本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒（Hepatitis

BVirus，HBV）基因分型檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，

同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)乙型肝炎病毒基因分型定性檢測(cè)試劑的一

般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，

若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具

體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉

及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使

用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定

的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)

原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

我國(guó)2006年乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查表明，我國(guó)1—59歲一般

人群乙型肝炎表面抗原（HepatitisBsurfaceantigen，HBsAg）攜

帶率為7.18%，5歲以下兒童的HBsAg僅為0.96%。據(jù)此推算，我

國(guó)現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人，其中慢性乙型肝炎患者約

2000萬(wàn)例；由于不同的乙型肝炎病毒基因型對(duì)現(xiàn)有藥物治療可能

存在不同的治療響應(yīng)，乙型肝炎病毒分型基因檢測(cè)在慢性乙型肝

炎患者治療中的作用正被越來(lái)越多人所關(guān)注。

根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性≥8％的界線，可將其分為不同

的基因型。目前，已鑒定的HBV基因型有A—I九種，基因型與

—1——

血清亞型之間的關(guān)系已被清晰論證?；蛐蛄械膯蝹€(gè)核酸的變化

即可能改變血清亞型，但血清亞型不能反映基因的差異。通過(guò)對(duì)

HBV全序列分析發(fā)現(xiàn)，在不同基因型之間S區(qū)段異質(zhì)性最大，而

型內(nèi)S區(qū)段的異質(zhì)性最小，從而也可以根據(jù)S區(qū)基因序列異質(zhì)性≥

4％的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)分不同的基因型。在此基礎(chǔ)上，發(fā)展了一系列簡(jiǎn)單、

準(zhǔn)確的分型方法，推動(dòng)了HBV基因型的流行病學(xué)及臨床相關(guān)研

究。

基于現(xiàn)階段研究，在我國(guó)HBV以C型和B型為主。HBV基因

型與疾病進(jìn)展和干擾素α治療效果有關(guān)。與C基因型感染者相

比，B基因型感染者較早出現(xiàn)乙型肝炎e抗原（hepatitisBe

antigen，HBeAg）血清學(xué)轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和

原發(fā)性肝細(xì)胞癌；并且HBeAg陽(yáng)性患者對(duì)干擾素α治療的應(yīng)答率

高于C基因型；A基因型患者應(yīng)答率高于D基因型。其他基因型與

疾病譜的關(guān)系還未有特殊發(fā)現(xiàn)。但是，由于基因型分布不均衡和

樣本大小的影響，還需要作多中心大樣本的研究方能進(jìn)一步了解

基因型與疾病譜之間的關(guān)系。

HBV基因型的分布具有明顯的地理學(xué)特點(diǎn)，大體上如下：

A基因型主要流行于美國(guó)及北歐國(guó)家；B和C基因型主要分布

在亞洲及遠(yuǎn)東地區(qū)；D基因型在世界各地均有發(fā)現(xiàn),但主要分布于

地中海地區(qū)；E基因型僅限于非洲；F基因型則分布在中美洲；G、

H、I及J型基因型的地理分布尚不清楚。隨著時(shí)間的推移，新的

基因型可能會(huì)被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。

HBV基因分型檢測(cè)試劑是指利用包括分子生物學(xué)相關(guān)方法

在內(nèi)的核酸檢測(cè)技術(shù)，以HBV基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)人血清、

—2——

血漿等樣本中的HBV不同基因型進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑。結(jié)

合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可作為乙型肝炎感染者臨床診療

的輔助指標(biāo)之一。

本指導(dǎo)原則適用于基于實(shí)時(shí)熒光（polymerasechainreaction，

PCR）方法的HBV基因分型檢測(cè)試劑，其他方法學(xué)的定性檢測(cè)

方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是

否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求

或評(píng)價(jià)方法。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變

更的產(chǎn)品。其他未盡事宜（包括產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料等），應(yīng)當(dāng)符

合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局

令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全

性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)

容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及不同基因

型檢出能力等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同

類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。若尚無(wú)同類產(chǎn)品批準(zhǔn)上市，則應(yīng)詳細(xì)對(duì)

該產(chǎn)品的有效性及安全性進(jìn)行論述，說(shuō)明理論依據(jù)。

提交的資料應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)

申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督

管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料

—3——

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品的選擇與來(lái)源、

制備過(guò)程、質(zhì)量分析和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。若主要原材料

為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，并提交工藝驗(yàn)證報(bào)

告；如主要原材料購(gòu)自其他供貨商，應(yīng)提供的資料包括：供貨方

提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢

驗(yàn)資料。主要包括以下內(nèi)容：

1.核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)

的驗(yàn)證資料。

2.PCR和組分的主要原料（包括引物、探針、各種酶及其他

主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括

以下內(nèi)容：

2.1脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核苷酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和

dTTP，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料。

2.2引物

由一定數(shù)量的堿基構(gòu)成的特定序列，通常采用

（Deoxyribonucleicacid，DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚

丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或其他適宜方法純化。需提供對(duì)分

子量、純度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。如為外購(gòu)，應(yīng)

提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或

高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜。

2.3探針

特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸

片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。

—4——

合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或其他適宜方法純化，

在5’-端(和/或3’-端)進(jìn)行標(biāo)記，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法

純化，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的

質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜，應(yīng)對(duì)探針的分子量及標(biāo)記的熒光

素進(jìn)行核實(shí)，并進(jìn)行功能性試驗(yàn)驗(yàn)證。

2.4酶

DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，

具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性；尿嘧啶糖

基化酶（UNG），具有尿嘧啶糖基化活性，無(wú)核酸外切酶及核酸

內(nèi)切酶活性，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證。如使用其他工具酶，應(yīng)提

供其詳細(xì)的研究資料。

2.5核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)DNase和RNase

污染。

2.6企業(yè)內(nèi)部參考品及試劑內(nèi)對(duì)照（質(zhì)控品）：

由于乙型肝炎病毒不易培養(yǎng)，制備相應(yīng)的參考品及質(zhì)控品

時(shí)，參考品設(shè)置建議采用滅活病毒的血清/血漿。并且參考品及

質(zhì)控品與被測(cè)臨床樣本在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)保持相同的檢測(cè)方

式。

企業(yè)內(nèi)部參考品以及質(zhì)控品設(shè)置必須客觀合理，能夠充分評(píng)

價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量。應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他方法對(duì)企業(yè)內(nèi)部參考品以及

質(zhì)控品中物質(zhì)成分進(jìn)行確認(rèn)。

2.6.1陽(yáng)性參考品及陽(yáng)性質(zhì)控品

陽(yáng)性參考品應(yīng)包含試劑盒所能檢測(cè)的所有基因型（所有的單

基因型以及所有的重組基因型），每個(gè)基因型應(yīng)設(shè)置不同濃度水

—5——

平，應(yīng)能滿足驗(yàn)證產(chǎn)品性能的需要，至少設(shè)置兩個(gè)濃度水平（弱

陽(yáng)性、中或強(qiáng)陽(yáng)性）；常見基因型（如B型、C型）陽(yáng)性參考品

設(shè)置建議采用滅活病毒的血清/血漿。其他基因型陽(yáng)性參考品設(shè)

置可采用模擬臨床樣本。對(duì)于陽(yáng)性參考品的獲取方式建議使用金

標(biāo)準(zhǔn)的方法或同類方法或者其他能證明問(wèn)題的方法進(jìn)行確認(rèn)。

陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)包含目標(biāo)靶基因，用于監(jiān)控整個(gè)檢測(cè)過(guò)程，包

括：核糖核酸提取，基因擴(kuò)增和檢測(cè)。陽(yáng)性質(zhì)控品作為單獨(dú)檢測(cè)

過(guò)程，用于模擬患者樣本，用于與患者樣本進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。

2.6.2陰性參考品及陰性質(zhì)控品

可采用經(jīng)確認(rèn)無(wú)目標(biāo)靶基因的序列的樣本。陰性參考品及陰

性質(zhì)控品對(duì)照物可反映非特異擴(kuò)增或檢測(cè)過(guò)程，當(dāng)不存在目標(biāo)序

列時(shí)不會(huì)得到相關(guān)信號(hào)。陰性參考品設(shè)置建議采用滅活的血清/

血漿。陰性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，對(duì)假陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)

行質(zhì)量控制。

2.6.3靈敏度參考品（檢測(cè)限參考品）

靈敏度參考品是評(píng)價(jià)產(chǎn)品檢測(cè)能力的重要工具，對(duì)于定性產(chǎn)

品來(lái)說(shuō)，其設(shè)計(jì)的合理性顯得非常重要。在基因型設(shè)置方面，應(yīng)

包括試劑盒所包含的所有基因型。在濃度設(shè)置方面，應(yīng)采用核酸

定量的方法對(duì)該參考品進(jìn)行定量檢測(cè)，明確被測(cè)物的具體量值，

設(shè)置濃度應(yīng)接近產(chǎn)品最低檢出限。

2.6.4精密度參考品

精密度參考品應(yīng)反映產(chǎn)品檢測(cè)的重復(fù)性以及重復(fù)檢測(cè)的穩(wěn)

定性，該部分參考品應(yīng)采用臨床樣本作為精密度參考品，需包括

陰性、弱陽(yáng)性、中或強(qiáng)陽(yáng)性三個(gè)濃度水平的精密度驗(yàn)證。

2.6.5內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）

—6——

與目標(biāo)靶基因平行提取，擴(kuò)增；用于對(duì)檢測(cè)管內(nèi)抑制物造成

的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）可采用競(jìng)爭(zhēng)性或非

競(jìng)爭(zhēng)性的引物設(shè)置。

2.6.6其他需要注意問(wèn)題

如單個(gè)產(chǎn)品檢驗(yàn)原理為兩種方法學(xué)或多種方法學(xué)聯(lián)合檢測(cè)

的方法，應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中每種方法學(xué)均設(shè)置參考品及質(zhì)控品，用于對(duì)

不同方法學(xué)的質(zhì)量監(jiān)控，例如：檢測(cè)原理為PCR-雜交方法聯(lián)用，

在這種情況下，不僅需在PCR環(huán)節(jié)設(shè)置參考品及質(zhì)控品對(duì)擴(kuò)增

過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制；同時(shí)在基因探針雜交環(huán)節(jié)也必須設(shè)置質(zhì)控程

序?qū)﹄s交過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

基本生產(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和

包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)

混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

生產(chǎn)工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如

樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方

法、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.基因位點(diǎn)選擇、PCR方法學(xué)特性介紹。

4.DNA提取純化方法優(yōu)化，建議包含純化步驟，內(nèi)標(biāo)、質(zhì)

控品均應(yīng)全程參與提取純化，不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。

5.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/

探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體

—7——

積等。

6.確定PCR各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。

7.對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研

究資料。

8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件的對(duì)比分析，如果有差異應(yīng)分別

詳述。

如單個(gè)產(chǎn)品檢驗(yàn)原理為兩種方法學(xué)或多種方法學(xué)聯(lián)合檢測(cè)

的方法，例如：檢測(cè)原理為PCR方法和基因探針雜交方法聯(lián)用。

應(yīng)在上述1至8項(xiàng)基礎(chǔ)上完善以下工作：

1.主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)原理介紹。

2.雜交膜條的制備工藝。

3.確定最佳雜交反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、探針濃

度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。

4.確定雜交各階段溫度、時(shí)間的研究資料。

5.交叉污染和攜帶污染研究。

該類產(chǎn)品適用于檢測(cè)乙型肝炎病毒感染人群，在臨床檢測(cè)中

發(fā)現(xiàn)，部分臨床樣本會(huì)出現(xiàn)高濃度的乙型肝炎病毒載量。這部分

臨床樣本在提取過(guò)程中增加了交叉污染及攜帶污染的可能性。在

核酸提取過(guò)程中，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果。

如產(chǎn)品配套采用自動(dòng)提取設(shè)備提取DNA，在攜帶污染試驗(yàn)

中，建議將高濃度陽(yáng)性（病毒濃度至少不低于108IU/mL）樣本與

陰性樣本在同一待提取反應(yīng)板中連續(xù)交替排列并應(yīng)進(jìn)行不少于5

輪上述提取研究。建議試驗(yàn)使用的高陽(yáng)性樣本水平應(yīng)接近該產(chǎn)品

檢測(cè)能力的上限。以鄰近高陽(yáng)性樣本的陰性樣本的陰性結(jié)果對(duì)比

—8——

未鄰近高陽(yáng)性樣本的陰性結(jié)果，評(píng)估攜帶和交叉污染的影響。

如產(chǎn)品檢測(cè)原理中涉及開管檢測(cè)過(guò)程，如自動(dòng)化膜條雜交

儀，應(yīng)參照該項(xiàng)要求進(jìn)行驗(yàn)證。

（四）分析性能評(píng)估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證

的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分

析等詳細(xì)資料。如有相應(yīng)的國(guó)家參考品，應(yīng)在分析性能評(píng)估階段

采用國(guó)家參考品對(duì)產(chǎn)品性能進(jìn)行驗(yàn)證。建議著重對(duì)以下分析性能

進(jìn)行研究：

1.陽(yáng)性/陰性參考品符合率

所有基因型別的陽(yáng)性參考品均應(yīng)按要求檢出陽(yáng)性，考慮到濃

度梯度的不同，應(yīng)對(duì)各水平陽(yáng)性參考品設(shè)置相應(yīng)Ct值的限制；

陰性參考品應(yīng)按要求檢出為陰性。

2.最低檢測(cè)限（分析靈敏度）

建議采用95%（n≥20）的陽(yáng)性檢出率作為最低檢測(cè)限確定

的標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)明確各基因型的最低檢出限。申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出

限或接近最低檢出限的病毒濃度對(duì)說(shuō)明書描述的所有基因型進(jìn)

行驗(yàn)證。

3.分析特異性

3.1交叉反應(yīng)

用于HBVDNA分型檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類

主要考慮以下幾方面可能性：

3.1.1核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀

的其他病原體。

—9——

3.1.2申報(bào)產(chǎn)品中不同基因型以及乙型肝炎病毒其他基因型

對(duì)被檢測(cè)基因型的影響。對(duì)于難以獲得的基因型,可采用針對(duì)該

基因型構(gòu)建的質(zhì)?；蚱渌蚬こ坍a(chǎn)品進(jìn)行交叉驗(yàn)證。

3.1.3建議用高濃度的病原體對(duì)乙型肝炎病毒核酸陰性樣本

進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病

毒和細(xì)菌的來(lái)源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

3.2干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物

質(zhì)。

3.2.1內(nèi)源性干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的

影響，如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等。

3.2.2外源性干擾物質(zhì)：常用抗凝劑，臨床常用抗病毒藥物

如：干擾素、拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定等對(duì)

檢測(cè)結(jié)果的影響。

3.2.3建議在病毒的檢測(cè)臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾

影響進(jìn)行檢測(cè)。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下

可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。應(yīng)注明不同干擾物質(zhì)對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)無(wú)干擾

的最高限值。對(duì)于不易收集的干擾物質(zhì)濃度樣本可使用臨床模擬

樣本進(jìn)行調(diào)節(jié)。

4.精密度

精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特

征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。

具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的國(guó)外或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性

能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合

—10——

理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度

評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

4.1用于精密度評(píng)價(jià)的樣本濃度水平應(yīng)至少包含陰性、弱陽(yáng)

性和強(qiáng)陽(yáng)性三個(gè)水平。

4.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢

測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/

批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精

密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.基因混合型的研究

該部分研究主要包括兩個(gè)目的：一是申報(bào)試劑檢測(cè)不同濃度

混合型的能力。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)置不同濃度比例的混合型進(jìn)行驗(yàn)證。

二是申報(bào)試劑在判讀結(jié)果時(shí)，是否能夠有效區(qū)分基因重組型和基

因混合型。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)置不同濃度的基因重組型與不同混合比例

的基因混合型進(jìn)行驗(yàn)證。

因理想的不同濃度比例基因混合型樣本在臨床單位中難以

收集，申請(qǐng)人可以使用臨床模擬樣本進(jìn)行驗(yàn)證。該部分樣本建議

用核酸測(cè)序明確樣本中包含的所有基因型序列，同時(shí)應(yīng)使用核酸

定量的方法確定不同基因型的濃度。

如申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果判讀無(wú)法有效區(qū)分基因混合型與基因重

組型，應(yīng)在產(chǎn)品說(shuō)明書中進(jìn)行注明。

6.HBV核酸分離純化

病毒DNA提取主要有以下目的：富集目的基因濃度、保證

目的基因序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR

—11——

抑制物，是決定PCR成敗的重要因素之一。企業(yè)應(yīng)對(duì)核酸提取

的環(huán)節(jié)做詳細(xì)的驗(yàn)證。

（五）陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間確定資料

陽(yáng)性判斷值確定資料主要指對(duì)核酸檢測(cè)的Ct值進(jìn)行確認(rèn)，

建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。參考值

范圍研究資料樣本來(lái)源應(yīng)考慮不同年齡、型別、地域等因素，盡

可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性。如存在參考值灰區(qū)，應(yīng)提

供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如采用其他方法對(duì)陽(yáng)性判斷值進(jìn)行確認(rèn)研

究，應(yīng)說(shuō)明這種方法的合理性。對(duì)于此類試劑，正常人群及其他

患病人群中一般不應(yīng)檢出HBV基因型。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和

適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、

運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)

實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研

究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。

對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保

存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍

條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫

度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析

驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣

本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明

—12——

書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）臨床試驗(yàn)

1.試驗(yàn)方法

乙型肝炎病毒基因分型核酸檢測(cè)試劑目前主要供臨床醫(yī)護(hù)

人員對(duì)慢性乙型肝炎患者設(shè)置臨床治療方案提供參考依據(jù)。隨著

乙型肝炎基因型與肝炎病情關(guān)系的研究工作不斷深入，研究方法

不斷改進(jìn)，新的研究成果可能將被轉(zhuǎn)化應(yīng)用于臨床工作中。如乙

型肝炎病毒基因分型核酸檢測(cè)試劑用于新的臨床用途，應(yīng)根據(jù)新

的臨床用途特點(diǎn)設(shè)置具有針對(duì)性的臨床試驗(yàn)研究方案。

參比方法的選擇可以考慮以下幾方面：

1.1如已有同類產(chǎn)品上市，可以選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床

普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品

（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市

產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。應(yīng)充分考慮已上市同類試劑的型別

選擇、靶序列選擇、分析靈敏度等特性，確?？己嗽噭┡c申報(bào)試

劑具有明確可比性。

1.2申請(qǐng)人亦可采用核酸序列測(cè)定方法作為此類試劑臨床

試驗(yàn)研究的參比方法，驗(yàn)證考核試劑檢測(cè)結(jié)果與核酸序列測(cè)定

（測(cè)序）結(jié)果之間的一致性情況。臨床試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)對(duì)選用的測(cè)

序方法做詳細(xì)介紹。

申請(qǐng)人應(yīng)提供以下關(guān)于測(cè)序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需有臨床

試驗(yàn)單位簽章確認(rèn)：

1.2.1測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相

關(guān)信息。

—13——

1.2.2測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子

量、純度、功能性實(shí)驗(yàn)等資料。引物設(shè)計(jì)應(yīng)合理涵蓋考核試劑擴(kuò)

增的靶核酸區(qū)段、位點(diǎn)、及所有突變類型。

1.2.3對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最

低檢測(cè)限的確認(rèn)，建議將所選測(cè)序方法與申報(bào)試劑的相關(guān)性能進(jìn)

行適當(dāng)比對(duì)分析。

1.2.4測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨

床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.2.5提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。

建議申請(qǐng)人在選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)時(shí)，應(yīng)考慮試驗(yàn)機(jī)構(gòu)之間的地域

代表性，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)

操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、

質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑

和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)

學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的方案。各臨床試驗(yàn)

機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循

預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)

構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技

術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程，尤其

—14——

是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入

選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案，并明確說(shuō)明原因。

在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)

果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行

合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同時(shí)方案中應(yīng)明確寫明對(duì)于對(duì)比試驗(yàn)研究中

測(cè)定結(jié)果不符的樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的第三方試劑或方法。

4.臨床試驗(yàn)對(duì)象選擇

4.1基因型方面的考慮

HBV病毒為DNA病毒，其基因具有顯著的多樣性，不同的

地區(qū)和民族，HBV流行的基因型不同。境內(nèi)流行的HBV基因型

主要為B型、C型，部分地區(qū)存在少數(shù)D型，以及重組型基因

B/C型，B/D型，C/D型等。而且，HBV基因型具有一定的地域

差異，不同地區(qū)流行的HBV基因型也不盡相同。因此，在選擇

HBV感染者病例時(shí)，首先應(yīng)根據(jù)HBV流行的情況，選擇能代表

我國(guó)不同地區(qū)流行基因型的HBV感染者病例，以對(duì)試劑檢測(cè)我

國(guó)流行的HBV病毒的能力進(jìn)行客觀科學(xué)的評(píng)價(jià)，選擇的基因型

應(yīng)包括上述三種主要的基因型。

4.2病例選擇及樣本類型

應(yīng)涵蓋注冊(cè)申報(bào)試劑所聲稱的所有基因型，應(yīng)選擇部分干擾

樣本（交叉反應(yīng)樣本），比較干擾組和病例組結(jié)果，以便對(duì)申報(bào)

產(chǎn)品的臨床性能做出科學(xué)的分析。臨床試驗(yàn)所需樣本總例數(shù)不少

于500例，其干擾組例數(shù)的選擇以不超過(guò)總臨床樣本數(shù)的10%

為宜。對(duì)于B型及C型基因型臨床樣本，應(yīng)滿足每種基因型不

—15——

少于200例臨床樣本；對(duì)于D型基因型及其他基因型臨床樣本，

建議每種不少于30例陽(yáng)性病例。每種基因型臨床樣本應(yīng)來(lái)源于

乙型肝炎病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性的患者。如注冊(cè)申報(bào)試劑中包含其他

基因型，應(yīng)結(jié)合這部分基因型在我國(guó)的流行病學(xué)特點(diǎn)，臨床應(yīng)用

情況等綜合因素，對(duì)其臨床有效性進(jìn)行科學(xué)評(píng)估。

在樣本選擇時(shí)，應(yīng)注重患者來(lái)源的不同地域性，不同病情進(jìn)

展，不同藥物治療方案等。對(duì)于干擾組樣本的選擇，應(yīng)考慮到在

檢測(cè)過(guò)程中容易產(chǎn)生干擾，可能造成假陽(yáng)性/假陰性的情況，以

從臨床角度考察其分析特異性。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果

一致性分析、不同基因型陰性/陽(yáng)性符合率等。對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)

比試驗(yàn)的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的

定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以

驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法

的檢測(cè)結(jié)果有無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)

檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致的樣

本，如有必要，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑或參考

方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可

能結(jié)果進(jìn)行分析。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥

—16——

品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)

告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，

應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明

的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床

總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述：

7.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

7.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床

試驗(yàn)主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹；

7.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)

及標(biāo)準(zhǔn)；

7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

7.2臨床試驗(yàn)具體情況

7.2.1臨床試驗(yàn)所用產(chǎn)品的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型

等信息，以及對(duì)比試驗(yàn)產(chǎn)品的注冊(cè)情況；

7.2.2對(duì)各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的病例數(shù)、年齡分布情況進(jìn)行綜合

分析，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

7.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、質(zhì)控品運(yùn)

行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估；

7.2.4具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、

結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

7.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

—17——

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及

是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中

是否涉及對(duì)方案的修改；

7.3.2陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率；

7.3.3以交叉多格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，

對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行多格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定

性結(jié)果的一致性。應(yīng)明確將每種基因型單獨(dú)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

7.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨

床試驗(yàn)有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申

報(bào)資料要求及說(shuō)明》的相關(guān)規(guī)定。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生

產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)

果,依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品

技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014

年第9號(hào)）的有關(guān)要求編寫。內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)

方法。第三類產(chǎn)品技術(shù)要求中還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材

料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。

附錄中應(yīng)將待測(cè)靶基因的基因位點(diǎn)、引物/探針設(shè)計(jì)及來(lái)源、

參考品設(shè)置、來(lái)源及驗(yàn)證情況、各種酶的來(lái)源、特性及驗(yàn)證等重

點(diǎn)內(nèi)容予以明確。

乙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)試劑的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包

括以下性能指標(biāo)：物理性狀、陰/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、

—18——

最低檢測(cè)限等。陽(yáng)性參考品主要考察對(duì)試劑盒覆蓋范圍內(nèi)不同基

因的檢測(cè)符合性，陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)

行驗(yàn)證。

（九）注冊(cè)檢驗(yàn)

根據(jù)《辦法》要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家

食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢

驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家

標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)項(xiàng)目，在注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行

檢驗(yàn)；對(duì)于目前尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的

參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（十）產(chǎn)品說(shuō)明書

說(shuō)明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、

檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員

正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依

據(jù)，是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書的

格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥

品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求。境外試劑的中文

說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致

性，翻譯應(yīng)準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均

應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如

某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，

并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，明確乙

—19——

型肝炎病毒（HBV）基因分型檢測(cè)試劑說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容，以指

導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書編制。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性檢測(cè)已明確為乙型肝炎病毒核酸

陽(yáng)性患者的血清、血漿等樣本中乙型肝炎病毒基因型。輔助醫(yī)療

專業(yè)人員了解病人的乙型肝炎病毒基因型感染情況以及確定適

當(dāng)?shù)闹委煼椒ā?/p>

1.2乙型肝炎病毒基因分型試劑的基因型應(yīng)至少包括B型、C

型、D型，如果申請(qǐng)人略去上述任意一種推薦的基因型，應(yīng)給出

合理的解釋。

1.3適用人群：確診的慢性乙型肝炎病毒感染者。

1.4簡(jiǎn)要介紹乙型肝炎病毒基因型的特征，包括不同基因型

的特征、不同基因型常見亞型、不同基因型在地域及人群中的分

布情況、不同基因型在臨床的應(yīng)用特點(diǎn)。

1.5強(qiáng)調(diào)該試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為治療藥

物調(diào)整的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

指標(biāo)等因素對(duì)患者治療進(jìn)行綜合判斷。

2.【檢驗(yàn)原理】

2.1對(duì)試劑盒檢測(cè)能夠覆蓋的所有被檢測(cè)的基因型進(jìn)行詳

細(xì)描述（靶序列長(zhǎng)度及來(lái)源區(qū)段、基因型類型及相關(guān)特征等），

對(duì)引物及探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)介、不同樣品反應(yīng)管組合、對(duì)照品設(shè)置及熒

光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。

2.2核酸提取純化的方法、原理等。

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2.3試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說(shuō)

明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也

應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】

3.1詳細(xì)說(shuō)明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度、

穩(wěn)定性等信息，陰性/陽(yáng)性對(duì)照品（或質(zhì)控品）可能含有生物源

性物質(zhì)的組分，應(yīng)說(shuō)明其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；說(shuō)明不

同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中如不包含該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說(shuō)明書中應(yīng)列

出相關(guān)試劑/耗材的名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息。

3.3如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則

應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑

盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）以及配套儀器等詳

細(xì)信息。

4.【適用機(jī)型】

注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以

指導(dǎo)用戶操作。

5.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸

穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

6.【樣本要求】

6.1樣本收集要求：如采集時(shí)間、采集順序等，是否受臨床

癥狀、用藥情況等因素的影響。結(jié)合臨床需要并參照慢性乙型肝

炎防治指南（現(xiàn)行版）相關(guān)要求。

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6.2血液樣本應(yīng)當(dāng)說(shuō)明對(duì)采血管及抗凝劑的要求：明確樣本

類型、采血管和抗凝劑，其他樣本應(yīng)說(shuō)明樣本采集、處理及保存

方式。

6.3樣本處理、運(yùn)送及保存：對(duì)血液樣本離心條件的要求，

核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)送條件、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）

等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。

如有需要應(yīng)對(duì)高于檢測(cè)范圍的樣本稀釋方法進(jìn)行規(guī)定。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

7.1試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2詳述待測(cè)樣本、質(zhì)控品核酸提取的條件、步驟及注意事

項(xiàng)。

7.3核酸提取/純化方法的詳細(xì)介紹。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事

項(xiàng)。

7.6儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況對(duì)待

測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。

7.7基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法。

8.【陽(yáng)性判斷值或者參考區(qū)間】

該類產(chǎn)品用于定性檢測(cè)，Cut-off值是檢測(cè)試劑有效區(qū)分檢

測(cè)結(jié)果陽(yáng)性和陰性的標(biāo)準(zhǔn)，如產(chǎn)品檢測(cè)原理為熒光PCR法。

Cut-off的描述包括基線的確定方法和循環(huán)閾值（Ct值）的要