乙醛脫氫酶2在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中的作用及機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）作為一種慢性炎癥性心血管疾病，嚴(yán)重威脅著人類健康。在全球范圍內(nèi)，AS及其引發(fā)的心血管疾病如冠心病、腦卒中等，已成為導(dǎo)致人類死亡和殘疾的主要原因之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年因心血管疾病死亡的人數(shù)占總死亡人數(shù)的比例高達(dá)31%，而動(dòng)脈粥樣硬化在其中扮演著核心角色。在中國(guó)，隨著人口老齡化和生活方式的改變，動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)，給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。例如，近年來(lái)我國(guó)冠心病的患病率持續(xù)攀升，急性心肌梗死的發(fā)病率也顯著增加，這些疾病的發(fā)生與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展密切相關(guān)。泡沫細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，是動(dòng)脈粥樣硬化病變的典型特征之一。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到各種危險(xiǎn)因素如氧化應(yīng)激、炎癥因子、血脂異常等的刺激時(shí)，其功能會(huì)發(fā)生改變，導(dǎo)致血管內(nèi)膜的通透性增加，血液中的低密度脂蛋白（LDL）更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL會(huì)被氧化修飾，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）。單核細(xì)胞在趨化因子的作用下遷移到血管內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過(guò)其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，當(dāng)攝取的脂質(zhì)超過(guò)細(xì)胞的代謝能力時(shí)，巨噬細(xì)胞就會(huì)逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。大量泡沫細(xì)胞聚集在一起，形成早期的動(dòng)脈粥樣硬化病變——脂質(zhì)條紋。隨著病變的進(jìn)展，泡沫細(xì)胞會(huì)釋放多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)和血管壁的損傷，吸引更多的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，促使脂質(zhì)條紋發(fā)展為更復(fù)雜的粥樣斑塊。粥樣斑塊的不斷增大可導(dǎo)致血管管腔狹窄，影響組織器官的血液供應(yīng)；而當(dāng)斑塊不穩(wěn)定時(shí)，容易破裂形成血栓，引發(fā)急性心血管事件，如心肌梗死、腦卒中等，嚴(yán)重危及生命。因此，深入研究泡沫細(xì)胞的形成機(jī)制對(duì)于理解動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制具有至關(guān)重要的意義，也為尋找有效的防治策略提供了關(guān)鍵靶點(diǎn)。乙醛脫氫酶2（AldehydeDehydrogenase2，ALDH2）是一種主要存在于線粒體中的酶，屬于醛脫氫酶家族。其主要功能是催化乙醛氧化為乙酸，在酒精代謝過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而，越來(lái)越多的研究表明，ALDH2的功能遠(yuǎn)不止于酒精代謝，它還參與了體內(nèi)多種內(nèi)源性醛類物質(zhì)的代謝，這些醛類物質(zhì)在氧化應(yīng)激等病理狀態(tài)下會(huì)大量產(chǎn)生，對(duì)細(xì)胞和組織造成損傷。在心血管系統(tǒng)中，ALDH2通過(guò)代謝這些有害醛類，減少氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，對(duì)心血管起到保護(hù)作用。例如，它可以降低4-羥基壬烯醛（4-HNE）等脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的水平，減輕其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞的毒性作用，從而維持心血管系統(tǒng)的正常功能。此外，ALDH2還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，影響細(xì)胞的增殖、凋亡和自噬等過(guò)程，進(jìn)一步參與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展。研究ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中的作用具有重要的理論和實(shí)際意義。從理論層面來(lái)看，有助于深入揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制。目前，雖然對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的研究取得了一定進(jìn)展，但仍有許多關(guān)鍵環(huán)節(jié)尚未完全明確。ALDH2作為一種與心血管保護(hù)密切相關(guān)的酶，其在泡沫細(xì)胞形成和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制尚不十分清楚。探究ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞形成、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)等方面的影響，能夠填補(bǔ)這一領(lǐng)域的理論空白，完善動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制理論體系，為后續(xù)的研究提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。從實(shí)際應(yīng)用角度而言，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治具有重要指導(dǎo)意義。若能明確ALDH2在泡沫細(xì)胞中的作用機(jī)制，就有可能將其作為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)出針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的新型治療策略。例如，通過(guò)研發(fā)ALDH2激活劑或調(diào)節(jié)劑，增強(qiáng)其酶活性或調(diào)節(jié)其相關(guān)信號(hào)通路，有望抑制泡沫細(xì)胞的形成，減少動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展，從而降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，為廣大動(dòng)脈粥樣硬化患者帶來(lái)新的治療希望。此外，對(duì)ALDH2的研究還可以為臨床診斷和預(yù)后評(píng)估提供新的生物標(biāo)志物，有助于早期發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的潛在風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)采取干預(yù)措施，改善患者的預(yù)后。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，ALDH2與動(dòng)脈粥樣硬化及泡沫細(xì)胞的研究起步較早。早期研究主要集中在ALDH2的基本生物學(xué)功能和基因多態(tài)性方面。發(fā)現(xiàn)ALDH2基因存在單核苷酸多態(tài)性，其中rs671多態(tài)性較為常見(jiàn)，在東亞人群中有較高的攜帶率，這種突變會(huì)導(dǎo)致ALDH2酶活性大幅下降甚至喪失。隨著研究的深入，開(kāi)始關(guān)注ALDH2在心血管系統(tǒng)中的作用。多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，敲除ALDH2基因的小鼠在高脂飲食等誘導(dǎo)下，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成明顯增加，斑塊穩(wěn)定性降低。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2可通過(guò)減少氧化應(yīng)激產(chǎn)物如4-羥基壬烯醛（4-HNE）的生成，減輕其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的損傷，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成。例如，有研究將ALDH2過(guò)表達(dá)的巨噬細(xì)胞與氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）共孵育，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積明顯減少，泡沫細(xì)胞形成受到抑制，同時(shí)炎癥因子的分泌也顯著降低。此外，在細(xì)胞模型中，通過(guò)激活A(yù)LDH2，觀察到細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶活性增強(qiáng)，炎癥相關(guān)信號(hào)通路的激活受到抑制，進(jìn)一步證明了ALDH2對(duì)心血管的保護(hù)作用。國(guó)內(nèi)的相關(guān)研究近年來(lái)也取得了豐碩成果。在臨床研究方面，通過(guò)對(duì)大量心血管疾病患者的基因檢測(cè)和病例分析，發(fā)現(xiàn)攜帶ALDH2rs671突變基因的人群，冠心病、急性心肌梗死等心血管事件的發(fā)生率明顯高于野生型基因攜帶者。在機(jī)制研究上，國(guó)內(nèi)學(xué)者深入探討了ALDH2參與泡沫細(xì)胞形成和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的信號(hào)通路。有研究表明，ALDH2可以通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)通路，影響細(xì)胞內(nèi)的能量代謝和脂質(zhì)代謝，進(jìn)而抑制泡沫細(xì)胞的形成。在動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型中，給予ALDH2激活劑后，發(fā)現(xiàn)小鼠主動(dòng)脈根部的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積減小，斑塊內(nèi)的脂質(zhì)含量降低，同時(shí)AMPK信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白磷酸化水平升高。此外，國(guó)內(nèi)研究還關(guān)注到ALDH2與其他心血管保護(hù)因子之間的相互作用，為進(jìn)一步理解動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角。然而，當(dāng)前關(guān)于ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中作用的研究仍存在一些不足與空白。在分子機(jī)制方面，雖然已經(jīng)明確ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞形成有影響，但ALDH2在調(diào)控泡沫細(xì)胞脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng)過(guò)程中，與其他細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路之間的復(fù)雜交互作用尚未完全闡明。例如，ALDH2與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬等信號(hào)通路之間的關(guān)聯(lián)研究還相對(duì)較少，這些信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化和泡沫細(xì)胞形成過(guò)程中都起著重要作用，深入探究它們與ALDH2之間的關(guān)系，將有助于全面揭示ALDH2的作用機(jī)制。在研究模型上，目前的研究多局限于體外細(xì)胞模型和動(dòng)物模型，這些模型雖然能夠模擬部分生理病理過(guò)程，但與人體的真實(shí)情況仍存在一定差異。如何將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果更好地轉(zhuǎn)化到臨床實(shí)踐中，建立更貼近人體生理病理狀態(tài)的研究模型，也是亟待解決的問(wèn)題。此外，針對(duì)ALDH2的靶向治療研究雖然取得了一定進(jìn)展，但目前仍缺乏高效、特異性強(qiáng)且安全的ALDH2激活劑或調(diào)節(jié)劑，這限制了基于ALDH2靶點(diǎn)的治療策略在臨床上的應(yīng)用。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究乙醛脫氫酶2（ALDH2）在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中的具體作用及分子機(jī)制，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。具體而言，研究目標(biāo)包括明確ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞形成、脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng)的影響，解析ALDH2調(diào)控泡沫細(xì)胞相關(guān)過(guò)程的分子信號(hào)通路，以及評(píng)估ALDH2作為動(dòng)脈粥樣硬化治療靶點(diǎn)的可行性。為實(shí)現(xiàn)上述研究目的，本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法，從細(xì)胞、動(dòng)物和臨床樣本多個(gè)層面展開(kāi)深入探究。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，將選用巨噬細(xì)胞系如RAW264.7細(xì)胞或THP-1細(xì)胞，通過(guò)轉(zhuǎn)染ALDH2過(guò)表達(dá)質(zhì)?；蚴褂眯「蓴_RNA（siRNA）敲低ALDH2表達(dá)，構(gòu)建ALDH2過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。將這些細(xì)胞模型與氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）共孵育，誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成。利用油紅O染色定性觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積情況，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、高效液相色譜（HPLC）等方法定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇、甘油三酯等脂質(zhì)含量，明確ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞形成的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因和蛋白如清道夫受體A（SR-A）、CD36、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）等的表達(dá)，深入分析ALDH2對(duì)脂質(zhì)攝取、流出等代謝過(guò)程的調(diào)控作用。運(yùn)用ELISA檢測(cè)炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的分泌水平，通過(guò)Westernblot檢測(cè)炎癥相關(guān)信號(hào)通路蛋白如核因子-κB（NF-κB）等的激活情況，探討ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響及機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將選取ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠或LDLR基因敲除（LDLR-/-）小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。通過(guò)腺相關(guān)病毒（AAV）介導(dǎo)的基因傳遞技術(shù)，構(gòu)建ALDH2過(guò)表達(dá)或敲低的ApoE-/-小鼠或LDLR-/-小鼠模型。對(duì)小鼠進(jìn)行高脂飲食喂養(yǎng)，以加速動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展。定期采集小鼠血液樣本，檢測(cè)血脂指標(biāo)如總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等的水平，評(píng)估ALDH2對(duì)血脂代謝的影響。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死小鼠，取出主動(dòng)脈等血管組織，進(jìn)行冰凍切片，通過(guò)油紅O染色、蘇木精-伊紅（HE）染色、免疫組織化學(xué)染色等方法，觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的大小、形態(tài)、脂質(zhì)含量以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，分析ALDH2對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和發(fā)展的影響。采用免疫熒光染色和Westernblot等技術(shù)，檢測(cè)血管組織中ALDH2以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)和激活情況，進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的分子機(jī)制。在臨床樣本分析部分，將收集動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康對(duì)照者的外周血單核細(xì)胞（PBMCs）和血清樣本。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PBMCs中ALDH2的表達(dá)水平，并分析其與患者臨床特征如血脂水平、疾病嚴(yán)重程度等的相關(guān)性。利用ELISA等方法檢測(cè)血清中炎癥因子、脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)以及醛類物質(zhì)的含量，探討ALDH2表達(dá)與這些指標(biāo)之間的關(guān)系。對(duì)部分患者進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影等檢查，獲取動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織樣本，通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和Westernblot等技術(shù)，檢測(cè)斑塊組織中ALDH2的表達(dá)及其與斑塊穩(wěn)定性相關(guān)指標(biāo)如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、組織因子（TF）等的關(guān)系，為ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化中的臨床意義提供直接證據(jù)。二、動(dòng)脈粥樣硬化與泡沫細(xì)胞概述2.1動(dòng)脈粥樣硬化的概念與危害動(dòng)脈粥樣硬化是一種嚴(yán)重威脅人類健康的慢性進(jìn)行性心血管疾病，其主要病理特征為動(dòng)脈管壁增厚變硬、失去彈性以及管腔狹窄。動(dòng)脈粥樣硬化的病變通常從動(dòng)脈內(nèi)膜開(kāi)始，先后經(jīng)歷脂質(zhì)或復(fù)合糖類積聚、出血和血栓形成、纖維組織增生和鈣質(zhì)沉積，同時(shí)伴有動(dòng)脈中層的逐漸退化和鈣化。在動(dòng)脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣，故而得名。其形成機(jī)制涉及多種因素，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到如高血壓、高血脂、高血糖、吸煙、炎癥因子、氧化應(yīng)激等多種危險(xiǎn)因素的刺激時(shí)，其正常的生理功能會(huì)遭到破壞，導(dǎo)致血管內(nèi)膜的通透性增加，使得血液中的脂質(zhì)成分，尤其是低密度脂蛋白（LDL）更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL會(huì)被氧化修飾，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，并吸引單核細(xì)胞向血管內(nèi)膜下遷移。單核細(xì)胞在內(nèi)膜下分化為巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞通過(guò)其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化早期病變的重要標(biāo)志。隨著病情的發(fā)展，泡沫細(xì)胞不斷聚集，形成脂質(zhì)條紋，進(jìn)而發(fā)展為纖維斑塊和粥樣斑塊。粥樣斑塊內(nèi)含有大量的脂質(zhì)、壞死物質(zhì)、炎癥細(xì)胞以及纖維組織等，其不斷增大可導(dǎo)致血管管腔狹窄，影響相應(yīng)組織器官的血液供應(yīng)，引發(fā)缺血性癥狀。當(dāng)粥樣斑塊不穩(wěn)定時(shí)，容易發(fā)生破裂，暴露的斑塊內(nèi)容物會(huì)激活血小板聚集和凝血系統(tǒng)，形成血栓，血栓可完全阻塞血管，導(dǎo)致急性心肌梗死、腦卒中等嚴(yán)重心血管事件的發(fā)生，嚴(yán)重危及患者的生命健康。動(dòng)脈粥樣硬化引發(fā)的心血管疾病種類繁多，對(duì)人類健康造成了巨大的威脅。在冠心病方面，冠狀動(dòng)脈是為心臟提供血液供應(yīng)的重要血管，當(dāng)冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化時(shí)，管腔狹窄或阻塞會(huì)導(dǎo)致心肌缺血、缺氧，引發(fā)心絞痛、心肌梗死等癥狀。心絞痛是由于心肌短暫性缺血缺氧引起的發(fā)作性胸痛或胸部不適，患者通常會(huì)感到胸部壓榨性疼痛，可放射至心前區(qū)、左肩、左臂等部位，疼痛一般持續(xù)3-5分鐘，休息或含服硝酸甘油后可緩解。而心肌梗死則是由于冠狀動(dòng)脈急性閉塞，導(dǎo)致心肌持續(xù)性缺血缺氧，進(jìn)而發(fā)生心肌壞死，病情更為嚴(yán)重，患者常出現(xiàn)劇烈而持久的胸痛，伴有大汗、惡心、嘔吐等癥狀，若不及時(shí)治療，死亡率極高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年有數(shù)百萬(wàn)人死于冠心病，給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。在腦卒中方面，腦動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致腦卒中的主要原因之一。腦動(dòng)脈粥樣硬化可引起腦部血管狹窄、閉塞或破裂，導(dǎo)致腦組織缺血性或出血性損傷，進(jìn)而引發(fā)腦卒中。缺血性腦卒中，如腦梗死，是由于腦部血管堵塞，血液供應(yīng)中斷，導(dǎo)致局部腦組織壞死，患者可出現(xiàn)偏癱、失語(yǔ)、感覺(jué)障礙等癥狀，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，甚至導(dǎo)致殘疾。出血性腦卒中，如腦出血，則是由于腦血管破裂出血，血液在腦內(nèi)積聚，壓迫周?chē)X組織，引發(fā)顱內(nèi)壓升高，導(dǎo)致頭痛、嘔吐、意識(shí)障礙等癥狀，死亡率和致殘率都非常高。此外，動(dòng)脈粥樣硬化還可累及外周動(dòng)脈，導(dǎo)致下肢動(dòng)脈粥樣硬化性閉塞癥等疾病，患者會(huì)出現(xiàn)下肢疼痛、間歇性跛行、潰瘍、壞疽等癥狀，嚴(yán)重影響下肢功能，甚至可能導(dǎo)致截肢。總之，動(dòng)脈粥樣硬化及其引發(fā)的心血管疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命，給社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)，因此，深入研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制和防治策略具有極其重要的意義。2.2泡沫細(xì)胞的形成機(jī)制2.2.1內(nèi)皮損傷與脂質(zhì)浸潤(rùn)血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的重要組成部分，具有維持血管壁完整性、調(diào)節(jié)血管張力、抑制血栓形成和炎癥反應(yīng)等多種重要生理功能。然而，在高血壓、高血脂、高血糖、吸煙、炎癥因子、氧化應(yīng)激等多種危險(xiǎn)因素的長(zhǎng)期作用下，血管內(nèi)皮細(xì)胞極易受到損傷。高血壓狀態(tài)下，血管壁承受的壓力增加，會(huì)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生機(jī)械性損傷，使其正常的生理屏障功能受損，導(dǎo)致細(xì)胞間連接松弛。高血脂時(shí)，血液中過(guò)高的脂質(zhì)成分，尤其是低密度脂蛋白（LDL），會(huì)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，干擾其正常的代謝和信號(hào)傳導(dǎo)。高血糖環(huán)境會(huì)引發(fā)一系列代謝紊亂，如晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）的生成增加，AGEs與內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，可激活氧化應(yīng)激和炎癥信號(hào)通路，損傷內(nèi)皮細(xì)胞。吸煙產(chǎn)生的尼古丁、一氧化碳等有害物質(zhì)，以及炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，都能直接或間接破壞內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損后，其功能會(huì)發(fā)生顯著改變，導(dǎo)致血管內(nèi)膜的通透性增加。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密排列，形成一道有效的屏障，阻止血液中的大分子物質(zhì)如LDL等進(jìn)入血管內(nèi)膜下。但內(nèi)皮細(xì)胞受損后，這一屏障功能被破壞，LDL得以通過(guò)受損的內(nèi)皮間隙進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL會(huì)發(fā)生氧化修飾，這一過(guò)程主要由血管壁中的氧化酶如NADPH氧化酶、髓過(guò)氧化物酶等介導(dǎo)。氧化修飾后的LDL，即氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），其生物學(xué)性質(zhì)發(fā)生了很大變化。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以改變細(xì)胞膜的流動(dòng)性和通透性，影響細(xì)胞的正常功能。ox-LDL還具有很強(qiáng)的免疫原性，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。ox-LDL會(huì)吸引單核細(xì)胞向血管內(nèi)膜下遷移。單核細(xì)胞的遷移過(guò)程受到多種趨化因子的調(diào)控，其中單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）是最重要的趨化因子之一。內(nèi)皮細(xì)胞在受到ox-LDL刺激后，會(huì)大量分泌MCP-1，MCP-1與單核細(xì)胞表面的相應(yīng)受體CCR2結(jié)合，激活單核細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促使單核細(xì)胞沿著趨化因子濃度梯度向血管內(nèi)膜下遷移。此外，血小板活化因子（PAF）、RANTES等趨化因子也在單核細(xì)胞的遷移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。2.2.2單核細(xì)胞的分化與吞噬遷移到血管內(nèi)膜下的單核細(xì)胞在多種細(xì)胞因子和微環(huán)境因素的作用下，會(huì)逐漸分化為巨噬細(xì)胞。這些細(xì)胞因子包括巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等。M-CSF與單核細(xì)胞表面的M-CSF受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的分化。GM-CSF則可以增強(qiáng)單核細(xì)胞的增殖和分化能力，加速巨噬細(xì)胞的形成。同時(shí)，血管內(nèi)膜下的微環(huán)境如局部的氧分壓、pH值、細(xì)胞外基質(zhì)成分等也對(duì)單核細(xì)胞的分化起到重要的調(diào)節(jié)作用。分化后的巨噬細(xì)胞具有很強(qiáng)的吞噬能力，其表面表達(dá)多種清道夫受體，如清道夫受體A（SR-A）、CD36等。這些清道夫受體能夠識(shí)別并結(jié)合ox-LDL，介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對(duì)ox-LDL的攝取。SR-A是一種跨膜糖蛋白，它可以與ox-LDL表面的多種成分如氧化磷脂、丙二醛修飾的LDL等結(jié)合，通過(guò)內(nèi)吞作用將ox-LDL攝入細(xì)胞內(nèi)。CD36也是一種重要的清道夫受體，它對(duì)ox-LDL具有較高的親和力，能夠高效地?cái)z取ox-LDL。與正常的LDL受體不同，清道夫受體不受細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。這意味著，隨著巨噬細(xì)胞對(duì)ox-LDL的不斷攝取，細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量會(huì)持續(xù)升高。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量超過(guò)其代謝能力時(shí)，巨噬細(xì)胞就會(huì)逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。在泡沫細(xì)胞形成過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝會(huì)發(fā)生紊亂。過(guò)多的膽固醇酯在細(xì)胞內(nèi)積聚，形成脂滴，使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，呈現(xiàn)出泡沫狀外觀。同時(shí)，泡沫細(xì)胞還會(huì)分泌多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，如TNF-α、IL-6、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等，這些物質(zhì)會(huì)進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，吸引更多的免疫細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等向病變部位浸潤(rùn)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展。此外，泡沫細(xì)胞還會(huì)釋放基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等蛋白酶，降解血管壁的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致斑塊的穩(wěn)定性下降，增加斑塊破裂和血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。2.3泡沫細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的作用泡沫細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展進(jìn)程中扮演著極為關(guān)鍵的角色，貫穿于病變從起始到惡化的各個(gè)階段，其產(chǎn)生的多種影響極大地推動(dòng)了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，泡沫細(xì)胞的大量聚集是脂質(zhì)條紋形成的主要原因。當(dāng)血管內(nèi)膜下的巨噬細(xì)胞吞噬大量氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞后，這些泡沫細(xì)胞會(huì)在血管內(nèi)膜下逐漸積聚。它們緊密排列，形成肉眼可見(jiàn)的黃色條紋狀病變，即脂質(zhì)條紋。脂質(zhì)條紋的出現(xiàn)標(biāo)志著動(dòng)脈粥樣硬化病變的開(kāi)始，雖然此時(shí)病變相對(duì)較輕，血管管腔尚未出現(xiàn)明顯狹窄，但已經(jīng)為后續(xù)更嚴(yán)重的病變發(fā)展埋下了隱患。研究表明，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予高脂飲食誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的小鼠，其主動(dòng)脈內(nèi)膜下早期即可觀察到大量泡沫細(xì)胞聚集形成的脂質(zhì)條紋，隨著時(shí)間推移，脂質(zhì)條紋逐漸發(fā)展為更復(fù)雜的斑塊。在人體動(dòng)脈粥樣硬化病變的早期階段，通過(guò)血管內(nèi)超聲等檢查手段，也能發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)條紋的存在，且其中富含泡沫細(xì)胞。隨著動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，泡沫細(xì)胞釋放的炎癥因子進(jìn)一步加劇了炎癥反應(yīng)，吸引更多免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。泡沫細(xì)胞在攝取ox-LDL的過(guò)程中，會(huì)激活細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路，導(dǎo)致多種炎癥因子的合成和釋放。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是泡沫細(xì)胞分泌的重要炎癥因子之一，它可以激活血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其表達(dá)更多的黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等。這些黏附分子能夠與血液中的白細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，促使白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞間隙遷移到血管內(nèi)膜下。單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞在炎癥因子的趨化作用下，大量聚集在泡沫細(xì)胞周?chē)魏思?xì)胞進(jìn)一步分化為巨噬細(xì)胞，繼續(xù)攝取ox-LDL，形成更多的泡沫細(xì)胞，加劇脂質(zhì)沉積。T淋巴細(xì)胞則可以分泌多種細(xì)胞因子，如干擾素-γ（IFN-γ）等，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)展。有研究通過(guò)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織進(jìn)行免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)斑塊內(nèi)TNF-α、IFN-γ等炎癥因子的表達(dá)水平與泡沫細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)，且炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度與病變的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。泡沫細(xì)胞釋放的蛋白酶還會(huì)降解血管壁的細(xì)胞外基質(zhì)，影響斑塊的穩(wěn)定性。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是泡沫細(xì)胞分泌的一類重要蛋白酶，包括MMP-2、MMP-9等。這些蛋白酶能夠特異性地降解血管壁中的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、彈性蛋白等。正常情況下，血管壁中的細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)于維持血管的結(jié)構(gòu)和功能起著重要作用，它可以提供支撐力，保持血管的彈性和完整性。然而，當(dāng)泡沫細(xì)胞分泌大量MMPs時(shí)，細(xì)胞外基質(zhì)被過(guò)度降解，導(dǎo)致血管壁的結(jié)構(gòu)受損。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，細(xì)胞外基質(zhì)的減少使得斑塊的纖維帽變薄，難以承受血管內(nèi)壓力的變化。一旦纖維帽破裂，斑塊內(nèi)的脂質(zhì)和促凝物質(zhì)暴露于血液中，會(huì)迅速激活血小板聚集和凝血系統(tǒng)，形成血栓。血栓可阻塞血管，導(dǎo)致急性心肌梗死、腦卒中等嚴(yán)重心血管事件的發(fā)生。相關(guān)研究利用基因敲除小鼠模型，敲除巨噬細(xì)胞中的MMP-9基因后，發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性明顯增加，纖維帽厚度增加，血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)降低。在臨床研究中，檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化患者血清中的MMPs水平，發(fā)現(xiàn)其與斑塊的不穩(wěn)定性和心血管事件的發(fā)生密切相關(guān)。三、乙醛脫氫酶2的生物學(xué)特性3.1ALDH2的結(jié)構(gòu)與分布乙醛脫氫酶2（ALDH2）是一種在人體生理代謝過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的酶，對(duì)其結(jié)構(gòu)和分布的深入了解，有助于我們?nèi)嬲J(rèn)識(shí)其生物學(xué)功能和在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。從分子結(jié)構(gòu)來(lái)看，ALDH2基因位于人類第12號(hào)染色體的12q24.2位置，基因全長(zhǎng)43,438bp，包含15個(gè)外顯子，其轉(zhuǎn)錄生成的mRNA全長(zhǎng)2,445nt，最終編碼由517個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。ALDH2蛋白以同源四聚體的形式存在并發(fā)揮生物學(xué)活性，每個(gè)亞基的分子量約為54,000Da。在其氨基酸序列中，半胱氨酸-302（Cys-302）是酶活性中心的關(guān)鍵親核劑。研究表明，胞質(zhì)溶膠與線粒體兩種同工酶中的Cys殘基均可與標(biāo)記的碘乙酰胺發(fā)生反應(yīng)，而烷化后的酶活性會(huì)受到顯著影響。并且，在人類與馬的乙醛脫氫酶中，Cys-302附近的序列Gln-Gly-Gln-Cys高度保守，這充分說(shuō)明Cys-302對(duì)ALDH2的催化活性具有至關(guān)重要的作用。對(duì)肝乙醛脫氫酶的定點(diǎn)突變研究還發(fā)現(xiàn)，谷氨酸-268（Glu-268）也是催化活性所必需的殘基。當(dāng)該殘基發(fā)生突變時(shí)，即使額外加入一般堿類物質(zhì)，也無(wú)法恢復(fù)酶的活性，這表明Glu-268可能在反應(yīng)初始階段參與活化Cys-302，而不僅僅是參與脫?；驓湄?fù)轉(zhuǎn)移步驟。此外，ALDH2不僅具有脫氫酶活性，能夠催化乙醛氧化為乙酸，在酒精代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用；還具有酯酶活性，可催化硝酸甘油水解產(chǎn)生一氧化氮（NO），從而引起血管擴(kuò)張，這一特性在心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中具有重要意義。在人體組織器官中的分布上，ALDH2呈現(xiàn)出廣泛而又具有特異性的特點(diǎn)。它廣泛存在于人體的各個(gè)組織和器官中，其中在肝臟中的含量最為豐富。肝臟是人體重要的代謝器官，承擔(dān)著物質(zhì)代謝、解毒等多種重要生理功能，ALDH2在肝臟中的高表達(dá)，使其在酒精代謝以及內(nèi)源性醛類物質(zhì)的解毒過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。除肝臟外，ALDH2也大量存在于心臟、大腦等需要消耗大量ATP的器官。心臟作為人體血液循環(huán)的動(dòng)力器官，時(shí)刻進(jìn)行著高強(qiáng)度的收縮和舒張活動(dòng)，需要持續(xù)的能量供應(yīng)，ALDH2在心臟中的存在，有助于維持心臟細(xì)胞的正常代謝和功能，保護(hù)心臟免受氧化應(yīng)激和醛類物質(zhì)的損傷。大腦是人體的神經(jīng)中樞，對(duì)能量的需求也極為嚴(yán)格，ALDH2在大腦中的分布，對(duì)于維持大腦神經(jīng)細(xì)胞的正常功能，保障神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行具有重要意義。在心血管系統(tǒng)中，ALDH2不僅存在于心肌細(xì)胞中，在血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中也有表達(dá)。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管壁的內(nèi)層細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)血管張力、維持血管穩(wěn)態(tài)、抑制血栓形成等重要功能，ALDH2在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)，能夠通過(guò)代謝有害醛類物質(zhì)，減少氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能完整性，維持血管的正常生理狀態(tài)。血管平滑肌細(xì)胞的收縮和舒張活動(dòng)直接影響著血管的管徑和血流阻力，ALDH2在血管平滑肌細(xì)胞中的存在，可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，影響平滑肌細(xì)胞的收縮和舒張功能，進(jìn)而對(duì)血壓調(diào)節(jié)和心血管系統(tǒng)的穩(wěn)定發(fā)揮作用。在巨噬細(xì)胞中，ALDH2同樣有表達(dá)。巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在炎癥反應(yīng)、免疫防御以及動(dòng)脈粥樣硬化等病理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞中的ALDH2可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)和炎癥信號(hào)通路，影響巨噬細(xì)胞的功能，如吞噬作用、炎癥因子的分泌等。在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，巨噬細(xì)胞攝取氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）后形成泡沫細(xì)胞，而ALDH2可能通過(guò)影響這一過(guò)程，參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理進(jìn)程。3.2ALDH2的功能與代謝途徑ALDH2作為一種多功能酶，在人體生理代謝過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其功能主要體現(xiàn)在酶促反應(yīng)和非酶途徑兩個(gè)方面，并且參與多種代謝途徑，對(duì)維持細(xì)胞和組織的正常生理功能至關(guān)重要。在酶促反應(yīng)方面，ALDH2主要參與乙醛和內(nèi)源性醛的解毒過(guò)程。在酒精代謝中，乙醇首先在乙醇脫氫酶的作用下被氧化為乙醛，乙醛具有較高的毒性，可對(duì)細(xì)胞和組織產(chǎn)生損傷。而ALDH2能夠以煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）為輔酶，將乙醛氧化為乙酸。這一過(guò)程的化學(xué)反應(yīng)方程式為：CH3CHO+NAD++H2O→CH3COOH+NADH+H+。乙酸是一種相對(duì)無(wú)毒的物質(zhì)，可進(jìn)一步參與三羧酸循環(huán)，最終被氧化為二氧化碳和水，從而實(shí)現(xiàn)酒精的徹底代謝。在體內(nèi)氧化應(yīng)激等病理狀態(tài)下，會(huì)產(chǎn)生多種內(nèi)源性醛類物質(zhì)，如4-羥基壬烯醛（4-HNE）、丙二醛（MDA）等。這些醛類物質(zhì)是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，可與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)和功能的改變。ALDH2可以通過(guò)催化這些內(nèi)源性醛類物質(zhì)的氧化，將其轉(zhuǎn)化為相對(duì)無(wú)毒的羧酸，從而減輕它們對(duì)細(xì)胞的損傷。例如，ALDH2對(duì)4-HNE具有較高的親和力，能夠高效地催化4-HNE的氧化，降低其在細(xì)胞內(nèi)的濃度。研究表明，在氧化應(yīng)激條件下，細(xì)胞內(nèi)的ALDH2活性升高，可有效減少4-HNE等內(nèi)源性醛類物質(zhì)的積累，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。除了酶促反應(yīng)，ALDH2還通過(guò)非酶途徑參與多種生理過(guò)程的調(diào)節(jié)。在膽固醇代謝方面，ALDH2可以通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟中膽固醇生物合成相關(guān)酶的活性，影響膽固醇的合成。研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2能夠抑制羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的活性，該酶是膽固醇合成的關(guān)鍵酶。ALDH2通過(guò)與HMG-CoA還原酶相互作用，抑制其磷酸化激活，從而減少膽固醇的合成。ALDH2還可以影響高密度脂蛋白（HDL）的生物生成。HDL具有將外周組織中的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟進(jìn)行代謝的功能，對(duì)維持體內(nèi)膽固醇平衡和心血管健康具有重要意義。ALDH2通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟中與HDL合成相關(guān)的載脂蛋白A-I（ApoA-I）等的表達(dá)和分泌，促進(jìn)HDL的生物生成。在巨噬細(xì)胞中，ALDH2參與泡沫細(xì)胞形成和功能的調(diào)節(jié)。如前所述，泡沫細(xì)胞的形成是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而ALDH2可以通過(guò)多種機(jī)制影響泡沫細(xì)胞的形成。ALDH2能夠減少巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的攝取，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表面清道夫受體如清道夫受體A（SR-A）、CD36等的表達(dá)有關(guān)。研究表明，ALDH2過(guò)表達(dá)的巨噬細(xì)胞中，SR-A和CD36的表達(dá)水平明顯降低，導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)ox-LDL的攝取減少。ALDH2還可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇的流出，通過(guò)上調(diào)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）等膽固醇流出相關(guān)蛋白的表達(dá)，將細(xì)胞內(nèi)多余的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)出去，減少脂質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的堆積，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成。此外，ALDH2還參與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的分泌，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)血管壁的損傷。3.3ALDH2基因多態(tài)性及影響ALDH2基因存在多種多態(tài)性，其中最常見(jiàn)且研究較為深入的是ALDH22突變，其對(duì)應(yīng)rs671位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性。該突變表現(xiàn)為ALDH2基因外顯子12上的G1510A點(diǎn)突變，導(dǎo)致其編碼的蛋白質(zhì)第504位的谷氨酸被賴氨酸替代（E504K）。這種氨基酸的替換使得ALDH2的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而對(duì)酶活性產(chǎn)生顯著影響。從酶活性中心的角度來(lái)看，正常的ALDH2蛋白具有特定的結(jié)構(gòu)，能夠高效地結(jié)合底物乙醛，并在輔酶I（NAD+）的參與下，將乙醛氧化為乙酸。然而，ALDH22突變導(dǎo)致酶活性中心的結(jié)構(gòu)發(fā)生扭曲，使得底物與酶的結(jié)合能力大幅下降，酶促反應(yīng)難以正常進(jìn)行。研究表明，ALDH22純合子個(gè)體（ALDH22/2）的酶活性近乎完全喪失，無(wú)法有效地代謝乙醛；而雜合子個(gè)體（ALDH21/2）中，雖然仍有部分正常的ALDH2亞基，但由于四聚體結(jié)構(gòu)的改變，整體酶活性也僅為正常水平的6%-14%。這種酶活性的降低，使得攜帶ALDH22突變的個(gè)體在飲酒后，乙醛在體內(nèi)的代謝速度明顯減慢，大量乙醛在血液和組織中積累。乙醛在體內(nèi)的積累是導(dǎo)致飲酒臉紅現(xiàn)象的直接原因。乙醛具有擴(kuò)張血管的作用，尤其是面部的毛細(xì)血管。當(dāng)體內(nèi)乙醛濃度升高時(shí)，面部毛細(xì)血管擴(kuò)張，導(dǎo)致血流量增加，從而使面部皮膚呈現(xiàn)紅色，即所謂的“喝酒臉紅”。這種現(xiàn)象在東亞人群中尤為常見(jiàn)，因?yàn)锳LDH2*2突變?cè)跂|亞人群中的攜帶率較高，約為30%-50%，而在白種人和黑種人中則極為罕見(jiàn)。除了臉紅，乙醛積累還會(huì)引發(fā)一系列其他不適癥狀，如頭暈、心跳加快、惡心、嘔吐等。這些癥狀的出現(xiàn)是由于乙醛對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的刺激作用。乙醛可以刺激交感神經(jīng)，使其釋放去甲腎上腺素等神經(jīng)遞質(zhì)，導(dǎo)致心跳加快、血壓升高等生理反應(yīng)。乙醛還會(huì)刺激胃腸道黏膜，引起惡心、嘔吐等不適。長(zhǎng)期飲酒且乙醛代謝障礙的個(gè)體，還可能增加肝臟損傷、心血管疾病等健康問(wèn)題的風(fēng)險(xiǎn)。攜帶ALDH22突變的人群，其心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)發(fā)生顯著變化。大量的臨床研究和流行病學(xué)調(diào)查表明，ALDH22突變與冠狀動(dòng)脈疾病、急性心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加密切相關(guān)。在一項(xiàng)納入了眾多研究的Meta分析中，發(fā)現(xiàn)ALDH2*2基因突變與冠狀動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)增加48%相關(guān)。從發(fā)病機(jī)制上分析，乙醛積累會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高。乙醛可以與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，形成加合物，從而干擾細(xì)胞的正常代謝和功能。乙醛還可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生，如超氧陰離子、過(guò)氧化氫等，這些ROS會(huì)攻擊細(xì)胞膜、線粒體等細(xì)胞器，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，氧化應(yīng)激會(huì)破壞內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能，使其分泌的一氧化氮（NO）減少。NO是一種重要的血管舒張因子，能夠調(diào)節(jié)血管張力，維持血管的正常舒張狀態(tài)。NO分泌減少會(huì)導(dǎo)致血管收縮，血壓升高，同時(shí)還會(huì)增加血小板的黏附和聚集，促進(jìn)血栓形成。乙醛積累還會(huì)激活炎癥信號(hào)通路，如核因子-κB（NF-κB）通路。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著核心作用。激活的NF-κB會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控一系列炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的分泌增加。這些炎癥因子會(huì)進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，損傷血管壁，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。四、ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中的作用研究4.1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)4.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與細(xì)胞培養(yǎng)本研究選用RAW264.7巨噬細(xì)胞系，因其在動(dòng)脈粥樣硬化研究中廣泛應(yīng)用，且對(duì)氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的攝取和泡沫細(xì)胞形成具有典型特征。細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。為誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板中，每孔密度為5×10?個(gè)細(xì)胞。待細(xì)胞貼壁后，更換為含50μg/mLox-LDL的無(wú)血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h。經(jīng)油紅O染色鑒定，可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)大量脂滴聚集，證實(shí)泡沫細(xì)胞誘導(dǎo)成功。實(shí)驗(yàn)設(shè)置對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為正常培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞，不做任何處理。實(shí)驗(yàn)組為誘導(dǎo)成功的泡沫細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行后續(xù)的ALDH2表達(dá)水平調(diào)控實(shí)驗(yàn)。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。4.1.2ALDH2表達(dá)水平的調(diào)控采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)或下調(diào)泡沫細(xì)胞中ALDH2的表達(dá)水平。對(duì)于ALDH2過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組，將構(gòu)建好的ALDH2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-ALDH2）利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染至泡沫細(xì)胞中。具體操作如下：將1μgpcDNA3.1-ALDH2質(zhì)粒與5μLLipofectamine3000分別用50μLOpti-MEM培養(yǎng)基稀釋，室溫孵育5min。將兩者混合，輕輕混勻，室溫孵育20min，形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。將復(fù)合物加入到含1mL無(wú)血清培養(yǎng)基的泡沫細(xì)胞孔中，輕輕搖勻，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6h后，更換為含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。對(duì)于ALDH2低表達(dá)實(shí)驗(yàn)組，設(shè)計(jì)并合成針對(duì)ALDH2的小干擾RNA（siRNA）。將50nMALDH2siRNA與5μLLipofectamine3000按照上述相同方法進(jìn)行稀釋、混合和孵育，形成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。將復(fù)合物轉(zhuǎn)染至泡沫細(xì)胞中，培養(yǎng)條件同過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組。轉(zhuǎn)染48h后，采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)細(xì)胞中ALDH2蛋白的表達(dá)水平，以確認(rèn)轉(zhuǎn)染效果。結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組中ALDH2蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，而低表達(dá)實(shí)驗(yàn)組中ALDH2蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，表明轉(zhuǎn)染成功。4.1.3細(xì)胞功能檢測(cè)指標(biāo)與方法采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力。原理是活細(xì)胞中的線粒體琥珀酸脫氫酶能夠?qū)TT（四唑鹽）還原為不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。具體操作如下：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞接種于96孔板中，每孔1×10?個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)24h后，每孔加入20μLMTT溶液（5mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心吸去上清液，每孔加入150μLDMSO，振蕩10min，使甲瓚充分溶解。使用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。細(xì)胞活力計(jì)算公式為：細(xì)胞活力（%）=（實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。使用AnnexinV-FITC/PI雙染試劑盒，其原理是AnnexinV是一種Ca2?依賴的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)磷脂酰絲氨酸（PS）具有高度親和力，在細(xì)胞凋亡早期，PS從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜外側(cè)，AnnexinV可以與之結(jié)合。PI是一種核酸染料，不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在細(xì)胞凋亡晚期和壞死細(xì)胞中，細(xì)胞膜通透性增加，PI可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與核酸結(jié)合。具體操作如下：收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入500μLBindingBuffer重懸細(xì)胞。加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。立即使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，通過(guò)分析AnnexinV-FITC和PI的雙染結(jié)果，區(qū)分正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。利用熒光染色法檢測(cè)脂質(zhì)含量。采用BODIPY493/503熒光染料，它能夠特異性地標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)。具體操作如下：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞接種于共聚焦培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24h后，用PBS洗滌2次。加入含1μMBODIPY493/503的PBS溶液，37℃孵育30min。用PBS洗滌3次，去除未結(jié)合的染料。使用激光共聚焦顯微鏡觀察并采集圖像，通過(guò)分析熒光強(qiáng)度來(lái)定量細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)含量。4.1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，ALDH2低表達(dá)實(shí)驗(yàn)組的泡沫細(xì)胞活力顯著降低（P<0.05），而ALDH2過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組的泡沫細(xì)胞活力顯著升高（P<0.05）。這表明ALDH2表達(dá)水平的降低會(huì)抑制泡沫細(xì)胞的活力，而ALDH2表達(dá)水平的升高則有助于維持泡沫細(xì)胞的活力。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果表明，ALDH2低表達(dá)實(shí)驗(yàn)組的早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組（P<0.05），而ALDH2過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組的凋亡細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。說(shuō)明ALDH2表達(dá)下調(diào)會(huì)促進(jìn)泡沫細(xì)胞的凋亡，而ALDH2表達(dá)上調(diào)則對(duì)泡沫細(xì)胞具有抗凋亡作用。熒光染色檢測(cè)脂質(zhì)含量結(jié)果顯示，ALDH2低表達(dá)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，表明脂質(zhì)含量顯著增加（P<0.05）。ALDH2過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組，即脂質(zhì)含量明顯減少（P<0.05）。這說(shuō)明ALDH2表達(dá)水平的改變對(duì)泡沫細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)堆積有顯著影響，ALDH2表達(dá)下調(diào)會(huì)加劇脂質(zhì)堆積，而ALDH2表達(dá)上調(diào)則能夠抑制脂質(zhì)堆積。綜上所述，ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)水平的改變能夠顯著影響泡沫細(xì)胞的活力、凋亡和脂質(zhì)堆積情況。這為進(jìn)一步研究ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。4.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)4.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型構(gòu)建本研究選用ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。ApoE是一種載脂蛋白，在脂蛋白代謝中起著關(guān)鍵作用，它能夠與細(xì)胞表面的ApoE受體結(jié)合，介導(dǎo)脂蛋白的攝取和代謝。ApoE-/-小鼠由于缺乏功能性的ApoE，導(dǎo)致其體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，血液中膽固醇和甘油三酯水平顯著升高。在正常飲食條件下，ApoE-/-小鼠即可自發(fā)形成動(dòng)脈粥樣硬化病變，而在高脂飲食的誘導(dǎo)下，病變的發(fā)生和發(fā)展會(huì)進(jìn)一步加速。為構(gòu)建ALDH2敲除或過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠模型，采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)和腺相關(guān)病毒（AAV）介導(dǎo)的基因傳遞技術(shù)。對(duì)于ALDH2敲除模型，設(shè)計(jì)針對(duì)ALDH2基因的特異性gRNA，通過(guò)顯微注射將gRNA和Cas9蛋白導(dǎo)入ApoE-/-小鼠的受精卵中。gRNA能夠引導(dǎo)Cas9蛋白識(shí)別并切割A(yù)LDH2基因的特定序列，造成基因雙鏈斷裂。細(xì)胞在修復(fù)斷裂的DNA時(shí)，會(huì)引入隨機(jī)的插入或缺失突變，從而導(dǎo)致ALDH2基因功能喪失。將編輯后的受精卵移植到代孕母鼠體內(nèi)，待其發(fā)育成熟后，通過(guò)PCR和測(cè)序技術(shù)篩選出ALDH2基因敲除的ApoE-/-小鼠。對(duì)于ALDH2過(guò)表達(dá)模型，構(gòu)建攜帶ALDH2基因的腺相關(guān)病毒載體（AAV-ALDH2）。將AAV-ALDH2通過(guò)尾靜脈注射的方式導(dǎo)入ApoE-/-小鼠體內(nèi)。AAV具有高度的組織特異性和低免疫原性，能夠高效地將攜帶的基因傳遞到目標(biāo)細(xì)胞中。進(jìn)入小鼠體內(nèi)的AAV-ALDH2會(huì)感染肝臟、心臟等組織細(xì)胞，將ALDH2基因整合到細(xì)胞基因組中并表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)ALDH2在ApoE-/-小鼠體內(nèi)的過(guò)表達(dá)。通過(guò)Westernblot等方法檢測(cè)小鼠組織中ALDH2蛋白的表達(dá)水平，確認(rèn)模型構(gòu)建成功。4.2.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)期間，每?jī)芍懿杉淮涡∈笪察o脈血，使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。這些指標(biāo)的變化能夠反映小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝的情況，對(duì)于評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展具有重要意義。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將小鼠處死，迅速取出主動(dòng)脈等血管組織。將主動(dòng)脈進(jìn)行冰凍切片，厚度為8μm。采用油紅O染色法，檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的脂質(zhì)含量。油紅O是一種脂溶性染料，能夠特異性地與脂質(zhì)結(jié)合，使脂質(zhì)呈現(xiàn)紅色。通過(guò)顯微鏡觀察并拍照，利用圖像分析軟件（如ImageJ）計(jì)算斑塊面積和脂質(zhì)面積占比。蘇木精-伊紅（HE）染色用于觀察斑塊的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。蘇木精能夠?qū)⒓?xì)胞核染成藍(lán)色，伊紅將細(xì)胞質(zhì)染成紅色，通過(guò)染色可以清晰地觀察到斑塊內(nèi)的細(xì)胞成分、纖維組織等結(jié)構(gòu)。免疫組織化學(xué)染色用于檢測(cè)斑塊中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。使用抗CD68抗體標(biāo)記巨噬細(xì)胞，抗CD3抗體標(biāo)記T淋巴細(xì)胞。通過(guò)抗原-抗體特異性結(jié)合，再利用顯色劑顯色，在顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞在斑塊中的分布和數(shù)量。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清中炎癥因子水平，包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)血清中炎癥因子的含量。通過(guò)檢測(cè)這些炎癥因子的水平，可以評(píng)估小鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)程度，進(jìn)一步了解ALDH2對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化炎癥過(guò)程的影響。4.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析血脂檢測(cè)結(jié)果顯示，與野生型ApoE-/-小鼠相比，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平顯著升高（P<0.05），而HDL-C水平顯著降低（P<0.05）。這表明ALDH2基因敲除導(dǎo)致小鼠脂質(zhì)代謝紊亂進(jìn)一步加劇，血液中致動(dòng)脈粥樣硬化的脂質(zhì)成分增加。ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平則顯著低于野生型ApoE-/-小鼠（P<0.05），HDL-C水平顯著升高（P<0.05）。說(shuō)明ALDH2過(guò)表達(dá)能夠改善ApoE-/-小鼠的脂質(zhì)代謝異常，降低血液中脂質(zhì)含量，減少動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。油紅O染色結(jié)果表明，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊面積和脂質(zhì)面積占比明顯大于野生型ApoE-/-小鼠（P<0.05）。這說(shuō)明ALDH2基因缺失促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和脂質(zhì)沉積，使病變更加嚴(yán)重。ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊面積和脂質(zhì)面積占比顯著小于野生型ApoE-/-小鼠（P<0.05）。表明ALDH2過(guò)表達(dá)能夠抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有保護(hù)作用。HE染色結(jié)果顯示，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)細(xì)胞成分增多，纖維帽變薄，斑塊穩(wěn)定性降低。而ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠斑塊內(nèi)細(xì)胞成分相對(duì)較少，纖維帽較厚，斑塊穩(wěn)定性增加。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增多（P<0.05），炎癥反應(yīng)加劇。ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減少（P<0.05），炎癥反應(yīng)減輕。ELISA檢測(cè)炎癥因子水平結(jié)果顯示，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠血清中TNF-α、IL-6和MCP-1等炎癥因子水平顯著高于野生型ApoE-/-小鼠（P<0.05）。說(shuō)明ALDH2基因缺失導(dǎo)致炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠血清中炎癥因子水平顯著低于野生型ApoE-/-小鼠（P<0.05）。表明ALDH2過(guò)表達(dá)能夠抑制炎癥反應(yīng)，減輕炎癥對(duì)血管壁的損傷，從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。綜上所述，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ALDH2在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的保護(hù)作用。ALDH2基因敲除會(huì)加劇動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，而ALDH2過(guò)表達(dá)則能夠抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng)有關(guān)。4.3臨床研究4.3.1臨床樣本收集與處理臨床樣本收集自[醫(yī)院名稱]心血管內(nèi)科住院患者及同期健康體檢者。納入標(biāo)準(zhǔn)為：年齡在40-75歲之間；患者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影、頸動(dòng)脈超聲等檢查確診為動(dòng)脈粥樣硬化；健康體檢者經(jīng)全面檢查排除心血管疾病及其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：近期（3個(gè)月內(nèi)）有急性心血管事件發(fā)生；患有嚴(yán)重肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等；長(zhǎng)期服用可能影響ALDH2活性或脂質(zhì)代謝的藥物。最終共收集動(dòng)脈粥樣硬化患者150例，健康對(duì)照者50例。在樣本采集過(guò)程中，清晨空腹采集所有受試者外周靜脈血5mL，其中2mL置于含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的采血管中，用于提取基因組DNA，以檢測(cè)ALDH2基因型；另外3mL置于普通采血管中，3000r/min離心15min，分離血清，用于檢測(cè)血脂、炎癥指標(biāo)等。同時(shí)，對(duì)于部分動(dòng)脈粥樣硬化患者，在進(jìn)行冠狀動(dòng)脈介入治療或頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)時(shí)，獲取動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織樣本，立即置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩；蚪MDNA提取采用血液基因組DNA提取試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。首先，將200μL抗凝全血加入含有蛋白酶K和緩沖液BL的離心管中，渦旋振蕩混勻，56℃水浴孵育10min，充分裂解細(xì)胞。加入200μL無(wú)水乙醇，再次振蕩混勻，使DNA充分沉淀。將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中，12000r/min離心1min，棄廢液。依次用緩沖液BW1和BW2洗滌吸附柱，12000r/min離心1min，棄廢液。將吸附柱空轉(zhuǎn)離心1min，去除殘余漂洗液。最后，向吸附柱膜中間位置加入60μL緩沖液BE，室溫放置5min，12000r/min離心1min，收集洗脫的DNA溶液。使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度和純度，確保OD260/OD280比值在1.8-2.0之間，以保證DNA質(zhì)量。4.3.2臨床指標(biāo)檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中的血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。檢測(cè)方法遵循儀器操作規(guī)程和相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。例如，TC檢測(cè)采用膽固醇氧化酶法，TG檢測(cè)采用甘油磷酸氧化酶法，LDL-C和HDL-C檢測(cè)分別采用直接法。這些方法具有較高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，能夠準(zhǔn)確反映受試者的血脂水平。運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒檢測(cè)血清中炎癥因子水平，包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等。操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，每孔加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和酶標(biāo)抗體，37℃孵育一定時(shí)間后，洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)。加入底物顯色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各炎癥因子的濃度。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)血清中低濃度的炎癥因子。對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化患者，通過(guò)冠狀動(dòng)脈造影評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄程度，采用Gensini評(píng)分系統(tǒng)對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度進(jìn)行量化評(píng)分。Gensini評(píng)分根據(jù)冠狀動(dòng)脈病變的部位、狹窄程度和病變血管的支數(shù)等因素進(jìn)行綜合評(píng)分，能夠較為準(zhǔn)確地反映冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度。利用頸動(dòng)脈超聲檢測(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（IMT），IMT增厚是動(dòng)脈粥樣硬化的早期表現(xiàn)之一，可作為評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化的重要指標(biāo)。測(cè)量方法為在二維超聲圖像上，選擇頸動(dòng)脈分叉處近端1cm的頸總動(dòng)脈后壁，測(cè)量?jī)?nèi)膜表面到中膜與外膜交界處的距離，取雙側(cè)頸動(dòng)脈測(cè)量值的平均值。采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析探討ALDH2基因型與各臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)這些統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，能夠準(zhǔn)確分析數(shù)據(jù)，揭示ALDH2基因型與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及相關(guān)臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。五、ALDH2影響動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞的分子機(jī)制5.1ALDH2與LDLR的相互作用低密度脂蛋白受體（LDLR）作為一種關(guān)鍵的細(xì)胞表面蛋白，在膽固醇代謝中扮演著核心角色。其主要功能是特異性地識(shí)別并結(jié)合血液中的低密度脂蛋白（LDL），通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將LDL攝入細(xì)胞內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞后的LDL在溶酶體中被水解，釋放出膽固醇，這些膽固醇可用于細(xì)胞的生物合成過(guò)程，如細(xì)胞膜的構(gòu)建、類固醇激素的合成等。LDLR的表達(dá)和功能受到多種因素的精細(xì)調(diào)控，其中細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平是最重要的調(diào)節(jié)因素之一。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量升高時(shí)，會(huì)通過(guò)一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制LDLR基因的轉(zhuǎn)錄，減少LDLR的合成，從而減少細(xì)胞對(duì)LDL的攝取，以維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇的穩(wěn)態(tài)。相反，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量降低時(shí)，LDLR的表達(dá)會(huì)增加，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)LDL的攝取。LDLR基因的突變或缺失會(huì)導(dǎo)致其功能異常，使得血液中的LDL無(wú)法被正常清除，進(jìn)而導(dǎo)致血液中LDL膽固醇水平升高，增加心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。家族性高膽固醇血癥就是一種由于LDLR基因突變導(dǎo)致的遺傳性疾病，患者體內(nèi)LDLR功能缺陷或缺失，血液中LDL膽固醇水平顯著升高，易在早年發(fā)生嚴(yán)重的動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病。在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞形成過(guò)程中，ALDH2與LDLR之間存在著密切的相互作用。研究表明，ALDH2可以與LDLR發(fā)生直接的蛋白-蛋白相互作用。這種相互作用能夠影響LDLR的功能，進(jìn)而調(diào)控泡沫細(xì)胞的形成。當(dāng)ALDH2與LDLR結(jié)合時(shí)，能夠增強(qiáng)LDLR對(duì)LDL的親和力，促進(jìn)LDLR介導(dǎo)的LDL攝取。在巨噬細(xì)胞中，ALDH2過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致LDLR的活性增強(qiáng)，細(xì)胞對(duì)LDL的攝取量增加。這是因?yàn)锳LDH2與LDLR的結(jié)合能夠穩(wěn)定LDLR的結(jié)構(gòu)，使其更有效地識(shí)別和結(jié)合LDL。ALDH2還可以通過(guò)調(diào)節(jié)LDLR的內(nèi)吞和循環(huán)過(guò)程，影響LDL的攝取和代謝。正常情況下，LDLR在攝取LDL后，會(huì)形成內(nèi)吞小泡進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，隨后內(nèi)吞小泡與溶酶體融合，LDL被降解。而ALDH2能夠促進(jìn)內(nèi)吞小泡與溶酶體的融合過(guò)程，加速LDL的降解，從而減少細(xì)胞內(nèi)LDL的堆積。相反，當(dāng)ALDH2表達(dá)缺失或功能受損時(shí)，LDLR的活性會(huì)受到抑制，細(xì)胞對(duì)LDL的攝取和代謝能力下降。在ALDH2基因敲除的巨噬細(xì)胞中，LDLR的表達(dá)水平雖然沒(méi)有明顯變化，但LDLR的活性顯著降低，細(xì)胞對(duì)LDL的攝取量明顯減少。這導(dǎo)致LDL在細(xì)胞外堆積，增加了氧化修飾的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而促進(jìn)了氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的形成。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠刺激巨噬細(xì)胞攝取更多的ox-LDL，形成泡沫細(xì)胞。ALDH2與LDLR的相互作用還會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的膽固醇代謝平衡。正常情況下，細(xì)胞通過(guò)攝取LDL獲取膽固醇，同時(shí)也會(huì)通過(guò)膽固醇流出途徑，將多余的膽固醇排出細(xì)胞，以維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇的平衡。ALDH2與LDLR的相互作用能夠調(diào)節(jié)膽固醇的攝取和流出過(guò)程。當(dāng)ALDH2與LDLR結(jié)合促進(jìn)LDL攝取時(shí)，細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量會(huì)相應(yīng)增加。此時(shí)，細(xì)胞會(huì)通過(guò)上調(diào)膽固醇流出相關(guān)蛋白，如ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）等的表達(dá)，將多余的膽固醇排出細(xì)胞。ALDH2還可以直接或間接調(diào)節(jié)ABCA1等蛋白的活性，促進(jìn)膽固醇的流出。而當(dāng)ALDH2表達(dá)缺失或功能受損時(shí)，LDL攝取減少，細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量降低。這會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出減少，同時(shí)細(xì)胞會(huì)試圖通過(guò)其他途徑增加膽固醇的攝取，如上調(diào)清道夫受體的表達(dá)，攝取ox-LDL等，從而打破細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝的平衡，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成。5.2ALDH2與AMPK信號(hào)通路腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）作為細(xì)胞內(nèi)重要的能量感受器，在維持細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)和代謝平衡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。AMPK是一種由α、β和γ三個(gè)亞基組成的異源三聚體蛋白激酶。α亞基包含催化結(jié)構(gòu)域，具有激酶活性，能夠磷酸化下游底物；β亞基主要起連接和調(diào)節(jié)作用，它含有糖原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，可將AMPK定位于細(xì)胞內(nèi)的特定部位，并參與調(diào)節(jié)AMPK的活性；γ亞基則含有4個(gè)CBS結(jié)構(gòu)域，能夠結(jié)合AMP、ADP和ATP等核苷酸，通過(guò)感受細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP和ADP/ATP的比值變化來(lái)調(diào)節(jié)AMPK的活性。當(dāng)細(xì)胞處于能量缺乏狀態(tài)時(shí)，如在運(yùn)動(dòng)、饑餓、缺氧等條件下，細(xì)胞內(nèi)的ATP消耗增加，AMP和ADP水平升高，AMP/ATP和ADP/ATP比值增大。此時(shí)，AMP或ADP會(huì)結(jié)合到γ亞基的CBS結(jié)構(gòu)域上，引起AMPK構(gòu)象的改變，使其更容易被上游激酶如肝激酶B1（LKB1）或鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶激酶β（CaMKKβ）磷酸化激活。激活后的AMPK通過(guò)磷酸化一系列下游底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程，以增加ATP的生成并減少ATP的消耗。在脂質(zhì)代謝方面，AMPK通過(guò)多種途徑發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。它可以抑制脂肪酸和膽固醇的合成。在脂肪酸合成過(guò)程中，AMPK能夠磷酸化并抑制乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的活性。ACC是脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，它催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A，丙二酰輔酶A是脂肪酸合成的前體。當(dāng)ACC被AMPK磷酸化后，其活性降低，丙二酰輔酶A的生成減少，從而抑制了脂肪酸的合成。在膽固醇合成方面，AMPK可以通過(guò)抑制羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的活性來(lái)減少膽固醇的合成。HMG-CoA還原酶是膽固醇合成的限速酶，AMPK對(duì)其磷酸化后，使其活性受到抑制，膽固醇合成減少。AMPK還可以促進(jìn)脂肪酸的氧化分解。它通過(guò)激活肉堿/有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2（OCTN2），增加細(xì)胞內(nèi)肉堿的攝取。肉堿是脂肪酸β-氧化過(guò)程中必需的載體，它能夠?qū)㈤L(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體，在線粒體內(nèi)進(jìn)行β-氧化，產(chǎn)生ATP。AMPK還可以通過(guò)磷酸化激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α（PGC-1α），PGC-1α是一種重要的轉(zhuǎn)錄共激活因子，它可以上調(diào)脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達(dá)，如肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT1）等，進(jìn)一步促進(jìn)脂肪酸的氧化。在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中，ALDH2與AMPK信號(hào)通路之間存在著緊密的聯(lián)系。研究表明，ALDH2可以通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，從而影響泡沫細(xì)胞的形成。在巨噬細(xì)胞中，ALDH2的過(guò)表達(dá)能夠顯著增加AMPK的磷酸化水平，使其活性增強(qiáng)。這一過(guò)程可能與ALDH2降低細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平有關(guān)。氧化應(yīng)激會(huì)抑制AMPK的活性，而ALDH2通過(guò)代謝內(nèi)源性醛類物質(zhì)，減少氧化應(yīng)激產(chǎn)物的生成，從而解除了對(duì)AMPK的抑制作用。激活的AMPK可以通過(guò)多種途徑抑制泡沫細(xì)胞的形成。它可以下調(diào)巨噬細(xì)胞表面清道夫受體如清道夫受體A（SR-A）和CD36的表達(dá)。SR-A和CD36是介導(dǎo)巨噬細(xì)胞攝取氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的主要受體，它們的表達(dá)下調(diào)會(huì)減少巨噬細(xì)胞對(duì)ox-LDL的攝取，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成。AMPK還可以上調(diào)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）和ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1（ABCG1）的表達(dá)。ABCA1和ABCG1是促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的關(guān)鍵蛋白，它們能夠?qū)⒓?xì)胞內(nèi)多余的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，與載脂蛋白A-I（ApoA-I）結(jié)合，形成高密度脂蛋白（HDL），從而減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇的堆積，抑制泡沫細(xì)胞的形成。相反，當(dāng)ALDH2表達(dá)缺失或功能受損時(shí)，AMPK信號(hào)通路的激活受到抑制。這會(huì)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞對(duì)ox-LDL的攝取增加，膽固醇流出減少，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積加劇，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成。5.3ALDH2對(duì)溶酶體功能和細(xì)胞自噬的調(diào)控溶酶體作為細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，在維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著不可或缺的作用。它內(nèi)部含有多種酸性水解酶，這些酶在酸性環(huán)境下具有活性，能夠降解細(xì)胞內(nèi)吞的各種物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等生物大分子。溶酶體通過(guò)與內(nèi)吞體、自噬體等融合，將其中的物質(zhì)進(jìn)行消化分解，產(chǎn)生的小分子物質(zhì)如氨基酸、核苷酸、脂肪酸等可以被細(xì)胞重新利用，為細(xì)胞的代謝和生長(zhǎng)提供原料。在細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取和利用過(guò)程中，溶酶體參與降解細(xì)胞內(nèi)多余或受損的細(xì)胞器，釋放出其中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以滿足細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)缺乏時(shí)的能量需求。溶酶體還在細(xì)胞的免疫防御中發(fā)揮重要作用，它能夠降解入侵細(xì)胞的病原體，如細(xì)菌、病毒等，從而保護(hù)細(xì)胞免受病原體的侵害。溶酶體功能的正常發(fā)揮依賴于其內(nèi)部的酸性環(huán)境，而維持酸性環(huán)境主要依靠溶酶體膜上的氫離子泵。溶酶體膜上存在一種特殊的氫離子泵——V-ATPase，它能夠利用ATP水解產(chǎn)生的能量，將細(xì)胞質(zhì)中的氫離子（H+）逆濃度梯度泵入溶酶體腔內(nèi)，使溶酶體腔內(nèi)的pH維持在酸性范圍，一般為4.5-5.5，這是溶酶體水解酶發(fā)揮活性的最佳pH條件。細(xì)胞自噬是細(xì)胞內(nèi)一種高度保守的自我降解過(guò)程，對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理功能至關(guān)重要。在細(xì)胞自噬過(guò)程中，首先會(huì)形成一種雙層膜結(jié)構(gòu)，稱為自噬體。自噬體能夠包裹細(xì)胞內(nèi)受損或多余的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)聚集體以及入侵的病原體等物質(zhì)。自噬體形成后，會(huì)與溶酶體融合，形成自噬溶酶體。在自噬溶酶體中，溶酶體的酸性水解酶會(huì)將包裹的物質(zhì)降解，產(chǎn)生的小分子物質(zhì)被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，供細(xì)胞重新利用。細(xì)胞自噬可以分為三種類型：巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬。巨自噬是最常見(jiàn)的類型，即通過(guò)形成自噬體來(lái)包裹物質(zhì)；微自噬則是溶酶體直接內(nèi)陷包裹物質(zhì)；分子伴侶介導(dǎo)的自噬是通過(guò)分子伴侶識(shí)別并結(jié)合特定的蛋白質(zhì)，將其轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體中進(jìn)行降解。細(xì)胞自噬在多種生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在生理狀態(tài)下，細(xì)胞自噬參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和分化過(guò)程。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞自噬可以清除多余的細(xì)胞和細(xì)胞器，促進(jìn)組織和器官的正常發(fā)育。在細(xì)胞分化過(guò)程中，自噬能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器組成，維持細(xì)胞的分化狀態(tài)。在病理狀態(tài)下，細(xì)胞自噬與許多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病、帕金森病等中，細(xì)胞自噬功能異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集體無(wú)法被有效清除，在細(xì)胞內(nèi)堆積，進(jìn)而損傷細(xì)胞。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞自噬具有雙重作用。在腫瘤早期，自噬可以清除細(xì)胞內(nèi)的受損物質(zhì)，抑制腫瘤的發(fā)生；而在腫瘤晚期，自噬可以為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖。在巨噬細(xì)胞中，ALDH2與溶酶體功能和細(xì)胞自噬之間存在著緊密的聯(lián)系。當(dāng)ALDH2發(fā)生rs671位點(diǎn)突變時(shí)，其功能會(huì)受到顯著影響。在巨噬細(xì)胞中，AMPK可以磷酸化激活rs671位點(diǎn)突變的ALDH2，使其從線粒體進(jìn)入細(xì)胞核。進(jìn)入細(xì)胞核的ALDH2會(huì)與HDAC3蛋白結(jié)合，進(jìn)而抑制調(diào)控溶酶體功能和細(xì)胞自噬的氫離子泵ATP6V0E2的表達(dá)。ATP6V0E2是溶酶體膜上V-ATPase的一個(gè)亞基，它對(duì)于維持溶酶體的正常功能至關(guān)重要。當(dāng)ATP6V0E2表達(dá)受到抑制時(shí)，溶酶體膜上的V-ATPase功能受損，導(dǎo)致氫離子泵入溶酶體腔內(nèi)的過(guò)程受阻，溶酶體腔內(nèi)的酸性環(huán)境無(wú)法維持。這會(huì)使溶酶體中的水解酶活性降低，從而抑制巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的水解。ox-LDL無(wú)法被正常水解，就會(huì)在巨噬細(xì)胞中堆積，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成。ALDH2對(duì)細(xì)胞自噬也有影響。由于溶酶體功能受損，自噬體與溶酶體的融合過(guò)程受到阻礙，細(xì)胞自噬水平下降。細(xì)胞自噬水平的降低使得細(xì)胞內(nèi)受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)等物質(zhì)無(wú)法被及時(shí)清除，進(jìn)一步影響細(xì)胞的正常代謝和功能，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。而在正常情況下，LDLR與ALDH2蛋白相互作用，能夠阻斷上述過(guò)程。LDLR與ALDH2的相互作用可以阻止ALDH2的磷酸化和核轉(zhuǎn)位，從而維持溶酶體功能和細(xì)胞自噬的正常進(jìn)行，抑制泡沫細(xì)胞的形成。六、結(jié)論與展望6.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究，系統(tǒng)深入地探究了乙醛脫氫酶2（ALDH2）在動(dòng)脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞中的作用及分子機(jī)制，取得了一系列具有重要意義的研究成果。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，成功構(gòu)建了ALDH2過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的泡沫細(xì)胞模型，結(jié)果表明ALDH2對(duì)泡沫細(xì)胞的活力、凋亡和脂質(zhì)堆積具有顯著影響。ALDH2過(guò)表達(dá)可顯著提高泡沫細(xì)胞的活力，降低細(xì)胞凋亡率，減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積。而ALDH2低表達(dá)則導(dǎo)致泡沫細(xì)胞活力下降，凋亡率增加，脂質(zhì)堆積明顯加劇。這說(shuō)明ALDH2在維持泡沫細(xì)胞的正常生理功能和抑制脂質(zhì)過(guò)度積累方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)ALDH2過(guò)表達(dá)能夠上調(diào)膽固醇流出相關(guān)蛋白如ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）的表達(dá)，促進(jìn)膽固醇流出，減少脂質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的沉積。ALDH2還能下調(diào)清道夫受體如清道夫受體A（SR-A）和CD36的表達(dá)，降低巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的攝取，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化模型，構(gòu)建了ALDH2敲除和過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ALDH2敲除的ApoE-/-小鼠血脂代謝紊亂加劇，血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平顯著升高，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平顯著降低。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積明顯增大，脂質(zhì)沉積增多，斑塊穩(wěn)定性降低，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的表達(dá)水平顯著升高。相反，ALDH2過(guò)表達(dá)的ApoE-/-小鼠血脂代謝得到改善，血清中脂質(zhì)水平降低，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積減小，脂質(zhì)沉積減少，斑塊穩(wěn)定性增加，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，炎癥因子表達(dá)水平降低。這進(jìn)一步證實(shí)了ALDH2在體內(nèi)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展具有重要的抑制作用，其機(jī)制與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。臨床研究收集了動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康對(duì)照者的樣本，檢測(cè)了ALDH2基因型、血脂指標(biāo)、炎癥因子水平以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。攜帶ALDH22突變基因的人群，動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，其血清中血脂水平和炎癥因子水平明顯高于野生型基因攜帶者。冠狀動(dòng)脈造影和頸動(dòng)脈超聲檢查結(jié)果顯示，攜帶ALDH22突變基因的患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度和頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（IMT）明顯增加，表明動(dòng)脈粥樣硬化病變更為嚴(yán)重。通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因型與血脂指標(biāo)、炎癥因子水平以及動(dòng)脈粥樣硬化病變程度