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第2章細胞工程第1節(jié)植物細胞工程一、植物細胞工程的基本技術[必備知識]1.細胞工程是指應用細胞生物學、分子生物學和發(fā)育生物學等多學科的原理和方法,通過細胞器、細胞或組織水平上的操作,有目的地獲得特定的細胞、組織、器官、個體或其產品的一門綜合性的生物工程。(P31)2.細胞經分裂和分化后,仍然具有產生完整生物體或分化成其他各種細胞的潛能,即細胞具有全能性。(P34)3.誘導愈傷組織期間一般不需要光照,在后續(xù)的培養(yǎng)過程中,每日需要給予適當時間和強度的光照。(P35“探究·實踐”)5.在進行體細胞雜交之前,必須先利用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁,獲得原生質體。(P37)6.植物體細胞雜交技術在打破生殖隔離,實現遠緣雜交育種,培育植物新品種等方面展示出獨特的優(yōu)勢。(P38)[重要圖解]1.植物組織培養(yǎng)流程圖(P35)植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細胞等,培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導其形成完整植株的技術。INCLUDEPICTURE"25YL48.TIF"“①eq\o(→,\s\up7(脫分化))②eq\o(→,\s\up7(再分化))③→試管苗eq\o(→,\s\up7(馴化移栽))完整植株”,其中數字序號處填寫內容依次為:①外植體、②愈傷組織③根、芽等。①具體指的是離體培養(yǎng)的植物器官、組織或細胞;脫分化是指在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導下,已經分化的細胞失去特有結構和功能轉變成未分化細胞的過程;經脫分化形成的是不定形的薄壁組織團塊,這稱為愈傷組織。再分化是指愈傷組織重新分化成芽、根等器官的過程;植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵激素,它們的濃度、用量的比例等都會影響植物細胞的發(fā)育方向。2.植物體細胞雜交技術流程圖(P37~38):人工誘導原生質體融合,融合后得到的雜種細胞再經過誘導可形成愈傷組織,并可進一步發(fā)育成完整的雜種植株。字母a~f表示相關過程,其中a為去除細胞壁的過程,用到的酶是纖維素酶和果膠酶。b表示人工誘導原生質體融合的過程,誘導的方法基本可以分為兩大類—物理法和化學法。物理法包括離心法、電融合法等;化學法包括聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等。過程c是原生質體融合后再生出新的細胞壁的過程。過程d表示脫分化,e表示再分化,過程f用到的技術是植物組織培養(yǎng)技術,其原理是細胞的全能性。甲~戊表示相關細胞或結構,甲、乙不是(是、不是)結構完整的植物細胞,丙表示正融合的原生質體,丁表示雜種細胞,戊表示愈傷組織。二、植物細胞工程的應用[必備知識]1.用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術,被人們形象地稱為植物的快速繁殖技術,也叫作微型繁殖技術。它不僅可以高效、快速地實現種苗的大量繁殖,還可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性。(P39)2.單倍體育種可以先通過花藥(或花粉)培養(yǎng)獲得單倍體植株,然后經過誘導染色體加倍,當年就能培育出遺傳性狀相對穩(wěn)定的純合二倍體植株,這極大地縮短了育種的年限,節(jié)約了大量的人力和物力。(P40)3.植物代謝會產生一些一般認為不是植物基本的生命活動所必需的產物——次生代謝物。如酚類、香料和色素等。(P41)4.植物細胞培養(yǎng)是指在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖的技術。(P41)[易錯提醒]錯點1:誤認為“具有全能性就是(就一定能)體現(實現)全能性”精析:具有全能性:理論上,具有細胞核的活細胞都具有全能性;體現(實現)全能性:只有發(fā)育成完整個體或分化成其他各種細胞才能說明體現(實現)了細胞的全能性。錯點2:植物組織培養(yǎng)中的四個注意點精析:①植物激素在植物組織培養(yǎng)中的作用:生長素/細胞分裂素植物細胞的發(fā)育方向高有利于根的分化、抑制芽的形成低有利于芽的分化,抑制根的形成適中促進愈傷組織的生長簡記為:“高”根,“低”芽,“中”愈傷②由愈傷組織進行細胞分化時,因為生根后不易再生芽,一般要先誘導其生芽,然后誘導其生根,可通過控制培養(yǎng)基中生長素和細胞分裂素的比例來實現。③光照:在誘導愈傷組織階段,對有些植物來說,避光培養(yǎng)有利于細胞脫分化形成愈傷組織。當愈傷組織再分化出芽和葉時,一定要有光照,有利于葉片內葉綠素的合成。④植物組織培養(yǎng)中所需的碳源一般為蔗糖,且蔗糖溶液濃度略大于原生質體內的濃度,少數為葡萄糖和果糖,原因是蔗糖既可提供充足的碳源,又可維持相對適中的滲透壓,而葡萄糖和果糖在與蔗糖提供相同數量碳源的前提下,其造成的滲透壓可能過高。錯點3:有關植物體細胞雜交的6個易錯點精析:(1)誤認為“植物體細胞雜交的結果只是形成雜種細胞”。植物體細胞雜交的結果最終要經過組織培養(yǎng)形成雜種植株。(2)誤認為“同種、不同種植物原生質體融合難易程度相同”。同種植物的原生質體更易融合,不同種植物原生質體的融合需要物理或化學法誘導。(3)誤認為“植物體細胞雜交屬于有性生殖”。植物體細胞雜交過程中沒有有性生殖細胞的結合,因此不屬于有性生殖,應為無性生殖,遺傳物質的傳遞不遵循孟德爾的遺傳定律。(4)誤認為“雜種植株的變異類型屬于基因重組”。雜種植株的染色體數通常是兩親本細胞染色體數目之和,屬于異源多倍體,所以變異類型為染色體變異。(5)誤認為“植物體細胞整合后的都是雜種細胞”。AA和BB體細胞融合成功以后,不僅有AABB型雜種細胞,還能形成AAAA型和BBBB型融合細胞,但只有AABB型細胞是植物體細胞雜交所形成的雜種細胞,因此在雜種細胞形成后還應有一個篩選過程。(6)誤認為“植物組織培養(yǎng)和植物細胞融合的原理相同”。植物組織培養(yǎng)技術的原理是植物細胞的全能性,植物體細胞雜交的原理是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性。錯點4:混淆脫毒苗與抗毒苗而出錯精析:脫毒苗是選擇植物的分生區(qū)如莖尖(剛形成,不含有病毒)進行組織培養(yǎng)而獲得的,屬于細胞工程的范疇??苟久缡前涯晨共《净驅胧荏w細胞中,并通過一定的方法培養(yǎng)形成,屬于基因工程的范疇。第2節(jié)動物細胞工程一、動物細胞培養(yǎng)[必備知識]1.動物細胞培養(yǎng)是指從動物體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞,然后在適宜的培養(yǎng)條件下,讓這些細胞生長和增殖的技術。(P43)2.一般來說,動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件。(P43)3.在體外培養(yǎng)細胞時,必須保證環(huán)境是無菌、無毒的,即需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進行操作。培養(yǎng)液還需要定期更換,以便清除代謝物,防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。(P44)4.動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。在進行細胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。(P44)5.動物細胞培養(yǎng)時細胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上,這種現象稱為細胞貼壁。懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質缺乏等因素而分裂受阻。貼壁細胞在生長增殖時,除受上述因素的影響外,還會發(fā)生接觸抑制現象,即當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞通常會停止分裂增殖。(P44)6.在一定條件下,干細胞可以分化成其他類型的細胞。干細胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中,包括胚胎干細胞和成體干細胞等。(P46)7.2006年,科學家通過體外誘導小鼠成纖維細胞,獲得了類似胚胎干細胞的一種細胞,將它稱為誘導多能干細胞(簡稱iPS細胞),并用iPS細胞治療了小鼠的鐮狀細胞貧血。(P46)[重要圖解]動物細胞培養(yǎng)過程示意圖(P45)人們通常將分瓶之前的細胞培養(yǎng),即動物組織經處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),將分瓶后的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進行傳代培養(yǎng)時,懸浮培養(yǎng)的細胞直接用離心法收集;貼壁細胞需要重新用胰蛋白酶等處理,使之分散成單個細胞,然后再用離心法收集。之后,將收集的細胞制成細胞懸液,分瓶培養(yǎng)。寫出下面動物細胞培養(yǎng)示意圖中①~⑤處的內容:①用機械的方法,或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等,②原代培養(yǎng),③二氧化碳培養(yǎng)箱,④胰蛋白酶,⑤傳代培養(yǎng)。二、動物細胞融合技術與單抗隆抗體[必備知識]1.動物細胞融合技術就是使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。融合后形成的雜交細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。(P48)2.動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理相同。誘導動物細胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。(P48)3.細胞融合技術突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能。(P48)4.制備單克隆抗體需要的技術手段:動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)。制備單克隆抗體的原理:細胞膜的流動性和細胞增殖。5.第一次篩選的目的是篩選出雜交瘤細胞,方法是用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)。經過篩選后未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細胞才能生長。第二次篩選的目的是篩選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞,方法是專一抗體檢測。(P48~49)6.抗體—藥物偶聯物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合,實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。(P50“思考·討論”)[重要圖解]1.制備單克隆抗體過程的示意圖(P48~49)圖中①處應填寫B(tài)淋巴,該細胞是從小鼠脾臟中獲取的,②過程為誘導融合的過程,該過程常用的有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法(動物細胞特有)等,③處應填寫雜交,④過程是選擇培養(yǎng)的過程,該過程所用培養(yǎng)基為特定的選擇培養(yǎng)基,⑤處應填寫雜交瘤,該過程只能獲得此類細胞的原因是在該培養(yǎng)基上,未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細胞才能生長。⑥過程是克隆化培養(yǎng)及抗體檢測的過程,⑦過程是篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞,即抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞,此類細胞分泌的抗體能與特定抗原結合,⑧和⑨是獲取抗體的兩種途徑,⑧指從培養(yǎng)注中獲取,⑨是從小鼠腹水中獲取。2.ADC的作用機制示意圖(P50)ADC通常由_抗體_、__接頭_和_藥物_部分組成。三、動物體細胞核移植技術和克隆動物[必備知識]1.動物細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中,使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動物個體的技術。(P52)2.減數分裂Ⅱ中期(MⅡ期)卵母細胞中的“核”其實是紡錘體—染色體復合物。書中所說的“去核”是去除該復合物。(P52“相關信息”)3.哺乳動物核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植。由于動物胚胎細胞分化程度低,表現全能性相對容易,而動物體細胞分化程度高,表現全能性十分困難,因此動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植。(P52)4.目前動物細胞核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。(P54“相關信息”)[重要圖解]體細胞核移植流程圖(P53)圖中序號①~⑧處應填空的內容依次為:①卵巢,②卵母細胞,③減數第二次分裂中期,④MⅡ中期卵母,⑤去核卵母,⑥供體細胞注入去核卵母細胞,⑦通過電刺激使兩細胞融合,供體核進入受體卵母細胞,形成重構胚,⑧胚胎移植。通過⑦構建重組胚胎后,還需用物理或化學方法激活受體細胞,使其完成細胞分裂和發(fā)育進程。[易錯提醒]錯點1:植物組織培養(yǎng)與動物細胞培養(yǎng)的“有”與“沒有”、“能”與“不能”精析:(1)植物組織培養(yǎng)過程中有脫分化和再分化,而動物細胞培養(yǎng)過程中沒有脫分化和再分化過程。(2)植物組織培養(yǎng)能獲得新個體,體現了細胞的全能性,而動物細胞培養(yǎng)只能得到細胞,不能體現細胞的全能性。錯點2:動物細胞培養(yǎng)中兩組易錯概念的辨析精析:(1)細胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細胞貼壁。細胞進行有絲分裂,數目不斷增多,當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞就會停止分裂增殖,這種現象稱為細胞的接觸抑制。(2)原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)。①原代培養(yǎng):細胞懸液第一次在瓶中培養(yǎng),沒有分瓶培養(yǎng)之前的細胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞核型正常。②傳代培養(yǎng):原代培養(yǎng)的細胞生長、增殖一定時間后,由于空間不足或細胞密度過大導致營養(yǎng)枯竭,影響細胞的生長,因此需要重新用胰蛋白酶等處理,進行分瓶擴大培養(yǎng),即傳代培養(yǎng)。一般情況下,細胞傳至10~50代后,出現核型異常,細胞增殖會明顯減緩,甚至完全死亡。錯點3:混淆了“懸浮生長和貼壁生長”細胞的培養(yǎng)方法而出錯精析:①懸浮生長細胞:原代培養(yǎng)→分裂受阻→離心法收集→制成細胞懸液eq\o(→,\s\up7(分瓶))傳代培養(yǎng)。②貼壁生長細胞:原代培養(yǎng)→分裂受阻→胰蛋白酶處理→離心法收集→制成細胞懸液eq\o(→,\s\up7(分瓶))傳代培養(yǎng)。錯點4:動物細胞培養(yǎng)過程中“酶”相關易錯點精析:①動物細胞培養(yǎng)過程中不同階段使用酶的目的并不完全相同。動物細胞的整個培養(yǎng)過程中可能多次用到胰蛋白酶或膠原蛋白酶,第一次使用的目的是使組織細胞分散開,這樣一方面保證細胞所需要的營養(yǎng)供應;另一方面能保證細胞內有害代謝物的及時排出;貼壁細胞傳代培養(yǎng)時使用的目的是使細胞從瓶壁上脫離下來,分散成單個細胞,便于分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。②使用酶處理時,并不是時間越長越好。使用胰蛋白酶時,要控制好作用時間,因為胰蛋白酶不僅能分解細胞間的蛋白質,長時間作用還會分解細胞膜蛋白等,對細胞造成損傷。進行動物細胞培養(yǎng)時不能用胃蛋白酶分散細胞,主要是因為pH不合適。錯點5:混淆三種干細胞的來源及特點而出錯精析:三種干細胞的比較比較項目胚胎干細胞成體干細胞誘導多能干細胞來源早期胚胎成體組織或器官中誘導高度分化的組織細胞形成特點具有分化成為成年動物體內的任何一種類型的細胞,并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能具有組織特異性,只能分化成特定的細胞或組織,不具有發(fā)育成完整個體的能力類似胚胎干細胞;誘導無需破壞胚胎,應用前景更廣泛錯點6:混淆動物細胞整合與植物體細胞雜交的原理、方法及結果而出錯精析:動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較比較植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性步驟酶解法去掉細胞壁后,誘導原生質體融合,形成雜種細胞,再經植物組織培養(yǎng)形成雜種植株分散成單個細胞后誘導細胞融合,形成雜交細胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法、電融合法、離心法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法結果形成雜種植株形成雜交細胞,以生產細胞產品意義打破生殖隔離,實現遠緣雜交育種突破有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能錯點7:混淆單克隆抗體制備過程中兩次篩選而出錯精析:單克隆抗體制備過程中兩次篩選的比較比較第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后得到多種融合細胞,還有未融合的細胞等由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,所以經選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細胞中有能產生其他抗體的細胞篩選目的篩選出雜交瘤細胞篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選;未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細胞才能生長用96孔板培養(yǎng),在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,經多次篩選得到足夠數量的能分泌所需抗體的細胞錯點8:對B淋巴細胞與骨髓瘤細胞經誘導處理后細胞種類判斷錯誤精析:B淋巴細胞與骨髓瘤細胞經誘導融合后,培養(yǎng)基中共出現5種細胞,其中融合的細胞有3種(如融合的話,只考慮兩兩融合)。錯點9:不明確去核的卵細胞在動物細胞核全能性的表達中的作用而出錯精析:細胞核全能性的表達,必須提供促進細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件,還要保證細胞的完整性,這樣去核的卵細胞是最合適的受體細胞。因為卵細胞體積大、易操作,含有促使細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。該技術形成重組細胞發(fā)育成一個新個體,體現了動物細胞核的全能性而非動物細胞的全能性。錯點10:不明確核移植動物親子代性狀的關系而出錯精析:核移植中供體動物、提供卵母細胞的動物、代孕動物和克隆動物之間的關系:克隆動物絕大部分性狀與供體動物相同,少數由線粒體DNA控制的性狀與提供卵母細胞的動物相同,與代孕動物的性狀無遺傳關系。錯點11:誤認為動物細胞培養(yǎng)時加入5%CO2的目的是維持氣體平衡或用于呼吸精析:動物細胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),加入CO2的目的是維持培養(yǎng)液的pH。錯點12:不清楚動物細胞克隆化培養(yǎng)時為何常選10代以內的細胞,而瘤細胞卻為50代以后精析:取供體動物的體細胞培養(yǎng),一般選用傳至10代以內的細胞,因為10代以內的細胞一般能保持正常的二倍體核型,保證了供體細胞正常的遺傳基礎。欲獲得無限增殖的瘤細胞則往往在50代以后,其遺傳物質已發(fā)生變化,具癌變特性。第3節(jié)胚胎工程一、胚胎工程的理論基礎[必備知識]1.胚胎工程是指對生殖細胞、受精卵或早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理,然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內生產后代,以滿足人類的各種需求。胚胎工程技術包括體外受精、胚胎移植和胚胎分割等。(P56)2.在自然條件下,哺乳動物的受精在輸卵管內完成。(P56)3.在精子觸及卵細胞膜的瞬間,卵細胞膜外的透明帶會迅速發(fā)生生理反應,阻止后來的精子進入透明帶。然后,精子入卵。精子入卵后,卵細胞膜也會立即發(fā)生生理反應,拒絕其他精子再進入卵內。(P57)4.精子入卵后,尾部脫離,原有的核膜破裂并形成一個新的核膜,最后形成一個比原來精子的核還大的核,叫作雄原核。與此同時,精子入卵后被激活的卵子完成減數分裂Ⅱ,排出第二極體后,形成雌原核。(P57)5.多數哺乳動物的第一極體不進行減數分裂Ⅱ,因而不會形成兩個第二極體。在實際胚胎工程操作中,常以觀察到兩個極體或者雌、雄原核作為受精的標志。(P58“相關信息”)6.聚集在胚胎一端的細胞形成內細胞團,將來發(fā)育成胎兒的各種組織;而沿透明帶內壁擴展和排列的細胞,稱為滋養(yǎng)層細胞,它們將來發(fā)育成胎膜和胎盤。(P58)[重要圖解]1.哺乳動物胚胎的早期發(fā)育示意圖(P58)下圖甲、乙表示胚胎發(fā)育的具體階段,①~③表示相關結構)(1)開始發(fā)育場所及分裂方式:受精卵形成后即在輸卵管內進行有絲分裂,開始發(fā)育。(2)卵裂:胚胎發(fā)育早期,有一段時間是在透明帶內進行分裂,細胞的數量不斷增加,但胚胎的總體積并不增加,這種受精卵的早期分裂稱為卵裂。(3)桑椹胚:當卵裂產生的子細胞逐漸形成致密的細胞團,形似桑椹時,這時的胚胎稱為桑椹胚。(4)囊胚:上圖中的乙表示囊胚。桑椹胚進一步發(fā)育,細胞逐漸分化。聚集在胚胎一端的細胞形成內細胞團,即上圖中序號②,內細胞團將來發(fā)育成胎兒的各種組織,而沿透明帶內壁擴展和排列的細胞,稱為滋養(yǎng)層細胞,即上圖中序號③,它們將來發(fā)育成胎膜和胎盤。隨著胚胎的進一步發(fā)育,胚胎的內部出現了含有液體的腔—囊胚腔,即上圖中序號①,這個時期的胚胎叫做囊胚。囊胚進一步擴大,會導致透明帶破裂,胚胎從其中伸展出來,這一過程叫作孵化。孵化非常重要,如果不能正常孵化,胚胎就無法繼續(xù)發(fā)育。(5)原腸胚:囊胚孵化后,將發(fā)育形成原腸胚。原腸胚表面的細胞層為外胚層,向內遷移的細胞形成內胚層。隨著發(fā)育的進行,一部分細胞還會在內、外兩個胚層之間形成中胚層。這三個胚層將逐漸分化形成各種組織、器官等。二、胚胎工程技術及其應用[必備知識]1.哺乳動物的體外受精技術主要包括卵母細胞的采集、精子的獲取和受精等步驟。(P60)2.采集到的卵母細胞和精子,要分別對它們進行成熟培養(yǎng)和獲能處理,然后才能用于體外受精。(P60)3.胚胎移植是指將通過體外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物體內,使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術。其中提供胚胎的個體稱為“供體”,接受胚胎的個體叫“受體”。通過任何一項技術(如轉基因、核移植和體外受精等)獲得的胚胎,都必須移植給受體才能獲得后代。(P61)4.胚胎移植實質上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉移。(P62“思考·討論”)5.進行胚胎移植的優(yōu)勢是可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力。(P62)6.超數排卵是指應用外源促性腺激素,誘發(fā)卵巢排出比自然情況下更多的成熟卵子。(P62“相關信息”)7.胚胎分割所需要的主要儀器設備為體視顯微鏡和顯微操作儀。在進行胚胎分割時,應選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑葚胚或囊胚,將它移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中,然后在顯微鏡下用分割針或分割刀分割。在分割囊胚階段的胚胎時,要注意將內細胞團均等分割。(P62)[重要圖解]1.牛胚胎移植示意圖(P61):胚胎移植主要包括供體、受體的選擇和處理,配種或人工授精,胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存,胚胎的移植,以及移植后的檢查等步驟。以牛胚胎移植為例,其過程如下圖所示。圖中甲為優(yōu)良供體母牛,一般具有遺傳性狀優(yōu)良、生產能力強等特點。乙為受體母牛,有健康的體質和正常繁殖能力。丙為優(yōu)良公牛,丁為具有優(yōu)良性狀的后代。過程①為進行同期發(fā)情處理、②為超數排卵處理、③為受體性情、④為發(fā)情配種或人工受精、⑤為收集胚胎并檢查、⑥為胚胎移植、⑦為對受體進行妊娠檢查。整個過程中提供胚胎的個體是甲,接受胚胎的個體乙。2.牛胚胎性別鑒定和分割示意圖(P63)[易錯提醒]錯點1:受精過程認識的“三個誤區(qū)”精析:(1)成熟的精子并不代表具有受精能力,必須獲能后才具備受精能力。獲能是指精子獲得受精“能力”,而不是獲得能量。(2)雌、雄原核不能理解成卵子、精子原來的核,而是在原來細胞核的基礎上形成的新核,原核膜已破裂。(3)受精的標志≠受精完成的標志:受精的標志是觀察到兩個極體或雌、雄原核,受精完成的標志是雌、雄原核的融合。錯點2:混淆防止多精入卵的屏障及其意義而出錯精析:(1)防止多精入卵的兩道屏障:精子接觸卵細胞膜的瞬間,卵細胞膜外的透明帶發(fā)生生理反應,阻止后來的精子進入透明帶;精子入卵后,卵細胞膜立即發(fā)生生理反應,拒絕其他精子再進入卵內。(2)這兩道屏障可以保證受精卵中遺傳物質與親代體細胞一致,從而保證遺傳的穩(wěn)定性。錯點3:不能準確判斷卵裂期胚胎發(fā)育過程中物質和體積變化而出錯精析:卵裂期胚胎發(fā)育過程中物質和體積變化的規(guī)律:(1)有機物:胚胎沒有和母體建立聯
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