pcr上崗證考試題庫及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.連接酶鏈反應(yīng)C.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)D.核酸外切酶反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)中，哪種酶起關(guān)鍵作用（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.TaqDNA聚合酶C.限制酶D.RNA聚合酶答案：B3.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.提供模板D.提供能量答案：A4.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.連接答案：D5.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的基本成分（）A.模板DNAB.dNTPsC.引物D.蛋白質(zhì)酶K答案：D6.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A7.以下關(guān)于PCR的說法錯(cuò)誤的是（）A.可以用于基因擴(kuò)增B.具有很高的特異性C.只能擴(kuò)增DNA不能擴(kuò)增RNAD.靈敏度高答案：C8.在PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.模板的長度B.引物的長度和GC含量C.dNTPs的濃度D.Taq酶的活性答案：B9.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPs答案：B10.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果（）A.反應(yīng)體系中模板量過少B.引物設(shè)計(jì)不合理C.嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理D.樣本中無目標(biāo)核酸答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPsD.TaqDNA聚合酶E.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR擴(kuò)增效率的因素有（）A.引物質(zhì)量B.模板質(zhì)量C.Taq酶活性D.反應(yīng)體系的離子濃度E.退火溫度答案：ABCDE3.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.基因克隆D.基因表達(dá)研究E.物種鑒定答案：ABCDE4.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則正確的是（）A.長度一般為15-30bpB.GC含量在40%-60%C.避免引物自身形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物之間不能有互補(bǔ)序列E.3'端最好是G或C答案：ABCDE5.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施包括（）A.實(shí)驗(yàn)室合理分區(qū)B.使用一次性耗材C.實(shí)驗(yàn)前后對(duì)儀器設(shè)備消毒D.嚴(yán)格的操作流程E.對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理答案：ABCD6.以下哪些是PCR的特點(diǎn)（）A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.操作簡便D.可用于微量樣本檢測(cè)E.快速高效答案：ABCDE7.對(duì)于RNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，需要（）A.先進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)B.特殊的引物設(shè)計(jì)C.更高的反應(yīng)溫度D.更多的dNTPsE.特殊的Taq酶答案：A8.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.熒光定量分析E.酶切分析答案：ABCDE9.在PCR反應(yīng)中，以下哪些情況可能導(dǎo)致無擴(kuò)增產(chǎn)物（）A.模板降解B.引物失效C.Taq酶失活D.反應(yīng)體系配制錯(cuò)誤E.退火溫度過高答案：ABCDE10.以下關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室的要求正確的是（）A.有嚴(yán)格的分區(qū)B.良好的通風(fēng)系統(tǒng)C.合適的溫濕度控制D.配備專用的儀器設(shè)備E.有防污染措施答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR只能用于檢測(cè)DNA，不能檢測(cè)RNA。（×）2.引物的長度越長，PCR擴(kuò)增的特異性越高。（×）3.Taq酶在高溫下容易失活。（×）4.PCR反應(yīng)體系中dNTPs的濃度越高越好。（×）5.只要有合適的引物，任何DNA都可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（×）6.瓊脂糖凝膠電泳可以用來檢測(cè)PCR產(chǎn)物的大小。（√）7.在PCR反應(yīng)中，退火溫度越高，引物與模板的結(jié)合越牢固。（×）8.一個(gè)好的引物3'端最好不要是A。（√）9.PCR實(shí)驗(yàn)室不需要進(jìn)行特殊的分區(qū)管理。（×）10.所有的Taq酶都具有相同的活性和特性。（×）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)基于DNA的半保留復(fù)制原理。在反應(yīng)體系中，模板DNA在高溫下變性解鏈為單鏈，然后在低溫下引物與模板單鏈的互補(bǔ)序列退火結(jié)合，接著在合適溫度下，TaqDNA聚合酶以dNTPs為原料，從引物的3'-OH端開始延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)過多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)目的基因的擴(kuò)增。2.說明PCR實(shí)驗(yàn)中防止污染的重要性及主要措施。答案：防止污染很重要，因?yàn)槲廴緯?huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。主要措施包括實(shí)驗(yàn)室合理分區(qū)（如試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)等），使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)前后對(duì)儀器設(shè)備消毒，嚴(yán)格按照操作流程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.簡述引物設(shè)計(jì)的主要原則。答案：引物設(shè)計(jì)原則包括：長度15-30bp，GC含量40%-60%，避免自身形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物間無互補(bǔ)序列，3'端最好為G或C等，這些原則有助于提高PCR擴(kuò)增的特異性和效率。4.簡述PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用。答案：在醫(yī)學(xué)診斷中可用于檢測(cè)病原體（如病毒、細(xì)菌等）的核酸，診斷遺傳性疾病，進(jìn)行腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)，監(jiān)測(cè)疾病治療過程中的基因變化等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何提高PCR擴(kuò)增的特異性。答案：可從引物設(shè)計(jì)方面入手，保證引物特異性（如合適長度、GC含量、避免二級(jí)結(jié)構(gòu)等）；優(yōu)化反應(yīng)條件，如選擇合適的退火溫度、Taq酶量、dNTPs濃度等；保證模板的純度，避免雜質(zhì)干擾。2.分析PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理的意義。答案：分區(qū)管理可防止污染。試劑準(zhǔn)備區(qū)避免試劑受污染，樣本處理區(qū)防止樣本間交叉污染，擴(kuò)增區(qū)保證擴(kuò)增反應(yīng)準(zhǔn)確，產(chǎn)物分析區(qū)防止產(chǎn)物對(duì)其他區(qū)域污染，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。3.探討在RNA為模板進(jìn)行PCR時(shí)需要注意的問題