電泳前的準(zhǔn)備工作緩沖系統(tǒng)的選擇保證蛋白質(zhì)的溶解性能穩(wěn)定性以_第1頁
電泳前的準(zhǔn)備工作緩沖系統(tǒng)的選擇保證蛋白質(zhì)的溶解性能穩(wěn)定性以_第2頁
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文檔簡介

電泳前的準(zhǔn)備工作緩沖系統(tǒng)的選擇：保證蛋白質(zhì)的溶解性能、穩(wěn)定性以及生物活性的保持；電泳時間和分辨率：從理論上講PAGE可以在任何pH進(jìn)行，但實際上過酸或過堿的條件下將發(fā)生某種水解（脫酰胺）。因此，pH應(yīng)限制在3-10之間。緩沖系統(tǒng)的選擇原則是兩種標(biāo)準(zhǔn)的對立權(quán)衡如果緩沖液的pH選擇在遠(yuǎn)離樣品中各種蛋白的等電點，蛋白質(zhì)分子所帶電荷的密度大，電泳時間短，區(qū)帶細(xì)而窄；如果緩沖pH選擇在靠近被分離樣品的一種或幾種蛋白質(zhì)的等電點，則蛋白質(zhì)分子之間的電荷密度差別大，分辨率就高；常選擇pH8.0-9.5的緩沖，常用的緩沖液有Tris-甘氨酸（pH8.3-9.5），Tris-硼酸(pH8.3-9.3)和Tris-醋酸（pH7.2-8.5）離子強(qiáng)度的選擇離子強(qiáng)度不宜過高，此時電導(dǎo)率低，產(chǎn)熱少，電泳速度快；但也不可過低，必須具有一定的緩沖能力，過低的離子強(qiáng)度容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)絮凝。一般選擇緩沖液的離子強(qiáng)度為0.01-0.1mol/L之間凝膠濃度的選擇由于PAGE電泳分離不僅取決于蛋白質(zhì)的電荷密度，而且取決于分子的大小、形狀。因此，與凝膠的分子篩效應(yīng)（即凝膠的孔徑與電泳的分辨率、電泳速度）密切相關(guān)。根據(jù)凝膠孔徑與被分離分子的大小和形狀，可以將凝膠分為：非排阻性凝膠（unrestrictivegel）:濃度0.7-1.0%的瓊脂糖凝膠；排阻性凝膠（restrictivegel）：濃度大于1%的瓊脂糖凝膠和常規(guī)PAGE（一）實驗原理：以聚丙烯酰胺凝膠為電泳支持物，電荷、分子大小不一的各種血清蛋白經(jīng)濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)

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