3 3 3 3 4 4 5 10 12一、申請(qǐng)人名稱江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司二、申請(qǐng)人住所蘇州市工業(yè)園區(qū)星湖街218號(hào)生物納米園C4樓201、301室三、生產(chǎn)地址蘇州工業(yè)園區(qū)金雞湖大道99號(hào)納米城西北區(qū)16棟2層，蘇州市工業(yè)園區(qū)星湖街218號(hào)生物納米園C4樓201、301室一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分試劑盒由2部分組成，分別為人PCA3/PSA基因mRNA提取試劑、人PCA3/PSA基因檢測(cè)試劑。（具體內(nèi)容詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于體外檢測(cè)總PSA在4~10ng/mL（灰度區(qū)）的疑似前列腺癌患者尿液樣本中PCA3基因及PSA基因的表達(dá)量，通過(guò)計(jì)算PCA3基因與PSA基因表達(dá)量的比值，作為是否需要穿刺活檢的輔助診斷指本產(chǎn)品不能單獨(dú)決定是否需要穿刺活檢，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢查等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，做出診斷。本產(chǎn)品不得單獨(dú)作為疾病管理決定的依據(jù)。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的前列腺癌新的標(biāo)記物PCA3（Prostatecancerantigen3在前列腺癌中高表達(dá)，但在良性前列腺組織、其他類型的正常組織或腫瘤中不表達(dá)或極低表達(dá)。PSA為前列腺特異抗原，PSA具有組織特異性，只存在于人前列腺腺泡及導(dǎo)管上皮細(xì)胞胞漿中，不表達(dá)于其他細(xì)胞，但它并無(wú)腫瘤特異性。PCA3得分不會(huì)因前列腺體積大小而改變，而血清f/tPSA卻受前列腺增大因素的影響，在前列腺炎、前列腺增生、尿道感染等非癌性疾病中也會(huì)升高。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理本試劑盒基于磁珠特異性捕獲和一步法PCR技術(shù)檢測(cè)原理，定性檢測(cè)行直腸指檢后尿液中PCA3、PSA基因。d（T）磁珠特異性結(jié)合含polyA的捕獲探針，同時(shí)針對(duì)PCA3、PSAmRNA基因序列設(shè)計(jì)的捕獲探針與互補(bǔ)的靶序列特異性結(jié)合，從而對(duì)提取后的RNA采用一步法進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)cDNA合成與PCR反應(yīng)在同反應(yīng)體系中進(jìn)行。同時(shí)PCR反應(yīng)體系中含有防止PCR產(chǎn)物污染的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG能有效地水解單鏈或雙鏈DNA上的尿嘧啶，從而避免了PCR模板污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性。檢測(cè)樣本與校準(zhǔn)品、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品一起進(jìn)行提取和擴(kuò)增，通過(guò)校準(zhǔn)曲線獲得PCA3和PSA基因的濃度，進(jìn)而計(jì)算出PCA3基因與PSA基因的比值得分（Score值）。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品的主要原材料包括：磁珠、捕獲探針、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、尿嘧啶-DNA糖基化酶、RNase抑制劑、Taq酶、引物和探針等。這些原材料均是通過(guò)外購(gòu)的方式獲得。其中引物、探針的序列由申請(qǐng)人自通過(guò)功能性試驗(yàn)篩選出合格供應(yīng)商，制定了主要原材料的技術(shù)要求和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗(yàn)合格。2.企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況本產(chǎn)品企業(yè)參考品包括提取參考品、準(zhǔn)確度參考品、陽(yáng)性符合率參考品，特異性參考品、PCA3交叉特異性參考品、PSA交叉特異性參考品、線性參考品、定量限參考品和精密度參考品。提取參考品包括PCA3和PSA兩個(gè)基因的兩個(gè)濃度水平的樣本；準(zhǔn)確度參考品包括PCA3和PSA兩個(gè)基因的兩個(gè)濃度水平樣本；陽(yáng)性符合率參考品10個(gè)，為不同Score值水平的前列腺癌尿液樣本；特異性參考品10個(gè)，為非前列腺癌患者尿液樣本；PCA3交叉特異性參考品，為包含PSA基因樣本；PSA交叉特異性參考品，為包含PCA3基因樣本；線性參考品包括PCA3和PSA兩個(gè)基因的5個(gè)不同濃度梯度的樣本；定量限參考品2種，分別為PCA3和PSA基因的定量限濃度水平的樣本；精密度參考品包括PCA3和PSA2個(gè)基因的2個(gè)不同濃度的樣本。本試劑盒設(shè)置了陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品各兩支。質(zhì)控品由分別包含不同濃度體外轉(zhuǎn)錄PCA3RNA和體外轉(zhuǎn)錄PSARNA的樣本組成，可用于檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請(qǐng)人對(duì)試劑盒反應(yīng)體系的研究包括：捕獲液中HEPES濃度的確定、捕獲液中LiCl濃度的確定、磁珠用量的確定、捕獲探針用量的確定、引物探針濃度的確定、DNA聚合酶用量的確定、逆轉(zhuǎn)錄酶濃度的確定、UDG酶濃度的確定、鎂離子濃度的確定、dNTP濃度的確定、PCR反應(yīng)體積的確定、PCR模板體積的確定。對(duì)反應(yīng)條件包括UDG酶作用溫度和時(shí)間、逆轉(zhuǎn)錄溫度時(shí)間、PCR反應(yīng)退火溫度與時(shí)間、反應(yīng)循環(huán)數(shù)等。通過(guò)功能性實(shí)驗(yàn)，最終確定了最佳反應(yīng)體系。申請(qǐng)人根據(jù)試劑盒中試劑及組件的主要生產(chǎn)工藝的研究結(jié)果，確定了最佳的生產(chǎn)工藝。（三）分析性能評(píng)估精密度、檢出限、分析特異性（交叉反應(yīng)、干擾試驗(yàn)）、線性等。申請(qǐng)人提交了有效運(yùn)行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的三批產(chǎn)品在適用機(jī)型上的性能評(píng)估資料。在核酸提取性能研究中，申請(qǐng)人采用試劑盒包含的提取試劑，對(duì)5例高值前列腺癌樣本進(jìn)行提取，評(píng)價(jià)提取濃度、純度等性能，結(jié)果表明該核酸提取試劑的提取性能符合研制設(shè)計(jì)要求。陽(yáng)性符合率參考品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果符合接受標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)選擇了若干例臨床確診為前列腺癌或非前列腺癌的臨床尿液樣本，與數(shù)字PCR方法同步進(jìn)行真實(shí)臨床尿液樣本檢測(cè)。測(cè)試結(jié)果：本檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果與數(shù)字PCR方法檢測(cè)結(jié)果一致性良好，濃度檢測(cè)結(jié)果符合接受標(biāo)準(zhǔn)。精密度研究中，申請(qǐng)人使用三批試劑，分別對(duì)中陽(yáng)性、臨界陽(yáng)性和陰性3個(gè)水平的樣本，進(jìn)行了20天的多次檢測(cè)，對(duì)批內(nèi)/間、操作者間、日內(nèi)/間、室內(nèi)精密度和室間精密度等進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：精密度良好，PCA3基因和PSA基因檢測(cè)濃度對(duì)數(shù)值的變異系數(shù)（CV，%）≤5%；PCA3Score值的變異系數(shù)（CV，%）≤20%。檢出限的研究中，申請(qǐng)人使用三批試劑，檢測(cè)兩個(gè)靶基因不同濃度梯度的樣本，將≥95%陽(yáng)性檢出率的濃度水平作為確定的檢出限，并進(jìn)行檢出限驗(yàn)證。最終確定PCA3檢出限不高于1000copies/mL；PSA檢測(cè)限不高于6000copies/mL。分析特異性研究包含交叉反應(yīng)和干擾研究，申請(qǐng)人對(duì)PCA3與PSA基因之間的交叉、與非靶標(biāo)的交叉以及檢測(cè)樣本相關(guān)常見(jiàn)微生物金黃色葡萄球菌）的交叉反應(yīng)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：檢測(cè)試劑與上述病原體無(wú)交叉。申請(qǐng)人對(duì)尿液常見(jiàn)的外源及內(nèi)源干擾物質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：白蛋白(≤60g/L）、未結(jié)合膽紅素(≤342μmol/L）、膽固醇(≤13mmol/L）、葡萄糖(≤55mmol/L）、血紅蛋白(≤2g/L）、免疫球蛋白G(≤32mg/L）、甘油三酸脂(≤37mmol/L）、尿酸(≤對(duì)乙酰氨基酚(≤1.324mmol/L）、乙酰水楊酸(≤3.62mmol/L）、阿μmol/L）、阿替洛爾(≤37.6μmol/L）、阿托伐他汀(≤25mg/L）、胺(≤2.25g/L）、呋喃苯胺酸(≤0.181mmol/L）、布洛芬(≤2.425鹽酸二甲雙胍(≤0.31mmol/L）、硒(≤1mg/L）、西地那非(≤12.95mmol/L）、多沙唑嗪(≤1.33pmol/L）、呋磺胺(≤0.181mmol/L）、鋸棕櫚(≤11.25g/L）、柳氮磺胺吡啶(≤0.754mmol/L未對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾影響。在線性研究中，申請(qǐng)人采用三批成品試劑盒，對(duì)包含高濃度靶基因的樣本進(jìn)行梯度稀釋后重復(fù)檢測(cè)，確定PCA3樣本線性范圍為1.25（四）陽(yáng)性判斷值研究申請(qǐng)人采用總PSA在4~10ng/mL（灰度區(qū)）的疑似前列腺癌患者的尿液樣本212例。使用申報(bào)產(chǎn)品對(duì)臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)算Score值，與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，經(jīng)ROC曲線分析，根據(jù)約登指數(shù)最大原則，確定試劑盒的陽(yáng)性判斷值為：Score值>40.1518時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，Score值≤40.1518時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性。（五）穩(wěn)定性研究申請(qǐng)人對(duì)本產(chǎn)品進(jìn)行了穩(wěn)定性研究，包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性等。研究結(jié)果表明：試劑盒組分1于2~8℃保存，組分2于-20℃±3℃中保存，其中2×PCA3反應(yīng)液和2×PSA反應(yīng)液于-20℃±3℃避光保存。試劑盒有效期為12個(gè)月。試劑盒的開(kāi)封穩(wěn)定性研究結(jié)果支持說(shuō)明書(shū)聲稱。樣本穩(wěn)定性研究：為考察該產(chǎn)品對(duì)不同條件下儲(chǔ)存不同時(shí)間的樣本的檢出性能，申請(qǐng)人使用該產(chǎn)品分別對(duì)短期儲(chǔ)存、長(zhǎng)期儲(chǔ)存的樣本進(jìn)行測(cè)試，研究結(jié)果支持說(shuō)明書(shū)聲稱。三、臨床評(píng)價(jià)概述申請(qǐng)人在上海市第十人民醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院、昆山市第一人民醫(yī)院和浙江省人民醫(yī)院共四家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)。采用試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，同時(shí)進(jìn)行臨床常規(guī)使用的游離PSA與總PSA比值（fPSA/tPSA）與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)比較研究，并進(jìn)一步比較試驗(yàn)體外診斷試劑與fPSA/tPSA的臨床性能，從而確認(rèn)試驗(yàn)體外診斷試劑的預(yù)期用途，其中，臨床參考標(biāo)準(zhǔn)采用穿刺活檢病理結(jié)果。臨床試驗(yàn)共前瞻性納入556例疑似前列腺癌患者，主要包括總PSA（tPSA）在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者。試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)樣本類型為尿液樣本，PSA指標(biāo)檢測(cè)樣本類型為血清。臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，針對(duì)tPSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比的臨床靈敏度為79.1%（95%CI：69.7%，86.2%臨床特異度為83.1%（95%CI：76.1%，（95%CI：65.5%，82.6%陰性預(yù)測(cè)值為86.1%（95%CI：79.4%，90.9%fPSA/tPSA與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比的臨床靈敏度為64.8%（95%CI：54.6%，73.9%臨床特異度為76.1%（95%CI：68.4%，82.3%總符合率為71.7%（95%CI：65.6%，77.1%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為83.3%）。上述結(jié)果顯示，針對(duì)PSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，試驗(yàn)體外診斷試劑具有較好的臨床性能。綜上，試驗(yàn)體外診斷試劑的臨床性能滿足技術(shù)審評(píng)要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定根據(jù)申請(qǐng)人提供的申報(bào)資料，經(jīng)綜合評(píng)價(jià)，在目前認(rèn)知水平上，認(rèn)為該產(chǎn)品的上市為適用人群帶來(lái)的受益大于風(fēng)險(xiǎn)。但為保證用械安全，基于對(duì)主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的規(guī)避，需要在說(shuō)明書(shū)中提示以下信息：1.預(yù)期用途本產(chǎn)品用于體外檢測(cè)總PSA在4~10ng/mL（灰度區(qū)）的疑似前列腺癌患者尿液樣本中PCA3基因及PSA基因的表達(dá)量，通過(guò)計(jì)算PCA3基因與PSA基因表達(dá)量的比值，作為是否需要穿刺活檢的輔助診斷指本產(chǎn)品不能單獨(dú)決定是否需要穿刺活檢，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢查等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，做出診斷。本產(chǎn)品不得單獨(dú)作為疾病管理決定的依據(jù)。2.警示及注意事項(xiàng)：該試劑盒說(shuō)明書(shū)中明確了該試劑盒檢查方法的局限性及使用中的注意事項(xiàng)。本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)。依據(jù)《醫(yī)療器理辦法》（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對(duì)申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià),申報(bào)產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認(rèn)知水平，建議準(zhǔn)予注冊(cè)。附件：產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)本產(chǎn)品用于體外檢測(cè)總PSA在4~10ng/mL（灰度區(qū)）的疑似前列腺癌患者尿液樣本中PCA3基因及PSA基因的表本產(chǎn)品不能單獨(dú)決定是否需要穿刺活檢，臨床和其他實(shí)驗(yàn)室檢查等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，做出診斷腺腺泡及導(dǎo)管上皮細(xì)胞胞漿中，不表達(dá)于其他細(xì)胞，但它并無(wú)腫瘤特異性[4]。影響，在前列腺炎、前列腺增生、尿道感染等非癌性疾病中也會(huì)升高[5,提取后的RNA采用一步法進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)cDNA合成與PCR反試劑盒由兩部分組成，分別為人PCA3/PSA基因mRNA提取試劑、人表1人PCA3/PSA基因mRNA提取試劑組分規(guī)格（12測(cè)123412×PCA3反應(yīng)液23逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase抑制劑、尿嘧啶-DNA糖456789PSA校準(zhǔn)品4細(xì)胞保存液（生產(chǎn)廠家：江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司，備案憑證編號(hào)：蘇3、請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明上規(guī)定的條件進(jìn)行保存，凍存試劑避免反復(fù)凍融，凍融2）處理后的尿液樣本，應(yīng)立即提取RNA進(jìn)行檢4）取出PCA3校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、PSA校200μLPCA3捕獲液（磁珠須混勻取PSA校準(zhǔn)品1~5、陽(yáng)性質(zhì)控品2和陰性應(yīng)，經(jīng)短暫離心后，1管加入200μLPCA3捕獲液，另1管加入200μLPSA捕4）取出后上下顛倒8~10次混勻后，室溫靜置40min；總體積(μL）總體積(μL）A11B2PSA校準(zhǔn)品22C33D4PSA校準(zhǔn)品44E55F6G7H84）分別向每個(gè)PCA3反應(yīng)孔中加入26.25μLPCA3反應(yīng)混合液；向每個(gè)PSA反應(yīng)孔中加入26.25μLPSA反應(yīng)5）分別向?qū)?yīng)的反應(yīng)孔中加入各種濃度的校），}3.3選擇“FilterComb4“50”。3.5選擇“NoiseBand”窗口，將“noiseband”設(shè)定為”Noise3.6選擇“Analysis”窗口，選擇“Thresho），“Threshold(Manual)”，將“threshold”設(shè)定與NoiseBand的值一致。123<mL/PSA4>mL/PSA56—不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、以及不當(dāng)?shù)脑囼?yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能2）PCA3試劑檢測(cè)PCA3交叉特異性參考品，素(≤342μmol/L）、膽固醇(≤13mmol/L）、葡萄糖(≤55mmol/L）、血紅蛋白 (≤2g/L）、免疫球蛋白G(≤32mg/L）、甘油三酸脂(≤37mmol/L）、尿酸(≤1.4mmol/L）、紅細(xì)胞(≤5.10×107cell/L）、白細(xì)胞(≤7.60×107cell/L）、對(duì)乙度他雄胺(≤1.5mg/L）、非那雄胺(≤15mg/L）、氟西汀(≤11.2μmol/L）、氟他胺(≤2.25g/L）、呋喃苯胺酸(≤0.181mmol/L）、布洛芬(≤2.425mmol/L）、左硒(≤1mg/L）、西地那非(≤12.9nmol/L）、坦索羅辛(≤1.2μg/L）、特拉唑嗪 (≤7.8μmol/L）、鈣(≤5mmol/L）、多沙唑嗪(≤1.33pmol/L）、強(qiáng)力霉素(≤1.35pmol/L）、呋磺胺(≤0.181mmol/L）、鋸棕櫚(≤11.25g/L）、柳氮磺胺吡啶 癌患者，主要包括tPSA位于4~10ng/mL（灰度區(qū)）的疑似前列腺癌患者。采用PSA比值（fPSA/tPSA）與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究，并進(jìn)一步比較本產(chǎn)品與1．本試劑盒檢測(cè)目標(biāo)基因主要位于尿液脫落細(xì)胞中，尿液樣3．檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到樣品本身的來(lái)