ICS65020.20CCSB0545TechnicalspecificationsforforagegermplasmresourcescollectionandpresDB45/T2577—2022 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 24.1前期準(zhǔn)備 24.2收集對(duì)象 24.3種質(zhì)資源樣本收集 34.4采樣植株?duì)I養(yǎng)成分測(cè)定 34.5樣本圖片資料采集與管理 34.6樣本標(biāo)本的采集、制作與管理 35保存 45.1有性繁殖種質(zhì)資源的入庫(kù)保存 45.2無(wú)性繁殖資源的入圃保存 56建立信息數(shù)據(jù)庫(kù) 5附錄A（資料性）牧草種質(zhì)資源收集與暫存 6附錄B（規(guī)范性）營(yíng)養(yǎng)成分分析測(cè)定 B.1采樣 B.2營(yíng)養(yǎng)成分分析樣品的制備 B.3檢測(cè)項(xiàng)目和測(cè)定方法 B.4記錄 附錄C（規(guī)范性）圖片信息采集與管理 C.1圖片采集 C.2圖片管理 附錄D（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作 D.1標(biāo)本的采集 D.2標(biāo)本制作 IDB45/T2577—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并宣貫。本文件由廣西畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所。本文件主要起草人：易顯鳳、陳冬冬、曹樹威、易顯菊、楊啟晟、龐天德、文裕、姚娜、史靜、胡湘云、李創(chuàng)舉。DB45/T2577—2022草地牧草種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了草地牧草種質(zhì)資源收集與保存的過(guò)程，包括收集、保存和信息數(shù)據(jù)庫(kù)建立三大流程。本文件適用于廣西壯族自治區(qū)行政區(qū)域內(nèi)的草地牧草種質(zhì)資源收集與保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2260中華人民共和國(guó)行政區(qū)劃代碼GB/T2930.2牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程凈度GB/T2930.4牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽率GB/T2930.6草種子檢驗(yàn)規(guī)程健康測(cè)定健康檢驗(yàn)GB/T2930.8牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定水分測(cè)定GB/T6432飼料中粗蛋白測(cè)定方法凱氏定氮法GB/T6433飼料中粗脂肪的測(cè)定GB/T6434飼料中粗纖維的含量測(cè)定過(guò)濾法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T6438飼料中粗灰分的測(cè)定3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1牧草forage供飼養(yǎng)的牲畜食用的草或其他草本植物。3.2牧草種質(zhì)資源foragegermplasmresources具有特定種質(zhì)或基因，可供牧草育種及相關(guān)研究利用的各種生物類型及品種。3.3草地grassland由草本植物和飼用灌木為主的生物群落及其著生的土地構(gòu)成的生物土地資源，包括天然草原和人工草地。3.4收集collection通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)采集或引進(jìn)等方法獲取所需的資源。1DB45/T2577—20223.5保存preservation對(duì)收集的牧草種質(zhì)資源在一定環(huán)境條件下存放，以維持其原有種質(zhì)資源的穩(wěn)定性。3.6生境habitat物種或物種群體賴以生存的生態(tài)環(huán)境。3.7居群population在野生植物群落中具有共同的基本特點(diǎn)的一組個(gè)體植株。3.8入庫(kù)putinstorage草種、標(biāo)本等放進(jìn)庫(kù)房貯存。3.9中期庫(kù)middle-termgenebanks利用儀器設(shè)備控制貯藏環(huán)境，貯存作物種質(zhì)資源10～20年的倉(cāng)庫(kù)，貯藏溫度控制在-4～4℃,相對(duì)濕度(RH)小于65%。3.10長(zhǎng)期庫(kù)long-termgenebanks利用儀器設(shè)備控制貯藏環(huán)境，貯存作物種質(zhì)資源20年及20年以上的倉(cāng)庫(kù)，貯藏溫度常年控制在-10~-18℃,相對(duì)濕度(RH)小于50%。4收集4.1前期準(zhǔn)備4.1.1組建調(diào)查團(tuán)隊(duì)并落實(shí)人員分工根據(jù)工作內(nèi)容和工作量組建團(tuán)隊(duì)并進(jìn)行培訓(xùn)，培訓(xùn)主要內(nèi)容包括地理信息解讀、草地類型判別、植物鑒定、植物攝影、標(biāo)本制作和植物材料保存等；明確分工，落實(shí)具體工作。4.1.2工具及耗材牧草種質(zhì)資源收集工具按照附錄A的表A.1準(zhǔn)備。4.1.3考察地點(diǎn)和考察路線查閱預(yù)采集行政區(qū)域的草地資源方面的草地類型圖、歷年草地調(diào)查和國(guó)土調(diào)查涉及草地分布的基礎(chǔ)圖件、行政區(qū)域圖、交通路線圖、植被類型圖及遙感地理影像等，規(guī)劃考察路線和重點(diǎn)考察區(qū)域。4.1.4工作計(jì)劃包括調(diào)查取樣時(shí)間、取樣區(qū)域及取樣路線、行程、出行方式等。4.2收集對(duì)象包括有性繁殖的種子和無(wú)性繁殖的根莖、根蘗、幼苗等，以及相應(yīng)的植物圖片、標(biāo)本和營(yíng)養(yǎng)成分等。2DB45/T2577—20224.3種質(zhì)資源樣本收集4.3.1采樣原則應(yīng)具有代表性、典型性和適時(shí)性。4.3.2采樣方法野外采集牧草種質(zhì)資源應(yīng)以居群為單位，隨機(jī)采樣，每個(gè)居群采集的個(gè)體數(shù)量應(yīng)超過(guò)60株。4.3.3采樣量應(yīng)盡量達(dá)到中期庫(kù)和長(zhǎng)期庫(kù)的保存要求，詳情見表1，如無(wú)法達(dá)到，可先采集，后期擴(kuò)繁再進(jìn)行保存；無(wú)性繁殖牧草資源材料一個(gè)居群應(yīng)采集30份～50份。4.3.4采樣編號(hào)采樣應(yīng)按如下規(guī)則進(jìn)行編號(hào)：——調(diào)查中對(duì)每份樣品都要進(jìn)行編號(hào)，同一個(gè)采集號(hào)不得重復(fù)使用；——同一時(shí)間、同一地點(diǎn)、同一草種的多份樣本應(yīng)編同一號(hào)；——同一塊草地、不同調(diào)查點(diǎn)、相同草種的樣本應(yīng)編不同號(hào)；——同一大型草種若干部分組成的樣本編為相同的號(hào)；——編號(hào)格式宜采用“采集日期（8位，年月日）+行政區(qū)劃代碼后兩位（按照GB/T2260的規(guī)定執(zhí)行）+序號(hào)（3位）”。4.3.5填寫原始記錄表種質(zhì)資源收集記錄按照附錄A的表A.2格式填寫。4.3.6樣本保管不同樣本的保管方式如下：——樣本是種子的，要及時(shí)晾曬，裝在透氣的紗袋或網(wǎng)袋內(nèi)，妥善保存；——樣本是根莖、根蘗、幼苗的，采樣時(shí)要連根帶土，根部放在塑料袋中保濕。4.4采樣植株?duì)I養(yǎng)成分測(cè)定需測(cè)定營(yíng)養(yǎng)成分的采樣植株按附錄B要求執(zhí)行。4.5樣本圖片資料采集與管理圖片資料按附錄C要求執(zhí)行。4.6樣本標(biāo)本的采集、制作與管理標(biāo)本制作按附錄D要求執(zhí)行。3DB45/T2577—20225保存5.1有性繁殖種質(zhì)資源的入庫(kù)保存5.1.1入庫(kù)前處理入庫(kù)前應(yīng)對(duì)種子進(jìn)行清選、干燥。5.1.2入庫(kù)前檢測(cè)入庫(kù)前應(yīng)對(duì)種子進(jìn)行檢測(cè)，規(guī)則如下：——凈度檢驗(yàn)按GB/T2930.2的規(guī)定執(zhí)行；——發(fā)芽率檢驗(yàn)按GB/T2930.4的規(guī)定執(zhí)行,規(guī)程中沒(méi)有提及的草種，按照該屬的發(fā)芽方法進(jìn)行檢驗(yàn)；——健康檢驗(yàn)按GB/T2930.6的規(guī)定執(zhí)行；——水分測(cè)定按照GB/T2930.8的規(guī)定執(zhí)行。5.1.3入庫(kù)保存流程5.1.3.1入庫(kù)對(duì)象名稱入庫(kù)的種質(zhì)資源學(xué)名以《中國(guó)植物志》為準(zhǔn)，并標(biāo)注其拉丁名。5.1.3.2入庫(kù)登記入庫(kù)前檢查種子基本信息資料、種子袋上的編號(hào)、對(duì)種質(zhì)信息進(jìn)行核對(duì)，并按照入庫(kù)的數(shù)量和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，登記種質(zhì)的基本信息資料，并填寫入庫(kù)登記信息表（見附錄A表A.3）。5.1.3.3查重及去重檢查新獲得種質(zhì)資源與已保存種質(zhì)資源之間是否有重復(fù)。5.1.3.4保存種子數(shù)量要求不同草種類型的保存數(shù)量要求詳見表1。表1種子保存數(shù)量最低要求101～10004DB45/T2577—20225.1.3.5入庫(kù)定位對(duì)符合入庫(kù)條件的種子按照牧草類別進(jìn)行編號(hào)，每份材料一個(gè)固定的庫(kù)位號(hào)，包裝后定位保存，填寫種質(zhì)資源庫(kù)存信息表（見附錄A的表A.4）。5.1.4庫(kù)存種子生活力監(jiān)測(cè)5.1.4.1原則定期取出少量種子進(jìn)行測(cè)定發(fā)芽率，同時(shí)對(duì)貯藏種子數(shù)量進(jìn)行檢查，確定是否需要進(jìn)行繁殖更新。5.1.4.2監(jiān)測(cè)周期每份種子，中期庫(kù)5年取出適量種子進(jìn)行發(fā)芽率測(cè)定，長(zhǎng)期庫(kù)10年取出適量種子進(jìn)行發(fā)芽率測(cè)定。5.1.5繁殖更新當(dāng)自花授粉草種和自交系的每份活種子數(shù)量低于600粒，異花授粉草種每份活種子數(shù)量低于800粒時(shí)，應(yīng)進(jìn)行繁殖更新。5.2無(wú)性繁殖資源的入圃保存5.2.1隔離處理采集的根莖、根蘗、幼苗等無(wú)性繁殖資源，應(yīng)消毒、隔離，合格后方可進(jìn)入資源圃種植。5.2.2入圃管理對(duì)于無(wú)性繁殖材料入圃應(yīng)按如下規(guī)則進(jìn)行：——對(duì)種植的牧草種質(zhì)進(jìn)行觀察，包括其適應(yīng)性和生長(zhǎng)情況等，并填寫入圃登記信息表（見附錄A的表A.5）?！谫Y源圃平面信息圖上標(biāo)注種質(zhì)的種植位置，標(biāo)明每份種質(zhì)的圃位號(hào)、種植時(shí)間、保存株數(shù)，并建立采集編號(hào)和圃位號(hào)對(duì)應(yīng)表。——種質(zhì)資源圃每次增減資源都要在圃位圖上進(jìn)行標(biāo)注，同時(shí)注明制圖人和審核人的姓名和制圖日期?！糠莘N質(zhì)在資源圃保存數(shù)量不低于3株，珍稀種質(zhì)資源可適當(dāng)增加保存數(shù)量。——種植時(shí)對(duì)每份種質(zhì)掛牌，牌上標(biāo)注種質(zhì)名稱，編號(hào)。5.2.3監(jiān)測(cè)與更新保存過(guò)程中定期對(duì)種質(zhì)存活株數(shù)、植株?duì)顟B(tài)、病蟲害及土壤狀況進(jìn)行觀察監(jiān)測(cè)，當(dāng)植株數(shù)量減少到原保存量的50％、植株出現(xiàn)顯著地衰老癥狀或遭受嚴(yán)重病蟲危害時(shí)應(yīng)進(jìn)行更新復(fù)壯。6建立信息數(shù)據(jù)庫(kù)將牧草種質(zhì)資源收集、保存工作中獲取的相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行整理建檔，包括搜集的資料、工作方案、工作記錄、影像圖片資料、收集信息、保存信息等，同時(shí)備份紙質(zhì)檔案和電子檔案，保證檔案資料的連續(xù)性和完整性，便于全過(guò)程追溯。5DB45/T2577—2022（資料性）牧草種質(zhì)資源收集與暫存表A.1草地牧草種質(zhì)資源收集物資表12111122226DB45/T2577—2022表A.1草地牧草種質(zhì)資源收集物資表（續(xù)）11111表A.2草地牧草種質(zhì)資源采集原始記錄表采集號(hào)：采集生境：1.平地2.谷地3.山坡收獲時(shí)期：1.播種期2.出苗期(返青期)3.6.結(jié)實(shí)期(綠果期)7.成熟期(果熟豐富程度：1.偶見種2.稀有種3.伴生種4.常見種5.優(yōu)植物習(xí)性：1.直立2.平臥3.匍匐4采集量：___________粒/_______7DB45/T2577—2022表A.3種質(zhì)資源入庫(kù)登記信息表表A.4種質(zhì)資源庫(kù)存信息表間量8DB45/T2577—2022表A.5入圃登記信息表9DB45/T2577—2022（規(guī)范性）營(yíng)養(yǎng)成分分析測(cè)定B.1采樣B.1.1取樣時(shí)期根據(jù)取樣時(shí)的牧草生長(zhǎng)時(shí)期進(jìn)行取樣，并在標(biāo)簽上標(biāo)明所處營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期、開花期、成熟期或枯黃期等信息。B.1.2取樣部位選取外形、長(zhǎng)勢(shì)、生育期基本一致的植株，全株取樣時(shí)植株處于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的宜采集主莖或主枝頂部的部分，開花期和成熟期、枯黃期則采取莖稈、籽粒、果實(shí)、塊莖、塊根等樣品；現(xiàn)場(chǎng)稱重，記為樣品鮮重。B.1.3取樣量同一樣點(diǎn)，不少于3個(gè)位點(diǎn)的植株，鮮樣重不少于500g。B.1.4樣品編號(hào)與種質(zhì)資源樣品編號(hào)一致（見4.3.4）。B.2營(yíng)養(yǎng)成分分析樣品的制備營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定時(shí)，應(yīng)預(yù)先對(duì)分析樣品進(jìn)行處理，處理規(guī)則如下：——用濕布擦凈表面的玷污物，去除泥土、施肥噴藥等污染；——鮮樣應(yīng)105℃殺青15min～30min，然后降至60～70℃烘干12～24h，除盡水分直至恒重時(shí)稱重，計(jì)算干物質(zhì)含量；——干燥的樣品用磨樣機(jī)粉碎，過(guò)φ1mm篩，如樣品量少過(guò)φ0.1～0.5mm篩，混勻，置廣口瓶中，密封，內(nèi)外均貼簽，保存。B.3檢測(cè)項(xiàng)目和測(cè)定方法檢測(cè)項(xiàng)目和測(cè)定方法見表B.1。表B.1營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定方法GB/T6432飼料中粗蛋白測(cè)定方法干物質(zhì)粗蛋白粗脂肪粗纖維粗灰分%)DB45/T2577—2022B.4記錄填寫廣西草地牧草種質(zhì)資源營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定表，見表B.2。表B.2草地牧草種質(zhì)資源營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定表干物質(zhì)含量%粗蛋白%粗脂肪%粗纖維%粗灰分%無(wú)氮浸出物%DB45/T2577—2022（規(guī)范性）圖片信息采集與管理C.1圖片采集C.1.1生境拍攝使用大景深拍攝方法，使整體環(huán)境清晰覆蓋整個(gè)圖片，具體操作應(yīng)遵守以下規(guī)則：——同等焦距下，可通過(guò)縮小光圈，增大景深；——使用廣角鏡頭，相同光圈下，焦距越廣，景深越大；——選擇合適的對(duì)焦點(diǎn)，達(dá)到最大景深。C.1.2植物主體拍攝拍攝應(yīng)突出植物主體,按以下規(guī)則執(zhí)行：——確定所要拍攝的植物，選擇合適角度進(jìn)行拍攝，使周圍環(huán)境和被攝主體分處不同平面，保持一定的位置差，以達(dá)到突顯主體的目的；——優(yōu)化拍攝的植物環(huán)境，拍攝低矮植物時(shí)應(yīng)去除周圍雜物，降低雜物入鏡率；——環(huán)境光控制，對(duì)周圍環(huán)境較暗的區(qū)域，通過(guò)內(nèi)置曝光補(bǔ)光、提高感光度、增大光圈等手段完成拍攝。C.1.3植物局部拍攝取下所需拍攝的部位，再?gòu)闹車h(huán)境中選擇色彩較一致的作為背景，通過(guò)點(diǎn)測(cè)光、大光圈、長(zhǎng)焦端拍攝。C.1.4拍攝要求圖片應(yīng)保證數(shù)量和質(zhì)量，按以下規(guī)則執(zhí)行：——圖片大小應(yīng)大于2M，數(shù)據(jù)格式為jpg；——要客觀反映被攝主體的植物學(xué)特征，從不同的角度對(duì)植株分類特性進(jìn)行描述，比如居群、植株、花、果實(shí)、種子、葉片、莖干、根系等；——重點(diǎn)拍攝植物分類鑒定的關(guān)鍵部位，比如禾本科的葉舌、葉鞘等，豆科的托葉等；——每個(gè)編號(hào)下的被攝物種應(yīng)包含體現(xiàn)植株及局部形態(tài)特征的圖片5張以上；珍稀瀕危或特有種要盡可能收集細(xì)部特征照片，增加微距照片或解剖鏡拍攝照片；——每個(gè)被調(diào)查草地應(yīng)有3張以上廣角照，每個(gè)被調(diào)查草地應(yīng)有3張以上調(diào)查隊(duì)集體工作照。C.2圖片管理C.2.1命名與種質(zhì)資源樣品編號(hào)一致（見4.3.4）。C.2.2整理保存圖片保存以“當(dāng)次調(diào)查時(shí)間+地區(qū)名稱+草地名稱”為名稱建立一級(jí)文件夾，如2019年5月4日至7日在廣西龍勝縣南山草地牧草資源的一級(jí)文件夾記為“20190504-07廣西龍勝南山草地”，體現(xiàn)DB45/T2577—2022被調(diào)查草地樣貌的廣角照或航拍照和調(diào)查隊(duì)集體工作照合并存于一級(jí)文件夾中；被調(diào)查草種的圖片以“編號(hào)+種名”形式建立二級(jí)文件夾保存于一級(jí)文件夾之下。DB45/T2577—2022（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作D.1標(biāo)本的采集D.1.1采集原則每個(gè)調(diào)查點(diǎn)，采集草種的標(biāo)本至少采集2～3份，標(biāo)本采集后，如條件允許，應(yīng)立即在野外進(jìn)行干燥，或?qū)?biāo)本放在吸水紙中。D.1.2標(biāo)本材料選取標(biāo)本材料選取的部分應(yīng)遵循以下原則：——標(biāo)本須具有根、莖、葉、花、果等營(yíng)養(yǎng)器官和生殖器官，雌雄異株的植物，要分別采取雄花枝和雌花枝；——小型一年生草種或具有走莖、球莖、根莖、鱗莖等多年生草種應(yīng)連根部或地下部一起采集；——大型禾草可分段采集，由花序、完整的莖節(jié)、完整的葉片等分段組成，各段統(tǒng)一編相同的號(hào)；——受光葉或庇陰葉、老葉、幼葉、二型葉或萌枝等各種發(fā)育階段形態(tài)不同者，均須采集；——木本或灌木類植物標(biāo)本采集大小應(yīng)控制于35～40cm內(nèi)，要求所采標(biāo)本應(yīng)含花序、果實(shí)（果莢）及具完整頂端的枝條。D.1.3采集編號(hào)與種質(zhì)資源樣品編號(hào)一致（見4.3.4）。D.2標(biāo)本制作D.2.1標(biāo)本整理標(biāo)本整理應(yīng)遵循以下原則：——壓制之前先將標(biāo)本的塵土、病斑葉等作潔凈處理；——將莖、葉、花、果展平放置，盡可能避免葉片重疊，如果干燥需很長(zhǎng)時(shí)間，為避免葉片重疊粘連，可在中間夾一條干燥紙；——至少應(yīng)有一片葉反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)以便觀察其背面，最好幼葉和老葉各有一片；花的正、反面也都應(yīng)朝上顯示；——若有額外的果實(shí)，可把一些縱向切開，另一些橫向切開；若個(gè)體過(guò)大，則可切成片分開干燥；——大型標(biāo)本可折成“N”字型或“V”字型，使其合于臺(tái)紙長(zhǎng)度即可；——標(biāo)本葉子太多，可剪除一部分，但應(yīng)保留葉柄，以示其著生的方式；若葉子太大，可對(duì)稱的剪除一半，但不可將先端剪除；——標(biāo)本有厚而凹凸不平的地方，可加干燥紙或報(bào)紙予以支撐，避免柔嫩的葉子、花瓣可能因受不到擠壓而在干燥過(guò)程中起皺褶。DB45/T2577—2022D.2.2標(biāo)本干燥標(biāo)本壓制前3天，宜每天更換干燥的吸水紙1～2次，含水量過(guò)高或者大而厚的標(biāo)本增加換紙頻率；標(biāo)本換紙到8～10次，標(biāo)本已基本干燥，可改為隔天換紙，直至標(biāo)本完全干燥為止；換紙時(shí)，注意對(duì)標(biāo)本繼續(xù)修整，鋪枝展葉，收藏脫落的花果和及時(shí)清除霉?fàn)€部位等。D.2.3標(biāo)本裝訂標(biāo)本裝訂應(yīng)遵循以下原則：——標(biāo)本在臺(tái)紙上的擺放要最大限度地展示盡可能多的特征，并考慮其的藝術(shù)性，最重要的是將臺(tái)紙的左上角和右下角留下空白區(qū)，便于采集簽和鑒定簽的貼放；——大標(biāo)本應(yīng)對(duì)角線放置，過(guò)長(zhǎng)標(biāo)本可進(jìn)行折疊；——修剪過(guò)大標(biāo)本時(shí)，盡量?jī)H剪去莖干，在不損壞標(biāo)