ICS65.020.30

CCSB40/49

DB51

四川省地方標準

DB51/T3128—2023

畜禽遺傳材料收集與保存技術(shù)規(guī)程

2023-12-29發(fā)布2024-01-29實施

四川省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB51/T3128—2023

目次

前言..................................................................................II

1范圍.................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.......................................................................1

3術(shù)語和定義...........................................................................1

4樣品來源.............................................................................2

5樣品信息登記.........................................................................2

6采集人員要求.........................................................................2

7采集方法.............................................................................2

8包裝與運輸...........................................................................3

9物流追蹤和記錄.......................................................................3

10安全管理............................................................................3

附錄A畜禽遺傳材料樣本信息采集單.......................................................5

附錄B畜禽遺傳材料樣本編碼規(guī)則.........................................................6

附錄C畜禽樣本采集量和儲存方案.........................................................7

附錄D豬冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程.......................................................8

附錄E家禽冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程....................................................11

I

DB51/T3128—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出、歸口并解釋。

本文件起草單位：四川省畜牧總站。

本文件主要起草人：曹偉，李強，王莉娟，劉園，張勇，洪寧，高慧純，王小強，楊舒慧，葛桂華，

余易展，劉政權(quán)。

本文件為首次發(fā)布。

II

DB51/T3128—2023

畜禽遺傳材料收集與保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了四川省畜禽遺傳材料收集、整理與保存相關(guān)的樣品來源、樣品信息登記、采集人員要

求、采集方法、包裝與運輸、物流追蹤和記錄、安全管理。

本文件適用于四川省畜禽遺傳資源基因庫、保種場、保護區(qū)等保種單位的畜禽遺傳材料收集、整理

與保存。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB2260中華人民共和國行政區(qū)劃代碼

GB/T5458液氮生物容器

GB13690化學(xué)品分類和危險性公示通則

GB19489實驗室生物安全通用要求

GB/T25172豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范

GB∕T26938牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術(shù)規(guī)程

GB/T43051實驗動物動物實驗生物安全通用要求

GB50140建筑滅火器配置設(shè)計規(guī)范

AQ3013危險化學(xué)品從業(yè)單位安全標準化通用規(guī)范

NY/T1234牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1571羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程

NY/T1900畜禽細胞與胚胎冷凍保種技術(shù)規(guī)范

NY/T3186羊冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T3444牦牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T3458種雞人工授精技術(shù)規(guī)程

NY/T3796馬和驢冷凍精液

NY/T4047家禽精液品質(zhì)檢測方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

畜禽遺傳材料livestockandpoultrygeneticmaterial

畜禽遺傳資源的胚胎、精液、卵子、細胞、毛發(fā)、DNA、RNA等遺傳物質(zhì)。

3.2

生物安全biosafety

在生物技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用過程中，為避免對人類健康及生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生潛在危害，所采取的綜合

1

DB51/T3128—2023

性預(yù)防和控制措施。

4樣品來源

《國家畜禽遺傳資源名錄》所列畜禽、蜂、蠶等遺傳資源。

5樣品信息登記

5.1登記《畜禽遺傳材料樣本信息采集單》，記錄樣本類型、物種信息、采集地、儲存條件、采集人

員等信息。參考附錄A。

5.2樣品編號具有唯一性，并且長期使用，以保證信息的準確性。樣品編號由15位字符、分五部分組

成：4位品種品系代碼+6位行政區(qū)域代碼（精確到區(qū)、縣）+3位樣品編號+1位性別代碼+1位樣品類型。

參考附錄B。

5.3根據(jù)樣本類型、用途，選擇合適保存規(guī)格、最低保存數(shù)量、儲存溫度、儲存類型。參考附錄C。

6采集人員要求

樣品采集人員須接受專業(yè)培訓(xùn)，熟悉品種特性，掌握遺傳材料采集方法、儲存條件及管理、防護措

施等。

7采集保存方法

7.1精液采集保存

牛冷凍精液采集和保存參照NY/T1234的規(guī)定執(zhí)行；牦牛冷凍精液采集和保存參照NY/T3444的

規(guī)定執(zhí)行；綿羊和山羊冷凍精液采集和保存參照NY/T3186的規(guī)定執(zhí)行；馬和驢冷凍精液采集和保存

參照NY/T3796的規(guī)定執(zhí)行；豬冷凍精液采集和保存參照附錄D的規(guī)定執(zhí)行；家禽冷凍精液采集和保存

參照附錄E的規(guī)定執(zhí)行。

7.2胚胎采集保存

牛胚胎采集和保存方法參照GB∕T26938的規(guī)定執(zhí)行；綿羊和山羊胚胎采集和保存方法參照NY/T

1571的規(guī)定執(zhí)行；其它家畜胚胎采集和保存方法參照NY/T1900的規(guī)定執(zhí)行。

7.3卵子采集保存

家畜卵子采集和保存方法參照NY/T1900的規(guī)定執(zhí)行。

7.4細胞采集保存

畜禽體細胞的采集和保存方法參照NY/T1900的規(guī)定執(zhí)行。

7.5組織樣品采集保存

7.5.1活體采集保存

將畜禽保定后，利用取樣器采集組織，放入凍存管或錫箔紙中，做好樣本標記迅速放入液氮中保存。

7.5.2死亡動物樣品采集保存

2

DB51/T3128—2023

動物死后2h內(nèi)利用取樣器采集組織，放入凍存管或錫箔紙中，做好樣本標記迅速放入液氮中保

存。

7.5.3用于細胞培養(yǎng)的組織樣本采集

在取樣后3min內(nèi)用pH7.0的PBS溶液對組織樣本進行沖洗、迅速放入細胞保存液中，0℃～

4℃保存，24h內(nèi)進行細胞培養(yǎng)。

7.6血液樣品采集保存

7.6.1將畜禽保定，對采血部位進行局部消毒后，用采血針沿靜脈緩慢刺入血管，待血液流出后收集

在不同需求的采血管內(nèi)，0℃～4℃暫存。

7.6.2需保存全血的樣品，全血0℃～4℃運輸至保存單位后，保存于-80℃冰箱。

7.6.3需保存血清的樣品，全血0℃～4℃運輸至保存單位，進行血清分離并分裝后，保存于-80℃

冰箱。

7.6.4需保存血漿的樣品，新鮮全血置于含肝素、枸櫞酸鈉等抗凝劑的試管中，全血0℃～4℃運

輸至保存單位后，進行血漿分離并分裝后，保存于-80℃冰箱。

7.7毛發(fā)樣本采集保存

畜禽保定后，對采集部位消毒后，分別采集背部、腹部、頸部、尾部的毛發(fā)（帶毛囊）放入凍存管

中，迅速放入液氮進行儲存。

8包裝與運輸

8.1包裝

8.1.1生物樣本選用三層容器保存，即內(nèi)層容器、第二層容器及外層容器。

8.1.2三層容器包裝上注明樣本類型、編號（采集編號和樣本編號）、物種信息、日期等標識。

8.1.3外層容器須堅固耐壓，三層容器均須注意防水、防漏。

8.2運輸

8.2.1樣本的運輸由專人承擔(dān)，運輸方式根據(jù)樣本類型、運輸距離、時間、溫度要求等條件決定。

8.2.2運輸前確認運輸方式、目的地、運輸證明文件等。運輸文件須包括《樣本信息采集單》。

8.2.3恒溫（16℃～18℃）運輸?shù)臉颖?，使用專用恒溫設(shè)備運輸；低溫（2℃～8℃）運輸?shù)?/p>

樣本，使用裝有冰袋的泡沫箱或其它一些制冷劑保持2℃～8℃運輸；超低溫（低于-30℃）條件

運輸?shù)臉颖荆酶杀４孢\輸；液氮條件下保存的樣本，使用液氮罐進行運輸，符合GB/T5458的要

求。

8.2.4對于運輸過程中可能出現(xiàn)的問題，工作人員須提前準備相關(guān)解決方案。

9物流追蹤和記錄

9.1運輸各個環(huán)節(jié)做好溝通、記錄、追蹤。

9.2裝樣運輸時核查是否達到各種樣品運送需要的防震、恒溫和防照射等要求，接樣時核查樣品是否

符合要求。

10安全管理

3

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10.1基本要求

畜禽遺傳材料保存單位制定相應(yīng)的保存計劃和質(zhì)量管理、出入庫管理、安全管理、消毒防疫、重大

突發(fā)事件應(yīng)急預(yù)案等制度，以及遺傳材料制作、保存和質(zhì)量檢測技術(shù)規(guī)程。有完整系統(tǒng)的技術(shù)檔案資料。

10.2消防安全

畜禽遺傳材料保存單位防火系統(tǒng)須符合GB19489的規(guī)定。畜禽遺傳資源保種單位滅火器的配置符合

GB50140的規(guī)定。

10.3生物安全

畜禽遺傳材料保存單位在樣本采集和使用前須進行生物安全評估，并符合GB/T43051的規(guī)定。

10.4化學(xué)安全

畜禽遺傳材料保存單位化學(xué)安全須符合GB13690的規(guī)定，在使用到有毒有害物質(zhì)的工作區(qū)域，須符

合AQ3013的規(guī)定。

10.5設(shè)備安全

畜禽遺傳材料保存單位的設(shè)施及儀器設(shè)備須建立安全維護系統(tǒng)，除制定有序的設(shè)備維護、更換計劃，

定期進行設(shè)施的維護和檢查外，還須制定相關(guān)儀器設(shè)備檢定、校準計劃并組織實施。相關(guān)設(shè)施設(shè)備的檢

修工作都須由專業(yè)技術(shù)人員來進行。

10.6環(huán)境安全

畜禽遺傳材料保存單位放置干冰、液氮的地方要確?？諝饬魍ǎ惭b氧氣與二氧化碳檢測裝置。液

氮儲存裝置須通過監(jiān)控裝備自動或手動記錄每天的液氮用量與剩余量。相關(guān)人員在操作干冰和液氮時，

須做好防凍保護措施并佩戴專用的保護裝備。

10.7信息安全

畜禽遺傳材料保存單位須有統(tǒng)一、完整的信息管理系統(tǒng)，滿足樣本追蹤、檢索以及與其他數(shù)據(jù)系統(tǒng)

兼容或關(guān)聯(lián)的需求，須根據(jù)不同工作人員職責(zé)設(shè)置相應(yīng)的權(quán)限。信息管理系統(tǒng)須建立安全保障措施，注

意硬件防潮及信息防盜。

A

A

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附錄A

（資料性）

畜禽遺傳材料樣本信息采集單

A.1畜禽遺傳材料樣本信息采集單

畜禽遺傳材料樣本信息采集單見表A.1。

表A.1畜禽遺傳材料樣本信息采集單

采集編號

樣本類型血液組織細胞精液胚胎卵子毛發(fā)其他

物種信息

屬種亞種

性別繁殖方式

采集地

省/直轄市市/州縣/區(qū)

具體地點

儲存條件

4℃冰箱-20℃冰箱-80℃冰箱液氮其他

采集人員

姓名單位

日期

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附錄B

（資料性）

畜禽遺傳材料樣本編碼規(guī)則

B.1畜禽遺傳材料樣本編碼規(guī)則

畜禽遺傳材料樣本編碼規(guī)則見表B.1。

表B.1畜禽遺傳材料樣本編碼規(guī)則

品種品系編碼行政區(qū)域代碼分管號性別類型

縣級行政區(qū)域

兩位品種首字母縮寫+

代碼，具體參001-NNNF-雌性D-DNA

兩位品系代碼

見GB2260

001-NNNM-雄性R-RNA

001-NNNC-細胞

001-NNNT-組織

001-NNNB-血液

001-NNNE-卵子

001-NNNEM-胚胎

001-NNNS-精子

001-NNNH-毛發(fā)

示例：CH0151XXXX001FB

CH01：成華豬

51XXXX：四川省XX市XX區(qū)

001：第一管樣本

F：雌性（Female）

B：血液（Blood）

CH0151XXXX001FB即成華豬在四川省XX市XX區(qū)采集的雌性第一管血液樣本

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附錄C

（資料性）

畜禽樣本采集量和儲存方案

C.1畜禽樣本采集量和儲存方案

畜禽樣本采集量和儲存方案見表C.1。

表C.1畜禽樣本采集量和儲存方案

樣本類型保存規(guī)格最低數(shù)量儲存條件用途

血液3～5mL3管-80℃冰箱RNA/DNA/蛋白提取

3管-80℃冰箱RNA/DNA/蛋白提取

組織2～10g

3份液氮RNA/DNA/蛋白提取/建立細胞系

單胎：1枚

胚胎200份液氮動物擴繁、育種

多胎：2枚

單胎：1枚

卵子200份液氮動物擴繁、育種

多胎：2枚

豬：15000劑

精液0.25mL牛：3000劑液氮動物授精、擴繁和育種

羊：3000劑

毛發(fā)適量3管-80℃冰箱核DNA和線粒體DNA分析

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附錄D

（規(guī)范性）

豬冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程

D.1采精前準備

D.1.1種公豬

D.1.1.1種公豬體型外貌和生產(chǎn)性能符合本品種標準，體質(zhì)健康，系譜齊全。

D.1.1.2采精前先修剪種公豬陰毛至2cm以下，刷拭公豬體表并清洗消毒。

D.1.2采精室

D.1.2.1檢查假臺豬是否平穩(wěn)，擦拭假臺豬后半部。

D.1.2.2檢查假臺豬后方的防滑墊，防止公豬爬跨時打滑。

D.1.2.3對采精室清洗，并用紫外線消毒。

D.1.2.4采精室的溫度須控制在15℃～25℃。

D.2采精

采精操作按照GB/T25172的規(guī)定進行。

D.3鮮精品質(zhì)檢測

D.3.1檢測方法

檢測方法按GB/T25172的規(guī)定進行，并做好登記。

D.3.2質(zhì)量要求

D.3.2.1外觀

淡乳白色或灰白色，均勻一致，無雜質(zhì)。

D.3.2.2氣味

略帶腥味，無異味。

D.3.2.3精子活力

精子活力≥70%。

D.3.2.4精子密度

精子密度≥1×108個/mL。

D.3.2.5精子畸形率

精子畸形率≤15%。

D.4鮮精處理

D.4.1預(yù)稀釋

營養(yǎng)液（葡萄糖1.5g、乳糖3g、甘氨酸0.8g，蒸餾水100mL）先預(yù)熱到32℃，與鮮精1:1混合

均勻。預(yù)稀釋后的精液放入17℃恒溫箱內(nèi)。

D.4.2離心

將預(yù)稀釋精液裝入100mL～500mL的離心管或離心杯內(nèi)，在17℃和重力800g條件下離心15

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min后，棄上清液。

D.4.3稀釋

冷凍稀釋液（葡萄糖6.12g、EDTA0.3g、蒸餾水75mL、蛋黃20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、

青霉素和鏈霉素各1×105U）預(yù)熱至17℃，以精子密度不低于4×108個/mL計算冷凍稀釋液添加量。先

取2/3冷凍稀釋液加到離心管中，以吸吐方式混合均勻，裝入專用器皿中，再用剩余冷凍稀釋液沖洗離

心管壁后合并。

D.4.4平衡

將盛放精液的器皿放入17℃水浴杯中，一同放進4℃冰箱，平衡1.5h。

D.4.5分裝

D.4.5.1將精液分裝到0.25mL或0.5mL細管中，標明生產(chǎn)單位、品種、種公豬號和生產(chǎn)日期。

D.4.5.2剔除有氣泡、未灌滿等不合格的細管精液。

D.4.5.3將分裝好的細管精液鋪放在冷凍支架上。

D.5冷凍

D.5.1冷凍方式

D.5.5.1程序冷凍：程控冷凍儀的冷凍柜預(yù)冷至4℃，將細管放入冷凍柜。以2℃/min的速率，從4℃

下降至1℃，以30℃/min的速率，從1℃下降至-25℃，以30℃/min的速率從-25℃下降至

-140℃，-140℃保持15min。冷凍程序完成后將細管浸入液氮。

D.5.5.2熏蒸冷凍：將液氮倒入深度50cm以上的專用冷凍箱預(yù)冷10min，保持冷凍支架高于液氮

面2cm、熏蒸冷凍8min。

D.5.2包裝

將冷凍好的細管精液包裝好，外包裝上標明生產(chǎn)單位、品種、種公豬號、生產(chǎn)日期和支數(shù)等。

D.5.3保存

將包裝好的細管精液放置液氮中保存。

D.6解凍

解凍液（葡萄糖3.7g、無水檸檬酸鈉0.6g、碳酸氫鈉0.125g、EDTA0.125g、氯化鉀0.075g，蒸

餾水100mL）預(yù)熱至26℃。

從液氮罐中快速取出2支～3支細管精液，放至38℃水浴鍋中15s～20s或50℃水浴鍋中7

s解凍。剪開細管精液封口端，擠入數(shù)滴精液至1mL解凍液中，攪勻，回溫到37℃，靜置20min。

D.7凍精品質(zhì)檢測

D.7.1檢測方法

檢測方法按GB/T25172的規(guī)定進行，并做好登記。

D.7.2質(zhì)量要求

D.7.2.1精子活力

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精子活力≥30%。

D.7.2.2精子密度

精子密度≥4×108個/mL。

D.7.2.3精子畸形率

精子畸形率≤18%。

D.7.2.4細菌菌落數(shù)

細菌菌落數(shù)≤800CFU/mL。

D.8生產(chǎn)記錄

做好冷凍精液生產(chǎn)全流程記錄并存檔。

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附錄E

（規(guī)范性）

家禽冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程

E.1采精前準備

E.1.1種公禽

E.1.1.1選擇符合本品種標準，體質(zhì)健康，系譜齊全的成年種公禽，單籠飼養(yǎng)3～4周，準備后續(xù)采

精訓(xùn)練。

E.1.1.2配種前1～2周開始采精訓(xùn)練，每天訓(xùn)練1次，使公禽形成條件反射，訓(xùn)練可采取按摩法。

E.1.1.3正式采精前，需剪掉公禽泄殖腔周圍直徑5～7cm范圍內(nèi)的羽毛，并在3h～4h內(nèi)不再喂

水喂料。

E.1.2采精用具

參考NY/T3458執(zhí)行。

E.1.3采精室

E.1.3.1采精環(huán)境保持清潔無污染。

E.1.3.2環(huán)境溫度保持在20℃～25℃。

E.2采精

采精員右手