CCSB20DB42湖北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB42/T2036.1—2023前言 V 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑和材料 6儀器和設備 27樣品制備與保存 28分析步驟 39分析結(jié)果的表述 410相對標準偏差 511檢出限及定量限 512質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 5附錄A（資料性）草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸標準品多反應檢測（MRM）色譜圖 6附錄B（資料性）方法的檢出限、定量限和線性范圍 8附錄C（資料性）回收率和精密度 9DB42/T2036.1—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件DB42/T2036《農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測定》的第1部分。DB42/T2036已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本文件由湖北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：武漢市農(nóng)業(yè)科學院、湖北省理化分析測試中心有限公司。本文件主要起草人：董軍、蘇小路、高夢月、肖康飛、姚延興、金鳳美、金莉、謝焰峰、李寶喜、鄭利、胡亦清、易文晗、戚紅晨、韓艷云、陳鋼、陳建、黃志宏、夏浩。本文件實施應用中的疑問，可咨詢湖北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳，聯(lián)系電話郵箱：hbsnab@126.com；對本文件的有關(guān)修改意見建議請反饋至武漢市農(nóng)業(yè)科學院，聯(lián)系電話郵箱：jiusjiu@163.com。DB42/T2036.1—2023V農(nóng)藥殘留在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品等農(nóng)產(chǎn)品中的現(xiàn)象。農(nóng)藥殘留檢測會造成農(nóng)產(chǎn)品污染，危害人的健康。因此，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全關(guān)系人民群眾身體健康和生命安全，開發(fā)簡單快速、準確高效的農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)慘檢測方法可以規(guī)范農(nóng)產(chǎn)品市場，確保人民群眾食品安全。當前，由于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)殘種類繁多且性質(zhì)不一，對農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留全部進行規(guī)范檢測成為亟待解決的問題?！掇r(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測定》主要是構(gòu)建農(nóng)產(chǎn)品中的不同種類農(nóng)藥殘留檢測方法標準體系，根據(jù)技術(shù)需求分別編寫，便于該文件各部分的單獨使用。當前，《農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測定》由第一部分組成，其它部分后續(xù)待補充?！?部分：草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法《農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測定》系列標準各部分均涉及的農(nóng)藥殘留均存在于農(nóng)產(chǎn)品中，他們具有類似的基質(zhì)屬性，同時又有各自獨特的本征特性，各部分相互協(xié)調(diào)，共同構(gòu)建農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量檢測方法的技術(shù)標準體系。本文件的發(fā)布機構(gòu)提請注意，聲明符合本文件時可能涉及到《一種農(nóng)產(chǎn)品中草甘膦、草銨膦及其代謝物氨甲基膦酸殘留量的測定方法》相關(guān)專利的使用。本文件的發(fā)布機構(gòu)對于該專利的真實性、有效性和范圍無任何立場。該專利持有人已向本文件的發(fā)布機構(gòu)承諾，他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下就專利授權(quán)許可進行談判。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過以下聯(lián)系方式獲得：專利持有人姓名：武漢市農(nóng)業(yè)科學院地址：湖北省武漢市洪山區(qū)白沙洲大道173號請注意除上述專利外，本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。DB42/T2036.1—20231農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測定第1部分：草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本文件規(guī)定了測定農(nóng)產(chǎn)品中草甘膦、草銨膦和氨甲基膦酸的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜方法原理、試劑和材料、儀器和設備、樣品制備與保存、分析步驟、分析結(jié)果的表述、相對標準差、檢出限及定量限、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制等內(nèi)容。本文件適用于果蔬、糧食中草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣粉碎或勻漿后經(jīng)水提取、固相萃取小柱凈化后，經(jīng)親水性色譜柱分離，串聯(lián)質(zhì)譜法測定，內(nèi)標法定量。5試劑和材料試劑5.1.1甲酸（HCOOH）：色譜純。5.1.2乙腈（CH3CN）：色譜純。5.1.3去離子水等實驗室用水：應滿足GB/T6682的要求。試劑配制5.2.1甲酸水溶液（0.9%,V/V）：準確量取9mL的甲酸（5.2.1）于容量瓶中，然后用去離子水定量至1000mL。5.2.2甲酸乙腈溶液（0.9%,V/V準確量取9mL的甲酸（5.2.1）于容量瓶中，然后用乙腈（5.2.2）定量至1000mL。標準品25.3.1草銨膦(CH??N?O?P,CAS號：77182-82-2):100μg/mL,或采用具有標準物質(zhì)證書的草銨膦基準試劑。5.3.2草甘膦(C?H?NO?P,CAS號：1071-83-6):100μg/mL,或采用具有標準物質(zhì)證書的草甘膦基準試劑。5.3.3氨甲基膦酸(CH?NO?P,CAS號：1066-51-9):100μg/mL,或采用具有標準物質(zhì)證書的氨甲基膦酸基準試劑。5.3.4草銨膦-D?(CAS號：1323254-05-2):100μg/mL,或采用具有標準物質(zhì)證書的草銨膦-D?基準試劑。5.3.5草甘膦-13C?,1?N(CAS號：1185107-63-4):100μ基準試劑。5.3.6氨甲基膦酸-3C,1?N(CAS號：1066-51-9):100μg/mL,或采用具有標準物質(zhì)證書的氨甲基膦5.4標準溶液的制備5.4.1混合外標使用液1(10μg/mL):量取草銨膦標準品(5.4.1)、草甘膦標準品(5.4.2)、氨甲基膦酸標準品(5.4.3)各1mL于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液(V/V)定容，制成10μg/mL的混合標準使用液1,避光4℃保存，有效期兩個月。5.4.2混合外標使用液2(1μg/mL):量取草銨膦標準品(5.4.1)、草甘膦標準品(5.4.2)、氨甲基膦酸標準品(5.4.3)各100μL于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液(V/V)定容，制成1μg/mL的混合標準使用液2,避光4℃保存，有效期兩個月。5.4.3混合內(nèi)標使用液1(10μg/mL):量取草銨膦-D?標準品(5.4.4)、草甘膦-3℃2,1?N標準品(5.4.5)、氨甲基膦酸-13℃,1?N標準品(5.4.6)各1mL于10mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液(V/V)定容，制成10μg/mL的混合內(nèi)標使用液1,避光4℃保存，有效期兩個月。5.5.1固相萃取小柱：200mg/6mL,如PrimeHLB小柱或性能相當者。5.5.2微孔濾膜：0.22μm,針式，水系。6儀器和設備6.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.2分析天平：感量為0.001g。6.3組織搗碎器。6.4渦旋混合儀：≥2500r/min。6.5高速離心機：≥12000r/min。6.6SPE真空固相萃取裝置。7樣品制備與保存7.1果蔬類取新鮮樣品可食用部分約500g,將其切碎后，用組織搗碎器均質(zhì)，充分混勻，裝入潔凈容器，密封并標記，-5℃以下避光保存。3取樣品可食用部分約500g,用組織搗碎器均質(zhì)，過20目篩后混勻，裝入潔凈容器，密封并-5℃以下避光保存。稱取0.50g試樣(精確到0.01g),置于15mL離心管中，加入50μL混合內(nèi)標使用液1(5.5.3)、58.2凈化取上清液(8.1)2mL于固相萃取小柱(5.6.1)小柱中，控制流速為1滴/s通過小柱，棄去最初0.5mL濾液，收集剩余濾液，過0.22μm濾膜(5.6.2),上機測定。取與試樣基質(zhì)相應的陰性樣品，按提取(8.1)與凈化(8.2)步驟制成空白基質(zhì)溶液，使用空白基質(zhì)溶液稀釋標準使用液(5.5.1,5.5.2,5.5.3),配制成外標濃度分別為0μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL,內(nèi)標濃度均為0.5μg/mL的基質(zhì)標準工作b)流速：0.5mL/min;c)進樣量：10μL;e)流動相：A:0.9%甲酸水溶液(5.3.1);B:0.9%甲酸乙腈溶液(5.3.2),洗脫程序見表1。時間/minCurve/-0一4261a)離子源：電噴霧離子源ESI;c)監(jiān)測方式：多反應監(jiān)測(MRM);4DB42/T2036.1—2023d)離子源溫度：135℃;e)毛細管電壓：2.4kV；f)脫溶劑氣溫度：600℃;g)脫溶劑氣流速：1000L/h；h)錐孔氣流速：150L/h；i)碰撞氣流速：0.15mL/min；j)輔助氣為高純氮氣，碰撞氣為高純氬氣。使用前應調(diào)節(jié)各氣體壓力，以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求；電噴霧電壓、碰撞能等參數(shù)應優(yōu)化至最佳靈敏度，相關(guān)參數(shù)及檢測離子對信息見表2。表2物質(zhì)檢測離子對信息及相關(guān)參數(shù)12834氨甲基膦酸-C,N5草甘膦-C,N6注：保留時間相對誤差在±2.5%以內(nèi)；帶*號為定量離子。8.4.3定性測定在相同試驗條件下進行試樣測定時，如果試樣中待測物的色譜峰保留時間和標準工作液中對應色譜柱峰的保留時間一致（相對誤差在±2.5%以內(nèi)），且試樣譜圖中待測物檢測離子的相對豐度和濃度相當?shù)臉藴势返南鄬ωS度一致，允許誤差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應的待測物。表3實驗室內(nèi)定性離子的相對豐度要求>50>20-50>10-208.4.4定量測定在儀器最佳工作條件下，將基質(zhì)標準工作液由低到高依次進樣，以待測物的定量離子峰面積與待測物相對應的內(nèi)標物質(zhì)的定量離子峰面積之比為縱坐標，以待測物的濃度與待測物相對應的內(nèi)標物質(zhì)的濃度之比為橫坐標，繪制標準曲線，用標準曲線對試樣進行定量。試樣中各待測物的響應值應在標準曲線線性范圍內(nèi)。在8.4.1與8.4.2條件下，各待測物的多反應檢測圖和參考保留時間參見附錄A中圖A.1至A.3。9分析結(jié)果的表述59.1計算按式(1)計算。w——試樣中待測物的殘留量(mg/kg);C——由標準曲線得到的試樣溶液中被測化合物的濃度，單位為微克每升(μg/L);m;——試樣的取樣量，單位為克(g);計算結(jié)果以算術(shù)平均值表示。若計算結(jié)果大于等于1mg/kg,保留三位有效數(shù)字，若計算結(jié)果小于每批樣品(最多10個樣品)應至少進行1次平行測定，平行雙樣測定結(jié)果相對偏差應在10%以內(nèi)。10相對標準偏差在重復性試驗條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。0.01mg/kg、0.01mg/kg,定量限分別為0.02mg/kg、0.04mg/kg、0.04mg/kg,見附錄B。12.1校準核查每次分析樣品前應選擇校準曲線中間濃度進行校準曲線核查，其測定結(jié)果相對偏差應不大于10%,12.2實際樣品加標和加標平行每一批樣品(最多10個樣品)應至少分析1個實際樣品加標和一個加標平行。實際樣品加標回收率每批樣品應同時進行一次空白實驗?？瞻捉Y(jié)果中本方法測定13種果蔬及糧食樣品中草甘膦、草銨膦和氨甲基膦酸的標準曲線，以及其中8種果蔬及糧食樣品中草甘膦、草銨膦和氨甲基膦酸的回收率和精密度數(shù)60808草甘膦-13C2-15N草銨膦8草銨膦80草銨膦-D37■0圖A.3氨甲基膦酸及其內(nèi)標標準溶液(1.0μg/mL)8DB42/T2036.1—2023（資料性）方法的檢出限、定量限和線性范