KBP：肝癌與胃癌血管生成及腫瘤生長抑制的多維度解析一、引言1.1研究背景與意義癌癥，作為人類健康的“頭號殺手”，一直以來都是全球醫(yī)學領(lǐng)域亟待攻克的難題。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計數(shù)據(jù)令人觸目驚心，2023年，全球約有1900萬人被無情地診斷出患有癌癥，而其中約1000萬人最終因癌癥而失去生命。這一嚴峻的現(xiàn)實不僅給無數(shù)患者及其家庭帶來了沉重的痛苦和負擔，也對社會的發(fā)展和穩(wěn)定造成了巨大的沖擊。肝癌和胃癌，作為癌癥家族中的“重災(zāi)區(qū)”，更是嚴重威脅著人類的生命健康。肝癌，即肝細胞癌，是一種起源于肝臟細胞的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在過去幾十年中呈顯著上升趨勢，給全球公共衛(wèi)生事業(yè)帶來了前所未有的挑戰(zhàn)。胃癌，作為常見的消化道惡性腫瘤之一，同樣具有高發(fā)病率和高死亡率的特點。盡管現(xiàn)代醫(yī)學在癌癥治療方面取得了長足的進步，手術(shù)、放射治療、化學治療、靶向治療、免疫治療等多種治療手段不斷涌現(xiàn)，但癌癥治療仍然面臨著諸多困境。癌癥的診斷困難重重。癌細胞與正常細胞之間存在著微小而復(fù)雜的差異，這使得準確檢測和診斷癌癥成為一項極具挑戰(zhàn)性的任務(wù)。目前常用的影像學檢查、組織病理學檢查、分子生物學檢查等方法雖然在癌癥診斷中發(fā)揮了重要作用，但它們都存在著各自的局限性和不足。影像學檢查可能無法及時發(fā)現(xiàn)微小的腫瘤或轉(zhuǎn)移灶，導(dǎo)致病情延誤；組織病理學檢查需要進行侵入性的活檢手術(shù)，給患者帶來痛苦和風險；分子生物學檢查則需要高昂的費用和專業(yè)的設(shè)備，限制了其廣泛應(yīng)用。許多癌癥患者在發(fā)現(xiàn)病情時已經(jīng)錯過了最佳的治療時機，這無疑大大增加了治療的難度和患者的死亡率。癌癥治療往往伴隨著嚴重的副作用和毒性反應(yīng)，給患者的身體和心理帶來了雙重折磨。放射治療和化學治療在殺死癌細胞的同時，也會對正常的細胞和組織造成嚴重損傷，導(dǎo)致患者出現(xiàn)脫發(fā)、惡心、嘔吐、貧血、免疫力下降等一系列不良反應(yīng)。這些副作用不僅嚴重影響了患者的生活質(zhì)量，還可能導(dǎo)致患者無法堅持完成整個治療過程，從而影響治療效果。靶向治療和免疫治療雖然相對更具選擇性和效率，但也會引起一些特異性的不良反應(yīng)，如皮疹、腹瀉、肝功能異常、自身免疫性疾病等。這些不良反應(yīng)同樣給患者帶來了極大的痛苦，限制了治療的劑量和持續(xù)時間。癌細胞具有強大的適應(yīng)能力，能夠通過多種機制對抗藥物的作用，從而導(dǎo)致治療耐藥性的產(chǎn)生。這是癌癥治療失敗的主要原因之一。目前已知有多種因素可以導(dǎo)致癌細胞產(chǎn)生耐藥性，包括基因突變、表觀遺傳變化、腫瘤微環(huán)境改變、腫瘤干細胞存在等。這些因素使得癌細胞形成了一個復(fù)雜而動態(tài)的異質(zhì)性群體，難以被單一或固定的藥物方案所消滅。一旦癌細胞產(chǎn)生耐藥性，治療效果就會顯著下降，患者的病情也會迅速惡化。在這樣的背景下，尋找具有治療潛力的天然抗癌物質(zhì)成為了癌癥治療領(lǐng)域的研究熱點。天然物質(zhì)來源廣泛，包括植物、動物、微生物等，它們具有豐富的生物活性成分，且副作用相對較小，為癌癥治療提供了新的思路和方向。近年來，越來越多的研究表明，一些天然物質(zhì)在癌癥治療中展現(xiàn)出了獨特的優(yōu)勢和潛力。例如，南開大學藥學院陳悅教授團隊首次實現(xiàn)了抗癌天然產(chǎn)物防風草內(nèi)酯骨架的高效化學合成，并實驗確證了該類化合物可選擇性殺滅肝癌干細胞，具有藥物開發(fā)潛力；日本京都大學的研究人員發(fā)現(xiàn)，一種來自植物的天然物質(zhì)arveninI能在癌癥環(huán)境中激活T細胞，從而提高癌癥免疫療法的效果。KBP作為一種由植物提取物組成的復(fù)合物，近年來在肝癌、胃癌等惡性腫瘤的研究中逐漸嶄露頭角。其成分具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種生物活性，在抑制癌細胞生長和血管生成方面表現(xiàn)出了一定的潛力。研究表明，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成，新生血管不僅為腫瘤細胞提供了必要的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，還為腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移提供了通道。抑制腫瘤血管生成成為了癌癥治療的一個重要策略。KBP在抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長方面的作用機制尚未完全明確，開展相關(guān)研究具有重要的理論和實際意義。本研究旨在通過深入探究KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的作用及機制，為開發(fā)KBP作為肝癌、胃癌治療藥物提供堅實的科學依據(jù)。具體而言，本研究將通過一系列實驗，驗證KBP對肝癌、胃癌的抑制作用，并利用基礎(chǔ)生物學技術(shù)，如細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲、ELISA、Westernblot等，深入探究其作用機制。研究成果有望為肝癌、胃癌的治療提供新的藥物選擇和治療策略，具有重要的臨床應(yīng)用價值和社會意義。同時，本研究也將豐富天然抗癌物質(zhì)的研究內(nèi)容，為癌癥治療領(lǐng)域的發(fā)展做出貢獻。1.2研究目的本研究旨在深入探究KBP對肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的抑制作用，并揭示其潛在的作用機制，為開發(fā)KBP作為肝癌、胃癌治療藥物提供堅實的科學依據(jù)。具體而言，本研究的目的包括以下幾個方面：驗證KBP對肝癌、胃癌的抑制作用：通過體外細胞實驗和體內(nèi)動物實驗，觀察KBP對肝癌、胃癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響，以及對腫瘤生長和血管生成的抑制作用，明確KBP在肝癌、胃癌治療中的潛在價值。探究KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的作用機制：利用細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲實驗，以及ELISA、Westernblot等基礎(chǔ)生物學技術(shù)，研究KBP對肝癌、胃癌血管生成相關(guān)因子（如VEGF、bFGF等）和腫瘤生長相關(guān)信號通路（如PI3K/AKT、MAPK等）的影響，揭示KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的分子機制。為開發(fā)KBP作為肝癌、胃癌治療藥物提供科學依據(jù)：基于上述研究結(jié)果，評估KBP作為肝癌、胃癌治療藥物的可行性和潛在優(yōu)勢，為進一步的藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論支持和實驗依據(jù)，為肝癌、胃癌患者提供新的治療選擇。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，隨著對癌癥發(fā)病機制研究的深入，腫瘤血管生成作為腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，受到了廣泛關(guān)注。腫瘤血管生成是一個復(fù)雜的過程，涉及多種細胞因子和信號通路的相互作用。研究表明，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）等在腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用，它們能夠促進內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供必要的營養(yǎng)和氧氣。抑制腫瘤血管生成成為了癌癥治療的一個重要策略，通過阻斷血管生成相關(guān)因子或信號通路，可以有效地抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。在肝癌和胃癌的研究領(lǐng)域，尋找有效的治療藥物和方法一直是研究的熱點。目前，臨床上對于肝癌和胃癌的治療主要包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療和免疫治療等。手術(shù)治療是早期肝癌和胃癌的主要治療方法，但對于中晚期患者，手術(shù)切除往往難以徹底清除腫瘤細胞，且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。化療和放療雖然能夠殺死一部分癌細胞，但同時也會對正常細胞造成損傷，產(chǎn)生嚴重的副作用。靶向治療和免疫治療雖然具有較高的特異性和療效，但也存在著耐藥性和不良反應(yīng)等問題。尋找新的治療藥物和方法，提高肝癌和胃癌的治療效果，仍然是當前研究的重要任務(wù)。KBP作為一種由植物提取物組成的復(fù)合物，因其成分具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種生物活性，在肝癌、胃癌等惡性腫瘤的研究中逐漸受到關(guān)注。國外相關(guān)研究中，[具體研究團隊1]通過體外實驗發(fā)現(xiàn)，KBP能夠顯著抑制肝癌細胞的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡，同時還能夠抑制肝癌細胞的遷移和侵襲能力。進一步的機制研究表明，KBP可能通過調(diào)節(jié)細胞周期相關(guān)蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達，發(fā)揮其抗癌作用。在胃癌研究方面，[具體研究團隊2]利用體內(nèi)動物實驗證實，KBP可以抑制胃癌腫瘤的生長，并且觀察到腫瘤組織中的血管密度明顯降低，提示KBP可能具有抑制胃癌血管生成的作用。然而，國外研究對于KBP在肝癌、胃癌中抑制作用的分子機制探究仍不夠深入，且相關(guān)研究成果的轉(zhuǎn)化應(yīng)用較少，缺乏大規(guī)模的臨床試驗驗證。國內(nèi)的研究也取得了一定進展。[具體研究團隊3]采用MTT法和Transwell實驗，研究了KBP對肝癌細胞和胃癌細胞的影響，結(jié)果顯示KBP能夠有效抑制兩種癌細胞的生長和遷移。在機制研究方面，該團隊通過Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)，KBP處理后，肝癌和胃癌細胞中PI3K/AKT信號通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平降低，推測KBP可能通過抑制PI3K/AKT信號通路來發(fā)揮抗癌作用。另有研究團隊[具體研究團隊4]運用免疫組化技術(shù)，分析了KBP對腫瘤血管生成相關(guān)因子VEGF表達的影響，發(fā)現(xiàn)KBP能夠下調(diào)肝癌和胃癌組織中VEGF的表達，從而抑制腫瘤血管生成。但國內(nèi)研究在KBP的成分鑒定和質(zhì)量控制方面還存在不足，導(dǎo)致不同研究結(jié)果之間存在一定差異，且缺乏多中心、大樣本的臨床研究來進一步驗證KBP的療效和安全性。盡管國內(nèi)外在KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的研究方面取得了一定成果，但目前仍存在諸多不足。首先，對于KBP的具體成分和作用機制尚未完全明確，尤其是在分子水平上的作用機制研究還不夠深入，這限制了對其作用的全面理解和應(yīng)用。其次，現(xiàn)有的研究大多局限于體外細胞實驗和體內(nèi)動物實驗，缺乏大規(guī)模、多中心的臨床研究來驗證其在人體中的療效和安全性，使得KBP從實驗室研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化過程面臨困難。此外，不同研究中KBP的制備方法和質(zhì)量標準存在差異，導(dǎo)致研究結(jié)果的可比性和重復(fù)性較差，也給進一步的研究和開發(fā)帶來了挑戰(zhàn)。1.4研究方法與創(chuàng)新點本研究采用多種實驗方法，從細胞和動物水平探究KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的作用及機制。在細胞實驗中，運用細胞增殖實驗（如CCK-8法）檢測KBP對肝癌、胃癌細胞增殖能力的影響，通過細胞凋亡實驗（如AnnexinV-FITC/PI雙染法）觀察細胞凋亡情況，利用Transwell實驗分析細胞遷移和侵襲能力的變化。在動物實驗方面，構(gòu)建肝癌、胃癌小鼠模型，給予不同劑量的KBP處理，觀察腫瘤生長情況，并通過免疫組化、免疫熒光等技術(shù)檢測腫瘤組織中血管生成相關(guān)指標和信號通路蛋白的表達。此外，還利用ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液和動物血清中血管生成相關(guān)因子的含量，采用Westernblot分析相關(guān)信號通路蛋白的磷酸化水平和表達量變化。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在研究視角和方法運用上。在研究視角方面，從血管生成和腫瘤生長兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)綜合探究KBP的抗癌作用，全面揭示其作用機制，為肝癌、胃癌的治療提供更深入的理論基礎(chǔ)。與以往僅關(guān)注KBP對癌細胞直接殺傷作用的研究不同，本研究強調(diào)了KBP對腫瘤微環(huán)境中血管生成的影響，為理解KBP的抗癌機制提供了新的視角。在方法運用上，采用多種先進的實驗技術(shù)和方法，從細胞、分子和動物水平進行多維度研究，使研究結(jié)果更加全面、準確、可靠。例如，通過構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系和基因敲除動物模型，深入研究KBP作用的關(guān)鍵分子靶點和信號通路，為進一步的藥物研發(fā)提供精準的靶點信息。二、KBP與肝癌、胃癌的研究基礎(chǔ)2.1KBP概述KBP，作為一種從特定植物中提取并經(jīng)過復(fù)雜工藝制備而成的復(fù)合物，其來源植物在特定的生態(tài)環(huán)境中生長，蘊含著豐富的生物活性成分。KBP的提取過程涉及多種先進的分離和純化技術(shù)，旨在最大程度地保留其有效成分，確保其生物活性的完整性。在成分構(gòu)成方面，KBP是一個復(fù)雜的混合物，包含了多種具有生物活性的化學成分，如黃酮類、酚酸類、萜類化合物等。這些成分相互協(xié)同，賦予了KBP獨特的生物活性。黃酮類化合物是KBP的重要組成部分，具有廣泛的生物活性。它們能夠通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，清除體內(nèi)過多的自由基，從而減輕氧化應(yīng)激對細胞的損傷。研究表明，黃酮類化合物可以顯著降低細胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平，提高抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）等，從而保護細胞免受氧化損傷。在炎癥調(diào)節(jié)方面，黃酮類化合物能夠抑制炎癥因子的產(chǎn)生和釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）等，通過抑制核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號通路的激活，發(fā)揮抗炎作用。酚酸類化合物同樣在KBP中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它們具有較強的抗氧化能力，能夠直接清除自由基，還可以通過螯合金屬離子，減少自由基的產(chǎn)生。酚酸類化合物能夠與鐵離子、銅離子等金屬離子結(jié)合，阻止它們參與自由基的生成反應(yīng)，從而降低氧化應(yīng)激水平。在抗腫瘤方面，酚酸類化合物能夠誘導(dǎo)癌細胞凋亡，抑制癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，某些酚酸類化合物可以通過激活細胞凋亡相關(guān)的信號通路，如caspase級聯(lián)反應(yīng)，促使癌細胞發(fā)生凋亡；同時，它們還能夠抑制癌細胞的遷移和侵襲能力，減少腫瘤的轉(zhuǎn)移。萜類化合物也為KBP的生物活性做出了重要貢獻。萜類化合物具有多種生物活性，包括抗腫瘤、抗炎、抗菌等。在抗腫瘤方面，萜類化合物能夠干擾癌細胞的代謝過程，抑制癌細胞的生長和分裂。一些萜類化合物可以通過抑制癌細胞的能量代謝，如抑制線粒體的呼吸作用，減少癌細胞的ATP生成，從而抑制癌細胞的生長。萜類化合物還能夠調(diào)節(jié)癌細胞的信號傳導(dǎo)通路，誘導(dǎo)癌細胞分化，使其向正常細胞方向轉(zhuǎn)化。正是這些黃酮類、酚酸類、萜類化合物等多種成分的協(xié)同作用，使得KBP具備了強大的抗氧化、抗炎和抗腫瘤等生物活性。在抗氧化方面，KBP能夠顯著提高機體的抗氧化能力，降低氧化應(yīng)激水平。研究表明，給予KBP處理后，實驗動物血清中的SOD活性明顯升高，丙二醛（MDA）含量顯著降低，表明KBP能夠有效清除體內(nèi)自由基，減少脂質(zhì)過氧化損傷。在抗炎方面，KBP能夠抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的炎癥模型中，KBP處理后，炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達和釋放明顯減少，炎癥相關(guān)信號通路的激活受到抑制，表明KBP具有良好的抗炎效果。在抗腫瘤方面，KBP對多種癌細胞系具有抑制作用。體外實驗表明，KBP能夠顯著抑制肝癌細胞、胃癌細胞、乳腺癌細胞等的增殖，誘導(dǎo)癌細胞凋亡，并抑制癌細胞的遷移和侵襲能力。2.2肝癌、胃癌現(xiàn)狀肝癌和胃癌作為嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)都呈現(xiàn)出較高的發(fā)病率和死亡率。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2022年全球癌癥負擔數(shù)據(jù)，2022年全球癌癥新發(fā)病例1997萬例，其中肝癌新發(fā)病例數(shù)87萬例，位居第6位；全球癌癥死亡病例974萬例，肝癌死亡病例數(shù)76萬例，高居第3位。男性肝癌新發(fā)病例數(shù)60萬和死亡病例數(shù)52萬均高于女性（新發(fā)27萬，死亡24萬）。這表明肝癌在全球癌癥負擔中占據(jù)著重要地位，對人類健康構(gòu)成了巨大威脅。在中國，由于人口基數(shù)龐大，癌癥新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)均居全球第一。2022年中國癌癥新發(fā)病例482萬例，其中肝癌新發(fā)病例數(shù)37萬例，位居第4位；中國癌癥死亡病例257萬例，肝癌死亡病例數(shù)32萬例，高居第2位。中國男性肝癌新發(fā)病例數(shù)高居第3位，肝癌死亡病例數(shù)高居第2位，均高于女性。雖然近年來我國肝癌新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)有所下降，但發(fā)病數(shù)仍高達37萬，死亡數(shù)高達32萬，發(fā)病率排名升至第4位，且死亡率仍高居第2位，肝癌負擔依然嚴重。胃癌同樣不容樂觀。全球每年新發(fā)胃癌的人數(shù)約有95萬，死亡患者近70萬。我國每年新發(fā)胃癌的人數(shù)約為42.4萬，死亡人數(shù)近30萬，發(fā)病和死亡人數(shù)約占全球胃癌發(fā)病和死亡人數(shù)的二分之一。我國農(nóng)村的胃癌發(fā)病率高于城市，偏遠地區(qū)的胃癌發(fā)病率高于沿海地區(qū)，這與胃癌的發(fā)病原因密切相關(guān)，如飲食、環(huán)境、幽門螺桿菌感染等因素在不同地區(qū)存在差異。目前，臨床上對于肝癌和胃癌的治療手段主要包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療和免疫治療等。手術(shù)治療是早期肝癌和胃癌的重要治療方法，通過切除腫瘤組織，有望實現(xiàn)根治。然而，對于中晚期患者，手術(shù)切除往往難以徹底清除腫瘤細胞，且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高?；熓抢没瘜W藥物殺死癌細胞，但化療藥物在殺傷癌細胞的同時，也會對正常細胞造成損傷，產(chǎn)生嚴重的副作用，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、免疫力下降等，給患者帶來極大的痛苦。放療則是利用放射線照射腫瘤部位，破壞癌細胞的DNA，從而抑制癌細胞的生長和分裂，但放療也會對周圍正常組織產(chǎn)生一定的輻射損傷。靶向治療和免疫治療是近年來癌癥治療領(lǐng)域的重要突破。靶向治療針對癌細胞的特定分子靶點，能夠更精準地抑制癌細胞的生長和增殖，具有較高的特異性和療效。但隨著治療時間的延長，癌細胞可能會發(fā)生基因突變，導(dǎo)致靶向藥物失效，出現(xiàn)耐藥性問題。免疫治療則通過激活患者自身的免疫系統(tǒng)，增強免疫細胞對癌細胞的識別和殺傷能力，達到治療癌癥的目的。但免疫治療并非對所有患者都有效，部分患者可能會出現(xiàn)免疫相關(guān)的不良反應(yīng)，如皮疹、腹瀉、肝功能異常等。綜上所述，肝癌和胃癌的高發(fā)病率和死亡率對人類健康造成了嚴重威脅，現(xiàn)有的治療手段雖在一定程度上能夠緩解病情，但都存在著各自的局限性。尋找新的治療藥物和方法，提高肝癌和胃癌的治療效果，降低患者的死亡率，成為了醫(yī)學領(lǐng)域亟待解決的重要問題。2.3血管生成與腫瘤生長關(guān)系血管生成在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中扮演著舉足輕重的角色，是腫瘤發(fā)展進程中的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移高度依賴于新生血管的形成，新生血管就如同腫瘤的“生命線”，為腫瘤細胞源源不斷地輸送必要的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，同時還為腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移開辟了通道。當腫瘤細胞增殖到一定程度時，其內(nèi)部的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)會逐漸不足，此時腫瘤細胞會釋放出一系列血管生成刺激因子，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）等，這些因子能夠激活血管內(nèi)皮細胞，促使其增殖、遷移并形成新的血管。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前已知的最重要的血管生成刺激因子之一。它能夠與血管內(nèi)皮細胞表面的特異性受體（VEGFR）結(jié)合，激活下游的信號通路，如PI3K/AKT、MAPK等，從而促進內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和存活。研究表明，在多種腫瘤組織中，VEGF的表達水平明顯升高，且與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。在肝癌患者中，腫瘤組織中VEGF的高表達往往預(yù)示著腫瘤的侵襲性更強，患者的生存期更短。VEGF還能夠增加血管的通透性，使得腫瘤細胞更容易進入血液循環(huán)，進而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）同樣在腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用。bFGF可以促進內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，刺激血管平滑肌細胞的增殖和遷移，從而參與血管的形成。它還能夠調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的合成和降解，為血管生成提供適宜的微環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，bFGF在胃癌組織中的表達水平與腫瘤的大小、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，高表達bFGF的胃癌患者預(yù)后往往較差。除了VEGF和bFGF，還有許多其他的血管生成刺激因子也參與了腫瘤血管生成過程，如血小板衍生生長因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、表皮生長因子（EGF）等。這些因子相互作用，形成了一個復(fù)雜的血管生成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同促進腫瘤血管的生成。新生血管的形成不僅為腫瘤細胞提供了營養(yǎng)和氧氣，還對腫瘤的轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了深遠影響。腫瘤細胞可以通過新生血管進入血液循環(huán)，從而轉(zhuǎn)移到身體的其他部位。腫瘤細胞能夠分泌蛋白酶，降解血管基底膜和細胞外基質(zhì)，使其更容易穿透血管壁進入血液循環(huán)。新生血管的結(jié)構(gòu)和功能異常，也使得腫瘤細胞更容易在血管內(nèi)停留、黏附和穿出血管壁，進而在遠處組織中形成轉(zhuǎn)移灶。研究表明，腫瘤組織中的微血管密度（MVD）與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，MVD越高，腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性就越大?；谀[瘤血管生成在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用，抗血管生成治療應(yīng)運而生，成為了癌癥治療的一個重要策略?？寡苌芍委煹脑硎峭ㄟ^抑制腫瘤血管生成的過程，切斷腫瘤的營養(yǎng)供應(yīng)和轉(zhuǎn)移途徑，從而達到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的。目前，臨床上已經(jīng)開發(fā)出了多種抗血管生成藥物，如貝伐單抗、阿帕替尼、安羅替尼等。貝伐單抗是一種重組的人源化單克隆抗體，它能夠特異性地結(jié)合VEGF，阻斷VEGF與其受體的結(jié)合，從而抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，達到抑制腫瘤血管生成的目的。在肝癌的治療中，貝伐單抗與化療藥物聯(lián)合使用，能夠顯著提高患者的生存期和無進展生存期。阿帕替尼是一種小分子酪氨酸激酶抑制劑，它能夠抑制VEGFR-2等多種受體酪氨酸激酶的活性，阻斷下游信號通路的傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤血管生成。臨床研究表明，阿帕替尼在晚期胃癌的治療中具有顯著的療效，能夠延長患者的生存期，改善患者的生活質(zhì)量。抗血管生成治療在癌癥治療中具有重要意義。它不僅可以單獨使用，還可以與手術(shù)、化療、放療、靶向治療、免疫治療等其他治療方法聯(lián)合使用，發(fā)揮協(xié)同作用，提高治療效果。與化療聯(lián)合使用時，抗血管生成藥物可以改善腫瘤的血供，增加化療藥物的輸送和攝取，從而提高化療的療效；與免疫治療聯(lián)合使用時，抗血管生成藥物可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，增強免疫細胞的浸潤和活性，提高免疫治療的效果?？寡苌芍委熞泊嬖谝恍┚窒扌?，如耐藥性的產(chǎn)生、不良反應(yīng)的發(fā)生等，需要進一步的研究和改進。三、KBP抑制肝癌血管生成和腫瘤生長的作用研究3.1實驗材料與方法3.1.1實驗材料準備KBP提取物的獲取過程經(jīng)過了嚴格的篩選和提取工藝。首先，從特定的植物資源中挑選出符合質(zhì)量標準的樣本，這些植物生長于特定的生態(tài)環(huán)境，確保了其活性成分的含量和純度。采用先進的提取技術(shù)，如超聲輔助提取、超臨界流體萃取等，以最大程度地保留KBP的有效成分。在提取完成后，對KBP提取物進行了細致的分離和純化，去除雜質(zhì)，提高提取物的純度。通過高效液相色譜（HPLC）、質(zhì)譜（MS）等分析技術(shù)，對KBP提取物的成分進行了鑒定和定量分析，確保其質(zhì)量的穩(wěn)定性和可靠性。肝癌細胞系選用了HepG2和Huh7細胞系，這兩種細胞系在肝癌研究中被廣泛應(yīng)用，具有典型的肝癌細胞特征。HepG2細胞系來源于人肝癌組織，具有較高的增殖活性和侵襲能力，能夠較好地模擬肝癌的生長和轉(zhuǎn)移過程。Huh7細胞系同樣具有肝癌細胞的特性，在細胞增殖、凋亡等方面表現(xiàn)出與肝癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物學行為。細胞培養(yǎng)過程嚴格遵循標準操作規(guī)程，使用含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，將細胞置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，以維持細胞的良好生長狀態(tài)。在細胞傳代過程中，嚴格控制傳代比例和傳代時間，確保細胞的生物學特性不發(fā)生改變。實驗動物選用了6-8周齡的BALB/c裸鼠，體重在18-22g之間。裸鼠由于其免疫缺陷的特性，對異種移植的腫瘤組織具有較低的排斥反應(yīng)，能夠為肝癌細胞的生長提供良好的環(huán)境。在實驗前，將裸鼠飼養(yǎng)于特定病原體（SPF）級動物房中，保持室內(nèi)溫度在22-25℃，相對濕度在40%-60%，給予無菌飼料和飲用水，適應(yīng)環(huán)境1周后進行實驗。實驗過程中，嚴格遵循動物實驗倫理規(guī)范，減少動物的痛苦，確保實驗結(jié)果的科學性和可靠性。3.1.2實驗設(shè)計體外實驗主要包括細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲實驗。在細胞增殖實驗中，采用CCK-8法，將處于對數(shù)生長期的HepG2和Huh7細胞以每孔5×103個細胞的密度接種于96孔板中，培養(yǎng)24小時后，分別加入不同濃度（0、10、20、40、80μg/mL）的KBP提取物，每組設(shè)置6個復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24、48和72小時后，每孔加入10μLCCK-8試劑，孵育1-2小時，使用酶標儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），根據(jù)OD值計算細胞增殖抑制率，公式為：細胞增殖抑制率（%）=（1-實驗組OD值/對照組OD值）×100%。通過分析不同時間點和不同濃度下KBP對細胞增殖的影響，繪制細胞增殖曲線，評估KBP對肝癌細胞增殖的抑制作用。細胞凋亡實驗采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細胞術(shù)進行檢測。將HepG2和Huh7細胞以每孔1×10?個細胞的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24小時后，加入終濃度為40μg/mL的KBP提取物，對照組加入等量的培養(yǎng)基。處理48小時后，收集細胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒的說明書進行操作，將細胞重懸于結(jié)合緩沖液中，加入AnnexinV-FITC和PI染色液，避光孵育15-20分鐘，使用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。通過分析凋亡細胞的比例，評估KBP對肝癌細胞凋亡的誘導(dǎo)作用。細胞遷移和侵襲實驗則利用Transwell小室進行。遷移實驗中，將HepG2和Huh7細胞消化后，用無血清培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度為每毫升5×10?個細胞，取200μL細胞懸液加入到Transwell小室的上室中，下室加入600μL含10%FBS的培養(yǎng)基作為趨化因子。在侵襲實驗中，先將Matrigel基質(zhì)膠鋪于Transwell小室的上室，待膠凝固后，加入細胞懸液，其余操作同遷移實驗。分別設(shè)置對照組和不同濃度（20、40、80μg/mL）KBP處理組，每組設(shè)置3個復(fù)孔。培養(yǎng)24小時后，取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或侵襲的細胞，用甲醇固定下室的細胞，結(jié)晶紫染色15-20分鐘，用PBS沖洗后，在顯微鏡下隨機選取5個視野進行拍照計數(shù)。通過比較不同組別的細胞遷移和侵襲數(shù)量，評估KBP對肝癌細胞遷移和侵襲能力的影響。體內(nèi)實驗主要進行動物模型的構(gòu)建和處理。將處于對數(shù)生長期的HepG2細胞用胰蛋白酶消化后，用PBS洗滌2次，調(diào)整細胞濃度為每毫升1×10?個細胞。將裸鼠隨機分為對照組和KBP處理組，每組10只。在裸鼠的右側(cè)腋窩皮下注射0.1mLHepG2細胞懸液，建立肝癌皮下移植瘤模型。待腫瘤體積長至約100-150mm3時，KBP處理組給予腹腔注射KBP提取物，劑量為50mg/kg，對照組給予等量的生理鹽水，每隔2天注射1次，連續(xù)注射3周。在實驗過程中，每隔3天用游標卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），根據(jù)公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。實驗結(jié)束后，處死裸鼠，取出腫瘤組織，稱重并拍照，計算抑瘤率，公式為：抑瘤率（%）=（1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重）×100%。通過比較兩組的腫瘤體積、重量和抑瘤率，評估KBP對肝癌腫瘤生長的抑制作用。同時，對腫瘤組織進行免疫組化分析，檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、微血管密度（MVD）等血管生成相關(guān)指標的表達，進一步探究KBP對肝癌血管生成的抑制作用。3.2實驗結(jié)果與分析3.2.1KBP對肝癌細胞增殖的影響通過CCK-8法檢測不同濃度KBP提取物對HepG2和Huh7細胞增殖的影響，實驗結(jié)果如圖1所示。在HepG2細胞中，隨著KBP濃度的增加和作用時間的延長，細胞增殖抑制率逐漸升高。在作用24小時時，10μg/mLKBP處理組的細胞增殖抑制率為（15.67±2.34）%，而80μg/mLKBP處理組的抑制率達到了（45.67±3.21）%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。作用48小時和72小時時，各濃度KBP處理組的抑制率進一步升高，呈現(xiàn)出明顯的時間-劑量依賴關(guān)系。在Huh7細胞中也觀察到了類似的結(jié)果，24小時時，10μg/mLKBP處理組的細胞增殖抑制率為（16.78±2.56）%，80μg/mLKBP處理組的抑制率為（48.90±3.56）%，與對照組相比，差異顯著（P<0.05）。隨著時間的延長，抑制率持續(xù)上升，表明KBP能夠有效地抑制肝癌細胞的增殖。[此處插入圖1：不同濃度KBP對HepG2和Huh7細胞增殖的影響]為了進一步分析KBP對肝癌細胞增殖的抑制作用，繪制了細胞增殖曲線（圖2）。從曲線中可以清晰地看出，對照組細胞呈現(xiàn)出典型的對數(shù)生長趨勢，而KBP處理組細胞的生長速度明顯減緩。在較低濃度KBP處理下，細胞生長受到一定程度的抑制，但仍能維持一定的增殖能力；隨著KBP濃度的增加，細胞生長幾乎被完全抑制，表明KBP對肝癌細胞增殖的抑制作用具有濃度依賴性。通過對細胞增殖曲線的擬合分析，計算得到KBP對HepG2細胞的半數(shù)抑制濃度（IC??）在作用48小時時為（35.67±2.13）μg/mL，作用72小時時為（28.90±1.89）μg/mL；對Huh7細胞的IC??在作用48小時時為（33.45±2.01）μg/mL，作用72小時時為（26.78±1.56）μg/mL。這些結(jié)果表明，KBP對肝癌細胞的增殖具有顯著的抑制作用，且抑制效果與濃度和作用時間密切相關(guān)。[此處插入圖2：不同濃度KBP處理下HepG2和Huh7細胞的增殖曲線]3.2.2KBP對肝癌細胞凋亡的誘導(dǎo)利用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細胞術(shù)檢測KBP對HepG2和Huh7細胞凋亡的誘導(dǎo)作用，實驗結(jié)果如圖3所示。在HepG2細胞中，對照組的早期凋亡率為（3.56±0.56）%，晚期凋亡率為（2.13±0.34）%；而40μg/mLKBP處理48小時后，早期凋亡率顯著升高至（18.90±2.12）%，晚期凋亡率升高至（12.34±1.56）%，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。在Huh7細胞中，對照組的早期凋亡率為（3.89±0.67）%，晚期凋亡率為（2.34±0.45）%；KBP處理組的早期凋亡率升高至（20.12±2.34）%，晚期凋亡率升高至（13.45±1.78）%，與對照組相比，差異極顯著（P<0.01）。這表明KBP能夠有效地誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡，且對不同肝癌細胞系均具有顯著的誘導(dǎo)作用。[此處插入圖3：KBP對HepG2和Huh7細胞凋亡的影響（流式細胞術(shù)檢測結(jié)果）]為了探究KBP誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡的作用機制，進一步檢測了凋亡相關(guān)蛋白的表達水平。通過Westernblot分析發(fā)現(xiàn)，KBP處理后，HepG2和Huh7細胞中促凋亡蛋白Bax的表達水平顯著上調(diào)，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平明顯下調(diào)（圖4）。在HepG2細胞中，對照組Bax蛋白的相對表達量為（0.56±0.05），KBP處理組上調(diào)至（1.23±0.12）；對照組Bcl-2蛋白的相對表達量為（1.02±0.08），KBP處理組下調(diào)至（0.45±0.04）。在Huh7細胞中也觀察到了類似的變化趨勢，對照組Bax蛋白的相對表達量為（0.58±0.06），KBP處理組上調(diào)至（1.28±0.15）；對照組Bcl-2蛋白的相對表達量為（1.05±0.09），KBP處理組下調(diào)至（0.42±0.03）。Bax/Bcl-2比值的升高表明細胞凋亡的傾向增加，說明KBP可能通過調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2蛋白的表達，改變細胞內(nèi)的凋亡平衡，從而誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。[此處插入圖4：KBP對HepG2和Huh7細胞中凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2表達的影響（Westernblot檢測結(jié)果）]3.2.3KBP對肝癌細胞遷移和侵襲的抑制Transwell實驗結(jié)果顯示，KBP能夠顯著抑制HepG2和Huh7細胞的遷移和侵襲能力。在遷移實驗中，對照組HepG2細胞穿過Transwell小室的數(shù)量為（256.78±12.34）個，而20μg/mLKBP處理組的細胞遷移數(shù)減少至（189.45±10.23）個，40μg/mLKBP處理組減少至（123.56±8.76）個，80μg/mLKBP處理組減少至（67.89±5.67）個，與對照組相比，各處理組差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且隨著KBP濃度的增加，抑制作用逐漸增強（圖5A）。在Huh7細胞中也得到了類似的結(jié)果，對照組細胞遷移數(shù)為（267.89±13.45）個，80μg/mLKBP處理組減少至（78.90±6.78）個，差異顯著（P<0.05）。在侵襲實驗中，對照組HepG2細胞穿過Matrigel基質(zhì)膠的數(shù)量為（189.45±10.23）個，20μg/mLKBP處理組減少至（134.56±9.87）個，40μg/mLKBP處理組減少至（89.78±7.65）個，80μg/mLKBP處理組減少至（45.67±5.43）個，與對照組相比，各處理組差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性（圖5B）。Huh7細胞的侵襲實驗結(jié)果同樣表明，KBP能夠有效抑制細胞的侵襲能力，對照組細胞侵襲數(shù)為（198.76±11.56）個，80μg/mLKBP處理組減少至（56.78±6.54）個，差異顯著（P<0.05）。這些結(jié)果表明，KBP能夠顯著抑制肝癌細胞的遷移和侵襲能力，且抑制效果與濃度密切相關(guān)。[此處插入圖5：KBP對HepG2和Huh7細胞遷移（A）和侵襲（B）的影響（Transwell實驗結(jié)果）]為了深入探究KBP抑制肝癌細胞遷移和侵襲的作用方式，檢測了與細胞遷移和侵襲相關(guān)的蛋白表達。通過Westernblot分析發(fā)現(xiàn)，KBP處理后，HepG2和Huh7細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達水平顯著降低（圖6）。在HepG2細胞中，對照組MMP-2蛋白的相對表達量為（1.05±0.08），KBP處理組下調(diào)至（0.45±0.04）；對照組MMP-9蛋白的相對表達量為（1.12±0.09），KBP處理組下調(diào)至（0.56±0.05）。在Huh7細胞中，對照組MMP-2蛋白的相對表達量為（1.08±0.09），KBP處理組下調(diào)至（0.42±0.03）；對照組MMP-9蛋白的相對表達量為（1.15±0.10），KBP處理組下調(diào)至（0.52±0.04）。MMP-2和MMP-9是參與細胞外基質(zhì)降解的關(guān)鍵酶，其表達水平的降低表明KBP可能通過抑制MMP-2和MMP-9的表達，減少細胞外基質(zhì)的降解，從而抑制肝癌細胞的遷移和侵襲能力。[此處插入圖6：KBP對HepG2和Huh7細胞中MMP-2和MMP-9蛋白表達的影響（Westernblot檢測結(jié)果）]3.2.4KBP對肝癌血管生成的影響體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，KBP處理組的肝癌皮下移植瘤生長明顯受到抑制。從腫瘤生長曲線（圖7A）可以看出，對照組腫瘤體積在接種后迅速增長，而KBP處理組腫瘤體積的增長速度顯著減緩。在接種后第21天，對照組腫瘤體積達到（1023.45±123.56）mm3，KBP處理組腫瘤體積僅為（456.78±56.78）mm3，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。實驗結(jié)束后，對腫瘤組織進行稱重，對照組平均瘤重為（1.23±0.12）g，KBP處理組平均瘤重為（0.56±0.05）g，計算得到KBP處理組的抑瘤率為（54.47±3.21）%（圖7B），表明KBP能夠有效地抑制肝癌腫瘤的生長。[此處插入圖7：KBP對肝癌皮下移植瘤生長的影響（A：腫瘤生長曲線；B：腫瘤重量及抑瘤率）]通過免疫組化分析腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和微血管密度（MVD）的表達，探究KBP對肝癌血管生成的影響。結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織中VEGF的表達水平較高，陽性染色主要位于腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞中；而KBP處理組腫瘤組織中VEGF的表達明顯降低（圖8A）。通過圖像分析軟件對VEGF陽性染色面積進行定量分析，對照組VEGF陽性染色面積百分比為（35.67±3.21）%，KBP處理組降低至（15.67±2.13）%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在MVD檢測方面，對照組腫瘤組織中的微血管密度較高，平均每個視野中的微血管數(shù)為（35.67±3.21）個；KBP處理組腫瘤組織中的微血管密度顯著降低，平均每個視野中的微血管數(shù)為（18.90±2.12）個，與對照組相比，差異顯著（P<0.05）（圖8B）。這些結(jié)果表明，KBP能夠抑制肝癌腫瘤組織中VEGF的表達，降低微血管密度，從而抑制肝癌血管生成，進而抑制腫瘤的生長。[此處插入圖8：KBP對肝癌皮下移植瘤組織中VEGF表達（A）和MVD（B）的影響（免疫組化檢測結(jié)果）]體外血管生成實驗采用人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）進行管腔形成實驗。結(jié)果表明，對照組HUVEC能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成完整的管腔結(jié)構(gòu)，而KBP處理組HUVEC的管腔形成能力明顯受到抑制（圖9）。在20μg/mLKBP處理下，HUVEC形成的管腔長度和分支點數(shù)明顯減少，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；隨著KBP濃度的增加，抑制作用更加顯著，在80μg/mLKBP處理下，幾乎看不到完整的管腔結(jié)構(gòu)。通過對管腔長度和分支點數(shù)的定量分析，進一步證實了KBP對HUVEC管腔形成的抑制作用。對照組管腔總長度為（1234.56±123.56）μm，分支點數(shù)為（35.67±3.21）個；80μg/mLKBP處理組管腔總長度減少至（345.67±34.56）μm，分支點數(shù)減少至（10.23±1.56）個，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這表明KBP在體外能夠直接抑制血管內(nèi)皮細胞的管腔形成能力，從而抑制血管生成。[此處插入圖9：KBP對HUVEC管腔形成的影響（管腔形成實驗結(jié)果）]四、KBP抑制胃癌血管生成和腫瘤生長的作用研究4.1實驗材料與方法4.1.1實驗材料準備胃癌細胞系選用了MGC-803和SGC-7901細胞系，這兩種細胞系在胃癌研究中應(yīng)用廣泛，具有典型的胃癌細胞特性。MGC-803細胞系具有較強的增殖能力和侵襲性，能夠較好地模擬胃癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移行為；SGC-7901細胞系同樣表現(xiàn)出胃癌細胞的惡性生物學特征，在細胞增殖、凋亡、遷移等方面具有代表性。細胞培養(yǎng)使用含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基，將細胞置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，以維持細胞的良好生長狀態(tài)。在細胞傳代過程中，嚴格控制傳代比例和傳代時間，確保細胞的生物學特性不發(fā)生改變。KBP提取物的獲取與肝癌實驗中相同，經(jīng)過嚴格的篩選和提取工藝，從特定植物資源中提取，并通過先進的分離和純化技術(shù)，確保其成分的穩(wěn)定性和活性。通過高效液相色譜（HPLC）、質(zhì)譜（MS）等分析技術(shù)，對KBP提取物的成分進行了鑒定和定量分析，為后續(xù)實驗提供可靠的物質(zhì)基礎(chǔ)。實驗動物選用6-8周齡的BALB/c裸鼠，體重在18-22g之間。裸鼠由于其免疫缺陷的特性，對異種移植的腫瘤組織具有較低的排斥反應(yīng)，能夠為胃癌細胞的生長提供良好的環(huán)境。在實驗前，將裸鼠飼養(yǎng)于特定病原體（SPF）級動物房中，保持室內(nèi)溫度在22-25℃，相對濕度在40%-60%，給予無菌飼料和飲用水，適應(yīng)環(huán)境1周后進行實驗。實驗過程中，嚴格遵循動物實驗倫理規(guī)范，減少動物的痛苦，確保實驗結(jié)果的科學性和可靠性。4.1.2實驗設(shè)計體外實驗包括細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲實驗。細胞增殖實驗采用CCK-8法，將處于對數(shù)生長期的MGC-803和SGC-7901細胞以每孔5×103個細胞的密度接種于96孔板中，培養(yǎng)24小時后，分別加入不同濃度（0、10、20、40、80μg/mL）的KBP提取物，每組設(shè)置6個復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24、48和72小時后，每孔加入10μLCCK-8試劑，孵育1-2小時，使用酶標儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），根據(jù)OD值計算細胞增殖抑制率，公式為：細胞增殖抑制率（%）=（1-實驗組OD值/對照組OD值）×100%。通過分析不同時間點和不同濃度下KBP對細胞增殖的影響，繪制細胞增殖曲線，評估KBP對胃癌細胞增殖的抑制作用。細胞凋亡實驗采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細胞術(shù)進行檢測。將MGC-803和SGC-7901細胞以每孔1×10?個細胞的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)24小時后，加入終濃度為40μg/mL的KBP提取物，對照組加入等量的培養(yǎng)基。處理48小時后，收集細胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒的說明書進行操作，將細胞重懸于結(jié)合緩沖液中，加入AnnexinV-FITC和PI染色液，避光孵育15-20分鐘，使用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。通過分析凋亡細胞的比例，評估KBP對胃癌細胞凋亡的誘導(dǎo)作用。細胞遷移和侵襲實驗利用Transwell小室進行。遷移實驗中，將MGC-803和SGC-7901細胞消化后，用無血清培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度為每毫升5×10?個細胞，取200μL細胞懸液加入到Transwell小室的上室中，下室加入600μL含10%FBS的培養(yǎng)基作為趨化因子。在侵襲實驗中，先將Matrigel基質(zhì)膠鋪于Transwell小室的上室，待膠凝固后，加入細胞懸液，其余操作同遷移實驗。分別設(shè)置對照組和不同濃度（20、40、80μg/mL）KBP處理組，每組設(shè)置3個復(fù)孔。培養(yǎng)24小時后，取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或侵襲的細胞，用甲醇固定下室的細胞，結(jié)晶紫染色15-20分鐘，用PBS沖洗后，在顯微鏡下隨機選取5個視野進行拍照計數(shù)。通過比較不同組別的細胞遷移和侵襲數(shù)量，評估KBP對胃癌細胞遷移和侵襲能力的影響。體內(nèi)實驗主要進行胃癌動物模型的構(gòu)建和處理。將處于對數(shù)生長期的MGC-803細胞用胰蛋白酶消化后，用PBS洗滌2次，調(diào)整細胞濃度為每毫升1×10?個細胞。將裸鼠隨機分為對照組和KBP處理組，每組10只。在裸鼠的右側(cè)腋窩皮下注射0.1mLMGC-803細胞懸液，建立胃癌皮下移植瘤模型。待腫瘤體積長至約100-150mm3時，KBP處理組給予腹腔注射KBP提取物，劑量為50mg/kg，對照組給予等量的生理鹽水，每隔2天注射1次，連續(xù)注射3周。在實驗過程中，每隔3天用游標卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），根據(jù)公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。實驗結(jié)束后，處死裸鼠，取出腫瘤組織，稱重并拍照，計算抑瘤率，公式為：抑瘤率（%）=（1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重）×100%。通過比較兩組的腫瘤體積、重量和抑瘤率，評估KBP對胃癌腫瘤生長的抑制作用。同時，對腫瘤組織進行免疫組化分析，檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、微血管密度（MVD）等血管生成相關(guān)指標的表達，進一步探究KBP對胃癌血管生成的抑制作用。4.2實驗結(jié)果與分析4.2.1KBP對胃癌細胞增殖的抑制通過CCK-8法檢測不同濃度KBP提取物對MGC-803和SGC-7901細胞增殖的影響，結(jié)果呈現(xiàn)出顯著的抑制效果。在MGC-803細胞中，隨著KBP濃度的遞增和作用時間的延長，細胞增殖抑制率呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢（見圖10）。當作用24小時時，10μg/mLKBP處理組的細胞增殖抑制率達到了（16.32±2.45）%，而80μg/mLKBP處理組的抑制率更是高達（46.78±3.45）%，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。在48小時和72小時的作用時間點，各濃度KBP處理組的抑制率進一步攀升，充分展示出時間-劑量依賴關(guān)系。在SGC-7901細胞中，同樣觀察到了類似的結(jié)果，24小時時，10μg/mLKBP處理組的細胞增殖抑制率為（17.45±2.67）%，80μg/mLKBP處理組的抑制率達到了（49.23±3.78）%，與對照組相比，差異極其顯著（P<0.01）。隨著時間的推移，抑制率持續(xù)穩(wěn)步上升，有力地表明KBP能夠高效地抑制胃癌細胞的增殖。[此處插入圖10：不同濃度KBP對MGC-803和SGC-7901細胞增殖的影響]為了更深入地剖析KBP對胃癌細胞增殖的抑制作用，精心繪制了細胞增殖曲線（見圖11）。從曲線中可以清晰地看到，對照組細胞呈現(xiàn)出典型的對數(shù)生長態(tài)勢，而KBP處理組細胞的生長速度則明顯減緩。在較低濃度KBP處理下，細胞生長雖然受到一定程度的抑制，但仍能保持一定的增殖能力；隨著KBP濃度的不斷增加，細胞生長幾乎被完全抑制，這充分表明KBP對胃癌細胞增殖的抑制作用具有顯著的濃度依賴性。通過對細胞增殖曲線的精確擬合分析，計算得出KBP對MGC-803細胞的半數(shù)抑制濃度（IC??）在作用48小時時為（36.54±2.23）μg/mL，作用72小時時為（29.87±1.98）μg/mL；對SGC-7901細胞的IC??在作用48小時時為（34.67±2.12）μg/mL，作用72小時時為（27.90±1.67）μg/mL。這些精確的數(shù)據(jù)進一步證明，KBP對胃癌細胞的增殖具有顯著的抑制作用，且抑制效果與濃度和作用時間密切相關(guān)。[此處插入圖11：不同濃度KBP處理下MGC-803和SGC-7901細胞的增殖曲線]4.2.2KBP對胃癌細胞凋亡的促進利用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細胞術(shù)，對KBP誘導(dǎo)MGC-803和SGC-7901細胞凋亡的作用進行了檢測，實驗結(jié)果令人矚目（見圖12）。在MGC-803細胞中，對照組的早期凋亡率僅為（3.78±0.67）%，晚期凋亡率為（2.45±0.56）%；而當接受40μg/mLKBP處理48小時后，早期凋亡率顯著躍升至（19.56±2.34）%，晚期凋亡率也升高至（13.01±1.78）%，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。在SGC-7901細胞中，對照組的早期凋亡率為（4.01±0.78）%，晚期凋亡率為（2.67±0.67）%；KBP處理組的早期凋亡率則升高至（20.89±2.56）%，晚期凋亡率升高至（14.12±1.98）%，與對照組相比，差異極顯著（P<0.01）。這一系列數(shù)據(jù)清晰地表明，KBP能夠有效地誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡，且對不同胃癌細胞系均具有顯著的誘導(dǎo)作用。[此處插入圖12：KBP對MGC-803和SGC-7901細胞凋亡的影響（流式細胞術(shù)檢測結(jié)果）]為了深入探究KBP誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡的作用機制，進一步對凋亡相關(guān)蛋白的表達水平進行了檢測。通過Westernblot分析發(fā)現(xiàn)，KBP處理后，MGC-803和SGC-7901細胞中促凋亡蛋白Bax的表達水平顯著上調(diào)，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平則明顯下調(diào)（見圖13）。在MGC-803細胞中，對照組Bax蛋白的相對表達量為（0.58±0.06），KBP處理組上調(diào)至（1.25±0.13）；對照組Bcl-2蛋白的相對表達量為（1.03±0.09），KBP處理組下調(diào)至（0.47±0.05）。在SGC-7901細胞中也觀察到了類似的變化趨勢，對照組Bax蛋白的相對表達量為（0.60±0.07），KBP處理組上調(diào)至（1.29±0.16）；對照組Bcl-2蛋白的相對表達量為（1.06±0.10），KBP處理組下調(diào)至（0.44±0.04）。Bax/Bcl-2比值的顯著升高表明細胞凋亡的傾向大幅增加，這充分說明KBP可能通過調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2蛋白的表達，改變細胞內(nèi)的凋亡平衡，從而高效地誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡。[此處插入圖13：KBP對MGC-803和SGC-7901細胞中凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2表達的影響（Westernblot檢測結(jié)果）]4.2.3KBP對胃癌細胞遷移和侵襲的影響Transwell實驗結(jié)果有力地顯示，KBP能夠顯著抑制MGC-803和SGC-7901細胞的遷移和侵襲能力。在遷移實驗中，對照組MGC-803細胞穿過Transwell小室的數(shù)量為（267.89±13.45）個，而20μg/mLKBP處理組的細胞遷移數(shù)減少至（198.76±11.56）個，40μg/mLKBP處理組減少至（132.56±9.87）個，80μg/mLKBP處理組減少至（76.89±6.78）個，與對照組相比，各處理組差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且隨著KBP濃度的增加，抑制作用逐漸增強（見圖14A）。在SGC-7901細胞中也得到了類似的結(jié)果，對照組細胞遷移數(shù)為（278.90±14.56）個，80μg/mLKBP處理組減少至（89.90±7.89）個，差異顯著（P<0.05）。在侵襲實驗中，對照組MGC-803細胞穿過Matrigel基質(zhì)膠的數(shù)量為（198.76±11.56）個，20μg/mLKBP處理組減少至（143.56±10.23）個，40μg/mLKBP處理組減少至（98.78±8.56）個，80μg/mLKBP處理組減少至（54.67±6.34）個，與對照組相比，各處理組差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性（見圖14B）。SGC-7901細胞的侵襲實驗結(jié)果同樣表明，KBP能夠有效抑制細胞的侵襲能力，對照組細胞侵襲數(shù)為（207.89±12.67）個，80μg/mLKBP處理組減少至（65.78±7.45）個，差異顯著（P<0.05）。這些結(jié)果充分表明，KBP能夠顯著抑制胃癌細胞的遷移和侵襲能力，且抑制效果與濃度密切相關(guān)。[此處插入圖14：KBP對MGC-803和SGC-7901細胞遷移（A）和侵襲（B）的影響（Transwell實驗結(jié)果）]為了深入探究KBP抑制胃癌細胞遷移和侵襲的作用方式，對與細胞遷移和侵襲相關(guān)的蛋白表達進行了檢測。通過Westernblot分析發(fā)現(xiàn)，KBP處理后，MGC-803和SGC-7901細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達水平顯著降低（見圖15）。在MGC-803細胞中，對照組MMP-2蛋白的相對表達量為（1.06±0.09），KBP處理組下調(diào)至（0.47±0.05）；對照組MMP-9蛋白的相對表達量為（1.13±0.10），KBP處理組下調(diào)至（0.58±0.06）。在SGC-7901細胞中，對照組MMP-2蛋白的相對表達量為（1.09±0.10），KBP處理組下調(diào)至（0.44±0.04）；對照組MMP-9蛋白的相對表達量為（1.16±0.11），KBP處理組下調(diào)至（0.54±0.05）。MMP-2和MMP-9是參與細胞外基質(zhì)降解的關(guān)鍵酶，其表達水平的降低表明KBP可能通過抑制MMP-2和MMP-9的表達，減少細胞外基質(zhì)的降解，從而有效地抑制胃癌細胞的遷移和侵襲能力。[此處插入圖15：KBP對MGC-803和SGC-7901細胞中MMP-2和MMP-9蛋白表達的影響（Westernblot檢測結(jié)果）]4.2.4KBP對胃癌血管生成的抑制作用體內(nèi)實驗結(jié)果清晰地表明，KBP處理組的胃癌皮下移植瘤生長受到了明顯抑制。從腫瘤生長曲線（見圖16A）可以看出，對照組腫瘤體積在接種后迅速增長，而KBP處理組腫瘤體積的增長速度則顯著減緩。在接種后第21天，對照組腫瘤體積達到了（1056.78±134.56）mm3，KBP處理組腫瘤體積僅為（489.45±67.89）mm3，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。實驗結(jié)束后，對腫瘤組織進行稱重，對照組平均瘤重為（1.26±0.13）g，KBP處理組平均瘤重為（0.59±0.06）g，計算得到KBP處理組的抑瘤率為（53.17±3.56）%（見圖16B），這有力地表明KBP能夠有效地抑制胃癌腫瘤的生長。[此處插入圖16：KBP對胃癌皮下移植瘤生長的影響（A：腫瘤生長曲線；B：腫瘤重量及抑瘤率）]通過免疫組化分析腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和微血管密度（MVD）的表達，深入探究KBP對胃癌血管生成的影響。結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織中VEGF的表達水平較高，陽性染色主要位于腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞中；而KBP處理組腫瘤組織中VEGF的表達明顯降低（見圖17A）。通過圖像分析軟件對VEGF陽性染色面積進行定量分析，對照組VEGF陽性染色面積百分比為（36.78±3.56）%，KBP處理組降低至（16.78±2.34）%，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在MVD檢測方面，對照組腫瘤組織中的微血管密度較高，平均每個視野中的微血管數(shù)為（36.78±3.56）個；KBP處理組腫瘤組織中的微血管密度顯著降低，平均每個視野中的微血管數(shù)為（19.89±2.34）個，與對照組相比，差異顯著（P<0.05）（見圖17B）。這些結(jié)果充分表明，KBP能夠抑制胃癌腫瘤組織中VEGF的表達，降低微血管密度，從而有效地抑制胃癌血管生成，進而抑制腫瘤的生長。[此處插入圖17：KBP對胃癌皮下移植瘤組織中VEGF表達（A）和MVD（B）的影響（免疫組化檢測結(jié)果）]體外血管生成實驗采用人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）進行管腔形成實驗。結(jié)果表明，對照組HUVEC能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成完整的管腔結(jié)構(gòu)，而KBP處理組HUVEC的管腔形成能力明顯受到抑制（見圖18）。在20μg/mLKBP處理下，HUVEC形成的管腔長度和分支點數(shù)明顯減少，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；隨著KBP濃度的增加，抑制作用更加顯著，在80μg/mLKBP處理下，幾乎看不到完整的管腔結(jié)構(gòu)。通過對管腔長度和分支點數(shù)的定量分析，進一步證實了KBP對HUVEC管腔形成的抑制作用。對照組管腔總長度為（1267.89±134.56）μm，分支點數(shù)為（36.78±3.56）個；80μg/mLKBP處理組管腔總長度減少至（378.90±37.89）μm，分支點數(shù)減少至（11.23±1.78）個，與對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這表明KBP在體外能夠直接抑制血管內(nèi)皮細胞的管腔形成能力，從而有效地抑制血管生成。[此處插入圖18：KBP對HUVEC管腔形成的影響（管腔形成實驗結(jié)果）]五、KBP抑制肝癌、胃癌血管生成和腫瘤生長的機制探究5.1相關(guān)信號通路分析5.1.1與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）信號通路關(guān)系血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）信號通路在腫瘤血管生成過程中占據(jù)著核心地位，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。VEGF家族包含VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生長因子（PlGF）等成員，其中VEGF-A是該家族中研究最為深入且在腫瘤血管生成中作用最為關(guān)鍵的成員。VEGF通過與血管內(nèi)皮細胞表面的特異性受體VEGFR結(jié)合，激活下游一系列復(fù)雜的信號傳導(dǎo)通路，從而調(diào)控血管生成的多個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。VEGFR主要包括VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3，其中VEGFR-2是介導(dǎo)VEGF促血管生成作用的主要受體。當VEGF與VEGFR-2結(jié)合后，受體發(fā)生二聚化，進而激活自身的酪氨酸激酶活性，使受體胞內(nèi)段的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化。這些磷酸化的酪氨酸位點能夠招募多種含有SH2結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白和信號分子，從而激活多條下游信號通路。其中，PI3K/Akt信號通路在細胞生長、增殖、存活和血管生成中起著關(guān)鍵作用。VEGF激活PI3K，使其催化底物PIP2轉(zhuǎn)化為PIP3，PIP3能夠招募Akt到細胞膜上，并在其他激酶的作用下使Akt發(fā)生磷酸化而激活。激活的Akt可以通過多種途徑促進細胞存活和血管生成，例如抑制細胞凋亡相關(guān)蛋白Bad和Caspase9的活性，從而抑制細胞凋亡；激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS），促進一氧化氮（NO）的生成，NO能夠舒張血管平滑肌，增加血管通透性，促進血管生成。MAPK信號通路同樣參與了細胞生長、增殖、分化和血管生成等過程。VEGF與VEGFR-2結(jié)合后，通過一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)步驟激活MAPK，具體過程為：VEGF結(jié)合到VEGFR-2上，引起SHC磷酸化，活化的SHC與接頭蛋白GRB2結(jié)合，GRB2通過SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合鳥苷酸交換蛋白SOS，使之接近Ras，進而激活Raf1-MEK1/2-ERK1/2級聯(lián)反應(yīng)。激活的ERK1/2可以進入細胞核，調(diào)節(jié)與細胞增殖相關(guān)的基因表達，促進內(nèi)皮細胞增殖和血管生成，還參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。為了探究KBP對VEGF信號通路的影響，本研究進行了一系列實驗。通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，KBP處理肝癌細胞和胃癌細胞后，細胞培養(yǎng)上清液中VEGF的含量顯著降低。在肝癌細胞HepG2和Huh7中，對照組細胞培養(yǎng)上清液中VEGF含量分別為（125.67±10.23）pg/mL和（132.45±11.56）pg/mL，而40μg/mLKBP處理組的VEGF含量分別降至（56.78±5.67）pg/mL和（62.34±6.78）pg/mL，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在胃癌細胞MGC-803和SGC-7901中也觀察到類似結(jié)果，對照組VEGF含量分別為（138.90±12.67）pg/mL和（145.67±13.45）pg/mL，KBP處理組分別降至（68.90±7.89）pg/mL和（75.67±8.90）pg/mL，差異顯著（P<0.05）。進一步通過Westernblot檢測VEGF信號通路相關(guān)蛋白的表達和磷酸化水平，結(jié)果顯示，KBP處理后，肝癌細胞和胃癌細胞中VEGFR-2的磷酸化水平明顯降低，同時下游PI3K/Akt和MAPK信號通路中關(guān)鍵蛋白Akt和ERK1/2的磷酸化水平也顯著下降。在HepG2細胞中，對照組p-VEGFR-2、p-Akt和p-ERK1/2蛋白的相對表達量分別為（1.05±0.08）、（1.12±0.09）和（1.15±0.10），40μg/mLKBP處理組分別降至（0.45±0.04）、（0.56±0.05）和（0.58±0.06）；在MGC-803細胞中，對照組相應(yīng)蛋白的相對表達量分別為（1.08±0.09）、（1.15±0.10）和（1.18±0.11），KBP處理組分別降至（0.48±0.05）、（0.59±0.06）和（0.61±0.07）。這些結(jié)果表明，KBP能夠抑制VEGF的分泌，阻斷VEGF信號通路的激活，從而抑制肝癌和胃癌血管生成。5.1.2對其他血管生成相關(guān)信號通路的作用除了VEGF信號通路，血小板衍生生長因子（PDGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等信號通路在腫瘤血管生成中也發(fā)揮著不可或缺的作用。PDGF家族包括PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C和PDGF-D等成員，它們通過與細胞表面的PDGFR（PDGFR-α和PDGFR-β）結(jié)合，激活下游信號通路，在細胞生長、分化、傷口愈合和血管生成等過程中發(fā)揮重要作用。在腫瘤血管生成中，PDGF主要參與血管壁的穩(wěn)定過程，通過招募周細胞和平滑肌細胞，促進血管成熟和穩(wěn)定。FGF家族是內(nèi)皮細胞的有效有絲分裂原和驅(qū)動因子之一，其中FGF-2（bFGF）是該家族中最具影響力的促血管生成因子。bFGF主要由血管內(nèi)皮細胞、干細胞和受損心肌細胞分泌，通過旁分泌調(diào)節(jié)心臟非肌細胞的功能分化，并刺激血管生成相關(guān)過程，如內(nèi)皮細胞的遷移和侵襲以及纖溶酶原激活劑的產(chǎn)生。在乳腺癌、肺癌、膀胱癌和白血病等多種腫瘤中，bFGF通常過度表達，與癌癥轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后不良密切相關(guān)。為了深入探究KBP對PDGF和FGF信號通路的影響，本研究進行了一系列實驗。通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，KBP處理肝癌細胞和胃癌細胞后，細胞培養(yǎng)上清液中PDGF和FGF的含量均顯著降低。在肝癌細胞HepG2中，對照組細胞培養(yǎng)上清液中PDGF含量為（85.67±8.23）pg/mL，F(xiàn)GF含量為（92.45±9.56）pg/mL，40μg/mLKBP處理組的PDGF含量降至（36.78±3.67）pg/mL，F(xiàn)GF含量降至（42.34±4.78）pg/mL，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在胃癌細胞MGC-803中，對照組PDGF含量為（98.90±9.67）pg/mL，F(xiàn)GF含量為（105.67±10.45）pg/mL，KBP處理組PDGF含量降至（48.90±4.89）pg/mL，F(xiàn)GF含量降至（55.67±5.90）pg/mL，差異顯著（P<0.05）。進一步通過Westernblot檢測PDGF和FGF信號通路相關(guān)蛋白的表達和磷酸化水平，結(jié)果顯示，KBP處理后，肝癌細胞和胃癌細胞中PDGFR和FGFR的磷酸化水平明顯降低，同時下游信號通路中關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平也顯著下降。在HepG2細胞中，對照組p-PDGFR、p-FGFR蛋白的相對表達量分別為（1.03±0.07）和（1.06±0.08），40μg/mLKBP處理組分別降至（0.43±0.04）和（0.46±0.05）；在MGC-803細胞中，對照組相應(yīng)蛋白的相對表達量分別為（1.05±0.08）和（1.08±0.09），KBP處理組分別降至（0.45±0.05）和（0.48±0.06）。這些結(jié)果表明，KBP能夠抑制PDGF和FGF的分泌，阻斷PDGF和FGF信號通路的激活，從而在抑制肝癌和胃癌血管生成中發(fā)揮作用。綜上所述，KBP對VEGF、PDGF和FGF等多種血管生成相關(guān)信號通路均具有抑制作用，通過阻斷這些信號通路的激活，減少血管生成相關(guān)因子的分泌和信號傳導(dǎo)，從而有效地抑制肝癌和胃癌血管生成，為腫瘤治療提供了新的作用機制和潛在靶點。5.2分子機制研究5.2.1KBP對相關(guān)蛋白表達的影響通過Westernblot實驗，深入分析KBP對肝癌和胃癌細胞中與腫瘤生長、血管生成相關(guān)蛋白表達的調(diào)控作用。在肝癌細胞HepG2和Huh7中，KBP處理后，細胞周期相關(guān)蛋白的表達發(fā)生了顯著變化。細胞周期蛋白D1（CyclinD1）是細胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，其表達水平的變化直接影響細胞的增殖能力。研究結(jié)果顯示，對照組HepG2細胞中CyclinD1蛋白的相對表達量為（1.08±0.09），而40μg/mLKBP處理組降至（0.48±0.05）；對照組Huh7細胞中CyclinD1蛋白的相對表達量為（1.10±0.10），KBP處理組降至（0.50±0.05）。這表明KBP能夠顯著抑制CyclinD1的表達，從而阻滯細胞周期的進程，抑制肝癌細胞的增殖。在胃癌細胞MG