MicroRNA-125a：胃癌診療新視角——表達(dá)水平、臨床關(guān)聯(lián)與機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義胃癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的重大疾病，其發(fā)病率和死亡率在各類(lèi)惡性腫瘤中均位居前列。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)年全球胃癌新發(fā)病例約108.9萬(wàn)例，死亡病例約76.9萬(wàn)例，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量與生命健康。在我國(guó)，胃癌同樣是高發(fā)的惡性腫瘤之一，由于早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致總體預(yù)后較差。目前，臨床對(duì)于胃癌的治療主要包括手術(shù)、化療、放療以及靶向治療等手段，但治療效果仍不盡人意，患者5年生存率較低。因此，深入探索胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高胃癌的診療水平、改善患者預(yù)后具有迫切且重要的現(xiàn)實(shí)意義。MicroRNA（miRNA）是一類(lèi)內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，長(zhǎng)度通常在20-24個(gè)核苷酸左右。它們?cè)谏矬w內(nèi)廣泛存在，通過(guò)與靶mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）互補(bǔ)配對(duì)，抑制mRNA的翻譯過(guò)程或促使其降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。研究表明，miRNA參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、遷移等多種生物學(xué)過(guò)程，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移以及耐藥等密切相關(guān)。眾多miRNA在腫瘤組織中呈現(xiàn)出特異性的表達(dá)模式，發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用，為腫瘤的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和治療干預(yù)提供了新的潛在靶點(diǎn)和生物標(biāo)志物。MicroRNA-125a（miR-125a）作為miRNA家族的重要成員之一，近年來(lái)在腫瘤研究領(lǐng)域備受關(guān)注。已有研究報(bào)道，miR-125a在多種腫瘤如乳腺癌、肺癌、肝癌等中表達(dá)異常，并參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的調(diào)控。然而，miR-125a在胃癌中的表達(dá)水平、作用機(jī)制及其臨床意義尚未完全明確，仍存在諸多爭(zhēng)議和未知領(lǐng)域亟待深入探究。明確miR-125a在胃癌中的表達(dá)變化規(guī)律，解析其參與胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，對(duì)于揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制、篩選新型診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論價(jià)值和臨床應(yīng)用前景，有望為胃癌的精準(zhǔn)診療提供新的思路和策略。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來(lái)，MicroRNA-125a在胃癌領(lǐng)域的研究受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，取得了一系列具有重要價(jià)值的研究成果，但目前仍存在一些爭(zhēng)議和待解決的問(wèn)題。在國(guó)外，早期研究通過(guò)基因芯片技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，初步揭示了miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)異常。有研究表明，miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)水平相較于正常胃黏膜組織明顯降低，且這種低表達(dá)與胃癌的臨床病理特征如腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等密切相關(guān)。例如，一項(xiàng)來(lái)自美國(guó)的研究納入了100例胃癌患者的腫瘤組織和配對(duì)的正常組織，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)量顯著低于正常組織，且低表達(dá)miR-125a的患者5年生存率明顯低于高表達(dá)者，提示miR-125a可能作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。同時(shí)，國(guó)外學(xué)者在細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)層面深入探究了miR-125a的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，miR-125a可以通過(guò)靶向作用于多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因，如Bcl-2、MAP3K1等，影響胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)miR-125a能夠抑制胃癌細(xì)胞系的增殖和侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；在裸鼠移植瘤模型中，導(dǎo)入miR-125a可顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步驗(yàn)證了其在胃癌中的抑癌作用。國(guó)內(nèi)對(duì)于miR-125a在胃癌中的研究也成果豐碩。眾多臨床研究同樣證實(shí)了miR-125a在胃癌組織中低表達(dá)的現(xiàn)象，并且發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平與患者的預(yù)后密切相關(guān)。一項(xiàng)國(guó)內(nèi)多中心研究對(duì)500例胃癌患者進(jìn)行分析，結(jié)果顯示miR-125a的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度及患者的總生存期顯著相關(guān)，低表達(dá)miR-125a是影響胃癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在作用機(jī)制研究方面，國(guó)內(nèi)學(xué)者進(jìn)一步挖掘了miR-125a參與調(diào)控的信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)miR-125a可能通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT、Wnt/β-catenin等經(jīng)典信號(hào)通路，影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。此外，國(guó)內(nèi)研究還關(guān)注到miR-125a與其他分子之間的相互作用，如與長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）、環(huán)狀RNA（circRNA）等形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。然而，目前關(guān)于miR-125a在胃癌中的研究仍存在一些分歧。部分研究結(jié)果顯示，miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)水平與上述結(jié)論相反，呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且這種高表達(dá)與胃癌的某些臨床病理特征及不良預(yù)后相關(guān)，這可能與研究樣本的差異、檢測(cè)方法的不同以及胃癌的異質(zhì)性等因素有關(guān)。此外，雖然對(duì)miR-125a的作用機(jī)制有了一定的認(rèn)識(shí)，但仍有許多潛在的靶基因和信號(hào)通路尚未被完全揭示，其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍有待進(jìn)一步完善。在臨床應(yīng)用方面，盡管miR-125a展現(xiàn)出作為胃癌診斷、預(yù)后評(píng)估和治療靶點(diǎn)的潛力，但如何將其轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)際應(yīng)用，如開(kāi)發(fā)基于miR-125a的檢測(cè)試劑盒、設(shè)計(jì)有效的miR-125a靶向治療策略等，仍面臨諸多挑戰(zhàn)，需要開(kāi)展更多大規(guī)模、多中心的臨床研究來(lái)驗(yàn)證其有效性和安全性。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究MicroRNA-125a（miR-125a）在胃癌中的表達(dá)水平變化，全面分析其與胃癌臨床病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性，并進(jìn)一步揭示其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的潛在作用機(jī)制，為胃癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估及靶向治療提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)。為達(dá)成上述研究目的，本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法。在臨床樣本檢測(cè)方面，收集一定數(shù)量的胃癌患者的腫瘤組織及配對(duì)的癌旁正常組織標(biāo)本，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)精確檢測(cè)miR-125a在這些標(biāo)本中的表達(dá)水平。同時(shí)，詳細(xì)收集患者的臨床病理資料，包括腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期等信息，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，如卡方檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)性分析等，深入探討miR-125a表達(dá)水平與各臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。此外，對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，獲取患者的生存數(shù)據(jù)，運(yùn)用生存分析方法，如Kaplan-Meier法、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型等，評(píng)估m(xù)iR-125a表達(dá)水平對(duì)胃癌患者預(yù)后的影響，篩選出影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)層面，選用多種人胃癌細(xì)胞系和正常胃黏膜上皮細(xì)胞系，通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-125a模擬物（mimics）、抑制劑（inhibitor）及相應(yīng)的陰性對(duì)照，構(gòu)建miR-125a過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。采用CCK-8法、EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力；利用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；運(yùn)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)等評(píng)估細(xì)胞的侵襲和遷移能力，從細(xì)胞水平全面揭示miR-125a對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。在分子機(jī)制研究中，首先運(yùn)用生物信息學(xué)分析方法，借助TargetScan、miRDB、PicTar等數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-125a的潛在靶基因。然后，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-125a與預(yù)測(cè)靶基因之間的直接靶向關(guān)系。進(jìn)一步采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法等技術(shù)檢測(cè)靶基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化，明確miR-125a對(duì)靶基因表達(dá)的調(diào)控作用。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)通路抑制劑、激動(dòng)劑處理及基因敲除、過(guò)表達(dá)等實(shí)驗(yàn)手段，深入探究miR-125a通過(guò)調(diào)控靶基因參與的信號(hào)通路及其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，繪制miR-125a相關(guān)的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖譜。二、MicroRNA-125a概述2.1MicroRNA的生物學(xué)特性MicroRNA（miRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度約為21-23個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，廣泛存在于從線(xiàn)蟲(chóng)到人類(lèi)等各種生物體內(nèi)。其結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特性，通常由一段單鏈RNA折疊形成發(fā)夾狀的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，這種特殊的二級(jí)結(jié)構(gòu)是miRNA發(fā)揮功能的重要基礎(chǔ)。成熟的miRNA序列高度保守，在不同物種間具有相似的序列特征和功能，這也反映了其在生物進(jìn)化過(guò)程中的重要性。miRNA的生成過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜且精細(xì)調(diào)控的過(guò)程。首先，在細(xì)胞核內(nèi)，由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄miRNA基因，產(chǎn)生初級(jí)轉(zhuǎn)錄本（pri-miRNA），pri-miRNA長(zhǎng)度從幾百到幾千個(gè)堿基不等，通常帶有5'帽子結(jié)構(gòu)和3'polyA尾巴，以及1到數(shù)個(gè)發(fā)夾徑環(huán)結(jié)構(gòu)。隨后，pri-miRNA在核酸酶Drosha及其輔助因子DGCR8組成的復(fù)合物作用下，進(jìn)行第一次切割，去除冗長(zhǎng)的側(cè)翼序列，產(chǎn)生長(zhǎng)度約70-100個(gè)堿基的具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA（pre-miRNA）。pre-miRNA通過(guò)Exportin-5轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與Ran-GTP形成復(fù)合物，從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中。在細(xì)胞質(zhì)中，pre-miRNA被另一種核酸酶Dicer識(shí)別并切割，去除莖環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)部和一條臂，最終生成由21-23個(gè)核苷酸組成的成熟雙鏈miRNA。成熟的雙鏈miRNA解旋后，其中一條鏈（引導(dǎo)鏈）會(huì)整合到RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）中，另一條鏈（過(guò)客鏈）則被降解。miRNA主要通過(guò)與靶mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）互補(bǔ)配對(duì)來(lái)發(fā)揮作用，其作用機(jī)制主要包括兩種方式。當(dāng)miRNA與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)程度較高，幾乎完全互補(bǔ)時(shí)，miRNA會(huì)介導(dǎo)RISC中的核酸酶對(duì)靶mRNA進(jìn)行切割，從而直接降解靶mRNA，導(dǎo)致靶基因的表達(dá)水平降低。例如，在某些細(xì)胞中，特定的miRNA與靶mRNA的3'-UTR完全互補(bǔ)結(jié)合后，RISC中的核酸酶迅速作用，將靶mRNA切割成片段，使其無(wú)法進(jìn)行正常的翻譯過(guò)程。而當(dāng)miRNA與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)程度較低，存在部分錯(cuò)配時(shí)，miRNA則主要抑制靶mRNA的翻譯過(guò)程。具體來(lái)說(shuō)，miRNA結(jié)合到靶mRNA的3'-UTR后，會(huì)阻礙核糖體與mRNA的結(jié)合，或者干擾翻譯起始復(fù)合物的形成，使得蛋白質(zhì)的合成無(wú)法順利進(jìn)行，但并不影響靶mRNA的穩(wěn)定性。在細(xì)胞的分化過(guò)程中，某些miRNA通過(guò)與相關(guān)靶mRNA的部分互補(bǔ)配對(duì)，抑制其翻譯，從而調(diào)控細(xì)胞的分化方向和進(jìn)程。值得注意的是，一個(gè)miRNA可以同時(shí)靶向多個(gè)不同的mRNA，對(duì)多個(gè)基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控；反之，一個(gè)mRNA也可能受到多個(gè)miRNA的共同調(diào)節(jié)，這種復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)使得miRNA能夠在細(xì)胞內(nèi)精細(xì)地調(diào)節(jié)各種生物學(xué)過(guò)程。2.2MicroRNA-125a的結(jié)構(gòu)與功能MicroRNA-125a（miR-125a）屬于miRNA家族的重要成員，其在不同物種間具有高度的序列保守性，這也預(yù)示著它在生物進(jìn)化過(guò)程中承擔(dān)著不可或缺的功能。在人類(lèi)基因組中，miR-125a位于19號(hào)染色體的q13.43區(qū)域，由一段長(zhǎng)度約為70-100個(gè)核苷酸的前體pre-miR-125a經(jīng)過(guò)核酸酶Dicer切割加工后，最終生成成熟的miR-125a。成熟的miR-125a序列長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸，具有典型的單鏈小分子RNA結(jié)構(gòu)特征。在正常生理狀態(tài)下，miR-125a參與調(diào)控多種細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程，對(duì)維持細(xì)胞的正常生理功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定起著關(guān)鍵作用。在造血系統(tǒng)中，miR-125a被證實(shí)是一個(gè)重要的基因開(kāi)關(guān)，正常情況下在干細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并控制干細(xì)胞的自我更新。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)祖細(xì)胞中人為開(kāi)啟miR-125a的表達(dá)時(shí)，可重新賦予祖細(xì)胞干性，使其轉(zhuǎn)變?yōu)楦杉?xì)胞，并能夠長(zhǎng)期維持，這一發(fā)現(xiàn)為增加臍帶血干細(xì)胞的供應(yīng)提供了新的思路。在神經(jīng)系統(tǒng)中，miR-125a對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的分化和發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。通過(guò)抑制相關(guān)靶基因的表達(dá)，miR-125a能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化，參與神經(jīng)環(huán)路的構(gòu)建和神經(jīng)功能的完善。此外，在心血管系統(tǒng)中，miR-125a也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。它可以通過(guò)調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，影響血管的生成和穩(wěn)態(tài)。有研究表明，miR-125a的過(guò)表達(dá)能夠通過(guò)靶向DLL4（Notch信號(hào)通路的配體），增強(qiáng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）中的血管生成能力，這對(duì)于維持心血管系統(tǒng)的正常功能具有重要意義。三、胃癌概述3.1胃癌的流行病學(xué)現(xiàn)狀胃癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的主要惡性腫瘤之一，其流行病學(xué)特征呈現(xiàn)出顯著的地域差異和變化趨勢(shì)。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)年全球胃癌新發(fā)病例約108.9萬(wàn)例，在各類(lèi)惡性腫瘤中位居第五，占所有癌癥新發(fā)病例的5.6%；死亡病例約76.9萬(wàn)例，居惡性腫瘤死亡人數(shù)的第四位，占癌癥死亡總數(shù)的7.7%。這意味著每天全球約有近3000人被新診斷為胃癌，超過(guò)2000人因胃癌死亡，其對(duì)人類(lèi)生命健康的危害可見(jiàn)一斑。從地域分布來(lái)看，胃癌的發(fā)病和死亡存在明顯的不均衡性。亞洲地區(qū)是胃癌的高發(fā)區(qū)域，尤其是東亞的中國(guó)、日本和韓國(guó)，三國(guó)的胃癌病例數(shù)約占全球總數(shù)的70%。在日本，由于其完善的胃癌篩查體系，早期胃癌的發(fā)現(xiàn)率較高，使得患者的總體預(yù)后相對(duì)較好。而在我國(guó)，胃癌同樣是發(fā)病率和死亡率居高不下的惡性腫瘤。中國(guó)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2020年我國(guó)胃癌新發(fā)病例約48.6萬(wàn)例，占全球發(fā)病病例的44.6%；死亡病例約37.7萬(wàn)例，占全球死亡病例的49.0%，無(wú)論是發(fā)病數(shù)還是死亡數(shù)，我國(guó)均在全球胃癌負(fù)擔(dān)中占據(jù)了相當(dāng)大的比例，成為亟待解決的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。進(jìn)一步分析我國(guó)胃癌的流行病學(xué)特點(diǎn)，農(nóng)村地區(qū)的發(fā)病率和死亡率普遍高于城市地區(qū)。以2014年全國(guó)腫瘤登記數(shù)據(jù)為例，農(nóng)村地區(qū)胃癌發(fā)病率為32.77/10萬(wàn)，死亡率為23.93/10萬(wàn)；而城市地區(qū)發(fā)病率為25.57/10萬(wàn)，死亡率為17.24/10萬(wàn)。這種城鄉(xiāng)差異可能與多種因素相關(guān)，農(nóng)村地區(qū)居民的生活環(huán)境、飲食習(xí)慣、醫(yī)療衛(wèi)生條件以及健康意識(shí)等相對(duì)較差，使得他們更容易暴露于胃癌的危險(xiǎn)因素之下，如長(zhǎng)期食用腌制、熏烤食品，幽門(mén)螺桿菌感染率較高，且難以獲得及時(shí)有效的早期篩查和診療服務(wù)。在性別方面，男性胃癌的發(fā)病率和死亡率明顯高于女性。2020年我國(guó)男性胃癌發(fā)病率為60.0/10萬(wàn)，女性為31.2/10萬(wàn)，男性發(fā)病率約為女性的1.92倍；男性死亡率為46.1/10萬(wàn)，女性為23.7/10萬(wàn)，男性死亡率約為女性的1.95倍。這種性別差異可能與男性吸煙、飲酒等不良生活習(xí)慣更為普遍，以及男性承受的社會(huì)心理壓力相對(duì)較大等因素有關(guān)。從年齡分布來(lái)看，胃癌的發(fā)病率和死亡率隨年齡增長(zhǎng)而逐漸升高。通常在40歲以后，胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)開(kāi)始顯著增加，在60-80歲年齡段達(dá)到高峰。2014年全國(guó)腫瘤登記數(shù)據(jù)顯示，25歲之前各個(gè)年齡組胃癌發(fā)生率均低于1/10萬(wàn)，從55歲開(kāi)始發(fā)病率超過(guò)50/10萬(wàn)，至80-84歲達(dá)到高峰，為185.85/10萬(wàn)；不同年齡組胃癌死亡率特征與發(fā)病率類(lèi)似，45歲之后，男性胃癌死亡率顯著高于女性，男性在80-84歲組的死亡率最高，為280.45/10萬(wàn)，而女性在85歲之后達(dá)到死亡率最高峰，為131.99/10萬(wàn)。盡管近年來(lái)隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、居民生活水平的提高以及醫(yī)療衛(wèi)生條件的改善，全球范圍內(nèi)胃癌的發(fā)病率和死亡率總體呈下降趨勢(shì)，但由于我國(guó)龐大的人口基數(shù)和持續(xù)增長(zhǎng)的老齡化人口比例，胃癌在我國(guó)的疾病負(fù)擔(dān)依然沉重，防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。同時(shí)，胃癌的早期診斷率較低，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，導(dǎo)致治療效果不佳，5年生存率較低。因此，深入了解胃癌的流行病學(xué)現(xiàn)狀，加強(qiáng)胃癌的早期篩查、預(yù)防和規(guī)范化治療，對(duì)于降低我國(guó)胃癌的發(fā)病率和死亡率，提高患者的生存質(zhì)量和預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。3.2胃癌的發(fā)病機(jī)制與病理類(lèi)型胃癌的發(fā)病是一個(gè)多因素、多步驟、復(fù)雜的病理過(guò)程，涉及環(huán)境因素、遺傳因素以及幽門(mén)螺桿菌感染等多個(gè)方面，這些因素相互作用，共同導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的異常增殖和分化，最終引發(fā)胃癌。在環(huán)境因素方面，飲食習(xí)慣是胃癌發(fā)生的重要影響因素之一。長(zhǎng)期攝入高鹽食物，如腌制食品、咸魚(yú)、咸肉等，會(huì)對(duì)胃黏膜造成直接損傷。高鹽環(huán)境可破壞胃黏膜的黏液屏障，使胃黏膜直接暴露于胃酸和其他有害物質(zhì)中，導(dǎo)致胃黏膜反復(fù)發(fā)炎、萎縮，進(jìn)而增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，高鹽飲食可激活胃黏膜細(xì)胞內(nèi)的某些信號(hào)通路，如NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)和釋放，引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，長(zhǎng)期的慢性炎癥刺激可促使胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生癌變。此外，煙熏、燒烤類(lèi)食物中含有大量的多環(huán)芳烴、苯并芘等致癌物質(zhì)，這些物質(zhì)在體內(nèi)經(jīng)過(guò)代謝活化后，可與DNA結(jié)合形成加合物，導(dǎo)致DNA損傷和基因突變，從而啟動(dòng)胃癌的發(fā)生過(guò)程。有研究對(duì)長(zhǎng)期食用煙熏、燒烤食物的人群進(jìn)行跟蹤調(diào)查，發(fā)現(xiàn)其胃癌發(fā)病率明顯高于普通人群。幽門(mén)螺桿菌（Helicobacterpylori，Hp）感染被公認(rèn)為是胃癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之一。Hp是一種革蘭氏陰性微需氧菌，主要定植于胃黏膜上皮表面和胃黏液底層。大量研究表明，Hp感染與胃癌的發(fā)生存在密切關(guān)聯(lián)，世界衛(wèi)生組織已將Hp列為第Ⅰ類(lèi)生物致癌因子。Hp感染可引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞損傷、增殖和分化異常。其致病機(jī)制主要包括：Hp產(chǎn)生的尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，使局部環(huán)境堿化，破壞胃黏膜的保護(hù)屏障；產(chǎn)生的細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（CagA）蛋白可注入胃上皮細(xì)胞內(nèi)，激活多種信號(hào)通路，如Ras-Raf-MEK-ERK、PI3K-AKT等，促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡；誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子和趨化因子，吸引炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，引發(fā)慢性炎癥，長(zhǎng)期的炎癥刺激可導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的惡變。研究顯示，Hp感染人群患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是未感染人群的3-6倍。遺傳因素在胃癌的發(fā)病中也起著重要作用。家族聚集性是胃癌遺傳易感性的重要表現(xiàn)形式。約10%的胃癌患者具有家族遺傳傾向，其中遺傳性彌漫型胃癌（HDGC）是一種較為典型的遺傳性胃癌綜合征，呈常染色體顯性遺傳。HDGC主要由CDH1基因突變引起，CDH1基因編碼E-鈣黏蛋白，該蛋白在維持細(xì)胞間的黏附連接中起關(guān)鍵作用。CDH1基因突變可導(dǎo)致E-鈣黏蛋白功能缺失，使細(xì)胞間黏附力下降，細(xì)胞容易發(fā)生脫落、遷移和浸潤(rùn)，從而增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，其他一些基因如BRCA1、BRCA2、MLH1、MSH2等的突變也與胃癌的遺傳易感性相關(guān)，這些基因參與DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)控等重要生物學(xué)過(guò)程，其突變可導(dǎo)致細(xì)胞基因組不穩(wěn)定，增加胃癌發(fā)生的可能性。從病理類(lèi)型來(lái)看，胃癌主要分為腺癌、腺鱗癌、鱗癌、未分化癌及類(lèi)癌等，其中腺癌最為常見(jiàn)，約占胃癌的90%以上。腺癌又可進(jìn)一步根據(jù)其組織學(xué)形態(tài)和分化程度進(jìn)行細(xì)分。乳頭狀腺癌的癌細(xì)胞呈乳頭狀生長(zhǎng)，乳頭由纖維血管軸心和覆蓋在表面的癌細(xì)胞組成，癌細(xì)胞分化程度相對(duì)較高，惡性程度較低，預(yù)后相對(duì)較好。管狀腺癌的癌細(xì)胞排列成腺管狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)腺管的大小、形態(tài)及細(xì)胞分化程度，可分為高分化管狀腺癌、中分化管狀腺癌和低分化管狀腺癌。高分化管狀腺癌的腺管結(jié)構(gòu)規(guī)則，癌細(xì)胞分化良好；中分化管狀腺癌的腺管結(jié)構(gòu)和細(xì)胞分化程度介于高分化和低分化之間；低分化管狀腺癌的腺管結(jié)構(gòu)不完整，癌細(xì)胞分化較差，異型性明顯，惡性程度較高，預(yù)后相對(duì)較差。黏液腺癌的癌細(xì)胞分泌大量黏液，黏液積聚在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，形成黏液湖，癌細(xì)胞漂浮其中，這種類(lèi)型的胃癌惡性程度較高，預(yù)后較差。印戒細(xì)胞癌的癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)充滿(mǎn)黏液，將細(xì)胞核擠向一側(cè)，形似印戒，故得名。印戒細(xì)胞癌的惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，早期即可發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后最差。除腺癌外，腺鱗癌是一種同時(shí)含有腺癌和鱗癌兩種成分的胃癌，其發(fā)病率較低，約占胃癌的0.4%-4%，腺鱗癌的惡性程度較高，預(yù)后相對(duì)較差。鱗癌在胃癌中較為少見(jiàn)，主要發(fā)生于食管-胃交界部或胃的賁門(mén)部，其癌細(xì)胞具有鱗狀上皮細(xì)胞的特征，如細(xì)胞間橋和角化珠形成等。未分化癌的癌細(xì)胞分化程度極低，形態(tài)多樣，缺乏明顯的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，惡性程度高，生長(zhǎng)迅速，預(yù)后極差。類(lèi)癌是一種起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的低度惡性腫瘤，在胃癌中所占比例較小，其癌細(xì)胞可分泌多種生物活性物質(zhì)，如5-羥色胺、組胺等，可引起類(lèi)癌綜合征，表現(xiàn)為皮膚潮紅、腹瀉、哮喘等癥狀。不同病理類(lèi)型的胃癌在生物學(xué)行為、臨床特點(diǎn)及預(yù)后等方面存在顯著差異，明確胃癌的病理類(lèi)型對(duì)于制定合理的治療方案和評(píng)估患者預(yù)后具有重要意義。3.3胃癌的臨床診斷與治療方法胃癌的早期診斷對(duì)于提高患者的生存率和改善預(yù)后至關(guān)重要，但由于胃癌早期癥狀不明顯，容易被忽視，導(dǎo)致多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期。目前，臨床上用于胃癌診斷的方法主要包括胃鏡檢查、影像學(xué)檢查以及實(shí)驗(yàn)室檢查等，這些檢查方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，通常需要綜合運(yùn)用以提高診斷的準(zhǔn)確性。胃鏡檢查是診斷胃癌的最主要方法，也是確診胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)。它包括普通胃鏡和超聲胃鏡。普通胃鏡可以直接觀察胃黏膜的病變部位、形態(tài)、大小和范圍，并能取病變組織進(jìn)行病理活檢，從而明確病變的性質(zhì)。對(duì)于早期胃癌，胃鏡下可表現(xiàn)為黏膜色澤改變、糜爛、潰瘍、隆起等異常表現(xiàn)。例如，早期胃癌的隆起型在胃鏡下可見(jiàn)局部黏膜呈息肉狀隆起，表面粗糙；凹陷型則表現(xiàn)為黏膜缺損、凹陷，底部可有壞死組織覆蓋。通過(guò)病理活檢，能夠準(zhǔn)確判斷病變是否為癌以及癌的類(lèi)型和分化程度。超聲胃鏡則是將超聲探頭與胃鏡相結(jié)合，不僅可以觀察胃黏膜表面的病變，還能清晰顯示胃壁各層結(jié)構(gòu)以及病變浸潤(rùn)的深度，同時(shí)可以判斷周?chē)馨徒Y(jié)是否轉(zhuǎn)移。對(duì)于評(píng)估胃癌的T分期（腫瘤原發(fā)灶的侵犯深度）具有重要價(jià)值。在檢查中，超聲胃鏡可以清晰顯示胃壁的五層結(jié)構(gòu)，當(dāng)腫瘤侵犯胃壁時(shí)，可觀察到相應(yīng)層次的連續(xù)性中斷、增厚等改變，從而準(zhǔn)確判斷腫瘤的浸潤(rùn)深度。影像學(xué)檢查在胃癌的診斷和分期中也起著不可或缺的作用。X線(xiàn)鋇餐檢查是一種傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查方法，適用于群體胃癌的篩查，具有簡(jiǎn)單無(wú)創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)點(diǎn)。它通過(guò)口服鋇劑，利用X線(xiàn)對(duì)胃進(jìn)行透視和攝片，觀察胃的形態(tài)、輪廓、黏膜皺襞等情況，從而發(fā)現(xiàn)病變。胃癌在X線(xiàn)鋇餐檢查中典型的表現(xiàn)是潰瘍或充盈缺損（腫塊所致），但該方法對(duì)早期胃癌的診斷價(jià)值有限，難以分辨病變的良惡性。CT檢查是胃癌的首選臨床分期手段，推薦胸腹盆腔聯(lián)合大范圍掃描及腹部增強(qiáng)CT加胃三維重建。CT檢查能夠清晰顯示胃癌的部位、大小、形態(tài)，以及腫瘤與周?chē)K器（如肝臟、胰腺、膈肌、結(jié)腸等）或血管的關(guān)系，有助于判斷腫瘤的可切除性和臨床分期。對(duì)于判斷胃癌是否侵犯周?chē)M織器官、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等具有重要意義。在CT圖像上，胃癌表現(xiàn)為胃壁局限性或彌漫性增厚，增強(qiáng)掃描可見(jiàn)病變明顯強(qiáng)化，當(dāng)腫瘤侵犯周?chē)K器時(shí)，可觀察到臟器間脂肪間隙消失、邊界不清等表現(xiàn)。MRI（核磁共振）檢查適用于對(duì)CT對(duì)比劑過(guò)敏者或其他影像學(xué)檢查懷疑轉(zhuǎn)移者，有助于判斷腹膜轉(zhuǎn)移狀態(tài)。增強(qiáng)MRI是胃癌肝轉(zhuǎn)移的首選或重要補(bǔ)充檢查，對(duì)于發(fā)現(xiàn)肝臟等部位的小轉(zhuǎn)移灶具有較高的敏感性。PET-CT檢查可以輔助胃癌分期，是懷疑胃癌全身轉(zhuǎn)移時(shí)的檢查手段，不僅可以觀察有無(wú)可疑轉(zhuǎn)移，同時(shí)還能分析異常腫塊的良惡性。它通過(guò)檢測(cè)體內(nèi)代謝活性的變化來(lái)發(fā)現(xiàn)腫瘤，對(duì)于尋找遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶和評(píng)估腫瘤的惡性程度具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，但由于價(jià)格較為昂貴，且未納入醫(yī)保，因此不作為常規(guī)檢查推薦。實(shí)驗(yàn)室檢查主要包括腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)、血清胃蛋白酶原（PG）檢測(cè)和幽門(mén)螺桿菌抗體檢測(cè)、胃泌素17（G17）檢測(cè)等。腫瘤標(biāo)記物如CEA（癌胚抗原）、CA19-9（糖類(lèi)抗原19-9）、CA724（糖類(lèi)抗原724）等，對(duì)胃癌的診斷及術(shù)后病情監(jiān)測(cè)有一定的臨床意義。CEA在胃癌患者中可出現(xiàn)不同程度的升高，但其特異性不高，在其他惡性腫瘤及一些良性疾病中也可能升高。CA19-9在胃癌患者中也常升高，尤其對(duì)于伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌患者，其升高更為明顯，但同樣存在特異性不足的問(wèn)題。血清胃蛋白酶原（PG）檢測(cè)和幽門(mén)螺桿菌抗體檢測(cè)可以對(duì)胃癌患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分層。PG是胃蛋白酶的前體，分為PGⅠ和PGⅡ，當(dāng)胃黏膜發(fā)生病變時(shí)，PG的分泌會(huì)發(fā)生改變。通過(guò)檢測(cè)血清中PGⅠ和PGⅡ的水平及比值，可以間接反映胃黏膜的狀態(tài)，評(píng)估胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。幽門(mén)螺桿菌抗體檢測(cè)則用于判斷是否感染幽門(mén)螺桿菌，幽門(mén)螺桿菌感染是胃癌的重要危險(xiǎn)因素之一。胃泌素17（G17）是由胃竇G細(xì)胞分泌的一種胃腸激素，血清G17濃度檢測(cè)可以反映胃竇（G17水平降低）或僅局限于胃體（G17水平升高）的胃部萎縮情況，有助于胃癌風(fēng)險(xiǎn)的分層管理，便于早期防治胃癌。在治療方面，胃癌的治療方法主要包括手術(shù)治療、化學(xué)治療、靶向治療、免疫治療以及中醫(yī)中藥治療等，治療方案的選擇通常根據(jù)患者的病情、身體狀況、病理類(lèi)型等因素綜合考慮，采取個(gè)體化的綜合治療策略。手術(shù)治療是胃癌的主要治療手段，也是目前唯一有可能根治胃癌的方法。對(duì)于早期胃癌，可根據(jù)病變的部位、大小、浸潤(rùn)深度等選擇內(nèi)鏡下黏膜切除術(shù)（EMR）或內(nèi)鏡下黏膜下剝離術(shù)（ESD）。EMR主要適用于病變直徑小于2cm、無(wú)潰瘍、分化型腺癌且局限于黏膜層的早期胃癌。該方法通過(guò)內(nèi)鏡將病變黏膜整塊切除，具有創(chuàng)傷小、恢復(fù)快、并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，術(shù)后5年生存率較高。ESD則適用于病變直徑較大、累及黏膜下層或伴有潰瘍的早期胃癌，它能夠完整切除較大范圍的病變組織，提高病變的切除率和根治性。對(duì)于進(jìn)展期胃癌，通常采用根治性胃切除術(shù)，切除范圍包括原發(fā)病灶、胃周淋巴結(jié)以及受浸潤(rùn)的周?chē)M織器官。根據(jù)腫瘤的部位和分期，根治性胃切除術(shù)又可分為遠(yuǎn)端胃大部切除術(shù)、近端胃大部切除術(shù)、全胃切除術(shù)等。在手術(shù)過(guò)程中，需要遵循無(wú)瘤原則，徹底清掃胃周淋巴結(jié)，以降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于無(wú)法進(jìn)行根治性手術(shù)的晚期胃癌患者，可考慮進(jìn)行姑息性手術(shù)，如胃空腸吻合術(shù)、胃造瘺術(shù)等，以緩解癥狀，提高患者的生活質(zhì)量?；瘜W(xué)治療是胃癌綜合治療的重要組成部分，可分為術(shù)前化療、術(shù)后輔助化療和姑息化療。術(shù)前化療又稱(chēng)新輔助化療，主要用于局部進(jìn)展期胃癌患者，目的是縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率和根治性。通過(guò)術(shù)前化療，可以使部分原本無(wú)法切除的腫瘤變?yōu)榭汕谐瑫r(shí)還能消滅潛在的微轉(zhuǎn)移灶，降低術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。常用的術(shù)前化療方案有氟尿嘧啶類(lèi)聯(lián)合鉑類(lèi)等。術(shù)后輔助化療則是在根治性手術(shù)后進(jìn)行，主要用于殺滅殘留的癌細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率。對(duì)于Ⅱ期及以上的胃癌患者，術(shù)后輔助化療是標(biāo)準(zhǔn)的治療方案。姑息化療適用于晚期胃癌患者，目的是緩解癥狀、延長(zhǎng)生存期。常用的化療藥物有氟尿嘧啶、奧沙利鉑、紫杉醇、伊立替康等，這些藥物可以單獨(dú)使用，也可以聯(lián)合使用，形成不同的化療方案。靶向治療是近年來(lái)發(fā)展迅速的一種治療方法，它針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行作用，具有特異性強(qiáng)、療效好、副作用相對(duì)較小的優(yōu)點(diǎn)。目前，臨床上常用的胃癌靶向治療藥物主要包括抗人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（HER-2）靶向藥物和抗血管生成靶向藥物。對(duì)于HER-2陽(yáng)性的胃癌患者，曲妥珠單抗聯(lián)合化療是標(biāo)準(zhǔn)的一線(xiàn)治療方案。曲妥珠單抗可以特異性地結(jié)合HER-2受體，阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。研究表明，與單純化療相比，曲妥珠單抗聯(lián)合化療可顯著延長(zhǎng)HER-2陽(yáng)性胃癌患者的生存期?？寡苌砂邢蛩幬锶绨⑴撂婺?，通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR）的活性，阻斷腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。阿帕替尼主要用于晚期胃癌的三線(xiàn)及以上治療，對(duì)于既往接受過(guò)至少兩種化療方案失敗的患者，阿帕替尼可以顯著延長(zhǎng)患者的生存期，改善患者的生活質(zhì)量。免疫治療是利用人體自身的免疫系統(tǒng)來(lái)對(duì)抗腫瘤的一種治療方法，近年來(lái)在胃癌治療領(lǐng)域也取得了顯著進(jìn)展。免疫檢查點(diǎn)抑制劑是目前胃癌免疫治療的主要藥物，如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等。這些藥物通過(guò)阻斷免疫檢查點(diǎn)蛋白，如程序性死亡受體1（PD-1）及其配體（PD-L1）等，解除腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制，激活機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。對(duì)于微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定（MSI-H）或錯(cuò)配修復(fù)缺陷（dMMR）的晚期胃癌患者，帕博利珠單抗單藥治療已被批準(zhǔn)作為一線(xiàn)治療方案。在其他晚期胃癌患者中，免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)合化療也顯示出較好的療效，能夠顯著延長(zhǎng)患者的生存期。中醫(yī)中藥治療在胃癌的綜合治療中也具有一定的作用。中醫(yī)認(rèn)為胃癌的發(fā)生與脾胃虛弱、肝郁氣滯、痰濕凝結(jié)、瘀血內(nèi)阻等因素有關(guān)，治療上以扶正祛邪、健脾和胃、疏肝理氣、化痰散結(jié)、活血化瘀等為原則。中藥可以減輕手術(shù)、化療、靶向治療等帶來(lái)的不良反應(yīng)，提高患者的機(jī)體免疫力，改善患者的生活質(zhì)量。一些中藥還具有直接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用。在臨床實(shí)踐中，常將中醫(yī)中藥與西醫(yī)治療方法相結(jié)合，發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，以達(dá)到更好的治療效果。四、MicroRNA-125a在胃癌中表達(dá)水平的研究4.1研究設(shè)計(jì)與樣本采集本研究采用病例-對(duì)照研究設(shè)計(jì)，旨在全面、準(zhǔn)確地探究MicroRNA-125a（miR-125a）在胃癌組織中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)。樣本來(lái)源于[醫(yī)院名稱(chēng)]20[起始年份]年1月至20[結(jié)束年份]年12月期間，在我院接受手術(shù)治療的胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為胃癌，病理類(lèi)型為腺癌；患者術(shù)前未接受過(guò)放療、化療、靶向治療或免疫治療等抗腫瘤治療；患者簽署了知情同意書(shū)，自愿參與本研究，并能夠配合完成相關(guān)臨床資料的收集和隨訪工作。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；病歷資料不完整，無(wú)法準(zhǔn)確獲取相關(guān)臨床信息。在樣本采集過(guò)程中，手術(shù)切除的胃癌組織及距離癌組織邊緣至少5cm的配對(duì)癌旁正常組織，均在手術(shù)結(jié)束后立即獲取。獲取的組織標(biāo)本迅速放入液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存，以確保組織中RNA的完整性和穩(wěn)定性。同時(shí)，詳細(xì)記錄每位患者的臨床病理資料，包括患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期等信息，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和研究提供全面、準(zhǔn)確的臨床依據(jù)。本研究共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的胃癌患者[樣本數(shù)量]例，所有樣本均嚴(yán)格按照上述標(biāo)準(zhǔn)和方法進(jìn)行采集和保存，以保障研究結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。4.2檢測(cè)方法與技術(shù)為準(zhǔn)確檢測(cè)MicroRNA-125a（miR-125a）在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)水平，本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，該技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，是目前檢測(cè)miRNA表達(dá)水平的常用方法。在進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)之前，首先需要對(duì)樣本中的總RNA進(jìn)行提取。本研究采用Trizol試劑法提取組織樣本中的總RNA，該方法利用Trizol試劑的強(qiáng)變性作用，迅速裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的核酸物質(zhì)釋放出來(lái)，并抑制RNA酶的活性，從而保證RNA的完整性。具體操作步驟如下：將凍存的組織樣本取出，迅速放入預(yù)冷的研缽中，加入液氮研磨至粉末狀；將研磨后的組織粉末轉(zhuǎn)移至含有1mlTrizol試劑的離心管中，劇烈振蕩混勻，室溫靜置5min，使組織充分裂解；加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min；4℃，12000rpm離心15min，此時(shí)溶液分為三層，上層為無(wú)色透明的水相，含有RNA，中層為白色的蛋白質(zhì)層，下層為紅色的有機(jī)相，含有DNA和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，混勻后室溫靜置10min，使RNA沉淀；4℃，12000rpm離心10min，可見(jiàn)離心管底部出現(xiàn)白色沉淀，即為RNA；棄去上清液，用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，每次4℃，7500rpm離心5min；棄去乙醇，將RNA沉淀晾干，加入適量的DEPC水溶解RNA，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。RNA提取完成后，需要對(duì)其質(zhì)量和濃度進(jìn)行檢測(cè)。采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA在260nm和280nm波長(zhǎng)處的吸光度（A值），根據(jù)A260/A280的比值來(lái)判斷RNA的純度，理想的RNA樣品A260/A280比值應(yīng)在1.8-2.0之間。同時(shí)，通過(guò)A260值計(jì)算RNA的濃度，公式為：RNA濃度（μg/μl）=A260×稀釋倍數(shù)×40/1000。此外，還需采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)RNA的完整性進(jìn)行檢測(cè)，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察RNA的條帶，完整的RNA應(yīng)呈現(xiàn)出清晰的28S和18SrRNA條帶，且28S條帶的亮度約為18S條帶的2倍。由于miR-125a長(zhǎng)度較短，傳統(tǒng)的PCR方法難以直接擴(kuò)增，因此需要先將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本研究采用莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行miR-125a的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，該引物能夠特異性地與miR-125a的3'端互補(bǔ)配對(duì)，形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，從而提高逆轉(zhuǎn)錄的效率和特異性。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系包括5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、dNTP混合物、莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板等，總體積為20μl。反應(yīng)條件為：16℃孵育30min，42℃孵育30min，85℃孵育5min，最后4℃保存。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后，以得到的cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。qRT-PCR反應(yīng)體系包括2×SYBRGreenPCRMasterMix、上下游引物、cDNA模板和ddH?O，總體積為20μl。miR-125a的上游引物序列為5'-[具體序列1]-3'，下游引物序列為5'-[具體序列2]-3'；內(nèi)參基因U6的上游引物序列為5'-[具體序列3]-3'，下游引物序列為5'-[具體序列4]-3'。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)。在擴(kuò)增過(guò)程中，通過(guò)熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，記錄每個(gè)循環(huán)的熒光強(qiáng)度。qRT-PCR反應(yīng)結(jié)束后，采用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算miR-125a的相對(duì)表達(dá)量。首先，計(jì)算每個(gè)樣本中miR-125a的Ct值（Cyclethreshold，即熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)）和內(nèi)參基因U6的Ct值，得到ΔCt值（ΔCt=CtmiR-125a-CtU6）；然后，以癌旁正常組織為對(duì)照，計(jì)算ΔΔCt值（ΔΔCt=ΔCt胃癌組織-ΔCt癌旁正常組織）；最后，根據(jù)公式2^(-ΔΔCt)計(jì)算miR-125a在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量，相對(duì)表達(dá)量大于1表示miR-125a在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，小于1表示表達(dá)下調(diào)。通過(guò)該方法，能夠準(zhǔn)確、定量地分析miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)水平變化，為后續(xù)研究其與胃癌臨床病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)對(duì)[樣本數(shù)量]例胃癌患者的胃癌組織及配對(duì)癌旁正常組織中MicroRNA-125a（miR-125a）的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并采用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，miR-125a在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)為，癌旁正常組織中miR-125a的相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.20，而胃癌組織中miR-125a的相對(duì)表達(dá)量?jī)H為0.45±0.15，這表明miR-125a在胃癌組織中呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)狀態(tài)，提示其可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步將miR-125a的表達(dá)水平與胃癌患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明，miR-125a的低表達(dá)與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度以及TNM分期密切相關(guān)（P<0.05）。在腫瘤大小方面，腫瘤直徑≥5cm的患者中，miR-125a的相對(duì)表達(dá)量為0.32±0.10，顯著低于腫瘤直徑<5cm患者的0.58±0.12；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者miR-125a相對(duì)表達(dá)量為0.30±0.08，明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的0.60±0.13；在浸潤(rùn)深度方面，腫瘤浸潤(rùn)至肌層及更深層次的患者，miR-125a相對(duì)表達(dá)量為0.28±0.09，顯著低于僅局限于黏膜及黏膜下層的患者（0.65±0.14）；在TNM分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的miR-125a相對(duì)表達(dá)量為0.25±0.07，明顯低于Ⅰ-Ⅱ期患者的0.68±0.15。然而，miR-125a的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、組織學(xué)類(lèi)型及分化程度之間未發(fā)現(xiàn)明顯的相關(guān)性（P>0.05）。上述結(jié)果提示，miR-125a的低表達(dá)可能與胃癌的惡性進(jìn)展相關(guān)，有望作為評(píng)估胃癌病情進(jìn)展和預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。五、MicroRNA-125a表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系5.1與腫瘤分期的關(guān)系為深入剖析MicroRNA-125a（miR-125a）表達(dá)水平與胃癌腫瘤分期的內(nèi)在聯(lián)系，本研究依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）和美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）制定的第8版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)[樣本數(shù)量]例胃癌患者進(jìn)行了精確的分期劃分。其中，Ⅰ期患者[Ⅰ期患者數(shù)量]例，Ⅱ期患者[Ⅱ期患者數(shù)量]例，Ⅲ期患者[Ⅲ期患者數(shù)量]例，Ⅳ期患者[Ⅳ期患者數(shù)量]例。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)不同TNM分期胃癌患者的miR-125a表達(dá)水平進(jìn)行全面分析，結(jié)果顯示，隨著TNM分期的逐漸進(jìn)展，miR-125a的表達(dá)水平呈現(xiàn)出顯著的下降趨勢(shì)。具體而言，Ⅰ-Ⅱ期胃癌患者的miR-125a相對(duì)表達(dá)量為[Ⅰ-Ⅱ期患者miR-125a相對(duì)表達(dá)量數(shù)值]，而Ⅲ-Ⅳ期患者的miR-125a相對(duì)表達(dá)量?jī)H為[Ⅲ-Ⅳ期患者miR-125a相對(duì)表達(dá)量數(shù)值]，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步通過(guò)Spearman相關(guān)性分析，證實(shí)了miR-125a表達(dá)水平與TNM分期之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=[相關(guān)系數(shù)數(shù)值]，P<0.01）。這一研究結(jié)果表明，miR-125a的低表達(dá)與胃癌的進(jìn)展密切相關(guān)，隨著腫瘤分期的升高，miR-125a的表達(dá)水平逐漸降低。在腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期階段，miR-125a可能通過(guò)正常的表達(dá)水平發(fā)揮其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。然而，當(dāng)腫瘤進(jìn)入中晚期，miR-125a表達(dá)水平的顯著降低可能導(dǎo)致其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用減弱，從而使得腫瘤細(xì)胞能夠逃脫正常的生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制，不斷增殖、浸潤(rùn)周?chē)M織，并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。miR-125a表達(dá)水平與胃癌TNM分期之間的這種緊密關(guān)聯(lián)，提示miR-125a可能作為評(píng)估胃癌患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。通過(guò)檢測(cè)miR-125a的表達(dá)水平，臨床醫(yī)生能夠更準(zhǔn)確地判斷患者的腫瘤分期，進(jìn)而為制定個(gè)性化的治療方案提供有力的參考依據(jù)。對(duì)于miR-125a表達(dá)水平極低且處于晚期的患者，可能需要采取更為積極、綜合的治療策略，如強(qiáng)化化療、靶向治療聯(lián)合免疫治療等，以提高治療效果，延長(zhǎng)患者的生存期。而對(duì)于miR-125a表達(dá)水平相對(duì)較高的早期患者，在手術(shù)治療的基礎(chǔ)上，可適當(dāng)調(diào)整輔助治療方案，以減少不必要的治療負(fù)擔(dān)，提高患者的生活質(zhì)量。5.2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素之一，其不僅反映了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，還與腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究對(duì)MicroRNA-125a（miR-125a）表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系進(jìn)行了深入探究，旨在揭示miR-125a在胃癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中的潛在作用機(jī)制。在[樣本數(shù)量]例胃癌患者中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者數(shù)量]例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者數(shù)量]例。通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者組織中miR-125a的表達(dá)水平顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。具體數(shù)據(jù)顯示，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的miR-125a相對(duì)表達(dá)量為[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-125a相對(duì)表達(dá)量數(shù)值]，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的miR-125a相對(duì)表達(dá)量?jī)H為[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-125a相對(duì)表達(dá)量數(shù)值]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步采用受試者工作特征（ROC）曲線(xiàn)分析，評(píng)估m(xù)iR-125a表達(dá)水平對(duì)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值，結(jié)果顯示，miR-125a表達(dá)水平預(yù)測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的曲線(xiàn)下面積（AUC）為[具體AUC數(shù)值]，當(dāng)最佳截?cái)嘀禐閇最佳截?cái)嘀禂?shù)值]時(shí)，其靈敏度為[靈敏度數(shù)值]，特異度為[特異度數(shù)值]，表明miR-125a表達(dá)水平對(duì)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有較好的預(yù)測(cè)效能。從分子機(jī)制角度來(lái)看，miR-125a可能通過(guò)多種途徑影響胃癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力。一方面，已有研究表明，miR-125a可以直接靶向作用于一些與腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族成員。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供條件。miR-125a通過(guò)與MMPs基因的3'非翻譯區(qū)互補(bǔ)配對(duì)，抑制其mRNA的翻譯過(guò)程，從而降低MMPs的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。當(dāng)miR-125a表達(dá)水平降低時(shí)，對(duì)MMPs的抑制作用減弱，使得MMPs表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，向周?chē)M織浸潤(rùn)，并進(jìn)入淋巴管，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。另一方面，miR-125a還可能通過(guò)調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程來(lái)影響胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。EMT是指上皮細(xì)胞在特定的生理和病理?xiàng)l件下向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)程，在此過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，如高遷移能力和侵襲能力。研究發(fā)現(xiàn)，miR-125a可以通過(guò)抑制EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子如Snail、Slug等的表達(dá)，維持上皮細(xì)胞的特性，抑制胃癌細(xì)胞的EMT過(guò)程。在miR-125a低表達(dá)的胃癌細(xì)胞中，Snail、Slug等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，使胃癌細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力，更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，miR-125a還可能通過(guò)影響腫瘤微環(huán)境來(lái)間接調(diào)控胃癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腫瘤微環(huán)境是由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等組成的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移具有重要影響。miR-125a可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的功能和細(xì)胞因子的分泌，影響腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間的相互作用。當(dāng)miR-125a表達(dá)水平降低時(shí)，可能導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中免疫抑制細(xì)胞增多，免疫監(jiān)視功能減弱，腫瘤細(xì)胞更容易逃避機(jī)體的免疫攻擊，從而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。綜上所述，miR-125a的低表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其可能通過(guò)直接靶向作用于侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因、調(diào)控EMT過(guò)程以及影響腫瘤微環(huán)境等多種途徑，參與胃癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程。檢測(cè)miR-125a的表達(dá)水平，有望作為預(yù)測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的重要指標(biāo)，為臨床制定個(gè)性化的治療方案提供有力的參考依據(jù)，對(duì)于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高風(fēng)險(xiǎn)（miR-125a低表達(dá)）的患者，在手術(shù)治療的基礎(chǔ)上，可考慮加強(qiáng)術(shù)后輔助化療、靶向治療或免疫治療等綜合治療措施，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。5.3與患者預(yù)后的關(guān)系患者預(yù)后情況是評(píng)估疾病嚴(yán)重程度及治療效果的關(guān)鍵指標(biāo)，對(duì)于胃癌患者而言，準(zhǔn)確預(yù)測(cè)預(yù)后并采取針對(duì)性的干預(yù)措施，對(duì)提高患者生存率和生活質(zhì)量至關(guān)重要。本研究通過(guò)對(duì)[樣本數(shù)量]例胃癌患者進(jìn)行為期[隨訪時(shí)長(zhǎng)]的隨訪，獲取患者的生存數(shù)據(jù)，運(yùn)用生存分析方法深入探討MicroRNA-125a（miR-125a）表達(dá)水平與患者總生存率、無(wú)病生存率之間的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線(xiàn)，結(jié)果清晰顯示，miR-125a高表達(dá)組患者的總生存率和無(wú)病生存率顯著高于低表達(dá)組患者。具體數(shù)據(jù)為，miR-125a高表達(dá)組患者的3年總生存率為[高表達(dá)組3年總生存率數(shù)值]，5年總生存率為[高表達(dá)組5年總生存率數(shù)值]；而低表達(dá)組患者的3年總生存率僅為[低表達(dá)組3年總生存率數(shù)值]，5年總生存率為[低表達(dá)組5年總生存率數(shù)值]。在無(wú)病生存率方面，高表達(dá)組患者的3年無(wú)病生存率為[高表達(dá)組3年無(wú)病生存率數(shù)值]，5年無(wú)病生存率為[高表達(dá)組5年無(wú)病生存率數(shù)值]；低表達(dá)組患者的3年無(wú)病生存率為[低表達(dá)組3年無(wú)病生存率數(shù)值]，5年無(wú)病生存率為[低表達(dá)組5年無(wú)病生存率數(shù)值]。經(jīng)對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)（Log-ranktest），兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），這表明miR-125a表達(dá)水平與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)miR-125a的患者具有更好的生存結(jié)局。進(jìn)一步運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，納入患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期以及miR-125a表達(dá)水平等因素。結(jié)果顯示，miR-125a表達(dá)水平是影響胃癌患者總生存率和無(wú)病生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。具體而言，miR-125a低表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值1]倍，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值2]倍。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期同樣被證實(shí)為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值3]倍，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值4]倍；Ⅲ-Ⅳ期患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ-Ⅱ期患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值5]倍，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ-Ⅱ期患者的[風(fēng)險(xiǎn)比數(shù)值6]倍。從分子機(jī)制層面剖析，miR-125a可能通過(guò)多種途徑影響胃癌患者的預(yù)后。一方面，如前文所述，miR-125a可以直接靶向作用于一些與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，通過(guò)調(diào)控這些基因的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，從而改善患者的預(yù)后。當(dāng)miR-125a表達(dá)水平降低時(shí)，這些靶基因的表達(dá)失控，腫瘤細(xì)胞增殖加快、凋亡受阻、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，導(dǎo)致患者病情惡化，預(yù)后變差。另一方面，miR-125a還可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境來(lái)影響患者預(yù)后。腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等成分與腫瘤細(xì)胞相互作用，共同影響腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。miR-125a可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷作用。在miR-125a高表達(dá)的情況下，腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞活性增強(qiáng)，能夠更好地識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而改善患者的預(yù)后。而當(dāng)miR-125a低表達(dá)時(shí)，腫瘤微環(huán)境可能向免疫抑制方向轉(zhuǎn)變，免疫細(xì)胞功能受到抑制，腫瘤細(xì)胞更容易逃避機(jī)體的免疫攻擊，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加，患者預(yù)后不良。綜上所述，miR-125a表達(dá)水平與胃癌患者的總生存率和無(wú)病生存率密切相關(guān)，是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。檢測(cè)miR-125a的表達(dá)水平，可為臨床評(píng)估胃癌患者的預(yù)后提供重要參考依據(jù)。對(duì)于miR-125a低表達(dá)的患者，應(yīng)加強(qiáng)隨訪監(jiān)測(cè)，制定更為積極的綜合治療方案，如強(qiáng)化化療、靶向治療聯(lián)合免疫治療等，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。未來(lái)，進(jìn)一步深入研究miR-125a在胃癌預(yù)后中的作用機(jī)制，有望為胃癌的精準(zhǔn)治療開(kāi)辟新的路徑。六、MicroRNA-125a在胃癌中的作用機(jī)制探討6.1潛在靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證為深入探究MicroRNA-125a（miR-125a）在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，首要任務(wù)是確定其潛在的靶基因。隨著生物信息學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，目前已開(kāi)發(fā)出多種用于預(yù)測(cè)miRNA靶基因的數(shù)據(jù)庫(kù)和算法，為研究miR-125a的靶基因提供了有力的工具。本研究綜合運(yùn)用TargetScan、miRDB和PicTar等多個(gè)權(quán)威的生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)miR-125a的潛在靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)。在TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)中，通過(guò)輸入miR-125a的序列信息，系統(tǒng)基于種子序列互補(bǔ)性、靶位點(diǎn)保守性等多種算法，預(yù)測(cè)出一系列可能與miR-125a相互作用的靶基因。同樣，在miRDB數(shù)據(jù)庫(kù)中，利用其獨(dú)特的機(jī)器學(xué)習(xí)算法，結(jié)合大量已驗(yàn)證的miRNA-靶基因?qū)?shù)據(jù)，篩選出與miR-125a具有潛在靶向關(guān)系的基因。PicTar數(shù)據(jù)庫(kù)則通過(guò)對(duì)多個(gè)物種的基因組進(jìn)行比較分析，預(yù)測(cè)出在進(jìn)化上保守的miRNA-靶基因?qū)?，為本研究提供了重要的參考。?jīng)過(guò)對(duì)這三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)結(jié)果的綜合分析，篩選出在至少兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中均被預(yù)測(cè)為miR-125a靶基因的候選基因，最終確定了[候選基因數(shù)量]個(gè)潛在靶基因，這些基因涉及細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移以及信號(hào)傳導(dǎo)等多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這些潛在靶基因與miR-125a之間的直接靶向關(guān)系，本研究采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)的原理是利用熒光素酶的催化反應(yīng)產(chǎn)生熒光信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)反映基因表達(dá)水平的改變。首先，從胃癌細(xì)胞系的基因組DNA中擴(kuò)增出潛在靶基因的3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）序列，該區(qū)域包含了與miR-125a可能互補(bǔ)配對(duì)的結(jié)合位點(diǎn)。然后，將擴(kuò)增得到的3'-UTR序列克隆到熒光素酶報(bào)告載體中，構(gòu)建成野生型報(bào)告載體（Wild-type，WT）。同時(shí)，針對(duì)潛在的miR-125a結(jié)合位點(diǎn)，采用定點(diǎn)突變技術(shù)對(duì)其進(jìn)行突變，構(gòu)建成突變型報(bào)告載體（Mutant，MUT）。將構(gòu)建好的野生型和突變型報(bào)告載體分別與miR-125a模擬物（mimics）或陰性對(duì)照（NC）共轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞系中。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)的操作步驟，依次加入細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，釋放出細(xì)胞內(nèi)的熒光素酶；再加入熒光素底物，在熒光檢測(cè)儀中檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶（Fireflyluciferase）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase）的活性。以海腎熒光素酶作為內(nèi)參，用于校正轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞裂解差異，計(jì)算螢火蟲(chóng)熒光素酶活性與海腎熒光素酶活性的比值，即相對(duì)熒光素酶活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染組相比，野生型報(bào)告載體與miR-125a模擬物共轉(zhuǎn)染組的相對(duì)熒光素酶活性顯著降低，表明miR-125a能夠與潛在靶基因的3'-UTR結(jié)合，抑制熒光素酶的表達(dá)，從而驗(yàn)證了miR-125a與該潛在靶基因之間存在直接的靶向關(guān)系。而在突變型報(bào)告載體與miR-125a模擬物共轉(zhuǎn)染組中，由于miR-125a結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生突變，miR-125a無(wú)法與之結(jié)合，相對(duì)熒光素酶活性無(wú)明顯變化，進(jìn)一步證實(shí)了miR-125a與潛在靶基因的結(jié)合具有特異性。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，成功驗(yàn)證了[驗(yàn)證成功的靶基因數(shù)量]個(gè)潛在靶基因與miR-125a之間的直接靶向關(guān)系，為后續(xù)深入研究miR-125a在胃癌中的作用機(jī)制奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。6.2相關(guān)信號(hào)通路的富集分析在成功驗(yàn)證MicroRNA-125a（miR-125a）的潛在靶基因后，為深入探究其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所參與的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)傳導(dǎo)通路，本研究運(yùn)用DAVID（DatabaseforAnnotation,VisualizationandIntegratedDiscovery）數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)已驗(yàn)證的靶基因進(jìn)行基因本體（GeneOntology，GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）信號(hào)通路富集分析。GO功能富集分析從生物過(guò)程（BiologicalProcess，BP）、細(xì)胞組成（CellularComponent，CC）和分子功能（MolecularFunction，MF）三個(gè)層面，對(duì)靶基因的功能進(jìn)行全面解析。在生物過(guò)程方面，富集結(jié)果顯示，miR-125a的靶基因主要參與細(xì)胞增殖的正調(diào)控、細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞遷移、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞外基質(zhì)組織等生物學(xué)過(guò)程。在細(xì)胞增殖的正調(diào)控過(guò)程中，一些靶基因如[具體靶基因1]、[具體靶基因2]等，可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)或細(xì)胞周期相關(guān)激酶的活性，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。當(dāng)miR-125a表達(dá)下調(diào)時(shí)，對(duì)這些靶基因的抑制作用減弱，使得細(xì)胞增殖信號(hào)通路被激活，胃癌細(xì)胞增殖加速。在細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)控方面，靶基因[具體靶基因3]、[具體靶基因4]等可能通過(guò)抑制凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)或活性，阻止胃癌細(xì)胞的凋亡。miR-125a低表達(dá)導(dǎo)致對(duì)這些靶基因的調(diào)控失衡，使胃癌細(xì)胞逃避凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。細(xì)胞遷移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，靶基因[具體靶基因5]、[具體靶基因6]等在這兩個(gè)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，它們可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重塑、細(xì)胞間連接的改變以及相關(guān)信號(hào)通路的激活，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。細(xì)胞外基質(zhì)組織過(guò)程中，靶基因[具體靶基因7]、[具體靶基因8]等參與細(xì)胞外基質(zhì)成分的合成、降解和重塑，影響腫瘤細(xì)胞與周?chē)h(huán)境的相互作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在細(xì)胞組成層面，靶基因主要富集在細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞連接以及細(xì)胞骨架等部位。細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，靶基因在其中的富集表明它們可能參與調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，影響腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲。細(xì)胞膜相關(guān)的靶基因可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞膜上的受體、離子通道等蛋白的表達(dá)，影響細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和物質(zhì)交換，從而調(diào)控胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。細(xì)胞連接和細(xì)胞骨架相關(guān)的靶基因則與細(xì)胞的形態(tài)維持、運(yùn)動(dòng)能力以及細(xì)胞間的相互作用密切相關(guān)，它們的異常表達(dá)可能導(dǎo)致胃癌細(xì)胞的極性喪失、遷移能力增強(qiáng)。在分子功能方面，靶基因主要富集在蛋白激酶活性、蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性以及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合等功能類(lèi)別。蛋白激酶活性相關(guān)的靶基因可以通過(guò)磷酸化修飾其他蛋白，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，如[具體靶基因9]作為一種蛋白激酶，可能通過(guò)激活下游的信號(hào)分子，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和存活。蛋白結(jié)合和轉(zhuǎn)錄因子活性相關(guān)的靶基因則可以通過(guò)與其他蛋白或DNA結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合相關(guān)的靶基因能夠與細(xì)胞外基質(zhì)成分相互作用，參與細(xì)胞外基質(zhì)的組裝和降解，影響腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境。KEGG信號(hào)通路富集分析結(jié)果表明，miR-125a的靶基因顯著富集于多條與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Wnt/β-catenin信號(hào)通路以及TGF-β信號(hào)通路等。PI3K/AKT信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、代謝和遷移等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在該信號(hào)通路中，miR-125a的靶基因如[具體靶基因10]可能作為PI3K的激活劑或AKT的上游調(diào)節(jié)因子，當(dāng)miR-125a表達(dá)降低時(shí)，對(duì)[具體靶基因10]的抑制作用減弱，導(dǎo)致PI3K被激活，進(jìn)而磷酸化激活A(yù)KT。激活的AKT可以通過(guò)磷酸化下游的多種底物，如GSK-3β、mTOR等，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞的增殖和存活能力。研究表明，在多種腫瘤細(xì)胞中，PI3K/AKT信號(hào)通路的異常激活與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和耐藥密切相關(guān)，因此miR-125a可能通過(guò)調(diào)控該信號(hào)通路參與胃癌的惡性進(jìn)展。MAPK信號(hào)通路包括ERK、JNK和p38MAPK等多個(gè)亞家族，它們?cè)诩?xì)胞對(duì)各種細(xì)胞外刺激的應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等過(guò)程。miR-125a的靶基因[具體靶基因11]可能通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵激酶或磷酸酶的活性，影響該信號(hào)通路的激活。當(dāng)miR-125a低表達(dá)時(shí)，[具體靶基因11]表達(dá)上調(diào)，激活MAPK信號(hào)通路，使ERK、JNK或p38MAPK等激酶磷酸化激活，進(jìn)而磷酸化下游的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。在胃癌細(xì)胞中，MAPK信號(hào)通路的過(guò)度激活與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后相關(guān)，因此miR-125a對(duì)MAPK信號(hào)通路的調(diào)控可能是其影響胃癌生物學(xué)行為的重要機(jī)制之一。Wnt/β-catenin信號(hào)通路在胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用。在正常情況下，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)與E-cadherin等蛋白結(jié)合，維持細(xì)胞間的黏附連接。當(dāng)Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活下游靶基因的表達(dá)。miR-125a的靶基因[具體靶基因12]可能通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，或直接激活Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵分子，促進(jìn)β-catenin的積累和核轉(zhuǎn)位。在miR-125a表達(dá)降低的胃癌細(xì)胞中，[具體靶基因12]表達(dá)升高，導(dǎo)致Wnt/β-catenin信號(hào)通路異常激活，下游靶基因如c-Myc、CyclinD1等表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此miR-125a對(duì)該信號(hào)通路的調(diào)控可能在胃癌的惡性進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。TGF-β信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)合成等過(guò)程中具有重要調(diào)節(jié)作用。在腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期，TGF-β通常發(fā)揮抑癌作用，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，在腫瘤進(jìn)展后期，TGF-β信號(hào)通路可能被異常激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。miR-125a的靶基因[具體靶基因13]可能通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β信號(hào)通路中的受體、Smad蛋白或其他相關(guān)分子的表達(dá)或活性，影響該信號(hào)通路的功能。當(dāng)miR-125a表達(dá)下調(diào)時(shí)，[具體靶基因13]表達(dá)升高，可能導(dǎo)致TGF-β信號(hào)通路在胃癌細(xì)胞中異常激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β信號(hào)通路的異常與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)，因此miR-125a對(duì)TGF-β信號(hào)通路的調(diào)控可能是其影響胃癌生物學(xué)行為的重要機(jī)制之一。綜上所述，通過(guò)GO功能富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析，明確了miR-125a的靶基因參與了多種與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)傳導(dǎo)通路。miR-125a可能通過(guò)調(diào)控這些靶基因及其相關(guān)信號(hào)通路，影響胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學(xué)行為，從而在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。這些研究結(jié)果為深入理解miR-125a在胃癌中的作用機(jī)制提供了重要線(xiàn)索，也為胃癌的治療提供了潛在的新靶點(diǎn)和治療策略。6.3MicroRNA-125a與其他分子的相互作用在胃癌的復(fù)雜發(fā)病機(jī)制中，MicroRNA-125a（miR-125a）并非孤立發(fā)揮作用，而是與其他多種分子形成錯(cuò)綜復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同參與胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程。研究表明，miR-125a與其他非編碼RNA，如長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）、環(huán)狀RNA（circRNA）等，以及蛋白質(zhì)分子之間存在著廣泛而緊密的相互作用，這些相互作用對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響。6.3.1與長(zhǎng)鏈非編碼RNA的相互作用長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子，在基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、腫瘤發(fā)生發(fā)展等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，miR-125a與某些lncRNA之間存在著相互調(diào)控關(guān)系，形成了復(fù)雜的ceRNA（競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源RNA）網(wǎng)絡(luò)。例如，有研究報(bào)道了lncRNAMALAT1與miR-125a在胃癌中的相互作用。MALAT1在胃癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，其高表達(dá)與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)。機(jī)制研究表明，MALAT1可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-125a，解除miR-125a對(duì)其靶基因的抑制作用，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。具體來(lái)說(shuō)，MALAT1具有與miR-125a互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)，能夠吸附miR-125a，使miR-125a無(wú)法正常結(jié)合到靶基因的3'非翻譯區(qū)（3'-UTR），導(dǎo)致靶基因表達(dá)上調(diào)。在胃癌細(xì)胞中，MALAT1的高表達(dá)使得miR-125a被大量吸附，進(jìn)而上調(diào)了miR-125a靶基因如MMP9、VEGF等的表達(dá)，這些基因參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解和血管生成，促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。通過(guò)敲低MALAT1的表達(dá)，可使細(xì)胞內(nèi)miR-125a的水平升高，重新恢復(fù)miR-125a對(duì)靶基因的抑制作用，從而抑制胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。此外，lncRNAHOTAIR也被證實(shí)與miR-125a存在相互作用。HOTAIR在胃癌中同樣呈高表達(dá)狀態(tài)，它通過(guò)與miR-125a競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，調(diào)控下游靶基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，HOTAIR可以與miR-125a結(jié)合，影響miR-125a對(duì)其靶基因E-cadherin的調(diào)控。E-cadherin是一種重要的細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)降低與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在胃癌細(xì)胞中，HOTAIR的高表達(dá)導(dǎo)致miR-125a對(duì)E-cadherin的上調(diào)作用受到抑制，使得E-cadherin表達(dá)下降，細(xì)胞間黏附力減弱，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。當(dāng)干擾HOTAIR的表達(dá)后，miR-125a對(duì)E-cadherin的調(diào)控作用得以恢復(fù)，E-cadherin表達(dá)上調(diào)，胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力受到抑制。6.3.2與環(huán)狀RNA的相互作用環(huán)狀RNA（circRNA）是一類(lèi)具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，其穩(wěn)定性高、表達(dá)具有組織特異性和疾病相關(guān)性，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。越來(lái)越多的研究表明，circRNA與miR-125a之間存在相互作用，共同參與胃癌的發(fā)病機(jī)制。例如，circRNA-0001649在胃癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，且其高表達(dá)與胃癌的臨床病理特征和不良預(yù)后相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，circRNA-0001649可以作為miR-125a的海綿，通過(guò)吸附miR-125a，抑制miR-125a的功能。機(jī)制研究表明，circR