2020pcr考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)錄2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成D.A和C3.PCR引物設(shè)計時，長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp4.下列哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)必需的（）A.dNTPB.Mg2?C.RNA聚合酶D.引物5.PCR反應(yīng)體系中，模板DNA的量一般為（）A.1-10ngB.10-100ngC.100-1000ngD.1μg以上6.退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃7.下列關(guān)于PCR技術(shù)敘述錯誤的是（）A.可用于基因診斷B.可用于基因克隆C.只能擴增已知序列D.操作簡單8.PCR反應(yīng)的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTP9.第一次PCR循環(huán)的變性時間一般為（）A.30sB.1minC.2minD.5min10.進行PCR實驗時，防止污染的關(guān)鍵是（）A.實驗環(huán)境清潔B.試劑純凈C.操作規(guī)范D.以上都是二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.分子進化研究2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)3.好的PCR引物應(yīng)具備的特點有（）A.特異性強B.避免形成引物二聚體C.堿基分布均勻D.Tm值合適4.PCR反應(yīng)體系包含（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP5.以下屬于PCR衍生技術(shù)的有（）A.RT-PCRB.qPCRC.巢式PCRD.多重PCR6.進行PCR實驗時，需要用到的儀器有（）A.離心機B.移液器C.PCR儀D.凝膠成像系統(tǒng)7.在PCR反應(yīng)中，Mg2?的作用是（）A.激活Taq酶B.穩(wěn)定引物與模板結(jié)合C.參與DNA合成D.調(diào)節(jié)反應(yīng)pH8.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.酶切分析9.關(guān)于PCR技術(shù)的優(yōu)點，正確的是（）A.靈敏度高B.特異性強C.快速高效D.可擴增未知序列10.設(shè)計PCR引物時需要考慮的因素有（）A.引物的長度B.引物的GC含量C.引物的Tm值D.引物的3'端堿基三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可以擴增任意長度的DNA片段。（）2.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（）3.引物濃度過高會導(dǎo)致非特異性擴增。（）4.PCR反應(yīng)中，延伸時間越長越好。（）5.只要模板DNA質(zhì)量好，PCR反應(yīng)就能成功。（）6.復(fù)性溫度越高，PCR反應(yīng)的特異性越強。（）7.熒光定量PCR可以對核酸進行絕對定量和相對定量。（）8.巢式PCR能提高PCR反應(yīng)的特異性和靈敏度。（）9.進行PCR實驗時，使用一次性吸頭可以有效防止污染。（）10.PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量與模板量呈線性關(guān)系。（）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。利用DNA半保留復(fù)制原理，通過高溫變性使雙鏈DNA解開成單鏈，低溫退火讓引物與模板單鏈結(jié)合，適溫延伸在Taq酶作用下以dNTP為原料合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)實現(xiàn)特定DNA片段擴增。2.簡述引物設(shè)計的基本原則。特異性要強，避免與非目標序列結(jié)合；避免形成引物二聚體；堿基分布均勻，GC含量在40%-60%；長度15-30bp左右，Tm值在55-65℃。3.列舉至少兩種PCR衍生技術(shù)及其應(yīng)用。RT-PCR用于反轉(zhuǎn)錄擴增RNA為cDNA，常用于基因表達分析；qPCR可對核酸定量，用于病原體載量檢測等。4.說明PCR實驗中防止污染的措施。實驗環(huán)境清潔，定期消毒；試劑單獨分裝，避免交叉污染；操作規(guī)范，使用一次性吸頭、手套等；設(shè)立陰性對照監(jiān)測污染情況。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。優(yōu)勢在于靈敏度高、特異性強、快速，能早期診斷疾病。局限性有易污染致假陽性，對儀器和操作人員要求高，擴增片段長度有限，對未知病原體檢測有困難。2.當PCR實驗結(jié)果出現(xiàn)非特異性擴增時，應(yīng)如何分析和解決？分析可能是引物設(shè)計不佳、引物濃度過高、退火溫度低、模板有雜質(zhì)等原因。解決辦法包括重新設(shè)計引物、調(diào)整引物濃度、提高退火溫度、純化模板等。3.闡述PCR技術(shù)對現(xiàn)代生物學(xué)研究的重要意義。極大推動基因克隆、表達分析、分子進化研究等，在疾病診斷、法醫(yī)鑒定、物種鑒定等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，為生命科學(xué)各領(lǐng)域發(fā)展提供關(guān)鍵技術(shù)支撐，促進對生命奧秘的深入探索。4.討論如何優(yōu)化PCR反應(yīng)條件以獲得理想結(jié)果。優(yōu)化模板質(zhì)量與用量，設(shè)計合適引物；合理調(diào)整Mg2?、dNTP、引物和酶濃度；精確設(shè)置變性、退火、延伸溫度與時間；根據(jù)模板和引物特性調(diào)整循環(huán)次數(shù)，通過預(yù)實驗確定最佳條件。答案一、單項選擇題1.D2.D3.B4.C5.B6.B7.C8.B9.C10.D二、多項選擇題1.ABCD2.ABCD