pcr考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.PCR反應(yīng)中，DNA變性所需的溫度一般是（）A.55-60℃B.72℃C.90-95℃D.37℃答案：C3.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.限制酶B.DNA連接酶C.Taq酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C4.PCR反應(yīng)體系中，引物的作用是（）A.提供模板B.提供能量C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.促進(jìn)DNA聚合答案：C5.在PCR反應(yīng)中，延伸步驟的溫度一般為（）A.55-60℃B.72℃C.90-95℃D.37℃答案：B6.PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)一般為（）A.1-5次B.10-20次C.20-30次D.50-60次答案：C7.下列哪項(xiàng)不是影響PCR反應(yīng)的因素（）A.模板質(zhì)量B.引物濃度C.光照強(qiáng)度D.酶的活性答案：C8.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物的說法正確的是（）A.都是雙鏈DNAB.都是單鏈DNAC.可以是雙鏈或單鏈DNAD.是RNA答案：C9.PCR反應(yīng)中，鎂離子的作用是（）A.激活酶活性B.穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)C.作為底物D.抑制反應(yīng)答案：A10.對(duì)于一個(gè)特定的PCR反應(yīng)，引物長(zhǎng)度一般為（）A.5-10個(gè)堿基B.15-30個(gè)堿基C.50-100個(gè)堿基D.100-200個(gè)堿基答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.DNA聚合酶D.dNTPs答案：ABCD2.以下哪些情況可能導(dǎo)致PCR擴(kuò)增失敗（）A.引物設(shè)計(jì)不當(dāng)B.模板DNA降解C.酶失活D.反應(yīng)體系中存在抑制劑答案：ABCD3.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.基因診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.基因克隆D.遺傳疾病研究答案：ABCD4.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素有（）A.長(zhǎng)度B.特異性C.GC含量D.退火溫度答案：ABCD5.在PCR反應(yīng)中，以下哪些物質(zhì)可以作為模板（）A.基因組DNAB.cDNAC.質(zhì)粒DNAD.線粒體DNA答案：ABCD6.PCR反應(yīng)的特點(diǎn)包括（）A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.操作簡(jiǎn)便D.快速高效答案：ABCD7.下列關(guān)于Taq酶的描述正確的是（）A.熱穩(wěn)定B.來源于嗜熱微生物C.催化DNA合成D.對(duì)鎂離子有依賴性答案：ABCD8.以下屬于PCR衍生技術(shù)的有（）A.巢式PCRB.反向PCRC.熒光定量PCRD.多重PCR答案：ABCD9.PCR反應(yīng)中，dNTPs的作用有（）A.提供合成原料B.參與能量代謝C.維持反應(yīng)體系的離子平衡D.穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)答案：A10.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.酶的質(zhì)量答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)只能擴(kuò)增雙鏈DNA。（）答案：錯(cuò)誤2.Taq酶在PCR反應(yīng)中可以反復(fù)使用。（）答案：正確3.引物的退火溫度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤4.PCR反應(yīng)不需要模板也能進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤5.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤6.PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度是固定不變的。（）答案：錯(cuò)誤7.增加PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)一定會(huì)提高產(chǎn)物量。（）答案：錯(cuò)誤8.引物與模板的結(jié)合是完全互補(bǔ)的。（）答案：錯(cuò)誤9.在PCR反應(yīng)中，鎂離子濃度過高會(huì)抑制反應(yīng)。（）答案：正確10.熒光定量PCR可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程。（）答案：正確四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱到90-95℃，使雙鏈DNA解開為單鏈；退火是將溫度降低到引物的退火溫度（一般55-60℃），使引物與模板鏈互補(bǔ)結(jié)合；延伸是在72℃下，Taq酶以dNTPs為原料在引物的引導(dǎo)下合成新的DNA鏈。2.引物設(shè)計(jì)的原則有哪些？答案：引物設(shè)計(jì)原則包括：長(zhǎng)度一般為15-30個(gè)堿基；具有特異性，避免與非靶序列結(jié)合；GC含量適中，一般40-60%；引物之間不能互補(bǔ)形成二聚體；退火溫度合適等。3.簡(jiǎn)述Taq酶在PCR反應(yīng)中的作用。答案：Taq酶是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，在PCR反應(yīng)中以dNTPs為原料，依據(jù)引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)，催化合成與模板互補(bǔ)的新的DNA鏈，從而實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。4.說出至少三種PCR衍生技術(shù)及其用途。答案：巢式PCR用于提高特異性和靈敏度，檢測(cè)低拷貝數(shù)的模板；熒光定量PCR用于定量分析基因表達(dá)量；多重PCR可同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)目標(biāo)片段，用于檢測(cè)多種病原體或基因位點(diǎn)。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢(shì)與局限性。答案：優(yōu)勢(shì)：特異性強(qiáng)能準(zhǔn)確檢測(cè)病原體基因，靈敏度高可檢測(cè)低濃度病原體，操作相對(duì)簡(jiǎn)便快速。局限性：容易受污染導(dǎo)致假陽性，對(duì)一些復(fù)雜基因變異檢測(cè)可能存在不足，無法直接檢測(cè)病原體的活性等。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可通過優(yōu)化引物設(shè)計(jì)確保特異性，提高退火溫度，使用高質(zhì)量的模板、酶和試劑，采用巢式PCR等衍生技術(shù)提高特異性。3.闡述PCR反應(yīng)中模板質(zhì)量對(duì)結(jié)果的影響。答案：高質(zhì)量模板可使PCR反應(yīng)正常進(jìn)行，產(chǎn)量和特異性較好。若模板降解會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或產(chǎn)物量