第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程第2章細(xì)胞工程小面積燒傷：患者通過(guò)切除+植皮(自身)后恢復(fù)大面積燒傷怎么辦？1）自身健康皮膚？非常有限免疫排斥反應(yīng)2）使用他人皮膚？通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建的人造皮膚一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程學(xué)習(xí)目標(biāo)1.

認(rèn)同動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是模擬體內(nèi)生理?xiàng)l件在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，由此分析、推出培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞需要滿足的基本條件。

2.

嘗試建構(gòu)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本流程。

3.

認(rèn)同動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。1、概念2、原理一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。細(xì)胞增殖二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件﹤動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需的基本條件﹤營(yíng)養(yǎng)條件其他條件糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素……適宜的溫度、pH和滲透壓無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境適宜的氣體環(huán)境1、營(yíng)養(yǎng)①已知成分:將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基。②未知成分：使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清等一些天然成分。血清中含有人類尚未全部研究清楚、細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖所必需的物質(zhì)。注意：培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境無(wú)菌①對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理②在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行操作定期更換培養(yǎng)液無(wú)毒可在培養(yǎng)基中加入抗生素，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件3、溫度、pH和滲透壓（1）適宜的溫度：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜。（2）適宜的pH：多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2-7.4。（3）適宜的滲透壓：維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件4、氣體環(huán)境O2：CO2：細(xì)胞代謝所必需的。主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。通氣動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程為什么將組織分散成單個(gè)細(xì)胞？可用什么方法？2.體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞有哪些類型？3.什么是細(xì)胞貼壁？什么是接觸抑制？4.什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？5.為什么要進(jìn)行分瓶培養(yǎng)？怎么處理？6.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)有什么異同？三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程閱讀教材，思考（4min）：原代培養(yǎng)放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)傳代培養(yǎng)制成細(xì)胞懸液

放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)分散成單個(gè)細(xì)胞取動(dòng)物組織分瓶取動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程取動(dòng)物組織一般取材于動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官。細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。(1)取材對(duì)象:(2)取材原因:1.取動(dòng)物組織三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程(1)原因：①組織中細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了生長(zhǎng)和增殖。②利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸。2.分散成單個(gè)細(xì)胞（2）處理方法：機(jī)械方法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理制成細(xì)胞懸液取動(dòng)物組織三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程蛋白質(zhì)不可以，因?yàn)槲傅鞍酌傅淖钸mpH為1.5左右長(zhǎng)時(shí)間會(huì)分解細(xì)胞膜蛋白，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，注意控制時(shí)間和酶用量。①用胰蛋白酶處理說(shuō)明動(dòng)物細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？②用胃蛋白酶可以嗎？③胰蛋白酶處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)怎樣？細(xì)胞外間質(zhì)成分三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程3.制成細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置于適宜環(huán)境中進(jìn)行原代培養(yǎng)。4.原代培養(yǎng):指動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程懸浮生長(zhǎng)貼壁生長(zhǎng)(大多數(shù)）細(xì)胞密度過(guò)大、有害代謝物積累、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖分裂受阻三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程5.傳代培養(yǎng)：懸浮細(xì)胞貼壁細(xì)胞離心法收集胰蛋白酶處理制成細(xì)胞懸液分瓶培養(yǎng)指分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。分瓶三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程思考：“細(xì)胞增殖到互相接觸的時(shí)候，糖蛋白識(shí)別了這種信息，就會(huì)使細(xì)胞停止繼續(xù)繁殖，出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象”試結(jié)合上述解釋，舉例說(shuō)明哪種細(xì)胞無(wú)接觸抑制現(xiàn)象，并闡述原因。癌細(xì)胞。癌細(xì)胞的細(xì)胞膜上糖蛋白等物質(zhì)減少。

癌細(xì)胞由于無(wú)接觸抑制而能夠繼續(xù)移動(dòng)和增殖，導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展，發(fā)生堆積。

是否接觸抑制可作為區(qū)別正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的標(biāo)志之一。植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)過(guò)程培養(yǎng)結(jié)果相同點(diǎn)常用固體培養(yǎng)基完整植株葡萄糖、動(dòng)物血清常用液體培養(yǎng)基細(xì)胞增殖植物細(xì)胞的全能性獲得大量細(xì)胞蔗糖、植物激素②培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞都進(jìn)行有絲分裂，不涉及減數(shù)分裂；③均需無(wú)菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件。原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)脫分化、再分化比較：①培養(yǎng)基中都需要加入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念和原理?xiàng)l件過(guò)程原理：細(xì)胞的增殖在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)(1)營(yíng)養(yǎng)條件(2)無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境(3)溫度、pH和滲透壓(4)氣體環(huán)境取動(dòng)物組織單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1、【判斷題】(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的全能性()(2)培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞(

)(3)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集，貼壁細(xì)胞需要用胰蛋白酶等處理后再用離心法收集()(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH(

)××√√練習(xí)1．在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要

()A．用胃蛋白酶處理以獲得單細(xì)胞懸液B．充入5%CO2以刺激細(xì)胞正常呼吸C．加入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的血清以提供營(yíng)養(yǎng)D．定期更換培養(yǎng)液以清除代謝物1．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要定期更換培養(yǎng)液，其目的是便于清除代謝物，防止代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害。 (

)2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞的全能性。 (

)3．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。(

)4．培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的第一代(即第一次細(xì)胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)。(

)×√××D2．實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程如圖所示。下列敘述不正確的是()