ICS11.220B41備案號：DB42Methodoftheimmunochromatographicassayforthedetectionofavianinfluenzavirus湖北省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā)布DB42/T794—2012前言 12縮略詞 13實驗原理 14實驗條件 15實驗材料 16樣品處理 27實驗方法 28結果判定 29注意事項 3DB42/T794—2012本標準按GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草。本標準由華中農(nóng)業(yè)大學提出。本標準由湖北省農(nóng)業(yè)廳歸口。本標準起草單位：華中農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院、武漢科前動物生物制品有限責任公司、湖北省動物疫病預防控制中心。本標準起草人：金梅林、陳煥春、但漢并、郭學波、董曉輝、宋念華、張安定、周紅波、孫小美、李淑云、周艷君、田峰。DB42/T794—2012禽流感病毒（AvianInfluenzaVirus,AIV）具有易變異的特點，可通過突變獲得對人的感染力和致病能力，導致嚴重的公共衛(wèi)生危害。為加強禽流感監(jiān)測，制定了《禽流感病毒免疫層析檢測方法》，本方法具有簡便、快速的優(yōu)點，尤其適合基層現(xiàn)場使用。DB42/T794—20121禽流感病毒免疫層析檢測方法本標準規(guī)定了禽流感病毒免疫層析檢測的方法的縮略詞、實驗原理、實驗材料、樣品處理、實驗方法、結果判定和注意事項等。本標準適用于禽類咽/鼻拭子、肛拭子、內(nèi)臟組織、雞胚尿囊液及細胞培養(yǎng)物中禽流感病毒的檢測。2縮略詞下列縮略詞適用于本標準。T線：檢測線C線：質(zhì)控線3實驗原理本方法用抗禽流感病毒核蛋白的單克隆抗體標記膠體金顆粒，以硝酸纖維素（NC）膜為載體，利用微孔膜的毛細管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲透。在移動過程中免疫金復合物會與NC膜表面檢測線、質(zhì)控線處包被的抗體發(fā)生反應，并通過免疫金的顏色顯示出來。樣品中含有禽流感病毒時，在檢測線和質(zhì)控線位置均出現(xiàn)紅色的條帶。4實驗條件4.1實驗室實驗操作宜在常溫（18℃~25℃)進行。4.2儀器臺式低溫高速離心機、微量移液器、冰箱、吸頭。4.3人員注意個人防護和環(huán)境保護。5實驗材料5.1檢測卡禽流感病毒檢測試紙條裝在塑料卡中制成檢測卡，鋁箔密封，內(nèi)裝干燥劑，室溫或冷藏保存。檢測卡結構如圖1所示。2DB42/T794—20125.2樣品處理液取24.2gTrisBase和10mLTriton-x100，加注射用水至1L,調(diào)pH值至9.0，過濾除菌，無菌分裝，1mL/管。6樣品處理6.1咽/鼻拭子、肛拭子將收集的咽/鼻拭子、肛拭子插入到含有處理液的樣品管中，充分混合，使其溶解，以12,000r/min離心10min，取上清。6.2內(nèi)臟組織稱取組織塊0.5g，置于勻漿器中，加生理鹽水1mL，研磨后取出組織浸出液，然后置2℃~8℃,12,000r/min離心10min，取上清。6.3雞胚尿囊液雞胚尿囊液以12,000r/min離心2min，取上清。6.4細胞培養(yǎng)物細胞培養(yǎng)物可直接用于檢測或者凍融一次后檢測。7實驗方法將檢測卡置于平整臺面上，取適量樣品80μL～120μL（約3滴～4滴），緩慢滴加到樣品孔中，當看到紅色液體在試紙條上移動時，放慢加樣速度。整個加樣過程在1min內(nèi)完成。加樣完成后5min~30min內(nèi)觀察的結果有效。8結果判定DB42/T794—20128.1陽性結果在試紙條上出現(xiàn)兩條紅色的條帶（T線和C線）。8.2陰性結果在試紙條