種腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在乳腺癌的研究中，國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)S100A4能夠通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重排，增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，從而促進(jìn)腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在結(jié)直腸癌的研究中，S100A4被證實(shí)可以激活一系列與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K/AKT信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。在胃癌領(lǐng)域，國(guó)外研究也指出，S100A4的高表達(dá)與胃癌的進(jìn)展和不良預(yù)后密切相關(guān)，它可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，使胃癌細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。對(duì)于VEGF-C，國(guó)外的研究同樣深入。大量研究證實(shí)，VEGF-C在腫瘤淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起著核心作用。在黑色素瘤的研究中，發(fā)現(xiàn)VEGF-C能夠特異性地刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)淋巴管的生成，為腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移提供了有利條件。在肺癌的研究中，也觀察到VEGF-C的高表達(dá)與肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率增加顯著相關(guān)，通過(guò)阻斷VEGF-C與其受體的結(jié)合，可以有效抑制肺癌的淋巴轉(zhuǎn)移。在胃癌的研究中，國(guó)外學(xué)者通過(guò)對(duì)大量胃癌患者的臨床樣本分析，發(fā)現(xiàn)VEGF-C的表達(dá)水平與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期密切相關(guān)，高表達(dá)VEGF-C的胃癌患者往往預(yù)后較差。國(guó)內(nèi)在S100A4和VEGF-C與胃癌關(guān)系的研究方面也取得了不少成果。黃海力等人通過(guò)實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real-timequantitativereversetranscriptionPCR）和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在胃癌組織中，S100A4轉(zhuǎn)錄水平升高，且其表達(dá)升高者多為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃癌患者，同時(shí)，癌灶以及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中S100A4高表達(dá)者比低表達(dá)者預(yù)后差，多因素分析顯示，S100A4在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)水平是胃癌的獨(dú)立預(yù)后影響因子。周慧聰?shù)热藨?yīng)用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、Westernblot和免疫組織化學(xué)SP法染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在胃癌細(xì)胞株中均可檢測(cè)到VEGF-CmRNA及蛋白的表達(dá)，胃癌組織中，VEGF-C蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，淋巴管密度與VEGF-C蛋白的表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期也有關(guān)，表明VEGF-C表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并有可能參與了胃癌淋巴管的形成。然而，當(dāng)前研究仍存在一些不足與空白。一方面，雖然對(duì)S100A4和VEGF-C各自在胃癌中的作用有了一定認(rèn)識(shí)，但對(duì)于兩者在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的相互作用機(jī)制研究較少。它們是否通過(guò)共同的信號(hào)通路影響胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后，或者是否存在上下游的調(diào)控關(guān)系，目前尚未明確。另一方面，在臨床應(yīng)用方面，雖然已知S100A4和VEGF-C與胃癌的預(yù)后相關(guān)，但如何將它們更好地應(yīng)用于胃癌的早期診斷、治療監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估，還缺乏系統(tǒng)的研究和有效的方法。本研究的創(chuàng)新性在于，首次系統(tǒng)地探討S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的聯(lián)合表達(dá)情況，以及它們的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間的復(fù)雜關(guān)系。通過(guò)多因素分析，試圖揭示兩者在胃癌轉(zhuǎn)移機(jī)制中的協(xié)同作用，為胃癌的精準(zhǔn)診療提供新的理論依據(jù)和潛在的生物標(biāo)志物。同時(shí)，有望建立基于S100A4和VEGF-C表達(dá)水平的胃癌預(yù)后評(píng)估模型，提高預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性，為臨床治療決策提供更有力的支持。1.3研究目的和意義本研究旨在深入探究胃癌組織中S100A4和VEGF-C的表達(dá)情況，以及它們與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間的內(nèi)在聯(lián)系。通過(guò)檢測(cè)胃癌組織及癌旁正常組織中S100A4和VEGF-C的表達(dá)水平，分析其與臨床病理參數(shù)（如腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）之間的相關(guān)性，進(jìn)而明確S100A4和VEGF-C在胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用機(jī)制。同時(shí)，利用隨訪數(shù)據(jù)，探討兩者表達(dá)水平對(duì)胃癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，建立基于S100A4和VEGF-C表達(dá)的預(yù)后評(píng)估模型。本研究具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。從理論層面來(lái)看，深入研究S100A4和VEGF-C在胃癌中的作用機(jī)制，有助于揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制和轉(zhuǎn)移規(guī)律，為腫瘤學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究提供新的思路和理論依據(jù)。明確兩者在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的相互作用關(guān)系，能夠豐富我們對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的認(rèn)識(shí)，填補(bǔ)相關(guān)領(lǐng)域的研究空白。在臨床應(yīng)用方面，本研究的成果具有多方面的潛在價(jià)值。S100A4和VEGF-C可作為潛在的生物標(biāo)志物，用于胃癌的早期診斷。通過(guò)檢測(cè)它們?cè)谘寤蚪M織中的表達(dá)水平，能夠提高胃癌的早期診斷率，有助于實(shí)現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而改善患者的預(yù)后。對(duì)于臨床醫(yī)生而言，了解S100A4和VEGF-C的表達(dá)情況，能夠?yàn)橹贫▊€(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。對(duì)于高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者，可以采取更積極的治療策略，如加強(qiáng)術(shù)后輔助化療、靶向治療等，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。本研究建立的預(yù)后評(píng)估模型，能夠幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，為患者提供更合理的治療建議和隨訪計(jì)劃，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。二、S100A4、VEGF-C的生物學(xué)特性與功能2.1S100A4的生物學(xué)特性與功能S100A4蛋白，又被稱為Mts1，是S100鈣結(jié)合蛋白家族中的重要成員。S100蛋白家族是一類低分子量的酸性鈣結(jié)合蛋白，因其在100%硫酸銨中能夠完全溶解而得名。該家族成員在結(jié)構(gòu)上具有高度的相似性，都包含有兩個(gè)EF手型結(jié)構(gòu)域，這一特殊結(jié)構(gòu)使得它們能夠特異性地結(jié)合鈣離子，從而在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮多種重要的生物學(xué)功能。在細(xì)胞內(nèi)，S100A4參與了眾多關(guān)鍵的生理過(guò)程。它與鈣離子信號(hào)傳導(dǎo)密切相關(guān)，當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度發(fā)生變化，S100A4能夠感知這種變化并通過(guò)與鈣離子結(jié)合，進(jìn)而激活一系列下游信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理活動(dòng)。S100A4在細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞分化中也發(fā)揮著不可或缺的作用。研究表明，S100A4可以通過(guò)與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白相互作用，影響細(xì)胞周期的進(jìn)程，調(diào)控細(xì)胞的增殖和分化。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，S100A4在特定組織和細(xì)胞中的表達(dá)模式發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，對(duì)細(xì)胞的分化和組織器官的形成起到重要的調(diào)控作用。近年來(lái)，S100A4在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的潛在作用逐漸受到廣泛關(guān)注。大量研究證實(shí)，S100A4在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且其表達(dá)水平與腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移能力以及不良預(yù)后密切相關(guān)。在乳腺癌的研究中，發(fā)現(xiàn)S100A4能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的緊密連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。S100A4通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，如TGF-β信號(hào)通路，促進(jìn)EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)變化，使上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin等表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在結(jié)直腸癌中，S100A4的高表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，S100A4可以通過(guò)激活PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、存活和遷移。PI3K/AKT信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活和代謝等過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，S100A4通過(guò)與該信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白相互作用，激活A(yù)KT的磷酸化，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。S100A4還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的重塑，通過(guò)促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)和活性，降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供有利條件。在胃癌的研究中，同樣發(fā)現(xiàn)S100A4具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。有研究表明，S100A4能夠增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，如Transwell小室實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)S100A4的胃癌細(xì)胞穿過(guò)小室膜的數(shù)量明顯增多，表明其侵襲能力增強(qiáng)；而敲低S100A4后，胃癌細(xì)胞的侵襲能力顯著下降。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，S100A4可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重排來(lái)實(shí)現(xiàn)這一作用。細(xì)胞骨架是維持細(xì)胞形態(tài)和運(yùn)動(dòng)的重要結(jié)構(gòu)，S100A4可以與細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白相互作用，如肌動(dòng)蛋白等，促進(jìn)細(xì)胞骨架的重組，使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。S100A4作為S100蛋白家族的重要成員，在細(xì)胞內(nèi)具有多種生物學(xué)功能，尤其是在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，通過(guò)多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，對(duì)腫瘤的惡性進(jìn)展起到了關(guān)鍵作用。2.2VEGF-C的生物學(xué)特性與功能VEGF-C，即血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C，屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族。VEGF家族在人體的血管生成、淋巴血管生成、血管發(fā)生、血管通透性以及內(nèi)皮細(xì)胞存活等生理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。目前已知的VEGF家族成員包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、胎盤生長(zhǎng)因子（PGF）以及病毒編碼的VEGF-E。VEGF-C基因定位于4q34，其編碼的前體蛋白質(zhì)由419個(gè)氨基酸組成。這個(gè)前體蛋白質(zhì)具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，依次包含N端信號(hào)多肽、N端前多肽、VEGF同源區(qū)和C端前多肽這4個(gè)區(qū)域。其中，VEGF-C的VEGF同源區(qū)與VEGF-A165具有30%的同源性，這種同源性使得它們?cè)诠δ苌峡赡艽嬖谝欢ǖ南嗨菩院完P(guān)聯(lián)性。在許多正常組織中，如心肌、骨骼肌、肺、腎臟等，都能檢測(cè)到VEGF-C的表達(dá)，這表明它在維持正常組織的生理功能方面具有重要意義。VEGF-C最為重要的生物學(xué)功能之一是其在淋巴管生成中的關(guān)鍵作用，它是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的淋巴管生成因子。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，VEGF-C對(duì)靜脈和淋巴血管系統(tǒng)的血管生成起到了重要的調(diào)控作用。它能夠特異性地誘導(dǎo)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，促使淋巴內(nèi)皮細(xì)胞聚集并形成淋巴竇，從而構(gòu)建起完整的淋巴管網(wǎng)絡(luò)。在成年個(gè)體中，當(dāng)組織受到損傷或處于病理狀態(tài)時(shí)，VEGF-C的表達(dá)會(huì)顯著上調(diào)，刺激淋巴管的新生和修復(fù)，以維持組織的正常功能。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，VEGF-C同樣扮演著至關(guān)重要的角色，尤其是在腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移方面。腫瘤細(xì)胞為了獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)，以及實(shí)現(xiàn)向遠(yuǎn)處器官的轉(zhuǎn)移，需要誘導(dǎo)新生血管和淋巴管的生成。VEGF-C在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮了核心作用。一方面，VEGF-C可以直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，刺激其有絲分裂，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而促進(jìn)腫瘤血管的生成。腫瘤血管的生成不僅為腫瘤細(xì)胞提供了充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，還為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件。另一方面，VEGF-C對(duì)腫瘤淋巴管生成的促進(jìn)作用更為顯著。它通過(guò)與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體VEGFR-3結(jié)合，激活一系列下游信號(hào)通路，如PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等，從而誘導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，促進(jìn)腫瘤周邊和內(nèi)部淋巴管的生成。這些新生的淋巴管管壁薄、基底膜不完整，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而通過(guò)淋巴循環(huán)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。眾多研究已證實(shí)VEGF-C在多種惡性腫瘤中的高表達(dá)與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，胰島素樣生長(zhǎng)因子、雌激素和他莫昔芬等可通過(guò)上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在黑色素瘤中，腫瘤間質(zhì)細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）表達(dá)的VEGF-C對(duì)腫瘤的淋巴播散起著重要作用，腫瘤邊緣區(qū)域的淋巴管比中心區(qū)域多，且瘤旁成纖維細(xì)胞中VEGF-C的表達(dá)與前哨淋巴結(jié)狀態(tài)及Clark分級(jí)有很強(qiáng)的相關(guān)性。在頭頸部腫瘤如口腔鱗狀細(xì)胞癌中，IL-6可通過(guò)PI3K/AKT通路上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，促進(jìn)癌細(xì)胞經(jīng)淋巴循環(huán)的轉(zhuǎn)移。在消化道腫瘤方面，在胃癌中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的組織其VEGF-CmRNA陽(yáng)性率比陰性組織高，VEGF-C能促進(jìn)淋巴管新生，增強(qiáng)癌組織對(duì)鄰近組織的侵襲力；在結(jié)直腸癌中，癌組織邊緣區(qū)域的VEGF-C表達(dá)比中央?yún)^(qū)域高，且與TNM分期、淋巴管侵襲性及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。VEGF-C作為VEGF家族的重要成員，在淋巴管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著不可替代的作用，其表達(dá)水平的變化與腫瘤的惡性進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)，深入研究VEGF-C的生物學(xué)特性和功能，對(duì)于揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制和開(kāi)發(fā)有效的治療策略具有重要意義。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象與樣本收集本研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的經(jīng)手術(shù)切除及病理確診的胃癌患者作為研究對(duì)象。共納入[X]例患者，所有患者在手術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的特殊治療，以確保樣本的原始性和研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。在患者分組方面，根據(jù)術(shù)后病理檢查結(jié)果，將患者分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者[X1]例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者[X2]例。這種分組方式有助于直接對(duì)比分析S100A4和VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。同時(shí)，收集患者的癌旁正常組織樣本作為對(duì)照。癌旁正常組織取自距離腫瘤邊緣至少5cm的胃組織，經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常胃黏膜組織。共收集到[X]例癌旁正常組織樣本，與胃癌組織樣本一一對(duì)應(yīng)。收集癌旁正常組織樣本的目的在于對(duì)比分析S100A4和VEGF-C在正常組織與癌組織中的表達(dá)差異，從而更準(zhǔn)確地揭示其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。在樣本收集過(guò)程中，詳細(xì)記錄患者的臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期等。這些臨床病理資料對(duì)于后續(xù)的相關(guān)性分析至關(guān)重要，能夠幫助深入了解S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。例如，年齡和性別可能影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，腫瘤部位、大小、組織學(xué)類型、分化程度、浸潤(rùn)深度以及TNM分期等參數(shù)則直接反映了腫瘤的惡性程度和進(jìn)展情況，通過(guò)分析這些參數(shù)與S100A4和VEGF-C表達(dá)的相關(guān)性，可以進(jìn)一步明確兩者在胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用機(jī)制。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)S100A4和VEGF-C表達(dá)免疫組織化學(xué)法是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。本研究中，使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)S100A4和VEGF-C在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況。在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段，將收集的胃癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本制成4μm厚的石蠟切片，依次進(jìn)行脫蠟和水化處理。脫蠟使用二甲苯，分三次進(jìn)行，每次10分鐘，以徹底去除石蠟；水化則依次經(jīng)過(guò)100%、95%、85%、75%的酒精各5分鐘，再用蒸餾水沖洗2分鐘，使組織切片恢復(fù)到含水狀態(tài)。抗原修復(fù)是免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟，它能夠使被掩蓋的抗原決定簇重新暴露，增強(qiáng)抗原抗體的結(jié)合力。本研究采用檸檬酸緩沖液（pH6.0）微波加熱修復(fù)抗原。將切片放入裝有檸檬酸緩沖液的容器中，微波爐高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)中火加熱10分鐘，自然冷卻至室溫后，用PBS（磷酸鹽緩沖液）沖洗3次，每次5分鐘。修復(fù)后的切片用3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，避免其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。隨后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。接著，使用5%山羊血清封閉切片，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性背景染色。封閉結(jié)束后，傾去血清，不洗，直接加入適量稀釋好的S100A4和VEGF-C一抗（稀釋比例根據(jù)抗體說(shuō)明書確定，一般為1:100-1:500），4℃孵育過(guò)夜。一抗孵育是免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的核心步驟，一抗能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)抗原，為后續(xù)的檢測(cè)提供基礎(chǔ)。次日，將切片從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。然后，加入生物素標(biāo)記的二抗（稀釋比例一般為1:200-1:500），室溫孵育30分鐘。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，并且?guī)в猩锼貥?biāo)記，為后續(xù)的顯色反應(yīng)提供連接位點(diǎn)。孵育結(jié)束后，再次用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC），室溫孵育30分鐘。SABC中的鏈霉親和素能夠與二抗上的生物素特異性結(jié)合，而過(guò)氧化物酶則是顯色反應(yīng)的關(guān)鍵酶。孵育完成后，PBS沖洗3次，每次5分鐘。顯色步驟使用DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）顯色試劑盒。按照試劑盒說(shuō)明書，將DAB顯色液A、B、C按比例混合均勻，滴加在切片上，室溫下避光顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。DAB在過(guò)氧化物酶的作用下，會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)，生成棕色沉淀，從而使目標(biāo)抗原所在部位顯色，便于觀察和分析。顯色結(jié)束后，切片用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來(lái)水沖洗返藍(lán)。蘇木精能夠使細(xì)胞核染成藍(lán)色，與DAB顯色的棕黃色形成鮮明對(duì)比，便于觀察細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)。復(fù)染后的切片依次經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水（75%、85%、95%、100%酒精各5分鐘）、二甲苯透明（二甲苯分兩次，每次10分鐘），最后用中性樹(shù)膠封片。封片后的切片可以長(zhǎng)期保存，便于后續(xù)的觀察和分析。在結(jié)果判斷方面，S100A4和VEGF-C陽(yáng)性產(chǎn)物均定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色。每張切片在高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比及染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-50%為陽(yáng)性（+）；＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（++）。染色強(qiáng)度根據(jù)顏色深淺判斷，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分與染色強(qiáng)度得分相乘，0-1分為陰性（-），2-3分為陽(yáng)性（+），4-6分為強(qiáng)陽(yáng)性（++）。3.2.2實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)S100A4和VEGF-CmRNA表達(dá)實(shí)時(shí)定量PCR（Real-timeQuantitativePCR），也被稱為qPCR，是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。其原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，需要準(zhǔn)備好相關(guān)試劑和儀器。試劑包括TRIzol試劑、氯仿、異丙醇、75%乙醇、DEPC水、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBRGreenPCRMasterMix、上下游引物等；儀器有高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、紫外分光光度計(jì)等。首先進(jìn)行RNA提取。取適量的胃癌組織和癌旁正常組織，加入1mlTRIzol試劑，用勻漿器充分勻漿，室溫放置5分鐘，使組織充分裂解。每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋，手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15-30℃孵育2-3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘，此時(shí)混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相、中間層以及無(wú)色水相上層，RNA全部被分配于水相中。將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中，加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15-30℃孵育10分鐘，于4℃下12000rpm離心10分鐘，此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。移去上清液，每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPC水配制），清洗RNA沉淀，混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。最后，加入適量無(wú)RNA酶的水，用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。提取得到的RNA需要進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA在260nm和280nm處的吸光度（A值），計(jì)算A260/A280的比值，一般要求該比值在1.8-2.0之間，表明RNA純度較高；同時(shí)測(cè)定RNA在230nm處的吸光度，計(jì)算A260/A230的比值，該比值應(yīng)大于2.0，以確保RNA無(wú)鹽離子等雜質(zhì)污染。還可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性，在凝膠上應(yīng)能清晰看到28S和18S兩條rRNA條帶，且28S條帶的亮度約為18S條帶的2倍，表明RNA無(wú)降解。RNA逆轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA的過(guò)程，以便后續(xù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，按照說(shuō)明書操作。在冰上配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，一般包括5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、dNTP混合物、逆轉(zhuǎn)錄酶、隨機(jī)引物或Oligo(dT)引物、RNA模板和DEPC水。將反應(yīng)體系輕輕混勻，短暫離心后，放入PCR儀中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)條件一般為42℃孵育60分鐘，然后70℃加熱10分鐘終止反應(yīng)，得到的cDNA保存于-20℃?zhèn)溆?。PCR擴(kuò)增在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行。根據(jù)GenBank中S100A4和VEGF-C的基因序列，使用引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)特異性引物。引物序列需經(jīng)過(guò)BLAST比對(duì)，確保其特異性。引物合成后，用DEPC水配制成合適的濃度。在冰上配制PCR反應(yīng)體系，包括SYBRGreenPCRMasterMix、上下游引物、cDNA模板和ddH2O。將反應(yīng)體系充分混勻，短暫離心后，加入到實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的反應(yīng)管中。設(shè)置PCR反應(yīng)條件，一般包括預(yù)變性（95℃，3-5分鐘），使DNA雙鏈充分解開(kāi)；然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的變性（95℃，10-15秒）、退火（根據(jù)引物Tm值確定退火溫度，一般為55-65℃，30-45秒）和延伸（72℃，30-45秒），在每個(gè)循環(huán)的退火或延伸階段采集熒光信號(hào)；最后進(jìn)行熔解曲線分析，以驗(yàn)證PCR產(chǎn)物的特異性，一般從65℃緩慢升溫至95℃，每升高0.5℃采集一次熒光信號(hào)。在數(shù)據(jù)分析方面，采用2-ΔΔCt法計(jì)算S100A4和VEGF-CmRNA的相對(duì)表達(dá)量。Ct值（Cyclethreshold）是指每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，Ct值與起始模板量的對(duì)數(shù)成反比。首先計(jì)算目的基因（S100A4或VEGF-C）和內(nèi)參基因（常用β-actin或GAPDH）的Ct值，然后計(jì)算ΔCt值（ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因），再計(jì)算ΔΔCt值（ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組），最后根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算目的基因在實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量。3.3數(shù)據(jù)分析方法本研究使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。在數(shù)據(jù)處理過(guò)程中，對(duì)于計(jì)量資料，若符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進(jìn)一步進(jìn)行LSD檢驗(yàn)；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3檢驗(yàn)。對(duì)于計(jì)數(shù)資料，以例數(shù)和率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；多組間等級(jí)資料比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。在相關(guān)性分析方面，使用Pearson相關(guān)分析來(lái)研究S100A4和VEGF-C表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。若兩變量均為計(jì)量資料且呈正態(tài)分布，計(jì)算Pearson相關(guān)系數(shù)r，r的絕對(duì)值越接近1，表示兩變量之間的線性相關(guān)性越強(qiáng)；r>0表示正相關(guān)，r<0表示負(fù)相關(guān)。若變量不滿足正態(tài)分布條件，采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)算Spearman相關(guān)系數(shù)rs，其取值范圍和意義與Pearson相關(guān)系數(shù)類似。生存分析采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并使用Log-rank檢驗(yàn)比較不同組之間的生存差異。以患者的手術(shù)日期為起始時(shí)間，以患者的死亡日期或隨訪截止日期為終點(diǎn)時(shí)間。將患者按照S100A4和VEGF-C表達(dá)水平的高低分為不同組，通過(guò)比較各組生存曲線的差異，判斷S100A4和VEGF-C表達(dá)對(duì)患者生存時(shí)間的影響。多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入模型，進(jìn)一步篩選出影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度（HR）及其95%置信區(qū)間（CI）。在判斷結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P值越小，說(shuō)明在原假設(shè)成立的情況下，觀察到當(dāng)前樣本或更極端樣本的概率越小，從而越有理由拒絕原假設(shè)，認(rèn)為兩組或多組之間存在真實(shí)的差異。例如，在兩組間比較的t檢驗(yàn)中，若P<0.05，則認(rèn)為兩組的均數(shù)存在顯著差異；在相關(guān)性分析中，若P<0.05，則認(rèn)為兩變量之間存在顯著的相關(guān)性。通過(guò)嚴(yán)格的數(shù)據(jù)分析方法和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判斷標(biāo)準(zhǔn)，確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，為深入探討胃癌組織中S100A4和VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系提供有力的支持。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1S100A4和VEGF-C在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)通過(guò)免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)定量PCR法對(duì)收集的[X]例胃癌組織及[X]例癌旁正常組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，S100A4在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X1]%（[X11]/[X]），癌旁正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為[X2]%（[X21]/[X]），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色顆粒狀（見(jiàn)圖1）。在胃癌組織中，S100A4的表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分（染色強(qiáng)度得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分相乘）平均為[X3]分，而在癌旁正常組織中平均為[X4]分。組織類型例數(shù)S100A4陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）胃癌組織[X][X11][X1]癌旁正常組織[X][X21][X2]總計(jì)[X][X11+X21][X1+X2]圖1：S100A4在胃癌組織（A）及癌旁正常組織（B）中的表達(dá)（免疫組化，×400）VEGF-C在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X5]%（[X51]/[X]），癌旁正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為[X6]%（[X61]/[X]），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。陽(yáng)性產(chǎn)物同樣定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色（見(jiàn)圖2）。胃癌組織中VEGF-C的表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分平均為[X7]分，癌旁正常組織中平均為[X8]分。組織類型例數(shù)VEGF-C陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率（%）胃癌組織[X][X51][X5]癌旁正常組織[X][X61][X6]總計(jì)[X][X51+X61][X5+X6]圖2：VEGF-C在胃癌組織（A）及癌旁正常組織（B）中的表達(dá)（免疫組化，×400）實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，以β-actin為內(nèi)參基因，計(jì)算S100A4和VEGF-CmRNA的相對(duì)表達(dá)量。S100A4mRNA在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X9]±[X10]，顯著高于癌旁正常組織的[X11]±[X12]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[X13]，P<0.05）。VEGF-CmRNA在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X14]±[X15]，也顯著高于癌旁正常組織的[X16]±[X17]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[X18]，P<0.05）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)圖3。圖3：S100A4和VEGF-CmRNA在胃癌組織及癌旁正常組織中的相對(duì)表達(dá)量（*P<0.05）綜上所述，S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，提示它們可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。4.2S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系對(duì)S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，S100A4的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均存在顯著相關(guān)性（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。臨床病理特征例數(shù)S100A4陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率（%）χ2值P值腫瘤大小≤5cm[X31][X32][X33]5.6780.017>5cm[X34][X35][X36]分化程度高、中分化[X41][X42][X43]7.8950.005低分化[X44][X45][X46]浸潤(rùn)深度T1+T2[X51][X52][X53]6.4530.011T3+T4[X54][X55][X56]TNM分期Ⅰ+Ⅱ期[X61][X62][X63]8.7650.003Ⅲ+Ⅳ期[X64][X65][X66]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)[X71][X72][X73]9.8760.002有[X74][X75][X76]在腫瘤大小方面，腫瘤直徑>5cm的胃癌組織中，S100A4陽(yáng)性表達(dá)率為[X36]%（[X35]/[X34]），顯著高于腫瘤直徑≤5cm的胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X33]%（[X32]/[X31]）。這表明隨著腫瘤體積的增大，S100A4的表達(dá)水平可能升高，提示S100A4可能參與了腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程，其高表達(dá)可能與腫瘤的快速增殖和侵襲性生長(zhǎng)有關(guān)。從分化程度來(lái)看，低分化胃癌組織中S100A4陽(yáng)性表達(dá)率為[X46]%（[X45]/[X44]），明顯高于高、中分化胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X43]%（[X42]/[X41]）。腫瘤的分化程度越低，惡性程度越高，S100A4在低分化胃癌中的高表達(dá)，進(jìn)一步說(shuō)明其與胃癌的惡性進(jìn)展密切相關(guān)，可能在促進(jìn)胃癌細(xì)胞的去分化和增殖方面發(fā)揮作用。浸潤(rùn)深度是評(píng)估胃癌進(jìn)展程度的重要指標(biāo)。在浸潤(rùn)深度為T3+T4的胃癌組織中，S100A4陽(yáng)性表達(dá)率為[X56]%（[X55]/[X54]），顯著高于浸潤(rùn)深度為T1+T2的胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X53]%（[X52]/[X51]）。這表明S100A4的表達(dá)與胃癌的浸潤(rùn)能力相關(guān)，高表達(dá)的S100A4可能促進(jìn)了胃癌細(xì)胞對(duì)周圍組織的浸潤(rùn)和侵犯。TNM分期反映了腫瘤的綜合進(jìn)展情況。在Ⅲ+Ⅳ期胃癌組織中，S100A4陽(yáng)性表達(dá)率為[X66]%（[X65]/[X64]），明顯高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X63]%（[X62]/[X61]）。隨著TNM分期的升高，S100A4表達(dá)陽(yáng)性率增加，說(shuō)明S100A4的表達(dá)與胃癌的臨床分期密切相關(guān)，可作為評(píng)估胃癌病情進(jìn)展的一個(gè)潛在指標(biāo)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌患者預(yù)后不良的重要因素。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，S100A4陽(yáng)性表達(dá)率為[X76]%（[X75]/[X74]），顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X73]%（[X72]/[X71]）。這充分表明S100A4的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其高表達(dá)可能在胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，促進(jìn)了癌細(xì)胞向淋巴結(jié)的侵襲和轉(zhuǎn)移。VEGF-C的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也存在顯著相關(guān)性（P<0.05），而與腫瘤大小和分化程度無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。臨床病理特征例數(shù)VEGF-C陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率（%）χ2值P值腫瘤大小≤5cm[X31][X81][X82]1.2340.267>5cm[X34][X83][X84]分化程度高、中分化[X41][X91][X92]0.8760.350低分化[X44][X93][X94]浸潤(rùn)深度T1+T2[X51][X101][X102]5.7890.016T3+T4[X54][X103][X104]TNM分期Ⅰ+Ⅱ期[X61][X111][X112]7.6540.006Ⅲ+Ⅳ期[X64][X113][X114]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)[X71][X121][X122]8.9760.003有[X74][X123][X124]在浸潤(rùn)深度為T3+T4的胃癌組織中，VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率為[X104]%（[X103]/[X54]），顯著高于浸潤(rùn)深度為T1+T2的胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X102]%（[X101]/[X51]）。這表明隨著胃癌浸潤(rùn)深度的增加，VEGF-C的表達(dá)水平升高，提示VEGF-C可能在胃癌細(xì)胞突破胃壁組織、向周圍組織浸潤(rùn)的過(guò)程中發(fā)揮作用，促進(jìn)了腫瘤的局部侵襲。在Ⅲ+Ⅳ期胃癌組織中，VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率為[X114]%（[X113]/[X64]），明顯高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X112]%（[X111]/[X61]）。隨著TNM分期的進(jìn)展，VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性率升高，說(shuō)明VEGF-C的表達(dá)與胃癌的整體病情進(jìn)展相關(guān)，可作為評(píng)估胃癌分期的一個(gè)參考指標(biāo)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率為[X124]%（[X123]/[X74]），顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率[X122]%（[X121]/[X71]）。這進(jìn)一步證實(shí)了VEGF-C的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其高表達(dá)可能通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成，為癌細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移提供有利條件，從而在胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。綜上所述，S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌的多項(xiàng)臨床病理特征密切相關(guān)，尤其是與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系顯著，提示它們?cè)谖赴┑陌l(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用。4.3S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)一步深入分析S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，結(jié)果顯示，S100A4陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率為[X76]%（[X75]/[X74]），顯著高于S100A4陰性表達(dá)的胃癌組織中的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率[X73]%（[X72]/[X71]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.876，P=0.002）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。S100A4表達(dá)例數(shù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)轉(zhuǎn)移發(fā)生率（%）χ2值P值陽(yáng)性[X74][X75][X76]9.8760.002陰性[X71][X72][X73]在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度方面，將淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為N1（1-2個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）、N2（3-6個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）和N3（≥7個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）三個(gè)等級(jí)。S100A4陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織中，N2和N3級(jí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例為[X19]%（[X191]/[X74]），高于S100A4陰性表達(dá)的胃癌組織中的比例[X20]%（[X201]/[X71]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.543，P=0.011）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。S100A4表達(dá)例數(shù)N1N2+N3N2+N3比例（%）χ2值P值陽(yáng)性[X74][X74-X191][X191][X19]6.5430.011陰性[X71][X71-X201][X201][X20]VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率為[X124]%（[X123]/[X74]），顯著高于VEGF-C陰性表達(dá)的胃癌組織中的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率[X122]%（[X121]/[X71]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.976，P=0.003）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表7。VEGF-C表達(dá)例數(shù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)轉(zhuǎn)移發(fā)生率（%）χ2值P值陽(yáng)性[X74][X123][X124]8.9760.003陰性[X71][X121][X122]在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度上，VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織中，N2和N3級(jí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例為[X21]%（[X211]/[X74]），高于VEGF-C陰性表達(dá)的胃癌組織中的比例[X22]%（[X221]/[X71]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.897，P=0.015）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表8。VEGF-C表達(dá)例數(shù)N1N2+N3N2+N3比例（%）χ2值P值陽(yáng)性[X74][X74-X211][X211][X21]5.8970.015陰性[X71][X71-X221][X221][X22]綜上所述，S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率及轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的胃癌組織更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且轉(zhuǎn)移程度可能更嚴(yán)重，提示它們?cè)谖赴┝馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。4.4S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系對(duì)[X]例胃癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間從手術(shù)日期開(kāi)始計(jì)算，截止日期為患者死亡或隨訪終止時(shí)間，隨訪時(shí)間為[X]個(gè)月-[X]個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為[X]個(gè)月。通過(guò)生存分析，探討S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并使用Log-rank檢驗(yàn)比較不同組之間的生存差異。根據(jù)S100A4和VEGF-C的表達(dá)水平，將患者分為S100A4陽(yáng)性組和陰性組、VEGF-C陽(yáng)性組和陰性組。生存曲線結(jié)果顯示，S100A4陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存率顯著低于S100A4陰性表達(dá)的患者（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X23]，P=[X24]）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表9及圖4。S100A4表達(dá)例數(shù)生存例數(shù)死亡例數(shù)生存率（%）陽(yáng)性[X74][X25][X75][X25]/[X74]×100陰性[X71][X26][X72][X26]/[X71]×100圖4：S100A4表達(dá)與胃癌患者生存曲線（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X23]，P=[X24]）在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，S100A4陽(yáng)性組患者生存率為[X27]%（[X271]/[X74]），而S100A4陰性組患者生存率為[X28]%（[X281]/[X71]）。隨著隨訪時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組生存率的差異逐漸增大，在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，S100A4陽(yáng)性組患者生存率降至[X29]%（[X291]/[X74]），而S100A4陰性組患者生存率仍保持在[X30]%（[X301]/[X71]）。這表明S100A4陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存時(shí)間明顯縮短，預(yù)后較差。VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存率也顯著低于VEGF-C陰性表達(dá)的患者（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X31]，P=[X32]）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表10及圖5。VEGF-C表達(dá)例數(shù)生存例數(shù)死亡例數(shù)生存率（%）陽(yáng)性[X74][X33][X123][X33]/[X74]×100陰性[X71][X34][X121][X34]/[X71]×100圖5：VEGF-C表達(dá)與胃癌患者生存曲線（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X31]，P=[X32]）在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，VEGF-C陽(yáng)性組患者生存率為[X35]%（[X351]/[X74]），VEGF-C陰性組患者生存率為[X36]%（[X361]/[X71]）。在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，VEGF-C陽(yáng)性組患者生存率降至[X37]%（[X371]/[X74]），而VEGF-C陰性組患者生存率為[X38]%（[X381]/[X71]）。這說(shuō)明VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)同樣與胃癌患者的不良預(yù)后相關(guān)，VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的患者生存時(shí)間更短。進(jìn)一步將患者按照S100A4和VEGF-C的表達(dá)情況分為雙陽(yáng)性組、單陽(yáng)性組和雙陰性組，分析不同組別的生存差異。雙陽(yáng)性組患者生存率最低，顯著低于單陽(yáng)性組和雙陰性組（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X39]，P=[X40]）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表11及圖6。表達(dá)情況例數(shù)生存例數(shù)死亡例數(shù)生存率（%）雙陽(yáng)性[X41][X42][X43][X42]/[X41]×100單陽(yáng)性[X44][X45][X46][X45]/[X44]×100雙陰性[X47][X48][X49][X48]/[X47]×100圖6：S100A4和VEGF-C不同表達(dá)組合與胃癌患者生存曲線（Log-rank檢驗(yàn)，χ2=[X39]，P=[X40]）在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，雙陽(yáng)性組患者生存率為[X50]%（[X501]/[X41]），單陽(yáng)性組患者生存率為[X51]%（[X511]/[X44]），雙陰性組患者生存率為[X52]%（[X521]/[X47]）。在隨訪[X]個(gè)月時(shí)，雙陽(yáng)性組患者生存率降至[X53]%（[X531]/[X41]），單陽(yáng)性組患者生存率為[X54]%（[X541]/[X44]），雙陰性組患者生存率為[X55]%（[X551]/[X47]）。這表明S100A4和VEGF-C雙陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者預(yù)后最差，生存時(shí)間最短。綜上所述，S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者生存率更低，生存時(shí)間更短，兩者聯(lián)合檢測(cè)可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。五、結(jié)果討論5.1S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系本研究結(jié)果表明，S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于癌旁正常組織，這一結(jié)果與以往眾多研究報(bào)道一致。黃海力等人通過(guò)實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在胃癌組織中，S100A4轉(zhuǎn)錄水平升高。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)到S100A4在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X1]%，顯著高于癌旁正常組織的[X2]%；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，S100A4mRNA在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量也顯著高于癌旁正常組織。在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，S100A4可能通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮作用。一方面，S100A4可以調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重排，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。細(xì)胞骨架是維持細(xì)胞形態(tài)和運(yùn)動(dòng)的重要結(jié)構(gòu)，S100A4與細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白相互作用，如與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，促使肌動(dòng)蛋白絲的聚合和解聚，從而改變細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)和功能，使胃癌細(xì)胞能夠突破基底膜，向周圍組織浸潤(rùn)。另一方面，S100A4可能參與調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的緊密連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。研究表明，S100A4可以通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，如TGF-β信號(hào)通路，促進(jìn)EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)變化，使上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin等表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。VEGF-C在胃癌組織中的高表達(dá)同樣具有重要意義。作為特異性的淋巴管生成因子，VEGF-C在腫瘤淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起著核心作用。腫瘤細(xì)胞為了實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，需要誘導(dǎo)新生淋巴管的生成，VEGF-C在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵的促進(jìn)作用。VEGF-C與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體VEGFR-3結(jié)合，激活一系列下游信號(hào)通路，如PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等。這些信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，促使淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞聚集并形成淋巴竇，從而構(gòu)建起新生的淋巴管網(wǎng)絡(luò)。這些新生的淋巴管管壁薄、基底膜不完整，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而通過(guò)淋巴循環(huán)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在本研究中，VEGF-C在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X5]%，顯著高于癌旁正常組織，且其表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了VEGF-C在胃癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要作用。S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的高表達(dá)，提示它們可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且兩者的作用機(jī)制可能存在相互關(guān)聯(lián)，共同促進(jìn)了胃癌的惡性進(jìn)展。5.2S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系本研究結(jié)果明確顯示，S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率及轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的胃癌組織更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且轉(zhuǎn)移程度可能更嚴(yán)重。這一結(jié)論與眾多前人研究結(jié)果相互印證，進(jìn)一步證實(shí)了兩者在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵作用。從S100A4的角度來(lái)看，其促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能是多方面的。S100A4可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重排，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。在細(xì)胞遷移過(guò)程中，細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化起著關(guān)鍵作用。S100A4能夠與肌動(dòng)蛋白等細(xì)胞骨架蛋白相互作用，促使肌動(dòng)蛋白絲的聚合和解聚，改變細(xì)胞的形態(tài)和極性，使胃癌細(xì)胞能夠突破基底膜，向周圍組織浸潤(rùn)，進(jìn)而更容易進(jìn)入淋巴管并發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。S100A4可能參與調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程。EMT是上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間緊密連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過(guò)程，這一過(guò)程使細(xì)胞具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。研究表明，S100A4可以激活TGF-β信號(hào)通路，促進(jìn)EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)變化，使上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin等表達(dá)上調(diào)，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。Saleem等人在對(duì)前列腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，S100A4的高表達(dá)可使金屬蛋白酶-9（MMP-9）活性增加，而應(yīng)用S100A4抑制劑則能降低MMP-9的表達(dá)和蛋白水解活性。MMP-9是一種能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶，其活性增加可以破壞細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供空間。因此，S100A4可能通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-9的活性，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)其向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。VEGF-C在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中則主要通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成來(lái)發(fā)揮作用。VEGF-C是特異性的淋巴管生成因子，它與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體VEGFR-3結(jié)合，激活一系列下游信號(hào)通路，如PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等。這些信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，促使淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞聚集并形成淋巴竇，從而構(gòu)建起新生的淋巴管網(wǎng)絡(luò)。在本研究中，VEGF-C在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了VEGF-C在促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用。腫瘤細(xì)胞為了實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，需要誘導(dǎo)新生淋巴管的生成，VEGF-C在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮了核心作用。新生的淋巴管管壁薄、基底膜不完整，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而通過(guò)淋巴循環(huán)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有研究表明，在乳腺癌中，VEGF-C的高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤周邊淋巴管的生成，增加腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管的機(jī)會(huì)，從而導(dǎo)致更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。在本研究的胃癌樣本中，也觀察到了類似的現(xiàn)象，即VEGF-C表達(dá)越高，胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率和轉(zhuǎn)移程度越高。S100A4和VEGF-C在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能存在協(xié)同作用。有研究發(fā)現(xiàn)，S100A4與VEGF-C在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。這表明S100A4可能通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF-C/VEGFR-3信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移。S100A4可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，或者增強(qiáng)VEGF-C與其受體VEGFR-3的結(jié)合能力，從而進(jìn)一步促進(jìn)淋巴管生成和腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Moriyama-Kita等發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染S100A4的舌鱗癌細(xì)胞株中VEGF-C表達(dá)上調(diào)，雖然該研究未對(duì)二者之間的關(guān)系作進(jìn)一步分析，但也在一定程度上支持了S100A4和VEGF-C可能存在協(xié)同作用的觀點(diǎn)。S100A4和VEGF-C通過(guò)不同但又相互關(guān)聯(lián)的機(jī)制促進(jìn)胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，兩者的高表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率和轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，深入研究它們的作用機(jī)制，對(duì)于理解胃癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程和開(kāi)發(fā)有效的治療策略具有重要意義。5.3S100A4和VEGF-C表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系本研究通過(guò)對(duì)[X]例胃癌患者的隨訪，發(fā)現(xiàn)S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者生存率更低，生存時(shí)間更短，兩者聯(lián)合檢測(cè)可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。S100A4陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存率顯著低于S100A4陰性表達(dá)的患者，這一結(jié)果與黃海力等人的研究一致，他們通過(guò)對(duì)208例胃癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，癌灶以及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中S100A4高表達(dá)者比低表達(dá)者預(yù)后差，多因素分析顯示，S100A4在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)水平是胃癌的獨(dú)立預(yù)后影響因子。S100A4可能通過(guò)多種機(jī)制影響胃癌患者的預(yù)后。S100A4可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，使腫瘤更容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，從而縮短患者的生存時(shí)間。在本研究中，S100A4的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均存在顯著相關(guān)性，這些因素都與患者的預(yù)后密切相關(guān)。S100A4還可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，影響免疫細(xì)胞的功能，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步影響患者的預(yù)后。VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存率也顯著低于VEGF-C陰性表達(dá)的患者，這與眾多研究結(jié)果相符，表明VEGF-C的高表達(dá)與胃癌患者的不良預(yù)后相關(guān)。VEGF-C主要通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成，增加腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。在本研究中，VEGF-C的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，高表達(dá)VEGF-C的胃癌組織更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者預(yù)后的重要因素。VEGF-C還可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤血管的生成，影響腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生不利影響。將患者按照S100A4和VEGF-C的表達(dá)情況分為雙陽(yáng)性組、單陽(yáng)性組和雙陰性組后發(fā)現(xiàn)，雙陽(yáng)性組患者生存率最低，顯著低于單陽(yáng)性組和雙陰性組。這表明S100A4和VEGF-C在影響胃癌患者預(yù)后方面可能存在協(xié)同作用。兩者的高表達(dá)可能通過(guò)不同但又相互關(guān)聯(lián)的機(jī)制，共同促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲，從而導(dǎo)致患者的預(yù)后更差。S100A4通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架和EMT過(guò)程增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，VEGF-C通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成增加腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，兩者相互作用，進(jìn)一步惡化患者的病情。S100A4和VEGF-C的表達(dá)可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。在臨床實(shí)踐中，檢測(cè)胃癌患者組織中S100A4和VEGF-C的表達(dá)水平，有助于醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷患者的預(yù)后情況，為制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。對(duì)于高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者，提示其預(yù)后較差，醫(yī)生可以考慮采取更積極的治療策略，如加強(qiáng)術(shù)后輔助化療、靶向治療等，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率。這兩個(gè)指標(biāo)還可以用于監(jiān)測(cè)患者的治療效果和病情進(jìn)展，為后續(xù)的治療調(diào)整提供參考。5.4研究結(jié)果的臨床應(yīng)用前景本研究結(jié)果在臨床應(yīng)用方面具有廣闊的前景，有望為胃癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估帶來(lái)新的突破和變革。在診斷領(lǐng)域，S100A4和VEGF-C作為潛在的生物標(biāo)志物，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前，胃癌的早期診斷主要依賴于胃鏡檢查和病理活檢，但這些方法具有一定的侵入性，且對(duì)于早期病變的檢測(cè)存在一定局限性。而檢測(cè)血清或組織中S100A4和VEGF-C的表達(dá)水平，為胃癌的早期診斷提供了一種新的、相對(duì)無(wú)創(chuàng)的方法。通過(guò)開(kāi)發(fā)高靈敏度和特異性的檢測(cè)試劑盒，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光檢測(cè)等技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)S100A4和VEGF-C的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。將這些檢測(cè)方法應(yīng)用于胃癌的篩查中，尤其是對(duì)于高危人群，如幽門螺桿菌感染患者、有胃癌家族史者等，可以提高胃癌的早期發(fā)現(xiàn)率，實(shí)現(xiàn)疾病的早診斷、早治療，從而顯著改善患者的預(yù)后。在治療方面，基于本研究結(jié)果，有望開(kāi)發(fā)出針對(duì)S100A4和VEGF-C的靶向治療藥物。由于S100A4和VEGF-C在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，阻斷它們的功能或信號(hào)通路，可能成為一種有效的治療策略。對(duì)于S100A4，可以開(kāi)發(fā)特異性的抑制劑，阻斷其與相關(guān)蛋白的相互作用，從而抑制其促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的功能。針對(duì)VEGF-C，可以研發(fā)抗VEGF-C單克隆抗體或小分子抑制劑，阻斷VEGF-C與其受體VEGFR-3的結(jié)合，抑制淋巴管生成，從而減少腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這些靶向治療藥物可以與傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療等治療方法聯(lián)合應(yīng)用，提高治療效果，降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。例如，在手術(shù)前給予靶向治療藥物，可以縮小腫瘤體積，降低腫瘤的侵襲性，提高手術(shù)切除的成功率；在術(shù)后給予靶向治療藥物，可以清除殘留的腫瘤細(xì)胞，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)。在預(yù)后評(píng)估方面，本研究建立的基于S100A4和VEGF-C表達(dá)的預(yù)后評(píng)估模型，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前，胃癌患者的預(yù)后評(píng)估主要依賴于TNM分期等傳統(tǒng)指標(biāo)，但這些指標(biāo)存在一定的局限性，不能準(zhǔn)確反映每個(gè)患者的具體情況。而結(jié)合S100A4和VEGF-C的表達(dá)水平，可以更全面、準(zhǔn)確地評(píng)估患者的預(yù)后。醫(yī)生可以根據(jù)患者的S100A4和VEGF-C表達(dá)情況，制定個(gè)性化的治療方案和隨訪計(jì)劃。對(duì)于高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者，提示其預(yù)后較差，醫(yī)生可以加強(qiáng)隨訪監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的跡象，并采取更積極的治療措施；對(duì)于低表達(dá)的患者，可以適當(dāng)減少隨訪頻率，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理壓力。通過(guò)這種個(gè)性化的預(yù)后評(píng)估和治療策略，可以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。本研究結(jié)果為胃癌的臨床診療提供了新的思路和方法，具有重要的臨床應(yīng)用前景。未來(lái)，需要進(jìn)一步深入研究S100A4和VEGF-C的作用機(jī)制，開(kāi)發(fā)更加有效的檢測(cè)方法和治療藥物，將研究成果更好地轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)踐，造福廣大胃癌患者。六、研究結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)定量PCR法，對(duì)胃癌組織及癌旁正常組織中S100A4和VEGF-C的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了它們與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系，得出以下主要結(jié)論：S100A4和VEGF-C在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于癌旁正常組織，提示它們可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。S100A4的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均存在顯著相關(guān)性；VEGF-C的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也存在顯著相關(guān)性，表明S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌的多項(xiàng)臨床病理特征密切相關(guān)，尤其是與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系顯著。S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率及轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的胃癌組織更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且轉(zhuǎn)移程度可能更嚴(yán)重，提示它們?cè)谖赴┝馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。S100A4和VEGF-C的表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)S100A4和VEGF-C的患者生存率更低，生存時(shí)間更短，兩者聯(lián)合檢測(cè)可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。6.2研究不足與展望盡管本研究在揭示胃癌組織中S100A4和VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系方面取得了一定成果，但不可避免地存在一些局限性。從樣本量來(lái)看，本研究?jī)H納入了[X]例胃癌患者，樣本數(shù)量相對(duì)有限。在醫(yī)學(xué)研究中，樣本量的大小直接影響研究結(jié)果的可靠性和普遍性。較小的樣本量可能無(wú)法全面涵蓋胃癌患者的各種臨床病理特征和個(gè)體差異，導(dǎo)致