··········································情境四：藥物定量分析

任務(wù)一：分析方法的效能指標(biāo)分析方法的效能指標(biāo)分析方法的效能指標(biāo)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于檢驗(yàn)的要求。對(duì)新建立的分析方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證；當(dāng)藥物生產(chǎn)的工藝有變動(dòng)，制劑的處方有變動(dòng)或?qū)υ治龇椒ㄟM(jìn)行修訂時(shí)，也需要對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的指標(biāo)：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性等。分析方法的效能指標(biāo)

1.準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指分析方法所得的測定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。準(zhǔn)確度一般用回收率來表示。例如制劑含量測定方法的回收試驗(yàn)，可將已知量的測定組分，加入到處方比例的附加劑中，照驗(yàn)證的方法測定，根據(jù)測定結(jié)果計(jì)算回收率收率。分析方法的效能指標(biāo)如不能得到制劑的全部組分，也可將已知量的測定組分加入一定量已知含量的樣品中，照驗(yàn)證方法測定，根據(jù)測定結(jié)果按下式計(jì)算回收率：分析方法的效能指標(biāo)取連蒲雙清片粉適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿40mg)，精密稱取，精密加入鹽酸小檗堿約40mg，用0.05mol/LH2SO4溶解。放冷置室溫，定量轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，并稀釋至刻度。過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液5.00ml于100ml量瓶中定容，按所選定的方法計(jì)算回收率。測定結(jié)果見下表。案例：回收率試驗(yàn)分析方法的效能指標(biāo)分析方法的效能指標(biāo)

2.精密度指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻樣品,經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來表示。若對(duì)同一樣品重復(fù)測定了n次，第i次的測定結(jié)果為xi

，測定結(jié)果的平均值為X。則標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算公式分析方法的效能指標(biāo)由于SD的大小與所使用的單位以及測定結(jié)果數(shù)值的大小有關(guān)，所以更常使用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來表示精密度。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算公式為：方法的精密度好是準(zhǔn)確度高的前提，但方法的精密度好、準(zhǔn)確度不一定高，只有在消除了系統(tǒng)誤差的前提下，精密度好，準(zhǔn)確度也才高。分析方法的效能指標(biāo)

專屬性是指在其他組分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在可的情況下，分析方法能準(zhǔn)確地測出被測組分的能力。原料藥物中常含有雜質(zhì)，如合成的原料、中間體、副產(chǎn)物以及降解產(chǎn)物等。制劑中則含有輔料，分析方法的專屬性高，就可以排除這些干擾組分的影響，準(zhǔn)確地測定被測組分。

3.專屬性分析方法的效能指標(biāo)

4.檢測限指分析方法在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下所能檢出被測組分的最低濃度或最低量。當(dāng)被測組分的量高于檢測限時(shí)，即可被檢出，但一般不能準(zhǔn)確測定。檢測限的確定因分析方法的類型不同而異。對(duì)儀器分析方法，可將已知濃度的被測組分溶液與空白樣品的測定結(jié)果進(jìn)行比較，按信（號(hào)）噪（音）比確定可被檢出的最低濃。一般按音噪比（S/N）為3:1或2:1來確定檢測限；對(duì)非儀器分析方法，可配制含不同濃度測定組分的樣品，通過分析，確定可被檢出的最低濃度。分析方法的效能指標(biāo)如薄層色譜法，可在薄層板上點(diǎn)加不同濃度的供試品溶液，展開后，檢視，以可觀察的最低濃度作為檢測限。

4.檢測限分析方法的效能指標(biāo)指分法可定量測定樣品中測定組分的最低濃度或最低量。定量限與檢測限的區(qū)別在于，它所規(guī)定的最低濃度，應(yīng)滿足一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。對(duì)非儀器分析方法，可用類似檢測限的方法確定。對(duì)儀器分析方法，按信噪比（S/N）為10:1時(shí)相應(yīng)的濃度或進(jìn)樣量來確定。

5.定量限分析方法的效能指標(biāo)

6.線性指在一定范圍內(nèi)的檢測結(jié)果和樣品中測定組分的濃度（或量）成線性關(guān)系的能力。在藥物分析中，不少檢測結(jié)果在理論上和測定組分的濃度（或量）有線性關(guān)系，如分光光度法中的吸收度（A）和濃度（C）滿足線性方程A=a+bC。理論上有線性關(guān)系的兩個(gè)量，由于受實(shí)驗(yàn)條件以及其他因素的影響，是否有線性關(guān)系以及線性方程中的兩個(gè)參數(shù)a和b還需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。方法是配制一系列不同濃度的測定組分溶液（至少5份），分別測定其響應(yīng)值，用最小二乘法以響應(yīng)值對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，即可計(jì)算出相關(guān)系數(shù)r和a、b的值。相關(guān)系數(shù)r接近于1，說明線性關(guān)系好。分析方法的效能指標(biāo)指在達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性的前提下，分析方法使用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法應(yīng)用的具體情況以及線性、準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)的結(jié)果來確定。

7.范圍分析方法的效能指標(biāo)如原料藥和制劑的含量測定，范圍應(yīng)為測試濃度的80%-120%；制劑含量均勻度的檢查,范圍應(yīng)為測試濃度的70%-130%；溶出度或釋放度中溶出量的測定，范圍應(yīng)為限度的±20%。

7.范圍分析方法的效能指標(biāo)指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受其影響的承受程度。方法的耐用性好，意味著該方法對(duì)測定條件的要求不苛刻，一定的條件的變化，對(duì)測定結(jié)果的影響不大。典型的變動(dòng)因素有樣品溶液的穩(wěn)定性，樣品提取的次數(shù)和時(shí)間；液相色譜流動(dòng)相中溶劑的比例和pH值，不同廠牌、不同批號(hào)的色譜柱，柱溫，流速等；氣相色譜中不同廠牌、不同批號(hào)的色譜柱,不同類型的擔(dān)體，柱溫，檢測器和進(jìn)樣器的溫度等。在建立分析方法時(shí)，應(yīng)對(duì)以上條件進(jìn)行試驗(yàn)，以考察方法的耐用性。

8.耐用性分析方法的效能指標(biāo)項(xiàng)目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定定量限度準(zhǔn)確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度

＋①

＋①

專屬性②＋＋＋＋檢測限

－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。視具體情況予以驗(yàn)證。分析方法的效能指標(biāo)各種含量測定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求用原料藥精制品（含量>99.5%）或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，RSD≤0.2%；回收率一般在99.7～100.3%之間。1.容量分析法分析方法的效能指標(biāo)各種含量測定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測定，其RSD≤1%。制劑的測定，回收率一般應(yīng)在98～102％之間。2.UV法分析方法的效能指標(biāo)各種含量測定方法對(duì)效能指標(biāo)的要