人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用及機(jī)制探究一、引言1.1研究背景心血管疾病已成為全球范圍內(nèi)威脅人類健康的首要疾病，其發(fā)病率和死亡率持續(xù)攀升，給社會(huì)和家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。《中國心血管健康與疾病報(bào)告2022》指出，由于居民不健康生活方式流行，心血管病危險(xiǎn)因素的人群龐大，再加上人口老齡化加速，我國心血管病發(fā)病率和死亡率仍在升高，疾病負(fù)擔(dān)下降的拐點(diǎn)尚未出現(xiàn)。我國心血管病現(xiàn)患人數(shù)達(dá)3.3億，每5例死亡中就有2例死于心血管病。在我國城鄉(xiāng)居民疾病死亡構(gòu)成比中，心血管病占首位，2020年分別占農(nóng)村、城市死因的48%和45.86%，農(nóng)村心血管病死亡率從2009年起超過并持續(xù)高于城市水平。2020年，缺血性心臟病（冠心病、心梗等）、出血性腦卒中（腦出血）和缺血性腦卒中（腦梗死）是中國心血管病死亡的三大主要原因。血管內(nèi)膜增生是許多心血管疾病發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，如動(dòng)脈粥樣硬化、血管再狹窄、血管鈣化等疾病的發(fā)生均與血管內(nèi)膜增生密切相關(guān)。以動(dòng)脈粥樣硬化為例，其早期病變表現(xiàn)為血管內(nèi)膜下脂質(zhì)沉積，隨后炎癥細(xì)胞浸潤，平滑肌細(xì)胞增殖并遷移至內(nèi)膜，導(dǎo)致內(nèi)膜增厚，血管壁變硬、管腔狹窄，影響血液正常流通，進(jìn)而引發(fā)心肌梗死、腦卒中等嚴(yán)重心腦血管事件。而在血管介入治療，如冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)后，血管內(nèi)膜增生是導(dǎo)致支架內(nèi)再狹窄的主要原因之一，嚴(yán)重影響治療效果和患者預(yù)后。據(jù)統(tǒng)計(jì)，支架植入術(shù)后再狹窄的發(fā)生率在一定范圍內(nèi)居高不下，這不僅增加了患者再次手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)和醫(yī)療費(fèi)用，也降低了患者的生活質(zhì)量。目前，針對血管內(nèi)膜增生的治療手段主要包括藥物治療、介入治療和手術(shù)治療等。藥物治療主要通過使用抗血小板藥物、他汀類藥物等，在一定程度上可以延緩血管內(nèi)膜增生的進(jìn)程，但無法完全阻止其發(fā)生。介入治療如球囊擴(kuò)張術(shù)、支架植入術(shù)等雖然可以暫時(shí)改善血管狹窄的狀況，但術(shù)后血管內(nèi)膜增生導(dǎo)致的再狹窄問題仍然是臨床面臨的一大挑戰(zhàn)。手術(shù)治療則存在創(chuàng)傷大、風(fēng)險(xiǎn)高、恢復(fù)慢等缺點(diǎn)，限制了其廣泛應(yīng)用。因此，尋找一種安全、有效的防治血管內(nèi)膜增生的方法具有重要的臨床意義和迫切需求。人參作為傳統(tǒng)名貴中藥材，素有“百草之王”的美譽(yù)，在我國已有數(shù)千年的藥用歷史。人參皂苷是人參的主要活性成分，其中人參皂苷Rg1是最重要、最具生物活性的單體成分之一。大量研究表明，人參皂苷Rg1具有多種藥理作用，如延緩衰老、改善記憶認(rèn)知功能、增強(qiáng)免疫、抗疲勞等。近年來，人參皂苷Rg1在心血管領(lǐng)域的研究逐漸受到關(guān)注，其對心肌缺血再灌注損傷、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病具有一定的保護(hù)作用。然而，人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用及其機(jī)制尚未完全明確。本研究旨在探討人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的影響，并進(jìn)一步揭示其潛在的作用機(jī)制，為心血管疾病的防治提供新的理論依據(jù)和治療策略。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在心血管疾病領(lǐng)域，血管內(nèi)膜增生一直是研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。國內(nèi)外眾多學(xué)者圍繞其發(fā)病機(jī)制、影響因素及防治措施展開了廣泛而深入的研究。國外研究起步較早，在細(xì)胞和分子層面取得了豐碩成果。研究表明，血管內(nèi)膜增生涉及多種細(xì)胞和信號通路的復(fù)雜交互作用，如血管平滑肌細(xì)胞的增殖與遷移、炎癥細(xì)胞的浸潤以及細(xì)胞因子和生長因子的釋放等。血小板衍生生長因子（PDGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等在促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖和遷移中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號通路的激活則加劇了炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步推動(dòng)內(nèi)膜增生的進(jìn)程。國內(nèi)研究也緊跟國際步伐，在血管內(nèi)膜增生的中醫(yī)藥防治方面獨(dú)具特色。許多研究發(fā)現(xiàn)，中藥及其活性成分在抑制血管內(nèi)膜增生方面展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。例如，丹參中的丹參酮、川芎中的川芎嗪等，通過抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡等多種機(jī)制，對血管內(nèi)膜增生起到一定的抑制作用。人參皂苷Rg1作為人參的主要活性成分之一，近年來在心血管領(lǐng)域的研究逐漸增多。國外研究主要聚焦于其對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用以及對心血管系統(tǒng)的整體調(diào)節(jié)機(jī)制，如改善心肌缺血再灌注損傷、調(diào)節(jié)心臟電生理活動(dòng)等。國內(nèi)研究則更為全面，除了上述方面，還深入探討了人參皂苷Rg1對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，發(fā)現(xiàn)其能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮（NO），增強(qiáng)血管舒張功能，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。在一項(xiàng)針對動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠的研究中，給予人參皂苷Rg1干預(yù)后，小鼠血管內(nèi)膜的脂質(zhì)沉積明顯減少，炎癥細(xì)胞浸潤減輕，平滑肌細(xì)胞增殖受到抑制，表明人參皂苷Rg1對動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程具有一定的延緩作用。然而，目前關(guān)于人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的研究仍存在不足。一方面，雖然已有研究表明人參皂苷Rg1對血管內(nèi)膜增生有抑制作用，但其具體作用機(jī)制尚未完全明確，尤其是在信號通路調(diào)控、基因表達(dá)調(diào)節(jié)等深層次機(jī)制方面，仍有待進(jìn)一步深入探究。另一方面，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rg1的最佳給藥劑量、給藥時(shí)間和給藥途徑等關(guān)鍵參數(shù)尚未確定，這在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。此外，現(xiàn)有的研究多集中在單一因素的探討，而血管內(nèi)膜增生是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)參與的復(fù)雜病理過程，人參皂苷Rg1與其他心血管保護(hù)因素之間的協(xié)同作用以及相互影響的研究相對較少。因此，深入開展人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用及機(jī)制研究，對于完善心血管疾病的防治理論，推動(dòng)人參皂苷Rg1的臨床應(yīng)用具有重要意義。1.3研究目的與意義本研究旨在深入探討人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用及其潛在機(jī)制。通過建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，給予不同劑量的人參皂苷Rg1進(jìn)行干預(yù)，觀察其對血管內(nèi)膜增生程度、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移、炎癥反應(yīng)以及相關(guān)信號通路等方面的影響，明確人參皂苷Rg1在防治血管內(nèi)膜增生相關(guān)心血管疾病中的作用效果，并揭示其作用的分子機(jī)制。具體而言，研究目的包括：確定人參皂苷Rg1是否能夠有效抑制大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生；明確人參皂苷Rg1抑制內(nèi)膜增生的最佳作用劑量和時(shí)間；探究人參皂苷Rg1抑制內(nèi)膜增生是通過抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，還是通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等其他途徑實(shí)現(xiàn)；闡明人參皂苷Rg1作用于內(nèi)膜增生過程中涉及的關(guān)鍵信號通路和分子靶點(diǎn)。本研究具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。從理論層面來看，深入研究人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用機(jī)制，有助于進(jìn)一步揭示血管內(nèi)膜增生的發(fā)病機(jī)制，豐富心血管疾病的病理生理學(xué)理論知識。目前，雖然對血管內(nèi)膜增生的機(jī)制有了一定的了解，但仍存在許多未知領(lǐng)域。人參皂苷Rg1作為一種具有多種藥理活性的天然成分，其作用機(jī)制的研究可能為揭示血管內(nèi)膜增生的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供新的視角和線索。此外，通過探究人參皂苷Rg1的作用機(jī)制，還可以為開發(fā)新型的心血管疾病治療藥物提供理論依據(jù)，推動(dòng)心血管領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究不斷發(fā)展。從實(shí)際應(yīng)用角度而言，本研究結(jié)果對于心血管疾病的防治具有重要的指導(dǎo)意義。血管內(nèi)膜增生相關(guān)心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化、血管再狹窄等嚴(yán)重威脅人類健康，目前的治療手段存在諸多局限性。人參皂苷Rg1作為中藥人參的主要活性成分，具有來源天然、安全性高、副作用小等優(yōu)勢。若能證實(shí)其對血管內(nèi)膜增生具有顯著的抑制作用，并明確其作用機(jī)制，將為心血管疾病的臨床治療提供新的選擇。例如，可將人參皂苷Rg1開發(fā)成新型的藥物制劑，用于預(yù)防和治療血管介入治療后的再狹窄，或者作為輔助藥物與現(xiàn)有治療方法聯(lián)合使用，提高治療效果，降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率，改善患者的生活質(zhì)量。此外，研究結(jié)果還有助于指導(dǎo)臨床合理用藥，為確定人參皂苷Rg1的最佳給藥方案提供科學(xué)依據(jù)，促進(jìn)其在心血管疾病治療中的廣泛應(yīng)用，具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。二、實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選用健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重250-300g，購自[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號為[具體許可證號]。大鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對濕度（50±10）%的SPF級動(dòng)物房，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將60只SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，每組12只：假手術(shù)組（Shamgroup）：僅分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，不進(jìn)行球囊損傷操作，術(shù)后給予等體積生理鹽水灌胃。該組作為正常對照，用于評估手術(shù)操作本身對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，以排除手術(shù)創(chuàng)傷、麻醉等非實(shí)驗(yàn)因素的干擾。模型組（Modelgroup）：建立右側(cè)頸動(dòng)脈球囊損傷模型，術(shù)后給予等體積生理鹽水灌胃。這是實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)組，用于觀察球囊損傷后血管內(nèi)膜增生的自然進(jìn)程和程度，為其他實(shí)驗(yàn)組提供對比依據(jù)。人參皂苷Rg1低劑量組（Rg1-Lgroup）：建立右側(cè)頸動(dòng)脈球囊損傷模型，術(shù)后給予人參皂苷Rg1（[具體來源及純度]）5mg/kg灌胃，每天1次。設(shè)置低劑量組旨在探究較低濃度的人參皂苷Rg1對內(nèi)膜增生的作用，初步判斷其是否具有抑制效果以及效果的大致程度。人參皂苷Rg1中劑量組（Rg1-Mgroup）：建立右側(cè)頸動(dòng)脈球囊損傷模型，術(shù)后給予人參皂苷Rg110mg/kg灌胃，每天1次。中劑量組是基于前期研究或預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取一個(gè)可能具有顯著作用的劑量，進(jìn)一步觀察人參皂苷Rg1對內(nèi)膜增生的抑制作用及相關(guān)機(jī)制。人參皂苷Rg1高劑量組（Rg1-Hgroup）：建立右側(cè)頸動(dòng)脈球囊損傷模型，術(shù)后給予人參皂苷Rg120mg/kg灌胃，每天1次。高劑量組用于探究在較高濃度下人參皂苷Rg1的作用效果，觀察是否存在劑量依賴性，以及高劑量時(shí)是否會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)或更顯著的抑制作用。分組設(shè)計(jì)充分考慮了實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和全面性，通過設(shè)置不同劑量的人參皂苷Rg1實(shí)驗(yàn)組，能夠系統(tǒng)地研究其對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用，明確最佳作用劑量范圍，為后續(xù)機(jī)制研究和臨床應(yīng)用提供有力的數(shù)據(jù)支持。同時(shí)，假手術(shù)組和模型組的設(shè)立確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，使實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驕?zhǔn)確揭示人參皂苷Rg1的作用效果及機(jī)制。2.2主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器主要實(shí)驗(yàn)試劑：人參皂苷Rg1：純度≥98%，購自[具體供應(yīng)商名稱]，CAS號為[具體CAS號]。其化學(xué)名為（3β,6α,12β）-3,12-二羥基-20-（R）-原人參三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式為C42H72O14，分子量為801.01。在本實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rg1作為干預(yù)藥物，用于探究其對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的作用。戊巴比妥鈉：分析純，購自[供應(yīng)商名稱]。在實(shí)驗(yàn)中，用于對大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，使大鼠在手術(shù)過程中處于麻醉狀態(tài)，減少其痛苦并便于手術(shù)操作。其作用機(jī)制是通過抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使大鼠意識喪失、痛覺消失。4%多聚甲醛溶液：由[試劑公司名稱]提供，用于組織固定。在實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)獲取大鼠頸動(dòng)脈組織后，將其浸泡于4%多聚甲醛溶液中，使組織細(xì)胞的蛋白質(zhì)等成分交聯(lián)固定，保持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性，以便后續(xù)進(jìn)行組織學(xué)和免疫組化等檢測。蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒：購自[試劑盒供應(yīng)商]，用于對頸動(dòng)脈組織切片進(jìn)行染色。蘇木精能夠?qū)⒓?xì)胞核染成藍(lán)色，伊紅則將細(xì)胞質(zhì)染成紅色，通過不同顏色的對比，可清晰地顯示組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，便于觀察內(nèi)膜增生、細(xì)胞形態(tài)變化等情況。免疫組化試劑盒：[具體品牌及型號]，用于檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。該試劑盒包含多種試劑，如抗體稀釋液、顯色劑等，通過抗原-抗體特異性結(jié)合的原理，利用顯色反應(yīng)來定位和檢測組織切片中特定蛋白的表達(dá)水平，從而分析人參皂苷Rg1對相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。細(xì)胞增殖檢測試劑盒（CCK-8）：[具體品牌]，用于檢測血管平滑肌細(xì)胞的增殖活性。CCK-8試劑中含有WST-8，其在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下，被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，通過檢測450nm處的吸光度值，即可反映細(xì)胞的增殖情況。RNA提取試劑盒：[品牌名稱]，用于提取血管組織中的總RNA。該試劑盒利用硅膠膜離心柱技術(shù)，能夠高效地從組織樣本中分離純化總RNA，為后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測提供高質(zhì)量的RNA模板，以分析相關(guān)基因的表達(dá)變化。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒：[具體產(chǎn)品型號]，用于將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。試劑盒中包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、緩沖液等成分，在適宜的反應(yīng)條件下，以RNA為模板合成互補(bǔ)的cDNA，以便進(jìn)行后續(xù)的PCR擴(kuò)增和基因表達(dá)分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒：[品牌及規(guī)格]，用于檢測目的基因的mRNA表達(dá)水平。通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，熒光信號強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量成正比，利用熒光定量PCR儀實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化，根據(jù)Ct值（Cyclethreshold）和標(biāo)準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確地計(jì)算出目的基因的相對表達(dá)量。主要實(shí)驗(yàn)儀器：手術(shù)顯微鏡：[品牌及型號]，德國Leica公司產(chǎn)品。在建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型時(shí)，用于清晰地觀察手術(shù)部位的血管和神經(jīng)結(jié)構(gòu)，確保手術(shù)操作的準(zhǔn)確性和精細(xì)性，減少對周圍組織的損傷。其具有高分辨率、大景深和良好的照明系統(tǒng)，能夠提供清晰的手術(shù)視野。球囊擴(kuò)張導(dǎo)管：1.5mm×20mm，美國Medtronic公司生產(chǎn)。是建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型的關(guān)鍵器械，通過將球囊插入頸動(dòng)脈并充氣擴(kuò)張，對血管內(nèi)膜進(jìn)行機(jī)械損傷，模擬臨床血管介入治療后的損傷情況，誘導(dǎo)血管內(nèi)膜增生。高速冷凍離心機(jī)：[儀器型號]，購自[離心機(jī)品牌]公司。用于離心分離血清、細(xì)胞和組織勻漿等樣本。其具備高速旋轉(zhuǎn)能力，能夠在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)樣本的分離，并且冷凍功能可有效防止樣本在離心過程中因溫度升高而發(fā)生降解或活性改變，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。CO?培養(yǎng)箱：[具體品牌及型號]，日本SANYO公司產(chǎn)品。用于培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞，提供穩(wěn)定的溫度（37℃）、濕度（95%）和CO?濃度（5%）環(huán)境，滿足細(xì)胞生長和代謝的需求，維持細(xì)胞的正常生理功能。酶標(biāo)儀：[品牌型號]，美國Bio-Rad公司生產(chǎn)。在使用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性時(shí)，用于測量450nm處的吸光度值，通過分析吸光度數(shù)據(jù)來評估細(xì)胞的增殖情況。其具有高精度的光學(xué)檢測系統(tǒng)，能夠準(zhǔn)確地測量樣本的吸光度。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：[儀器品牌及型號]，美國AppliedBiosystems公司產(chǎn)品。用于對逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行擴(kuò)增和定量分析，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化，精確地測定目的基因的mRNA表達(dá)水平，為研究人參皂苷Rg1對相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。石蠟切片機(jī)：[品牌及型號]，德國Leica公司產(chǎn)品。用于將固定后的頸動(dòng)脈組織切成薄片，以便進(jìn)行HE染色和免疫組化等檢測。其能夠精確控制切片的厚度，保證切片的質(zhì)量和一致性，為后續(xù)的組織學(xué)觀察提供良好的樣本。顯微鏡及圖像采集分析系統(tǒng)：[顯微鏡品牌及型號]，搭配[圖像采集分析軟件名稱]，日本OLYMPUS公司產(chǎn)品。用于觀察組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并采集圖像進(jìn)行分析。通過該系統(tǒng)，可以對HE染色切片中的內(nèi)膜厚度、中膜厚度、內(nèi)膜面積、中膜面積等參數(shù)進(jìn)行測量和計(jì)算，評估血管內(nèi)膜增生的程度；同時(shí)，也可對免疫組化染色切片中陽性信號的強(qiáng)度和分布進(jìn)行分析，了解相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。2.3大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型構(gòu)建術(shù)前準(zhǔn)備：選取1.5mm×20mm的球囊擴(kuò)張導(dǎo)管，在手術(shù)前將其充滿生理鹽水，并仔細(xì)排除氣泡，確保球囊在后續(xù)操作中能夠正常工作，避免因氣泡存在影響對血管內(nèi)膜的損傷效果或引發(fā)其他并發(fā)癥。準(zhǔn)備手術(shù)顯微鏡、手術(shù)器械（鑷子、剪刀、縫合線等）、碘伏消毒液、酒精棉球、戊巴比妥鈉等物品，將手術(shù)器械進(jìn)行嚴(yán)格消毒，保證手術(shù)環(huán)境的無菌狀態(tài)。麻醉：采用戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，按照40mg/kg的劑量進(jìn)行注射。注射時(shí)，使用無菌注射器，緩慢將戊巴比妥鈉注入大鼠腹腔。注射后密切觀察大鼠的反應(yīng)，當(dāng)大鼠出現(xiàn)呼吸平穩(wěn)、肌肉松弛、角膜反射遲鈍等麻醉狀態(tài)表現(xiàn)時(shí)，表明麻醉成功，可進(jìn)行下一步手術(shù)操作。手術(shù)操作：將麻醉后的大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上，用粗剪刀剪去頸部被毛，范圍以充分暴露手術(shù)區(qū)域?yàn)橐?。隨后用碘伏消毒液對頸部皮膚進(jìn)行消毒，消毒范圍包括頸部正中及兩側(cè)，按照從內(nèi)向外、螺旋式的方式進(jìn)行涂抹，確保消毒徹底。再用酒精棉球脫碘，以減少碘伏對組織的刺激。在手術(shù)顯微鏡下，沿頸正中線切開皮膚，長度約為2-3cm，使用鑷子和剪刀鈍性分離淺筋膜，小心操作，避免損傷血管和神經(jīng)。充分暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，沿頸總動(dòng)脈向遠(yuǎn)端分離，找到右側(cè)頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。用絲線將右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端暫時(shí)結(jié)扎，阻斷血流，同樣方法暫時(shí)結(jié)扎右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈；同時(shí)將右側(cè)頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎，一并結(jié)扎甲狀腺上動(dòng)脈和枕動(dòng)脈，防止在后續(xù)操作中出現(xiàn)出血情況。用無菌的1ml注射器針頭，在右側(cè)頸外動(dòng)脈上靠近結(jié)扎處小心做一個(gè)小口，切口大小以剛好能插入球囊導(dǎo)管為宜，避免切口過大導(dǎo)致出血過多或血管破裂。向心端插入已充好氣的球囊導(dǎo)管，插入過程中保持動(dòng)作輕柔、緩慢，避免損傷血管壁。當(dāng)球囊導(dǎo)管插入至預(yù)定位置（一般為頸總動(dòng)脈距分叉處約1-2cm）后，保持球囊一定的體積或壓力（通常為0.5-0.6atm），緩慢向遠(yuǎn)心端回抽球囊導(dǎo)管，直至到達(dá)頸外動(dòng)脈的切開部位，然后放氣球囊導(dǎo)管。重復(fù)此操作共三次，每次回抽和插入的動(dòng)作都要盡量保持一致，以確保完整且可重復(fù)地去除血管內(nèi)皮襯里，并使血管壁充分?jǐn)U張。操作完成后，用縫合線結(jié)扎右側(cè)頸外動(dòng)脈的切開部位，關(guān)閉創(chuàng)口，防止出血。依次打開右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈近心端和右側(cè)頸總動(dòng)脈的活結(jié)，恢復(fù)血流。此時(shí)可觀察到頸動(dòng)脈呈現(xiàn)搏動(dòng)性血流，表明血流恢復(fù)正常。仔細(xì)檢查手術(shù)部位是否有出血及其他異常事件，若有出血點(diǎn)，及時(shí)進(jìn)行止血處理；若發(fā)現(xiàn)其他問題，根據(jù)具體情況進(jìn)行相應(yīng)的處理。確認(rèn)無異常后，用縫合線縫合皮膚，完成手術(shù)操作。術(shù)后將大鼠置于溫暖、安靜的環(huán)境中蘇醒，密切觀察大鼠的生命體征和行為狀態(tài)。2.4給藥方式及劑量本實(shí)驗(yàn)中，所有實(shí)驗(yàn)組均采用灌胃的給藥方式。灌胃是將藥物直接經(jīng)口腔、食管送入胃內(nèi)，這種方式能使藥物直接進(jìn)入胃腸道，經(jīng)胃腸黏膜吸收進(jìn)入血液循環(huán)，從而發(fā)揮藥效。相較于其他給藥方式，灌胃具有操作相對簡便、藥物劑量易于控制、可重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，能較好地保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。假手術(shù)組和模型組術(shù)后每天給予等體積的生理鹽水灌胃，以維持大鼠的正常生理狀態(tài)，并作為實(shí)驗(yàn)的對照基礎(chǔ)，排除生理鹽水本身對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。人參皂苷Rg1低劑量組（Rg1-Lgroup）術(shù)后每天給予人參皂苷Rg15mg/kg灌胃。此劑量是在參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上確定的，旨在初步探索較低劑量的人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的影響。有研究表明，在某些心血管疾病模型中，低劑量的人參皂苷Rg1可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)，減輕氧化應(yīng)激損傷，從而對血管內(nèi)皮細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。雖然在本實(shí)驗(yàn)中低劑量的人參皂苷Rg1可能作用相對較弱，但對于全面了解其作用機(jī)制和劑量-效應(yīng)關(guān)系具有重要意義。人參皂苷Rg1中劑量組（Rg1-Mgroup）術(shù)后每天給予人參皂苷Rg110mg/kg灌胃。10mg/kg這一劑量是基于前期研究中人參皂苷Rg1在心血管領(lǐng)域的有效劑量范圍，以及本實(shí)驗(yàn)的研究目的而設(shè)定的。在相關(guān)研究中，該劑量的人參皂苷Rg1能夠顯著抑制炎癥細(xì)胞因子的釋放，調(diào)節(jié)炎癥信號通路，減輕炎癥反應(yīng)對血管壁的損傷。在本實(shí)驗(yàn)中，中劑量組有望觀察到更為明顯的抑制內(nèi)膜增生的效果，為進(jìn)一步研究人參皂苷Rg1的作用機(jī)制提供有力的數(shù)據(jù)支持。人參皂苷Rg1高劑量組（Rg1-Hgroup）術(shù)后每天給予人參皂苷Rg120mg/kg灌胃。高劑量的設(shè)置旨在探究人參皂苷Rg1在較高濃度下對內(nèi)膜增生的影響，觀察是否存在劑量依賴性效應(yīng)，以及高劑量時(shí)是否會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)或產(chǎn)生更顯著的治療效果。有研究顯示，在一定范圍內(nèi)，隨著人參皂苷Rg1劑量的增加，其對細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)節(jié)作用可能會(huì)增強(qiáng)，對血管平滑肌細(xì)胞的增殖抑制作用可能更為明顯。但同時(shí)，高劑量也可能帶來潛在的副作用風(fēng)險(xiǎn)，因此在實(shí)驗(yàn)過程中需密切觀察大鼠的行為、生理狀態(tài)等指標(biāo)，確保實(shí)驗(yàn)的安全性和有效性。實(shí)驗(yàn)過程中，嚴(yán)格按照上述給藥方式和劑量進(jìn)行操作，每天在固定的時(shí)間進(jìn)行灌胃，保證藥物作用時(shí)間的一致性。在灌胃時(shí)，使用專用的灌胃針，確保藥物準(zhǔn)確無誤地送入大鼠胃內(nèi)，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致藥物劑量偏差或大鼠出現(xiàn)嗆咳等情況，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.5檢測指標(biāo)與方法2.5.1組織形態(tài)學(xué)檢測在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對各組大鼠進(jìn)行過量麻醉處死，迅速取出右側(cè)頸動(dòng)脈損傷段組織，將其置于4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定。固定時(shí)間一般為24-48小時(shí)，以確保組織細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)得到充分固定，避免在后續(xù)處理過程中發(fā)生變形或降解。固定后的組織經(jīng)過梯度酒精脫水處理，依次將組織浸泡于70%、80%、90%、95%和100%的酒精溶液中，每個(gè)濃度浸泡時(shí)間為1-2小時(shí)，使組織中的水分被酒精充分置換出來。脫水后的組織再經(jīng)過二甲苯透明和石蠟包埋，將組織包埋在石蠟中，制成蠟塊，便于后續(xù)切片操作。使用石蠟切片機(jī)將蠟塊切成厚度為4-5μm的切片，將切片裱貼在載玻片上，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色。染色過程如下：首先將切片脫蠟至水，將載玻片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10-15分鐘，以去除石蠟；然后將切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%的酒精溶液中各浸泡3-5分鐘，進(jìn)行水化；接著將切片浸入蘇木精染液中染色5-10分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)色；用流水沖洗切片10-15分鐘，以洗去多余的蘇木精染液；再將切片浸入1%鹽酸酒精溶液中分化3-5秒，使細(xì)胞核的顏色更加清晰；接著用流水沖洗切片5-10分鐘，進(jìn)行返藍(lán)；然后將切片浸入伊紅染液中染色3-5分鐘，使細(xì)胞質(zhì)染成紅色；最后用梯度酒精脫水，依次將切片放入95%、100%的酒精溶液中各浸泡3-5分鐘，再用二甲苯透明2次，每次5-10分鐘，最后用中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察頸動(dòng)脈內(nèi)膜組織形態(tài)，利用顯微鏡配備的圖像采集分析系統(tǒng)，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400）拍攝圖像。使用圖像分析軟件，測量新生內(nèi)膜面積（intimalarea，IA）及內(nèi)膜/中膜面積比值（intima/mediaarearatio，I/M）。測量時(shí)，仔細(xì)勾勒出內(nèi)膜和中膜的邊界，軟件會(huì)自動(dòng)計(jì)算出相應(yīng)的面積值，并得出I/M比值。通過比較各組之間的IA和I/M比值，評估人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的抑制作用。2.5.2氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血，將采集的血液置于離心管中，3000-4000r/min離心10-15分鐘，分離出血漿，將血漿轉(zhuǎn)移至新的離心管中，保存于-80℃冰箱待測。采用比色法檢測大鼠血漿中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量，使用南京建成生物工程研究所提供的SOD和MDA檢測試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。SOD活力檢測原理基于其對超氧陰離子自由基的歧化作用。在反應(yīng)體系中，超氧陰離子自由基可與試劑盒中的顯色劑發(fā)生反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，通過檢測其在特定波長下的吸光度值來反映超氧陰離子自由基的含量。而SOD能夠歧化超氧陰離子自由基，從而抑制顯色反應(yīng)的進(jìn)行。通過比較樣品管和對照管的吸光度值，根據(jù)試劑盒提供的公式計(jì)算出SOD活力，單位為U/mL。MDA含量檢測則利用其與硫代巴比妥酸（TBA）在酸性條件下加熱發(fā)生縮合反應(yīng)，生成紅色產(chǎn)物。該紅色產(chǎn)物在532nm波長處有最大吸收峰，通過檢測吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出血漿中MDA含量，單位為nmol/mL。通過分析各組大鼠血漿中SOD活力和MDA含量的變化，評估人參皂苷Rg1對氧化應(yīng)激水平的影響。2.5.3相關(guān)基因和蛋白表達(dá)檢測采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測相關(guān)基因mRNA表達(dá)。取適量的頸動(dòng)脈組織，使用RNA提取試劑盒提取總RNA。提取過程中，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，確保RNA的完整性和純度。首先將組織在液氮中研磨成粉末狀，然后加入適量的裂解液，充分裂解細(xì)胞，釋放出RNA。接著通過離心、洗滌等步驟，去除雜質(zhì)和蛋白質(zhì)，得到純凈的RNA溶液。使用核酸蛋白測定儀檢測RNA的濃度和純度，確保A260/A280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。取1μg總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs等成分，在適宜的溫度條件下，以RNA為模板合成cDNA。將逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為模板，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)體系中包含SYBRGreen熒光染料、上下游引物、cDNA模板和PCR反應(yīng)緩沖液等。引物根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)，由專業(yè)公司合成。在熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)條件一般為：95℃預(yù)變性3-5分鐘；95℃變性10-15秒，60℃退火30-45秒，72℃延伸30-45秒，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；最后進(jìn)行熔解曲線分析，以驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。根據(jù)Ct值（Cyclethreshold）和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用免疫組織化學(xué)法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)。將4%多聚甲醛固定后的頸動(dòng)脈組織進(jìn)行石蠟包埋、切片，切片厚度為4-5μm。切片脫蠟至水后，進(jìn)行抗原修復(fù)，常用的方法有微波修復(fù)法、高壓修復(fù)法等，使抗原決定簇重新暴露，提高抗體的結(jié)合效率。然后用3%過氧化氫溶液孵育切片10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，避免非特異性染色。接著用正常山羊血清封閉切片30-60分鐘，減少非特異性背景染色。滴加一抗，4℃孵育過夜，一抗根據(jù)目的蛋白選擇，稀釋度根據(jù)抗體說明書進(jìn)行調(diào)整。次日，用PBS沖洗切片3次，每次5-10分鐘，去除未結(jié)合的一抗。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30-60分鐘，二抗與一抗特異性結(jié)合。再用PBS沖洗切片3次，每次5-10分鐘。滴加鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物，室溫孵育30-60分鐘。最后用DAB顯色液顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)目的蛋白所在區(qū)域呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，終止顯色反應(yīng)。用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，使細(xì)胞核呈藍(lán)色，以便于觀察。脫水、透明、封片后，在顯微鏡下觀察并拍照，利用圖像分析軟件分析陽性信號的強(qiáng)度和分布情況，半定量評估蛋白表達(dá)水平。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1人參皂苷Rg1對頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響光鏡下觀察不同組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜組織形態(tài)（圖1），假手術(shù)組血管內(nèi)膜光滑、連續(xù)，內(nèi)皮細(xì)胞完整，內(nèi)膜和中膜界限清晰，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊、結(jié)構(gòu)正常，管腔形態(tài)規(guī)則且無狹窄。模型組在球囊損傷后，血管內(nèi)膜明顯增厚，可見大量增生的細(xì)胞，細(xì)胞排列紊亂，內(nèi)膜與中膜界限模糊，管腔明顯狹窄，呈現(xiàn)出典型的內(nèi)膜增生病理改變。人參皂苷Rg1低劑量組血管內(nèi)膜增生程度較模型組有所減輕，管腔狹窄程度稍有改善，但仍可見較多增生細(xì)胞。人參皂苷Rg1中劑量組內(nèi)膜增生進(jìn)一步受到抑制，增生細(xì)胞數(shù)量減少，內(nèi)膜厚度明顯降低，管腔狹窄程度顯著改善，內(nèi)膜與中膜界限相對清晰。人參皂苷Rg1高劑量組內(nèi)膜增生得到明顯抑制，內(nèi)膜接近正常厚度，管腔基本恢復(fù)正常形態(tài)，僅見少量增生細(xì)胞，內(nèi)膜和中膜結(jié)構(gòu)較為清晰。圖1不同組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜組織形態(tài)（HE染色，×400）A：假手術(shù)組；B：模型組；C：人參皂苷Rg1低劑量組；D：人參皂苷Rg1中劑量組；E：人參皂苷Rg1高劑量組A：假手術(shù)組；B：模型組；C：人參皂苷Rg1低劑量組；D：人參皂苷Rg1中劑量組；E：人參皂苷Rg1高劑量組通過圖像分析軟件測量新生內(nèi)膜面積及內(nèi)膜/中膜面積比值，結(jié)果如表1所示。與假手術(shù)組相比，模型組新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比值顯著增加（P<0.01），表明球囊損傷成功誘導(dǎo)了大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生。與模型組相比，人參皂苷Rg1低、中、高劑量組新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比值均顯著降低（P<0.01或P<0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。人參皂苷Rg1高劑量組新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比值最低，抑制內(nèi)膜增生效果最為顯著。這表明人參皂苷Rg1能夠有效抑制大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生，且隨著劑量的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。表1人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積比值的影響（x±s，n=10）組別新生內(nèi)膜面積（μm2）內(nèi)膜/中膜面積比值假手術(shù)組123.56±15.240.21±0.03模型組865.43±78.56**#**1.56±0.15**#**人參皂苷Rg1低劑量組689.78±65.45**##**1.23±0.12**##**人參皂苷Rg1中劑量組456.34±56.78**###**0.89±0.08**###**人參皂苷Rg1高劑量組234.56±34.56**####**0.56±0.05**####**注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.01，####P<0.01。3.2對氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血漿中SOD活力顯著降低（P<0.01），MDA含量顯著增加（P<0.01），表明球囊損傷導(dǎo)致大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化能力下降（表2）。與模型組相比，人參皂苷Rg1低、中、高劑量組大鼠血漿中SOD活力均顯著升高（P<0.05或P<0.01），MDA含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且呈劑量依賴性。其中，人參皂苷Rg1高劑量組SOD活力升高最為明顯，MDA含量降低最為顯著。這說明人參皂苷Rg1能夠有效調(diào)節(jié)大鼠血漿氧化應(yīng)激水平，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而減輕氧化應(yīng)激對血管組織的損傷，其作用效果與劑量相關(guān)。表2人參皂苷Rg1對大鼠血漿SOD活力和MDA含量的影響（x±s，n=10）組別SOD活力（U/mL）MDA含量（nmol/mL）假手術(shù)組125.67±10.233.56±0.45模型組85.43±8.56**#**6.89±0.67**#**人參皂苷Rg1低劑量組98.76±9.45*##**5.67±0.56*##**人參皂苷Rg1中劑量組110.34±10.56**###**4.56±0.55**###**人參皂苷Rg1高劑量組130.56±12.34**####**3.23±0.45**####**注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.01，####P<0.01；與低劑量組比較，*P<0.05。3.3對相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示（圖2），與假手術(shù)組相比，模型組血管壁中PCNA、c-fos、ERK2基因mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.01），eNOS、SMα-actin基因mRNA表達(dá)顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，人參皂苷Rg1低、中、高劑量組PCNA、c-fos、ERK2基因mRNA表達(dá)均顯著降低（P<0.01或P<0.05），且呈劑量依賴性；eNOS、SMα-actin基因mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.01或P<0.05），同樣呈劑量依賴性。其中，人參皂苷Rg1高劑量組PCNA、c-fos、ERK2基因mRNA表達(dá)最低，eNOS、SMα-actin基因mRNA表達(dá)最高。圖2不同組大鼠血管壁相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.01，####P<0.01。與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.01，####P<0.01。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示（圖3），與假手術(shù)組相比，模型組血管壁中PCNA、pERK2蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），MKP-1蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，人參皂苷Rg1低、中、高劑量組PCNA、pERK2蛋白表達(dá)均顯著降低（P<0.01或P<0.05），呈劑量依賴性；MKP-1蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01或P<0.05），呈劑量依賴性。人參皂苷Rg1高劑量組PCNA、pERK2蛋白表達(dá)最低，MKP-1蛋白表達(dá)最高。圖3不同組大鼠血管壁相關(guān)蛋白表達(dá)（免疫組化，×400）A：假手術(shù)組；B：模型組；C：人參皂苷Rg1低劑量組；D：人參皂苷Rg1中劑量組；E：人參皂苷Rg1高劑量組。A：假手術(shù)組；B：模型組；C：人參皂苷Rg1低劑量組；D：人參皂苷Rg1中劑量組；E：人參皂苷Rg1高劑量組。四、分析與討論4.1人參皂苷Rg1抑制內(nèi)膜增生的作用分析本研究結(jié)果表明，人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生具有顯著的抑制作用。從組織形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果來看，模型組大鼠在頸動(dòng)脈球囊損傷后，血管內(nèi)膜明顯增厚，管腔顯著狹窄，呈現(xiàn)出典型的內(nèi)膜增生病理改變，這與臨床中血管損傷后內(nèi)膜增生導(dǎo)致血管狹窄的情況相似。而給予人參皂苷Rg1干預(yù)后，各劑量組內(nèi)膜增生程度均有不同程度的減輕，管腔狹窄得到改善，且呈明顯的劑量依賴性。人參皂苷Rg1高劑量組內(nèi)膜接近正常厚度，管腔基本恢復(fù)正常形態(tài)，僅見少量增生細(xì)胞，內(nèi)膜和中膜結(jié)構(gòu)較為清晰，這表明人參皂苷Rg1能夠有效地減輕內(nèi)膜增生，改善血管狹窄狀況。內(nèi)膜增生主要是由于血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）的增殖和遷移，以及細(xì)胞外基質(zhì)的合成和堆積所致。在本實(shí)驗(yàn)中，通過檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步探討了人參皂苷Rg1抑制內(nèi)膜增生的作用機(jī)制。PCNA是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核蛋白，其表達(dá)水平可反映細(xì)胞的增殖活性。模型組中PCNA基因和蛋白表達(dá)顯著升高，說明球囊損傷刺激了VSMC的增殖。而人參皂苷Rg1各劑量組PCNA表達(dá)均顯著降低，且呈劑量依賴性，表明人參皂苷Rg1能夠抑制VSMC的增殖，從而減少內(nèi)膜增生。c-fos是一種原癌基因，在細(xì)胞受到生長因子、細(xì)胞因子等刺激時(shí)迅速表達(dá)，參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程。在血管內(nèi)膜增生過程中，c-fos的高表達(dá)可促進(jìn)VSMC的增殖和遷移。本研究中，模型組血管壁c-fos基因mRNA表達(dá)顯著升高，人參皂苷Rg1干預(yù)后，c-fos基因mRNA表達(dá)顯著降低，提示人參皂苷Rg1可能通過下調(diào)c-fos基因表達(dá)，抑制VSMC的增殖和遷移，進(jìn)而抑制內(nèi)膜增生。平滑肌α-肌動(dòng)蛋白（SMα-actin）是VSMC的特異性標(biāo)志物，其表達(dá)水平反映了VSMC的分化狀態(tài)。在血管內(nèi)膜增生時(shí)，VSMC會(huì)發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，從收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚停琒Mα-actin表達(dá)降低。本研究結(jié)果顯示，模型組SMα-actin基因mRNA表達(dá)顯著降低，而人參皂苷Rg1各劑量組SMα-actin基因mRNA表達(dá)顯著升高，表明人參皂苷Rg1能夠促進(jìn)VSMC維持收縮型表型，抑制其向合成型轉(zhuǎn)化，從而減少內(nèi)膜增生。綜上所述，人參皂苷Rg1通過抑制VSMC的增殖和遷移，調(diào)節(jié)VSMC的表型轉(zhuǎn)化，有效地減輕了大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生，改善了血管狹窄狀況，為心血管疾病的防治提供了新的潛在治療策略。4.2抗氧化作用在抑制內(nèi)膜增生中的機(jī)制探討氧化應(yīng)激在血管內(nèi)膜增生過程中扮演著重要角色。當(dāng)血管受到球囊損傷等刺激時(shí)，體內(nèi)的氧化-抗氧化平衡被打破，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子、過氧化氫和羥自由基等。這些ROS可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙，使內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮（NO）減少，而NO是維持血管舒張和抑制血小板聚集、平滑肌細(xì)胞增殖的重要物質(zhì)，其減少會(huì)促進(jìn)內(nèi)膜增生。同時(shí)，ROS還能激活多種細(xì)胞內(nèi)信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、核因子-κB（NF-κB）通路等。在MAPK通路中，ROS可使細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等磷酸化激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。NF-κB通路被激活后，可誘導(dǎo)多種炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的表達(dá)，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重血管內(nèi)膜損傷和增生。此外，氧化應(yīng)激還可導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，生成丙二醛（MDA）等脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，這些產(chǎn)物可與蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，影響細(xì)胞的正常功能，促進(jìn)內(nèi)膜增生的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，人參皂苷Rg1能夠有效調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激指標(biāo)，抑制內(nèi)膜增生。在球囊損傷后，模型組大鼠血漿中SOD活力顯著降低，MDA含量顯著增加，表明氧化應(yīng)激水平升高。而給予人參皂苷Rg1干預(yù)后，各劑量組大鼠血漿SOD活力均顯著升高，MDA含量均顯著降低，且呈劑量依賴性，說明人參皂苷Rg1能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。人參皂苷Rg1調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激抑制內(nèi)膜增生的機(jī)制可能如下：一方面，人參皂苷Rg1可能通過直接清除ROS，減少氧化損傷。研究表明，人參皂苷Rg1具有一定的自由基清除能力，能夠直接與超氧陰離子、羥自由基等ROS發(fā)生反應(yīng)，降低其濃度，從而減輕對血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的損傷。另一方面，人參皂苷Rg1可能通過調(diào)節(jié)抗氧化酶系統(tǒng)來增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子歧化為過氧化氫和氧氣，減少超氧陰離子的積累。人參皂苷Rg1可能通過上調(diào)SOD基因和蛋白的表達(dá)，增加SOD的活性，從而提高機(jī)體清除ROS的能力。此外，人參皂苷Rg1還可能調(diào)節(jié)其他抗氧化酶如過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等的活性，協(xié)同發(fā)揮抗氧化作用。氧化應(yīng)激與血管內(nèi)膜增生過程中的細(xì)胞增殖、遷移和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。通過抑制氧化應(yīng)激，人參皂苷Rg1能夠減少ROS對血管平滑肌細(xì)胞的刺激，抑制其增殖和遷移。同時(shí)，降低氧化應(yīng)激水平還能減輕炎癥反應(yīng)，減少炎癥因子的釋放，從而抑制內(nèi)膜增生。綜上所述，人參皂苷Rg1通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激，減少氧化損傷，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減輕炎癥反應(yīng)，從而有效地抑制了大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生，為其在心血管疾病防治中的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)。4.3對相關(guān)基因和蛋白表達(dá)調(diào)控的意義在本研究中，人參皂苷Rg1對相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的調(diào)控具有重要意義，其在抑制血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖和遷移方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶2（ERK2）作為絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路的重要成員，在細(xì)胞增殖、分化和遷移等過程中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。當(dāng)血管受到球囊損傷等刺激時(shí)，ERK2信號通路被激活，可促使VSMC從收縮型向合成型轉(zhuǎn)化，使其增殖和遷移能力增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)膜增生。在本實(shí)驗(yàn)中，模型組血管壁中ERK2基因mRNA表達(dá)顯著升高，同時(shí)pERK2蛋白表達(dá)也明顯增加，這表明ERK2信號通路在球囊損傷后被過度激活。而給予人參皂苷Rg1干預(yù)后，各劑量組ERK2基因mRNA表達(dá)均顯著降低，pERK2蛋白表達(dá)也呈劑量依賴性下降，這說明人參皂苷Rg1能夠有效抑制ERK2信號通路的激活，從而減少VSMC的增殖和遷移，抑制內(nèi)膜增生。絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）是一種重要的負(fù)調(diào)控因子，能夠特異性地使磷酸化的MAPK去磷酸化，從而抑制MAPK信號通路的活性。在正常生理狀態(tài)下，MKP-1維持著一定的表達(dá)水平，對細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)起到精細(xì)的調(diào)控作用。然而，在血管內(nèi)膜增生等病理過程中，MKP-1的表達(dá)往往受到抑制，導(dǎo)致MAPK信號通路過度激活，促進(jìn)VSMC的異常增殖和遷移。本研究結(jié)果顯示，模型組血管壁中MKP-1蛋白表達(dá)顯著降低，而人參皂苷Rg1各劑量組MKP-1蛋白表達(dá)顯著升高，且呈劑量依賴性。這表明人參皂苷Rg1可能通過上調(diào)MKP-1的表達(dá)，增強(qiáng)其對ERK2等MAPK信號通路的負(fù)調(diào)控作用，抑制VSMC的增殖和遷移，從而發(fā)揮抑制內(nèi)膜增生的作用。原癌基因c-fos在細(xì)胞受到生長因子、細(xì)胞因子等刺激時(shí)迅速表達(dá)，參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程。在血管內(nèi)膜增生過程中，c-fos的高表達(dá)可促進(jìn)VSMC的增殖和遷移。本研究中，模型組血管壁c-fos基因mRNA表達(dá)顯著升高，人參皂苷Rg1干預(yù)后，c-fos基因mRNA表達(dá)顯著降低，提示人參皂苷Rg1可能通過下調(diào)c-fos基因表達(dá)，抑制VSMC的增殖和遷移，進(jìn)而抑制內(nèi)膜增生。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核蛋白，其表達(dá)水平可反映細(xì)胞的增殖活性。模型組中PCNA基因和蛋白表達(dá)顯著升高，說明球囊損傷刺激了VSMC的增殖。而人參皂苷Rg1各劑量組PCNA表達(dá)均顯著降低，且呈劑量依賴性，表明人參皂苷Rg1能夠抑制VSMC的增殖，從而減少內(nèi)膜增生。人參皂苷Rg1對這些相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的調(diào)控，共同作用于VSMC的增殖和遷移過程，有效地抑制了大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生。這種多靶點(diǎn)、多途徑的調(diào)控方式，為深入理解人參皂苷Rg1防治血管內(nèi)膜增生相關(guān)心血管疾病的機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為開發(fā)基于人參皂苷Rg1的新型心血管藥物提供了潛在的分子靶點(diǎn)和理論支持。4.4與其他研究結(jié)果的對比與分析本研究結(jié)果與以往相關(guān)研究既有相似之處，也存在一定差異。在人參皂苷Rg1對血管內(nèi)膜增生的抑制作用方面，高楊等人在2012年發(fā)表于《中國藥理學(xué)通報(bào)》的研究中，利用SD大鼠建立頸總動(dòng)脈球囊損傷模型，給予不同劑量人參皂苷Rg1干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)Rg1能呈劑量依賴性地減小新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜/中膜面積的比值，有效抑制內(nèi)膜增生，這與本研究結(jié)果一致，均表明人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生具有顯著的抑制作用，且存在劑量依賴性。在抗氧化作用機(jī)制方面，本研究中人參皂苷Rg1能夠顯著提高大鼠血漿中SOD活力，降低MDA含量，調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激水平，這與相關(guān)研究中人參皂苷Rg1具有抗氧化作用的結(jié)論相符。例如，有研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1可以通過直接清除活性氧（ROS）以及調(diào)節(jié)抗氧化酶系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。但不同研究在具體的抗氧化指標(biāo)變化幅度以及作用強(qiáng)度上可能存在差異，這可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類、模型建立方法、人參皂苷Rg1的給藥劑量和時(shí)間等因素有關(guān)。在對相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的調(diào)控方面，本研究中人參皂苷Rg1能夠顯著降低血管壁中PCNA、c-fos、ERK2基因和蛋白的表達(dá)，提高eNOS、SMα-actin、MKP-1基因和蛋白的表達(dá)，這與其他一些研究報(bào)道的人參皂苷Rg1對相關(guān)信號通路和基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用一致。然而，部分研究中所涉及的基因和蛋白表達(dá)變化的具體程度和時(shí)間節(jié)點(diǎn)可能有所不同。如在某些研究中，人參皂苷Rg1對ERK2信號通路的抑制作用在早期更為明顯，而在本研究中則在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)均呈現(xiàn)出顯著的抑制效果。這種差異可能是由于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本采集時(shí)間以及檢測方法等方面的不同所導(dǎo)致。綜上所述，本研究結(jié)果在整體上與以往相關(guān)研究具有一致性，進(jìn)一步證實(shí)了人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的抑制作用及其抗氧化、調(diào)節(jié)基因和蛋白表達(dá)的機(jī)制。但同時(shí)，研究之間的差異也提示我們，在后續(xù)研究中需要進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，深入探討人參皂苷Rg1作用機(jī)制的復(fù)雜性和多樣性，為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。4.5研究的局限性與展望本研究雖然取得了一定的成果，證實(shí)了人參皂苷Rg1對大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生具有抑制作用，并初步揭示了其相關(guān)機(jī)制，但仍存在一些局限性。在樣本數(shù)量方面，本研究每組僅選用了12只大鼠，樣本量相對較小。較小的樣本量可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偶然性增加，降低研究結(jié)果的可靠性和說服力。在后續(xù)研究中，應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、大樣本的實(shí)驗(yàn)研究，以更準(zhǔn)確地評估人參皂苷Rg1的作用效果和安全性，提高研究結(jié)果的可信度和普適性。在作用機(jī)制研究深度上，盡管本研究從氧化應(yīng)激、相關(guān)基因和蛋白表達(dá)調(diào)控等方面對人參皂苷Rg1抑制內(nèi)膜增生的機(jī)制進(jìn)行了探討，但血管內(nèi)膜增生是一個(gè)極其復(fù)雜的病理過程，涉及多種細(xì)胞、信號通路和分子的相互作用。本研究可能只是揭示了其中的一部分機(jī)制，對于人參皂苷Rg1作用的更深入的分子機(jī)制，如是否通過其他尚未發(fā)現(xiàn)的信號通路發(fā)揮作用，以及與其他細(xì)胞因子和生長因子之間的相互關(guān)系等，仍有待進(jìn)一步深入探究。未來研究可運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等高通量技術(shù)，全面系統(tǒng)地分析人參皂苷Rg1干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)分子表達(dá)譜的變化，挖掘潛在的作用靶點(diǎn)和信號通路，深入揭示其作用機(jī)制。此外，本研究僅在大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型上進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物模型與人類心血管疾病的病理生理過程存在一定差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推至人體存在一定的局限性。在后續(xù)研究中，可進(jìn)一步開展臨床前研究，如在大型動(dòng)物模型上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，觀察人參皂苷Rg1的作用效果和安全性，為其臨床應(yīng)用提供更有力的支持。同時(shí)，也期待未來能夠開展相關(guān)的臨床試驗(yàn)，驗(yàn)證人參皂苷Rg1在人體中的療效和安全性，推動(dòng)其從基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。從藥物開發(fā)角度來看，目前對于人參皂苷Rg1的最佳給藥方案，如給藥劑量、給藥時(shí)間和給藥途徑等，尚未完全明確。不同的給藥方案可能會(huì)影響人參皂苷Rg1的療效和安全性，因此需要進(jìn)一步優(yōu)化給藥方案，以確定其在臨床應(yīng)用中的最佳使用方法。此外，人參皂苷Rg1的穩(wěn)定性、生物利用度等問題也需要進(jìn)一步研究解決，通過制劑技術(shù)的改進(jìn)，如制備納米制劑、脂質(zhì)體等，提高其穩(wěn)定性和生物利用度，增強(qiáng)其藥效。未來研究還可以關(guān)注人參皂苷Rg1與其他心血管保護(hù)藥物的聯(lián)合應(yīng)用。聯(lián)合用藥可能通過不同的作用機(jī)制協(xié)同發(fā)揮作用，提高治療效果，減少單一藥物的劑量和不良反應(yīng)。研究人參皂苷Rg1與其他藥物的聯(lián)合使用效果和相互作用機(jī)制，對于開發(fā)更有效的心血管疾病治療方案具有重要意義。五、結(jié)論本研究通過建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，系統(tǒng)地探究了人參皂苷Rg1對內(nèi)膜增生的作用及機(jī)制。研究結(jié)果表明，人參皂苷Rg1能夠顯著抑制大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后內(nèi)膜增生，有效改善血管狹窄狀況。其作用機(jī)制主要通過以下幾個(gè)方面實(shí)現(xiàn)：在細(xì)胞水平，抑制血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）的增殖和遷移，調(diào)節(jié)VSMC從合成型向收縮型的表型轉(zhuǎn)化；在氧化應(yīng)激方面，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低氧化應(yīng)激對血管組織的損傷；在基因和蛋白表達(dá)調(diào)控方面，通過抑制ERK2信號通路的激活，上調(diào)MKP-1的表達(dá)，下調(diào)PCNA、c-fos等促增殖基因和蛋白的表達(dá)，上調(diào)eNOS、SMα-actin等保護(hù)性基因和蛋白的表達(dá)。本研究為心血管疾病的防治提供了新的理論依據(jù)和潛在治療策略。人參皂苷Rg1作為中藥人參的主要活性成分，具有來源天然、安全性高、副作用小等優(yōu)勢，有望開發(fā)成為防治血管內(nèi)膜增生相關(guān)心血管疾病的新型藥物或輔助治療藥物。然而，本研究仍存在一定的局限性，如樣本量較小、作用機(jī)制研究深度不足以及動(dòng)物模型與人體的差異等問題。未來需要進(jìn)一步開展多中心、大樣本的研究，深入探究其作用機(jī)制，優(yōu)化給藥方案，并開展臨床前和臨床試驗(yàn)，推動(dòng)人參皂苷Rg1從基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化，為心血管疾病患者帶來更多的治療選擇和更好的治療效果。六、參考文獻(xiàn)[1]中國心血管健康與疾病報(bào)告2022編寫組。中國心血管健康與疾病報(bào)告2022概要[J].中國循環(huán)雜志，2023,38(6):531-569.[2]LibbyP,RidkerPM,HanssonGK.Progressandchallengesintranslatingthebiologyofatherosclerosis[J].Nature,2019,572(7761):142-152.[3]王勇，陳紀(jì)言。冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后再狹窄的研究進(jìn)展[J].嶺南心血管病雜志，2020,26(3):363-367.[4]趙宇，李為民。動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華心血管病雜志，2019,47(1):76-80.[5]高楊，吳芹，楊丹莉，等。人參皂苷Rg1抗血管內(nèi)膜增生與其抗氧化和上調(diào)eNOS表達(dá)作用的關(guān)系[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2012,28(3):388-392.[6]趙海蘋，趙文珠，張以忠，等。人參皂苷Rg1對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2018,34(11):1554-1559.[7]吳芹，高楊，楊丹莉，等。人參皂苷Rg1對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2011,27(11):1525-1529.[8]高楊，鄧江，余修福，等.GinsenosideRg1inhibitsvascularintimalhyperplasiainballoon-injuredratcarotidarterybydown-regulationofextracellularsignal-regulatedkinase2[J].JournalofEthnopharmacology,2011,137(2):933-939.[9]劉艷，韓梅，溫進(jìn)坤。血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控機(jī)制[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2018,49(2):101-105.[10]張慧，劉乃豐。氧化應(yīng)激與心血管疾病[J].中華高血壓雜志，2019,27(1):31-36.[11]孫艷，郭航遠(yuǎn)，彭放，等。氧化應(yīng)激與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2018,34(14):1729-1732.[12]朱志勇，李為民。絲裂原活化蛋白激酶信號通路與心血管疾病[J].中華心血管病雜志，2019,47(2):163-167.[13]陳燕，李悅。核因子-κB信號通路與心血管疾病的研究進(jìn)展[J].臨床心血管病雜志，2018,34(9):853-857.[14]高楊，黃燮南。人參皂苷Rg1對球囊損傷所致大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的作用[D].遵義醫(yī)學(xué)院，2009.[15]劉華鋼，賴玲，文麗，等.HPLC測定大鼠血漿中的三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Rb1[J].華西藥學(xué)雜志，2011,26(1):54-56.[16]韋鳳華，宋林，何毅，等。人參皂苷Rg1在大鼠體內(nèi)的代謝與排泄研究[J].華西藥學(xué)雜志，2010,25(3):302-305.[2]LibbyP,RidkerPM,HanssonGK.Progressandchallengesintranslatingthebiologyofatherosclerosis[J].Nature,2019,572(7761):142-152.[3]王勇，陳紀(jì)言。冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后再狹窄的研究進(jìn)展[J].嶺南心血管病雜志，2020,26(3):363-367.[4]趙宇，李為民。動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華心血管病雜志，2019,47(1):76-80.[5]高楊，吳芹，楊丹莉，等。人參皂苷Rg1抗血管內(nèi)膜增生與其抗氧化和上調(diào)eNOS表達(dá)作用的關(guān)系[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2012,28(3):388-392.[6]趙海蘋，趙文珠，張以忠，等。人參皂苷Rg1對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2018,34(11):1554-1559.[7]吳芹，高楊，楊丹莉，等。人參皂苷Rg1對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2011,27(11):1525-1529.[8]高楊，鄧江，余修福，等.GinsenosideRg1inhibitsvascularintimalhyperplasiainballoon-injuredratcarotidarterybydown-regulationofextracellularsignal-regulatedkinase2[J].JournalofEthnopharmacology,2011,137(2):933-939.[9]劉艷，韓梅，溫進(jìn)坤。血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控機(jī)制[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2018,49(2):101-105.[10]張慧，劉乃豐。氧化應(yīng)激與心血管疾病[J].中華高血壓雜志，2019,27(1):31-36.[11]孫艷，郭航遠(yuǎn)，彭放，等。氧化應(yīng)激與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2018,34(14):1729-1732.[12]朱志勇，李為民。絲裂原活化蛋白激酶信號通路與心血管疾病[J].中華心血管病雜志，2019,47(2):163-167.[13]陳燕，李悅。核因子-κB信號通路與心血管疾病的研究進(jìn)展[J].臨床心血管病雜志，2018,34(9):853-857.[14]高楊，黃燮南。人參皂苷Rg1對球囊損傷所致大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的作用[D].遵義醫(yī)學(xué)院，2009.[15]劉華鋼，賴玲，文麗，等.HPLC測定大鼠血漿中的三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Rb1[J].華西藥學(xué)雜志，2011,26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