15I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定兒師范高等?？茖W校、鄂爾多斯市農(nóng)牧業(yè)生態(tài)與1馬鈴薯病毒RT-PCR檢測技術(shù)規(guī)程GB/T34265Sanger法測序技術(shù)GB/T40974核酸樣本質(zhì)量評價SN/T2497.21進出口危險化學品安全試驗方法第21部分：瓊脂糖凝又感染性RNA，是一種和病毒相似，但不具有蛋白質(zhì)外殼的一類環(huán)狀閉合的單鏈R反轉(zhuǎn)錄reversetranscrip互補DNAcomplementary聚合酶鏈式反應(yīng)Polymerasechainr2模板的特定區(qū)域進行體外擴增的技術(shù)。反應(yīng)混合物通常由DNA聚合酶、脫氧核苷三磷酸、引物和緩沖液組成，反應(yīng)過程主要包括變性、退火和延為復制延伸的起始位點。4.1主要RNA病毒種類黃瓜花葉病毒(Cucumbermos馬鈴薯奧古巴花葉病毒(Potato馬鈴薯卷葉病毒(Potatoleafrollvirus,PLRV)。馬鈴薯帚頂病毒(Potato馬鈴薯A病毒(PotatovirusA,PVA)。馬鈴薯M病毒(Potatovirus馬鈴薯X病毒(PotatovirusX,PVX)。馬鈴薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)。馬鈴薯紡錘塊莖類病毒(Potatospindle注：類病毒雖然不具有病毒所具有的蛋白質(zhì)外殼，但具有RNA基因組，檢測方法與RNA病毒一致。因此，列為本標準采用5點法抽樣。種植面積小于2001m2(含2001m2),抽檢100株。種植面積在2001m2到20010m2之間(含20010m2),之后每增加2001m2增檢20株。置于自封采樣袋內(nèi)。運輸。樣品在檢測點存儲時間較短時(一般不超過24h),在4℃存放即可。長期存放樣品時，需要將樣品用液氮預(yù)冷后，保存于-80℃超低溫保存箱。3選擇市售的用于提取含有多糖多酚材料RNA的試劑盒，按照試劑盒自帶的說明書進行操作。核酸質(zhì)cDNA。反應(yīng)體系和反應(yīng)程序按照試劑盒自帶的說市售產(chǎn)品通常為預(yù)混液或單品，根據(jù)所選產(chǎn)品提供的說明書，進行PCR反應(yīng)混合物配制，并按書指示加入cDNA模板以及病毒檢測引物。各種病毒的特異性AMVAMV-FaAMVAMV-RbACCCAAGCGTTCCTATATACACATCTGAGGACATGATGC4兩個引物退火溫度不一致時，取較低溫度；72℃延伸，延伸時間根據(jù)所選產(chǎn)品說明書提供的參數(shù)進行計算。最后，72℃終延伸5min。7.5瓊脂糖凝膠電泳檢測用Tris-乙酸緩沖液溶解瓊脂糖，制備質(zhì)量體積比為1%的瓊脂糖凝膠。瓊脂糖凝膠的制備按照SN/T2497.21執(zhí)行。時，凝膠置于紫外燈或凝膠成像系統(tǒng)進行觀測和拍照，獲取的圖片用于結(jié)果判定。8.1異常結(jié)果根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳圖，與圖中DNA相對分子質(zhì)量標準品相比，從陰性對照樣品