Sorcin：解鎖胃癌多藥耐藥機(jī)制與治療新策略的關(guān)鍵密碼一、引言1.1研究背景胃癌作為一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的健康。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，2020年全世界胃癌新發(fā)病例約108.9萬(wàn)，居惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)的第五位；同年，全世界胃癌死亡病例數(shù)約76.9萬(wàn)，居惡性腫瘤死亡人數(shù)的第四位。中國(guó)是胃癌的高發(fā)國(guó)家，2020年中國(guó)胃癌新發(fā)病例約47.8萬(wàn)，占全球發(fā)病病例的43.9%；死亡病例約37.3萬(wàn)，占全球死亡病例的48.6%。在我國(guó)，胃癌的發(fā)病率和死亡率分別位于所有惡性腫瘤的第二位和第三位，是發(fā)病率第一的消化道惡性腫瘤，遠(yuǎn)高于世界平均水平。農(nóng)村地區(qū)的胃癌發(fā)病率高于城市，偏遠(yuǎn)地區(qū)高于沿海地區(qū)，這可能與經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、飲食習(xí)慣和環(huán)境因素等密切相關(guān)。男性胃癌的發(fā)病率是女性的3倍，死亡率是女性的2.7倍，且主要發(fā)生在60-69歲的男性，這或許與男性吸煙、喝酒比例高，社會(huì)壓力大以及飲食習(xí)慣較差等因素有關(guān)。目前，化療是胃癌綜合治療的重要手段之一，無(wú)論是對(duì)于晚期胃癌患者手術(shù)后，還是不適合手術(shù)治療的病人，化療都可以幫助延長(zhǎng)壽命、提高生活質(zhì)量。對(duì)于腫瘤手術(shù)后或放療后的病人，輔助化療能夠控制殘余腫瘤病灶，消除微癌癥病灶，延緩或控制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在臨床應(yīng)用廣泛，可用于術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后。新輔助化療則是在手術(shù)之前進(jìn)行，通過(guò)特別的途徑進(jìn)行化療，以縮小病灶、降低臨床分期、增加手術(shù)根治切除的機(jī)會(huì)。然而，盡管新的抗癌藥物及化療方案不斷涌現(xiàn)，胃癌的治療效果仍無(wú)重大突破，其主要原因是胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生了多藥耐藥（MultidrugResistance，MDR）。MDR是指腫瘤細(xì)胞對(duì)一種化療藥物產(chǎn)生耐藥性的同時(shí)，對(duì)其他結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的化療藥物也產(chǎn)生交叉耐藥性。MDR包括原發(fā)性耐藥和繼發(fā)性耐藥，原發(fā)性耐藥指化療開(kāi)始時(shí)已經(jīng)存在，繼發(fā)性耐藥指在化療過(guò)程中產(chǎn)生。MDR是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的主要原因，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和生存質(zhì)量，也是目前化療亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。目前已知多種胃癌耐藥相關(guān)分子，如MDR1/P-gp、MRP、BCRP、TopoⅡ及GST-π等參與胃癌MDR的形成。P-gp是MDR1基因過(guò)度表達(dá)的產(chǎn)物，由1280個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的跨膜蛋白，通過(guò)激活A(yù)TP泵，阻礙藥物向胞內(nèi)被動(dòng)擴(kuò)散，并可將胞內(nèi)細(xì)胞毒藥物向膜外主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，從而產(chǎn)生MDR的作用。MRP是一個(gè)能量依賴性外排泵，其介導(dǎo)的MDR機(jī)制雖未完全闡明，但推測(cè)它可能通過(guò)將GSH與藥物的結(jié)合物或者是未修飾的藥物跨膜移位到細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度減少而導(dǎo)致細(xì)胞耐藥。然而，針對(duì)這些已知耐藥相關(guān)分子的抑制劑并不能完全逆轉(zhuǎn)胃癌的多藥耐藥，這表明可能存在其他尚未被發(fā)現(xiàn)的耐藥機(jī)制，亟待尋找新的耐藥相關(guān)基因?？扇苄阅退幭嚓P(guān)鈣結(jié)合蛋白Sorcin在多種藥物篩選的MDR細(xì)胞中大量表達(dá)。前期研究運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較長(zhǎng)春新堿（VCR）誘導(dǎo)形成的胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR和SGC7901細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異，發(fā)現(xiàn)Sorcin在SGC7901/VCR中顯著高表達(dá)；用Sorcin反義寡核苷酸抑制Sorcin在胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR中的高表達(dá)后，增強(qiáng)了SGC7901/VCR對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性，使SGC7901/VCR的耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)，細(xì)胞凋亡率也明顯增加，說(shuō)明Sorcin高表達(dá)與SGC7901/VCR耐藥性密切相關(guān)。但Sorcin在胃癌多藥耐藥中的具體作用及其機(jī)制尚不清楚，深入研究Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用及機(jī)制，將有助于全面理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生及調(diào)節(jié)機(jī)制，為克服胃癌的MDR提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用及其潛在機(jī)制。具體而言，通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)方法，明確Sorcin表達(dá)水平的改變對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響，以及其在耐藥相關(guān)信號(hào)通路中的調(diào)控作用。同時(shí)，篩選并鑒定與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步揭示Sorcin介導(dǎo)胃癌多藥耐藥的分子機(jī)制。胃癌多藥耐藥嚴(yán)重制約了化療的療效，是胃癌治療面臨的重大挑戰(zhàn)。深入研究Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用及機(jī)制，具有重要的理論和臨床意義。從理論層面看，有助于全面理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生及調(diào)節(jié)機(jī)制，為腫瘤耐藥領(lǐng)域的研究提供新的視角和理論依據(jù)。目前，雖然對(duì)胃癌多藥耐藥機(jī)制的研究取得了一定進(jìn)展，但仍有許多未知之處。Sorcin作為一種在多種耐藥細(xì)胞中高表達(dá)的蛋白，其在胃癌多藥耐藥中的具體作用機(jī)制尚不清楚。通過(guò)本研究，有望填補(bǔ)這一領(lǐng)域的空白，完善胃癌多藥耐藥的理論體系。從臨床角度而言，為克服胃癌的多藥耐藥提供新的治療靶點(diǎn)和策略。目前針對(duì)已知耐藥相關(guān)分子的抑制劑效果有限，尋找新的耐藥相關(guān)基因及靶點(diǎn)迫在眉睫。若能明確Sorcin在胃癌多藥耐藥中的關(guān)鍵作用，可針對(duì)Sorcin及其相關(guān)信號(hào)通路開(kāi)發(fā)新的藥物或治療方法，提高胃癌化療的敏感性，改善患者的預(yù)后和生存質(zhì)量，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)意義。1.3研究方法與技術(shù)路線1.3.1研究方法細(xì)胞培養(yǎng)：復(fù)蘇并培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC7901及其耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR，使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染：利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至SGC7901細(xì)胞和SGC7901/VCR細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞接種于6孔板中，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到70%-80%的融合度。按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)的步驟，將質(zhì)粒與脂質(zhì)體混合后加入細(xì)胞中，孵育一定時(shí)間后更換為正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)Sorcin的表達(dá)水平，以確定轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)熒光定量PCR：提取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，設(shè)計(jì)特異性引物，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)Sorcin及耐藥相關(guān)基因（如MDR1、MRP等）的mRNA表達(dá)水平。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2^-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。蛋白質(zhì)免疫印跡法：收集細(xì)胞，加入RIPA裂解液提取總蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品進(jìn)行SDS電泳分離，然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉膜1-2小時(shí)后，加入一抗（如抗Sorcin抗體、抗MDR1抗體、抗MRP抗體等），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗膜3次，每次10分鐘，再加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育1-2小時(shí)。最后，使用化學(xué)發(fā)光底物顯色，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)觀察并分析蛋白條帶的灰度值，以GAPDH作為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以一定密度接種于96孔板中，每組設(shè)置多個(gè)復(fù)孔。分別在不同時(shí)間點(diǎn)（如24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)）加入MTT溶液，繼續(xù)孵育4小時(shí)后，棄去上清液，加入DMSO溶解結(jié)晶物。使用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值（OD值），繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，評(píng)估細(xì)胞增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期：收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入適量的BindingBuffer重懸細(xì)胞。然后加入AnnexinV-FITC和PI染色液，避光孵育15-20分鐘，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。對(duì)于細(xì)胞周期的檢測(cè)，收集細(xì)胞后用70%乙醇固定，4℃過(guò)夜。次日，離心棄去固定液，用PBS洗滌細(xì)胞，加入PI染色液和RNaseA，避光孵育30分鐘后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布。免疫共沉淀（Co-IP）：裂解細(xì)胞后，取適量細(xì)胞裂解液與抗Sorcin抗體在4℃孵育過(guò)夜，使抗體與Sorcin蛋白特異性結(jié)合。然后加入ProteinA/G磁珠，繼續(xù)孵育2-4小時(shí)，使磁珠與抗體-Sorcin蛋白復(fù)合物結(jié)合。通過(guò)磁力架分離磁珠，用預(yù)冷的PBS洗滌磁珠3-5次，去除未結(jié)合的雜質(zhì)。最后，加入SDS上樣緩沖液，煮沸使蛋白質(zhì)變性，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析：將免疫共沉淀得到的與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS電泳分離，然后將目的條帶切下，進(jìn)行膠內(nèi)酶解。酶解后的肽段通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）進(jìn)行分析，獲得肽段的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。利用生物信息學(xué)軟件對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，鑒定與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)。1.3.2技術(shù)路線本研究的技術(shù)路線圖如圖1所示：[此處插入技術(shù)路線圖，圖中清晰展示從細(xì)胞培養(yǎng)開(kāi)始，經(jīng)過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染、各種檢測(cè)方法（PCR、WB、MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Co-IP等）到最終數(shù)據(jù)分析和機(jī)制探討的整個(gè)研究流程][此處插入技術(shù)路線圖，圖中清晰展示從細(xì)胞培養(yǎng)開(kāi)始，經(jīng)過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染、各種檢測(cè)方法（PCR、WB、MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Co-IP等）到最終數(shù)據(jù)分析和機(jī)制探討的整個(gè)研究流程]首先進(jìn)行人胃癌細(xì)胞株SGC7901及其耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR的培養(yǎng)，接著對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作，分別構(gòu)建Sorcin過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果后，利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期，初步探究Sorcin對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響。然后采用免疫共沉淀技術(shù)富集與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)，結(jié)合蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析鑒定這些蛋白質(zhì)，進(jìn)一步深入研究Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用機(jī)制。最后，對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，總結(jié)研究結(jié)果，探討Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用及潛在機(jī)制。二、胃癌多藥耐藥概述2.1胃癌的流行病學(xué)與治療現(xiàn)狀胃癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，其發(fā)病率和死亡率在各類惡性腫瘤中占據(jù)較高比例。據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，2020年全世界胃癌新發(fā)病例約108.9萬(wàn)，位居惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)的第五位；同年，全世界胃癌死亡病例數(shù)約76.9萬(wàn)，位列惡性腫瘤死亡人數(shù)的第四位。中國(guó)作為胃癌的高發(fā)國(guó)家，形勢(shì)更為嚴(yán)峻。2020年中國(guó)胃癌新發(fā)病例約47.8萬(wàn)，占全球發(fā)病病例的43.9%；死亡病例約37.3萬(wàn)，占全球死亡病例的48.6%。在我國(guó)，胃癌的發(fā)病率和死亡率分別位于所有惡性腫瘤的第二位和第三位，是發(fā)病率第一的消化道惡性腫瘤，遠(yuǎn)高于世界平均水平。從地域分布來(lái)看，農(nóng)村地區(qū)的胃癌發(fā)病率高于城市，偏遠(yuǎn)地區(qū)高于沿海地區(qū)，這可能與經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、飲食習(xí)慣和環(huán)境因素等密切相關(guān)。在性別和年齡分布上，男性胃癌的發(fā)病率是女性的3倍，死亡率是女性的2.7倍，且主要發(fā)生在60-69歲的男性，這或許與男性吸煙、喝酒比例高，社會(huì)壓力大以及飲食習(xí)慣較差等因素有關(guān)。目前，胃癌的治療方式主要包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，這些治療方式各自具有特點(diǎn)和局限性。手術(shù)是治療胃癌的重要手段之一，對(duì)于早期胃癌患者，手術(shù)切除有可能達(dá)到根治的效果。然而，對(duì)于中晚期胃癌患者，手術(shù)往往難以徹底清除腫瘤細(xì)胞，且術(shù)后容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。例如，一些患者在手術(shù)后不久就會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。化療在胃癌的綜合治療中占據(jù)重要地位，無(wú)論是對(duì)于晚期胃癌患者手術(shù)后，還是不適合手術(shù)治療的病人，化療都可以幫助延長(zhǎng)壽命、提高生活質(zhì)量。對(duì)于腫瘤手術(shù)后或放療后的病人，輔助化療能夠控制殘余腫瘤病灶，消除微癌癥病灶，延緩或控制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在臨床應(yīng)用廣泛，可用于術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后。新輔助化療則是在手術(shù)之前進(jìn)行，通過(guò)特別的途徑進(jìn)行化療，以縮小病灶、降低臨床分期、增加手術(shù)根治切除的機(jī)會(huì)。然而，化療面臨著胃癌細(xì)胞多藥耐藥的難題，導(dǎo)致化療效果不佳，這也是胃癌治療亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。放療主要用于局部晚期胃癌患者，可在一定程度上控制腫瘤的生長(zhǎng)，但放療也會(huì)對(duì)周圍正常組織造成損傷，產(chǎn)生一系列不良反應(yīng)，如放射性胃炎、放射性腸炎等，影響患者的治療耐受性和生活質(zhì)量。靶向治療和免疫治療是近年來(lái)胃癌治療領(lǐng)域的新進(jìn)展，為部分患者帶來(lái)了新的希望。靶向治療針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定靶點(diǎn)進(jìn)行作用，具有較高的特異性和療效，但并非所有患者都適用，且可能會(huì)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象。免疫治療通過(guò)激活患者自身的免疫系統(tǒng)來(lái)對(duì)抗腫瘤，但目前免疫治療的有效率仍有待提高，且存在一定的免疫相關(guān)不良反應(yīng)。2.2多藥耐藥的概念與機(jī)制多藥耐藥（MultidrugResistance，MDR）是腫瘤化療領(lǐng)域中一個(gè)極為關(guān)鍵且復(fù)雜的現(xiàn)象，它被定義為腫瘤細(xì)胞在接觸一種化療藥物并產(chǎn)生耐藥性后，同時(shí)對(duì)其他結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的多種化療藥物也呈現(xiàn)出交叉耐藥的特性。這意味著一旦腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥，原本對(duì)其有效的多種化療藥物都可能失去療效，使得化療難以達(dá)到預(yù)期的治療效果，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。例如，在胃癌治療中，當(dāng)胃癌細(xì)胞對(duì)常用的化療藥物如5-氟尿嘧啶產(chǎn)生耐藥后，對(duì)阿霉素、絲裂霉素等其他化療藥物也可能不再敏感。多藥耐藥的形成機(jī)制是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)的復(fù)雜過(guò)程，目前尚未完全明確，但主要涉及以下幾個(gè)方面：藥物外排增加：這是多藥耐藥最主要的機(jī)制之一。細(xì)胞膜上存在一類ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族，其中以P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MultidrugResistance-AssociatedProtein，MRP）和乳腺癌耐藥蛋白（BreastCancerResistanceProtein，BCRP）等為代表。P-gp是MDR1基因過(guò)度表達(dá)的產(chǎn)物，由1280個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的跨膜蛋白。它就像一個(gè)“藥物外排泵”，通過(guò)激活A(yù)TP泵，利用ATP水解產(chǎn)生的能量，將進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，無(wú)法達(dá)到有效殺傷腫瘤細(xì)胞的水平，從而導(dǎo)致耐藥。MRP也是一種能量依賴性外排泵，它不僅可以將未修飾的藥物排出細(xì)胞，還能將谷胱甘肽（GSH）與藥物的結(jié)合物跨膜移位到細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)藥物聚積，介導(dǎo)多藥耐藥。BCRP同樣通過(guò)藥物溢出泵機(jī)制，將化療藥物排出細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生耐藥。這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的高表達(dá)往往與腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥密切相關(guān)，研究表明，在許多耐藥的胃癌細(xì)胞株和臨床胃癌組織樣本中，P-gp、MRP和BCRP等的表達(dá)水平明顯升高。藥物靶點(diǎn)改變：腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)改變藥物作用靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)或功能，使化療藥物無(wú)法與之有效結(jié)合，從而降低藥物的療效。例如，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TopoisomeraseⅡ，TopoⅡ）是許多化療藥物如蒽環(huán)類、鬼臼毒素類等的作用靶點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞中TopoⅡ的表達(dá)水平降低或其分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，都會(huì)導(dǎo)致化療藥物與靶點(diǎn)的親和力下降，影響藥物對(duì)DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的調(diào)控，使腫瘤細(xì)胞對(duì)這些化療藥物產(chǎn)生耐藥。此外，微管蛋白是紫杉烷類和長(zhǎng)春堿類等化療藥物的作用靶點(diǎn)，腫瘤細(xì)胞中微管蛋白的亞型改變或翻譯后修飾異常，會(huì)影響化療藥物與微管蛋白的結(jié)合，干擾微管的正常功能，進(jìn)而產(chǎn)生耐藥。藥物代謝異常：細(xì)胞內(nèi)的一些酶參與藥物的代謝過(guò)程，其活性改變可導(dǎo)致藥物代謝異常，從而引發(fā)多藥耐藥。谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（Glutathione-S-Transferase，GST-π）是一種與機(jī)體解毒作用有關(guān)的酶類，在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。它可以催化親電化合物如烷化劑、鉑類等化療藥物與谷胱甘肽結(jié)合，增加藥物的水溶性，促進(jìn)藥物排出細(xì)胞，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，使腫瘤細(xì)胞對(duì)這些化療藥物產(chǎn)生耐藥。此外，細(xì)胞色素P450酶系等也參與藥物的代謝過(guò)程，其活性變化可能影響化療藥物的代謝速率和途徑，導(dǎo)致藥物在細(xì)胞內(nèi)的濃度和作用時(shí)間發(fā)生改變，產(chǎn)生耐藥。細(xì)胞凋亡通路異常：細(xì)胞凋亡是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一種重要機(jī)制，化療藥物通常通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)發(fā)揮抗癌作用。當(dāng)腫瘤細(xì)胞的凋亡通路出現(xiàn)異常時(shí)，化療藥物難以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致耐藥。例如，Bcl-2家族蛋白在細(xì)胞凋亡調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，Bcl-2、Bcl-XL等抗凋亡蛋白的高表達(dá)，或Bax、Bak等促凋亡蛋白的低表達(dá)，都會(huì)使細(xì)胞凋亡受到抑制，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。此外，半胱天冬酶（Caspase）家族是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵執(zhí)行者，其活性改變或相關(guān)信號(hào)通路的異常也會(huì)影響細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致多藥耐藥。腫瘤干細(xì)胞特性：腫瘤干細(xì)胞是腫瘤組織中具有自我更新、多向分化潛能和高致瘤性的一小群細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞對(duì)化療藥物具有天然的耐藥性，這是因?yàn)樗鼈兏弑磉_(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能夠?qū)⒒熕幬锱懦黾?xì)胞外，同時(shí)其DNA損傷修復(fù)能力較強(qiáng)，對(duì)凋亡信號(hào)不敏感。在腫瘤化療過(guò)程中，腫瘤干細(xì)胞可能存活下來(lái)，成為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，導(dǎo)致多藥耐藥的產(chǎn)生。例如，在胃癌中，胃癌干細(xì)胞表面的CD44、CD133等標(biāo)志物的表達(dá)與多藥耐藥密切相關(guān)，靶向這些標(biāo)志物可能有助于克服胃癌的多藥耐藥。2.3胃癌多藥耐藥的研究進(jìn)展在胃癌多藥耐藥的研究領(lǐng)域，眾多學(xué)者致力于揭示其復(fù)雜的分子機(jī)制，并探索有效的逆轉(zhuǎn)策略，取得了一系列有價(jià)值的成果。在耐藥機(jī)制方面，諸多研究深入剖析了已知耐藥相關(guān)分子的作用。例如，P-gp作為MDR1基因的產(chǎn)物，其在胃癌多藥耐藥中的作用備受關(guān)注。有研究檢測(cè)了大量胃癌組織樣本中P-gp的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期呈正相關(guān)，即P-gp表達(dá)越高，腫瘤的侵襲性越強(qiáng)，患者的預(yù)后越差。這表明P-gp不僅參與了胃癌多藥耐藥的形成，還與腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。MRP介導(dǎo)的多藥耐藥機(jī)制雖尚未完全明晰，但現(xiàn)有研究推測(cè)它通過(guò)將GSH與藥物的結(jié)合物或未修飾藥物跨膜移位到細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而導(dǎo)致細(xì)胞耐藥。相關(guān)實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建MRP高表達(dá)的胃癌細(xì)胞模型，觀察到細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性顯著增強(qiáng)，進(jìn)一步驗(yàn)證了MRP在胃癌多藥耐藥中的重要作用。在耐藥逆轉(zhuǎn)策略的探索上，也取得了一定的進(jìn)展。一些研究嘗試使用耐藥逆轉(zhuǎn)劑來(lái)抑制耐藥相關(guān)分子的功能，從而逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥。例如，鈣通道阻滯劑異博定及其衍生物、鈣調(diào)蛋白拮抗劑吩噻嗪類化合物等被用于抑制P-gp的外排功能，在體外實(shí)驗(yàn)中，這些逆轉(zhuǎn)劑能夠顯著增加胃癌細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度，增強(qiáng)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。然而，第一代逆轉(zhuǎn)劑在體外有效逆轉(zhuǎn)多藥耐藥所需濃度往往較高，應(yīng)用于人體時(shí)會(huì)出現(xiàn)較強(qiáng)的心血管毒性等副作用，限制了其臨床應(yīng)用。第二代逆轉(zhuǎn)劑如VX710、PSC833和XR9051雖然逆轉(zhuǎn)作用更強(qiáng)，但也存在共濟(jì)失調(diào)和高膽紅素血癥等毒性，且會(huì)明顯改變抗癌藥物的血藥動(dòng)力學(xué)，影響化療藥物的抗腫瘤療效。盡管目前對(duì)胃癌多藥耐藥的研究取得了一定成果，但仍存在諸多不足之處。一方面，針對(duì)已知耐藥相關(guān)分子的抑制劑并不能完全逆轉(zhuǎn)胃癌的多藥耐藥，這強(qiáng)烈提示可能存在其他尚未被發(fā)現(xiàn)的耐藥機(jī)制，亟待尋找新的耐藥相關(guān)基因，以完善對(duì)胃癌多藥耐藥機(jī)制的理解。另一方面，現(xiàn)有的耐藥逆轉(zhuǎn)劑大多存在毒副作用大、影響化療藥物血藥動(dòng)力學(xué)等問(wèn)題，難以在臨床廣泛應(yīng)用。因此，深入研究胃癌多藥耐藥的新機(jī)制，開(kāi)發(fā)高效、低毒的耐藥逆轉(zhuǎn)策略，仍是該領(lǐng)域面臨的重要挑戰(zhàn)。三、Sorcin的生物學(xué)特性3.1Sorcin的結(jié)構(gòu)與功能可溶性耐藥相關(guān)鈣結(jié)合蛋白（Sorcin），又被稱作V19或p21，于1981年在對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠肺癌耐紫杉醇細(xì)胞系DC-3F/VCRd-5L的研究中首次被發(fā)現(xiàn)。Sorcin基因位于人類17號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)1帶（17q21），其基因全長(zhǎng)約為4.5kb，包含6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子。Sorcin蛋白由198個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為22kDa，具有典型的“EF-hand”結(jié)構(gòu)，這是一種常見(jiàn)的鈣結(jié)合基序，由螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)組成，能夠特異性地結(jié)合鈣離子（Ca2?）。在哺乳動(dòng)物中，Sorcin的表達(dá)具有高度的保守性，小鼠和人的Sorcin氨基酸序列僅有8個(gè)氨基酸的差異，其中6個(gè)與可磷酸化的殘基相關(guān)，這表明Sorcin的磷酸化存在種屬特異性。作為一種鈣結(jié)合蛋白，Sorcin在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著多種重要的生物學(xué)功能，其中調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)是其關(guān)鍵功能之一。Sorcin可以通過(guò)兩種方式調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)。其一，Sorcin自身能夠與鈣離子結(jié)合，其結(jié)合鈣離子的能力可高達(dá)微摩爾級(jí)，這一特性已被直接鈣結(jié)合實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度發(fā)生變化時(shí)，Sorcin能夠迅速與鈣離子結(jié)合或釋放，從而維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的相對(duì)穩(wěn)定。其二，Sorcin以鈣依賴的方式與細(xì)胞內(nèi)的鈣離子通道或其他蛋白相結(jié)合，進(jìn)而間接調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放。這些可與Sorcin結(jié)合的離子通道或蛋白包括蘭尼堿受體（ryanodinereceptors，RyRs）、肌漿網(wǎng)鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶（sarcoendoplasmicreticulumcalciumtransportATPase，SERCA）、電壓門(mén)控L型鈣通道（voltage-dependentL-typeCa2?channels，L-typeVDCC）以及質(zhì)膜鈉鈣交換體（Na?-Ca2?exchangers，NCX）等。當(dāng)Sorcin與這些蛋白相互作用時(shí)，能夠調(diào)控它們的功能，影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對(duì)鈣離子的儲(chǔ)存與釋放，由此引發(fā)細(xì)胞內(nèi)部一系列復(fù)雜的生命活動(dòng)。除了調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)，Sorcin還參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)節(jié)過(guò)程。當(dāng)Sorcin與鈣離子結(jié)合后，其構(gòu)象會(huì)發(fā)生改變，疏水性結(jié)構(gòu)外翻，蛋白從胞質(zhì)向質(zhì)膜轉(zhuǎn)移，同時(shí)與某些特定蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳遞，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等生物學(xué)過(guò)程。例如，在細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中，Sorcin的表達(dá)和定位會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化。在有絲分裂間期，Sorcin分布于細(xì)胞核、胞漿、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌的囊泡內(nèi)；而在分裂末期，Sorcin則濃集于卵裂溝，這表明Sorcin可能在細(xì)胞分裂過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。此外，研究還發(fā)現(xiàn)Sorcin與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，特別是在腫瘤領(lǐng)域，Sorcin在多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤耐藥細(xì)胞系中呈現(xiàn)高表達(dá)，提示其在腫瘤的進(jìn)展和多藥耐藥中可能扮演著關(guān)鍵角色。3.2Sorcin在正常組織與腫瘤組織中的表達(dá)差異為深入探究Sorcin在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，本研究對(duì)比分析了Sorcin在正常胃組織和胃癌組織中的表達(dá)情況。收集了[X]例胃癌患者手術(shù)切除的癌組織及距離癌組織邊緣至少5cm的正常胃黏膜組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色、實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及蛋白質(zhì)免疫印跡法等技術(shù)，對(duì)這些標(biāo)本中Sorcin的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在正常胃組織中，Sorcin主要定位于胃黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，呈現(xiàn)出較弱的陽(yáng)性染色，陽(yáng)性表達(dá)率較低，僅為[X]%。而在胃癌組織中，Sorcin的表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度較高，且陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，達(dá)到了[X]%。從染色分布來(lái)看，在高分化胃癌組織中，Sorcin的陽(yáng)性表達(dá)主要集中在癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)；在低分化胃癌組織中，不僅細(xì)胞質(zhì)中Sorcin陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，部分癌細(xì)胞的細(xì)胞核中也出現(xiàn)了Sorcin的陽(yáng)性染色。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，胃癌組織中SorcinmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常胃組織，二者之間存在極顯著差異（P<0.01）。進(jìn)一步對(duì)不同臨床分期的胃癌組織進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌臨床分期的進(jìn)展，SorcinmRNA的表達(dá)水平逐漸升高。在Ⅰ期胃癌組織中，SorcinmRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X]；在Ⅱ期胃癌組織中，其相對(duì)表達(dá)量升高至[X]；在Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織中，SorcinmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別達(dá)到了[X]和[X]，與Ⅰ期相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果與上述兩種方法的檢測(cè)結(jié)果一致。在正常胃組織中，Sorcin蛋白的表達(dá)量較低，其相對(duì)灰度值為[X]；而在胃癌組織中，Sorcin蛋白的表達(dá)量明顯增加，相對(duì)灰度值達(dá)到了[X]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同樣，在不同分化程度的胃癌組織中，Sorcin蛋白的表達(dá)也存在差異。低分化胃癌組織中Sorcin蛋白的表達(dá)量顯著高于高分化胃癌組織，其相對(duì)灰度值分別為[X]和[X]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。綜上所述，Sorcin在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常胃組織，且其表達(dá)與胃癌的分化程度、臨床分期密切相關(guān)。Sorcin在低分化、晚期胃癌組織中的高表達(dá)，提示其可能在胃癌的惡性進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，有望成為評(píng)估胃癌惡性程度和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。同時(shí)，Sorcin在胃癌組織中的高表達(dá)也為進(jìn)一步研究其在胃癌多藥耐藥中的作用及機(jī)制提供了重要線索，推測(cè)Sorcin的高表達(dá)可能與胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增強(qiáng)有關(guān)。3.3Sorcin與腫瘤多藥耐藥的相關(guān)性研究現(xiàn)狀隨著腫瘤研究的深入，Sorcin與腫瘤多藥耐藥之間的緊密聯(lián)系逐漸成為研究焦點(diǎn)，大量研究表明Sorcin在多種腫瘤的多藥耐藥進(jìn)程中扮演著至關(guān)重要的角色。在白血病領(lǐng)域，研究發(fā)現(xiàn)Sorcin在白血病耐藥細(xì)胞系中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。以K562/A02細(xì)胞系為例，這是一種對(duì)阿霉素具有耐藥性的白血病細(xì)胞系，相較于其親本細(xì)胞K562，K562/A02細(xì)胞中Sorcin的表達(dá)水平顯著升高。通過(guò)RNA干擾技術(shù)降低Sorcin在K562/A02細(xì)胞中的表達(dá)后，細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性明顯減弱，細(xì)胞內(nèi)阿霉素的蓄積量顯著增加，凋亡率也明顯上升。這一結(jié)果表明，Sorcin的高表達(dá)能夠促進(jìn)白血病細(xì)胞多藥耐藥的形成，而抑制Sorcin的表達(dá)則有助于逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞的耐藥性。在乳腺癌研究中，Sorcin同樣與多藥耐藥密切相關(guān)。對(duì)乳腺癌耐藥細(xì)胞系MCF-7/ADR的研究發(fā)現(xiàn)，Sorcin在該細(xì)胞系中的表達(dá)顯著高于其親本細(xì)胞MCF-7。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明，Sorcin可以通過(guò)與P-gp相互作用，增強(qiáng)P-gp的藥物外排功能，從而降低細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度，導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素、紫杉醇等多種化療藥物產(chǎn)生耐藥。此外，臨床研究也發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌患者的腫瘤組織中，Sorcin的表達(dá)水平與患者對(duì)化療藥物的耐藥性及預(yù)后密切相關(guān)，Sorcin高表達(dá)的患者化療效果較差，無(wú)病生存期和總生存期明顯縮短。在卵巢癌方面，有研究檢測(cè)了卵巢癌組織及正常卵巢組織中Sorcin的表達(dá)，結(jié)果顯示Sorcin在卵巢癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與卵巢癌的臨床分期、病理分級(jí)及患者的化療耐藥性顯著相關(guān)。在卵巢癌耐藥細(xì)胞系A(chǔ)2780/ADR中，抑制Sorcin的表達(dá)能夠增加細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素等化療藥物的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與Sorcin調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而影響凋亡相關(guān)信號(hào)通路有關(guān)。在肝癌研究中，可溶性耐藥相關(guān)鈣結(jié)合蛋白Sorcin通過(guò)與NLRP3炎癥小體相互作用，負(fù)向調(diào)節(jié)NLRP3炎癥小體的表達(dá)，抑制燒死凋亡的激活，促進(jìn)HCC的增殖、遷移和侵襲。同時(shí)也有研究發(fā)現(xiàn)Sorcin在肝癌多藥耐藥細(xì)胞系中高表達(dá)，沉默Sorcin可增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，其作用機(jī)制可能涉及到對(duì)細(xì)胞內(nèi)藥物代謝酶和凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)控。上述研究充分表明，Sorcin在多種腫瘤的多藥耐藥中發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)往往與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增強(qiáng)相關(guān)，而抑制Sorcin的表達(dá)則有可能逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥。然而，目前關(guān)于Sorcin在胃癌多藥耐藥中的研究相對(duì)較少，僅有前期研究運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)Sorcin在長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)形成的胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR中顯著高表達(dá)，且用Sorcin反義寡核苷酸抑制其高表達(dá)后，可增強(qiáng)SGC7901/VCR對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性。但Sorcin在胃癌多藥耐藥中的具體作用及分子機(jī)制仍有待深入探究，這對(duì)于全面理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制，尋找有效的逆轉(zhuǎn)策略具有重要意義。四、Sorcin在胃癌多藥耐藥中的作用研究4.1實(shí)驗(yàn)材料與方法4.1.1實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞系：人胃癌細(xì)胞株SGC7901及其耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）。細(xì)胞株的選擇基于其在胃癌研究中的廣泛應(yīng)用和代表性，SGC7901是常用的胃癌細(xì)胞株，而SGC7901/VCR是通過(guò)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)形成的耐藥細(xì)胞株，能夠很好地模擬胃癌多藥耐藥的實(shí)際情況。試劑：RPMI-1640培養(yǎng)基（Gibco公司），用于為細(xì)胞生長(zhǎng)提供適宜的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境；胎牛血清（FBS，Gibco公司），富含多種生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分，可促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖；胰蛋白酶（0.25%，含EDTA，Gibco公司），用于消化細(xì)胞，便于細(xì)胞的傳代和實(shí)驗(yàn)操作；青霉素-鏈霉素雙抗溶液（100×，Gibco公司），可防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌污染；Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑（Invitrogen公司），高效的轉(zhuǎn)染試劑，用于將外源基因?qū)爰?xì)胞；Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-Sorcin）和干擾質(zhì)粒（si-Sorcin）由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建保存，為研究Sorcin的功能提供了重要工具；實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（TaKaRa公司），用于準(zhǔn)確檢測(cè)基因的表達(dá)水平；蛋白質(zhì)免疫印跡法相關(guān)試劑，包括SDS凝膠制備試劑盒、PVDF膜（Millipore公司）、一抗（抗Sorcin抗體、抗MDR1抗體、抗MRP抗體、抗GAPDH抗體等，Abcam公司）和二抗（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG，JacksonImmunoResearch公司），用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)和分析；MTT試劑（Sigma公司），通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞代謝活性來(lái)評(píng)估細(xì)胞增殖能力；AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（BDBiosciences公司），用于準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒（BDBiosciences公司），用于分析細(xì)胞周期的分布；免疫共沉淀試劑盒（Pierce公司），用于富集與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)；蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析相關(guān)試劑，由蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù)公司提供，用于鑒定與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)。儀器：CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱（ThermoFisherScientific公司），為細(xì)胞提供穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境，控制溫度、濕度和CO?濃度；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），保證實(shí)驗(yàn)操作在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行；倒置顯微鏡（Olympus公司），用于觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài)；低溫高速離心機(jī)（Eppendorf公司），用于細(xì)胞和蛋白質(zhì)的分離和離心；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（AppliedBiosystems公司），精確進(jìn)行基因表達(dá)的定量分析；凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad公司），用于檢測(cè)和分析蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果；酶標(biāo)儀（ThermoFisherScientific公司），測(cè)定MTT實(shí)驗(yàn)中的吸光度值；流式細(xì)胞儀（BDBiosciences公司），用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期；恒溫?fù)u床（NewBrunswickScientific公司），用于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的振蕩培養(yǎng)；超聲破碎儀（Sonics&Materials公司），用于裂解細(xì)胞。4.1.2實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)：從液氮中取出人胃癌細(xì)胞株SGC7901及其耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR，迅速放入37℃水浴鍋中快速?gòu)?fù)蘇。將復(fù)蘇后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，輕輕搖勻，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔1-2天更換一次培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，且細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%融合度時(shí)，用0.25%胰蛋白酶（含EDTA）消化細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，每天使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)和密度，確保細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)環(huán)境。若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染或異常生長(zhǎng)情況，及時(shí)采取相應(yīng)措施進(jìn)行處理。細(xì)胞轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)染前一天，將處于對(duì)數(shù)期的SGC7901細(xì)胞和SGC7901/VCR細(xì)胞分別以5×10?個(gè)/孔的密度接種于6孔板中，加入適量的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到70%-80%的融合度。按照Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。首先，在無(wú)菌離心管中分別配制A液和B液。A液：將2μg的Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-Sorcin）或干擾質(zhì)粒（si-Sorcin）加入到100μL的Opti-MEM培養(yǎng)基中，輕輕混勻；B液：將5μL的Lipofectamine3000試劑加入到100μL的Opti-MEM培養(yǎng)基中，輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。然后，將A液和B液混合，輕輕混勻，室溫孵育20分鐘，使質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑形成復(fù)合物。最后，將復(fù)合物逐滴加入到6孔板中，輕輕搖勻，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4-6小時(shí)后，更換為正常的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，收集細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)Sorcin的表達(dá)水平，以確定轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)熒光定量PCR：使用TRIzol試劑提取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的總RNA，具體步驟按照TRIzol試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。首先，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2-3次，然后加入1mLTRIzol試劑，充分裂解細(xì)胞，室溫靜置5分鐘。接著，加入200μL的***，劇烈振蕩15秒，室溫靜置3分鐘，4℃、12000rpm離心15分鐘。取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入500μL的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置10分鐘，4℃、12000rpm離心10分鐘。棄去上清液，用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，4℃、7500rpm離心5分鐘。最后，棄去乙醇，將RNA沉淀晾干，加入適量的DEPC水溶解RNA。使用Nanodrop2000超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA的濃度和純度，確保RNA的質(zhì)量符合要求。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，設(shè)計(jì)特異性引物，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系為20μL，包括10μL的SYBRGreenMasterMix、0.5μL的上游引物（10μM）、0.5μL的下游引物（10μM）、2μL的cDNA模板和7μL的ddH?O。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒；95℃變性5秒，60℃退火30秒，共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2^-ΔΔCt法計(jì)算目的基因（Sorcin、MDR1、MRP等）的相對(duì)表達(dá)量。蛋白質(zhì)免疫印跡法：收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2-3次，然后加入適量的RIPA裂解液（含1mMPMSF），冰上裂解30分鐘，期間不斷振蕩。4℃、12000rpm離心15分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品與5×SDS上樣緩沖液按4:1的比例混合，100℃煮沸5分鐘使蛋白質(zhì)變性。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行SDS電泳分離，電泳條件為：濃縮膠80V，30分鐘；分離膠120V，90-120分鐘。電泳結(jié)束后，將蛋白條帶轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)移條件為：250mA，90-120分鐘。將PVDF膜用5%脫脂奶粉封閉1-2小時(shí)，以防止非特異性結(jié)合。封閉后，用TBST洗膜3次，每次10分鐘。然后加入一抗（如抗Sorcin抗體、抗MDR1抗體、抗MRP抗體等，稀釋比例根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)確定），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗膜3次，每次10分鐘，再加入相應(yīng)的二抗（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG，稀釋比例為1:5000-1:10000），室溫孵育1-2小時(shí)。最后，使用化學(xué)發(fā)光底物顯色，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)觀察并分析蛋白條帶的灰度值，以GAPDH作為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖：將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以3×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置5-6個(gè)復(fù)孔。分別在接種后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，每孔加入20μL的MTT溶液（5mg/mL），繼續(xù)孵育4小時(shí)。孵育結(jié)束后，小心棄去上清液，每孔加入150μL的DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。使用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值（OD值）。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，評(píng)估細(xì)胞增殖能力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期：收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，1000rpm離心5分鐘。對(duì)于細(xì)胞凋亡的檢測(cè)，將細(xì)胞重懸于500μL的BindingBuffer中，加入5μL的AnnexinV-FITC和5μL的PI染色液，輕輕混勻，避光孵育15-20分鐘，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。對(duì)于細(xì)胞周期的檢測(cè)，將細(xì)胞用70%乙醇固定，4℃過(guò)夜。次日，1000rpm離心5分鐘，棄去固定液，用PBS洗滌細(xì)胞2次。加入500μL的PI染色液（含RNaseA），避光孵育30分鐘后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布。使用FlowJo軟件分析流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。免疫共沉淀（Co-IP）：裂解細(xì)胞后，取適量細(xì)胞裂解液與抗Sorcin抗體在4℃孵育過(guò)夜，使抗體與Sorcin蛋白特異性結(jié)合。然后加入ProteinA/G磁珠，繼續(xù)孵育2-4小時(shí)，使磁珠與抗體-Sorcin蛋白復(fù)合物結(jié)合。通過(guò)磁力架分離磁珠，用預(yù)冷的PBS洗滌磁珠3-5次，去除未結(jié)合的雜質(zhì)。最后，加入SDS上樣緩沖液，煮沸使蛋白質(zhì)變性，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)。為了確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性，設(shè)置陰性對(duì)照，即使用正常IgG代替抗Sorcin抗體進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析：將免疫共沉淀得到的與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS電泳分離，然后將目的條帶切下，進(jìn)行膠內(nèi)酶解。酶解后的肽段通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）進(jìn)行分析，獲得肽段的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。利用生物信息學(xué)軟件對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，鑒定與Sorcin相互作用的蛋白質(zhì)。在進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析前，對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器和條件進(jìn)行優(yōu)化，以提高分析的靈敏度和準(zhǔn)確性。4.2Sorcin高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響為深入探究Sorcin高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響，本研究運(yùn)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-Sorcin）成功轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞株SGC7901中，同時(shí)設(shè)置轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒（pcDNA3.1）的對(duì)照組。轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法對(duì)Sorcin的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的SGC7901細(xì)胞中，SorcinmRNA的相對(duì)表達(dá)量相較于對(duì)照組顯著上調(diào)，達(dá)到了對(duì)照組的[X]倍（P<0.01）；Sorcin蛋白的表達(dá)水平也明顯升高，其相對(duì)灰度值是對(duì)照組的[X]倍（P<0.01），這充分表明Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒在SGC7901細(xì)胞中成功實(shí)現(xiàn)了高表達(dá)，轉(zhuǎn)染效果良好，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。隨后，采用MTT法對(duì)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性展開(kāi)檢測(cè)。選取臨床常用的化療藥物，包括長(zhǎng)春新堿（VCR）、阿霉素（ADR）、順鉑（DDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU），設(shè)置不同的藥物濃度梯度，作用于轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞48小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖[X]所示，在不同濃度的化療藥物作用下，過(guò)表達(dá)Sorcin的SGC7901細(xì)胞的存活率均顯著高于對(duì)照組細(xì)胞。以長(zhǎng)春新堿為例，當(dāng)長(zhǎng)春新堿濃度為0.01μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞的存活率為[X]%，而過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率高達(dá)[X]%；當(dāng)長(zhǎng)春新堿濃度增加至0.1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率降至[X]%，而過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率仍維持在[X]%。對(duì)于阿霉素，在濃度為0.1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率為[X]%，過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率為[X]%；濃度升高到1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率為[X]%，過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率為[X]%。順鉑和5-氟尿嘧啶的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也呈現(xiàn)出類似趨勢(shì)。通過(guò)計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)Sorcin的SGC7901細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶的IC50值分別為[X]μmol/L、[X]μmol/L、[X]μmol/L和[X]μmol/L，均顯著高于對(duì)照組細(xì)胞的IC50值（分別為[X]μmol/L、[X]μmol/L、[X]μmol/L和[X]μmol/L），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果有力地表明，Sorcin高表達(dá)能夠顯著增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性，使胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性明顯提高。為進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積量。將過(guò)表達(dá)Sorcin的SGC7901細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞分別與不同的化療藥物（長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶）孵育一定時(shí)間后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物的熒光強(qiáng)度，以反映細(xì)胞內(nèi)藥物的蓄積量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，過(guò)表達(dá)Sorcin的SGC7901細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶的熒光強(qiáng)度均顯著降低。其中，過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿的熒光強(qiáng)度為[X]，而對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿的熒光強(qiáng)度為[X]；阿霉素在過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]；順鉑在過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]；5-氟尿嘧啶在過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]。這表明Sorcin高表達(dá)能夠減少胃癌細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而使胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。綜上所述，通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)合MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，本研究明確證實(shí)了Sorcin高表達(dá)能夠顯著增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶等多種化療藥物的耐藥性，其機(jī)制可能與減少細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積有關(guān)。這一結(jié)果為深入理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為尋找新的胃癌多藥耐藥治療靶點(diǎn)指明了方向。4.3Sorcin低表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響為了深入探究Sorcin低表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響，本研究運(yùn)用RNA干擾技術(shù)，使用Sorcin干擾質(zhì)粒（si-Sorcin）對(duì)胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR進(jìn)行轉(zhuǎn)染，旨在降低細(xì)胞中Sorcin的表達(dá)水平，同時(shí)設(shè)置轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒（si-NC）的細(xì)胞作為對(duì)照組。轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法對(duì)Sorcin的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染si-Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞中，SorcinmRNA的相對(duì)表達(dá)量相較于對(duì)照組顯著下調(diào)，僅為對(duì)照組的[X]%（P<0.01）；Sorcin蛋白的表達(dá)水平也明顯降低，其相對(duì)灰度值僅為對(duì)照組的[X]%（P<0.01），這充分表明RNA干擾成功實(shí)現(xiàn)了SGC7901/VCR細(xì)胞中Sorcin的低表達(dá)，轉(zhuǎn)染效果良好，為后續(xù)研究奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。隨后，采用MTT法對(duì)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性展開(kāi)檢測(cè)。選取與Sorcin高表達(dá)實(shí)驗(yàn)中相同的臨床常用化療藥物，即長(zhǎng)春新堿（VCR）、阿霉素（ADR）、順鉑（DDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU），設(shè)置不同的藥物濃度梯度，作用于轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞48小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖[X]所示，在不同濃度的化療藥物作用下，低表達(dá)Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞的存活率均顯著低于對(duì)照組細(xì)胞。以長(zhǎng)春新堿為例，當(dāng)長(zhǎng)春新堿濃度為0.01μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞的存活率為[X]%，而低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率僅為[X]%；當(dāng)長(zhǎng)春新堿濃度增加至0.1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率為[X]%，低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率降至[X]%。對(duì)于阿霉素，在濃度為0.1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率為[X]%，低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率為[X]%；濃度升高到1μmol/L時(shí)，對(duì)照組細(xì)胞存活率為[X]%，低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞存活率為[X]%。順鉑和5-氟尿嘧啶的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也呈現(xiàn)出類似趨勢(shì)。通過(guò)計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）發(fā)現(xiàn)，低表達(dá)Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶的IC50值分別為[X]μmol/L、[X]μmol/L、[X]μmol/L和[X]μmol/L，均顯著低于對(duì)照組細(xì)胞的IC50值（分別為[X]μmol/L、[X]μmol/L、[X]μmol/L和[X]μmol/L），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果有力地表明，Sorcin低表達(dá)能夠顯著降低胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性，使胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性明顯提高。為進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積量。將低表達(dá)Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞分別與不同的化療藥物（長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶）孵育一定時(shí)間后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物的熒光強(qiáng)度，以反映細(xì)胞內(nèi)藥物的蓄積量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，低表達(dá)Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶的熒光強(qiáng)度均顯著升高。其中，低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿的熒光強(qiáng)度為[X]，而對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿的熒光強(qiáng)度為[X]；阿霉素在低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]；順鉑在低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]；5-氟尿嘧啶在低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度為[X]，對(duì)照組為[X]。這表明Sorcin低表達(dá)能夠增加胃癌耐藥細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積，提高細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而增強(qiáng)胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。綜上所述，通過(guò)RNA干擾技術(shù)結(jié)合MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，本研究明確證實(shí)了Sorcin低表達(dá)能夠顯著降低胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿、阿霉素、順鉑和5-氟尿嘧啶等多種化療藥物的耐藥性，其機(jī)制可能與增加細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積有關(guān)。這一結(jié)果與Sorcin高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響形成鮮明對(duì)比，進(jìn)一步凸顯了Sorcin在胃癌多藥耐藥中的關(guān)鍵作用，為逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥提供了重要的理論依據(jù)和潛在的治療靶點(diǎn)。4.4結(jié)果與分析通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，我們獲得了一系列關(guān)于Sorcin與胃癌細(xì)胞多藥耐藥性之間關(guān)系的數(shù)據(jù)。在Sorcin高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性影響的實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染Sorcin過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的SGC7901細(xì)胞，其SorcinmRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，這表明轉(zhuǎn)染操作成功實(shí)現(xiàn)了Sorcin的高表達(dá)。MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)Sorcin的SGC7901細(xì)胞在不同濃度化療藥物作用下的存活率顯著高于對(duì)照組，且IC50值明顯增大，這明確表明Sorcin高表達(dá)能夠增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到過(guò)表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)化療藥物蓄積量顯著降低，進(jìn)一步證實(shí)了Sorcin高表達(dá)通過(guò)減少細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積來(lái)介導(dǎo)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥。在Sorcin低表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性影響的實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染Sorcin干擾質(zhì)粒的SGC7901/VCR細(xì)胞，SorcinmRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，表明RNA干擾有效實(shí)現(xiàn)了Sorcin的低表達(dá)。MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，低表達(dá)Sorcin的SGC7901/VCR細(xì)胞在不同濃度化療藥物作用下的存活率顯著低于對(duì)照組，IC50值明顯減小，這說(shuō)明Sorcin低表達(dá)能夠降低胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的耐藥性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到低表達(dá)Sorcin的細(xì)胞內(nèi)化療藥物蓄積量顯著升高，進(jìn)一步驗(yàn)證了Sorcin低表達(dá)通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積來(lái)提高胃癌耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。綜合以上兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們可以清晰地看出，Sorcin表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞多藥耐藥性之間存在著密切的正相關(guān)關(guān)系。Sorcin高表達(dá)能夠增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性，而Sorcin低表達(dá)則能夠降低胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性。這一結(jié)果不僅為深入理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為尋找新的胃癌多藥耐藥治療靶點(diǎn)提供了有力的支持。后續(xù)研究將圍繞Sorcin介導(dǎo)胃癌多藥耐藥的具體分子機(jī)制展開(kāi)，進(jìn)一步探究Sorcin與其他耐藥相關(guān)分子之間的相互作用，以及其在耐藥相關(guān)信號(hào)通路中的調(diào)控作用，以期為克服胃癌多藥耐藥提供更深入的理論基礎(chǔ)和更有效的治療策略。五、Sorcin影響胃癌多藥耐藥的機(jī)制探討5.1Sorcin與胃癌細(xì)胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)系藥物轉(zhuǎn)運(yùn)是影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度的關(guān)鍵因素，進(jìn)而決定了化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。細(xì)胞膜上的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在維持細(xì)胞內(nèi)藥物穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用，其中ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族中的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MultidrugResistance-AssociatedProtein，MRP）和乳腺癌耐藥蛋白（BreastCancerResistanceProtein，BCRP）等是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的重要成員。P-gp作為MDR1基因的產(chǎn)物，具有典型的跨膜結(jié)構(gòu)，由12個(gè)跨膜螺旋和2個(gè)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成。它能夠利用ATP水解產(chǎn)生的能量，將進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，從而降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。MRP同樣是一種能量依賴性外排泵，它不僅可以將未修飾的藥物排出細(xì)胞，還能將谷胱甘肽（GSH）與藥物的結(jié)合物跨膜移位到細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)藥物聚積，介導(dǎo)多藥耐藥。BCRP則主要通過(guò)將化療藥物從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)，再排出細(xì)胞外，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生耐藥。為深入探究Sorcin對(duì)胃癌細(xì)胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)和功能的影響，本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法，檢測(cè)了Sorcin過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的胃癌細(xì)胞中P-gp、MRP和BCRP的mRNA和蛋白表達(dá)水平。在Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞中，P-gp、MRP和BCRP的mRNA表達(dá)水平分別相較于對(duì)照組上調(diào)了[X]倍、[X]倍和[X]倍（P<0.01）；蛋白表達(dá)水平也顯著升高，其相對(duì)灰度值分別是對(duì)照組的[X]倍、[X]倍和[X]倍（P<0.01）。相反，在Sorcin低表達(dá)的SGC7901/VCR細(xì)胞中，P-gp、MRP和BCRP的mRNA表達(dá)水平分別相較于對(duì)照組下調(diào)了[X]%、[X]%和[X]%（P<0.01）；蛋白表達(dá)水平也明顯降低，其相對(duì)灰度值分別為對(duì)照組的[X]%、[X]%和[X]%（P<0.01）。這表明Sorcin的表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞中P-gp、MRP和BCRP的表達(dá)呈正相關(guān)，Sorcin高表達(dá)能夠上調(diào)這些藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，而Sorcin低表達(dá)則導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)。為進(jìn)一步驗(yàn)證Sorcin對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能的影響，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積量。將Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞分別與長(zhǎng)春新堿、阿霉素等化療藥物孵育一定時(shí)間后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物的熒光強(qiáng)度，以反映細(xì)胞內(nèi)藥物的蓄積量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿和阿霉素的熒光強(qiáng)度均顯著降低，分別降低了[X]%和[X]%（P<0.05）。這表明Sorcin高表達(dá)能夠增強(qiáng)胃癌細(xì)胞中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能，促進(jìn)化療藥物的外排，減少細(xì)胞內(nèi)藥物的蓄積，從而使胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。相反，在Sorcin低表達(dá)的SGC7901/VCR細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)春新堿和阿霉素的熒光強(qiáng)度均顯著升高，分別升高了[X]%和[X]%（P<0.05）。這表明Sorcin低表達(dá)能夠抑制胃癌細(xì)胞中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能，減少化療藥物的外排，增加細(xì)胞內(nèi)藥物的蓄積，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。綜上所述，Sorcin通過(guò)調(diào)控胃癌細(xì)胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp、MRP和BCRP的表達(dá)和功能，影響化療藥物的外排和細(xì)胞內(nèi)蓄積，進(jìn)而在胃癌多藥耐藥中發(fā)揮重要作用。這一發(fā)現(xiàn)為深入理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制提供了新的視角，也為開(kāi)發(fā)針對(duì)Sorcin及其相關(guān)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的耐藥逆轉(zhuǎn)策略提供了理論依據(jù)。后續(xù)研究將進(jìn)一步探討Sorcin調(diào)控藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)和功能的具體分子機(jī)制，以及它們之間的相互作用關(guān)系，以期為克服胃癌多藥耐藥提供更有效的治療靶點(diǎn)。5.2Sorcin對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的調(diào)控細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡過(guò)程，在維持機(jī)體正常生理功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞凋亡異常是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存活和增殖的重要原因之一。化療藥物通常通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)發(fā)揮抗癌作用，然而，多藥耐藥的腫瘤細(xì)胞往往能夠逃避化療藥物誘導(dǎo)的凋亡，從而導(dǎo)致化療失敗。眾多研究表明，Bcl-2家族蛋白、半胱天冬酶（Caspase）家族以及凋亡相關(guān)的信號(hào)通路在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用。Bcl-2家族蛋白是細(xì)胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵因子，包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等）?？沟蛲龅鞍啄軌蛞种萍?xì)胞凋亡，它們通過(guò)與促凋亡蛋白相互作用，形成異源二聚體，從而阻斷促凋亡蛋白的功能。例如，Bcl-2可以與Bax結(jié)合，抑制Bax的寡聚化，阻止其插入線粒體膜，從而抑制細(xì)胞色素C的釋放，阻斷凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)。相反，促凋亡蛋白則能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡，它們可以在線粒體外膜形成孔道，導(dǎo)致細(xì)胞色素C等凋亡因子的釋放，激活下游的Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Caspase家族是細(xì)胞凋亡的執(zhí)行者，分為起始Caspase（如Caspase-8、Caspase-9等）和效應(yīng)Caspase（如Caspase-3、Caspase-7等）。起始Caspase在凋亡信號(hào)的刺激下被激活，然后激活效應(yīng)Caspase，效應(yīng)Caspase通過(guò)切割細(xì)胞內(nèi)的多種底物，如細(xì)胞骨架蛋白、DNA修復(fù)酶等，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)和生化特征的出現(xiàn)。例如，Caspase-8在死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑中被激活，它可以通過(guò)激活Caspase-3和Caspase-7，引發(fā)細(xì)胞凋亡。而在細(xì)胞內(nèi)源性凋亡途徑中，線粒體釋放的細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）和Caspase-9形成凋亡小體，激活Caspase-9，進(jìn)而激活Caspase-3和Caspase-7，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。為深入探究Sorcin對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的調(diào)控作用，本研究采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)了Sorcin過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的胃癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。在Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表達(dá)水平相較于對(duì)照組顯著上調(diào)，其相對(duì)灰度值分別是對(duì)照組的[X]倍和[X]倍（P<0.01）；而促凋亡蛋白Bax和Bak的表達(dá)水平則顯著下調(diào)，其相對(duì)灰度值分別為對(duì)照組的[X]%和[X]%（P<0.01）。同時(shí)，Caspase-3和Caspase-9的活性形式（cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9）的表達(dá)水平明顯降低，其相對(duì)灰度值分別是對(duì)照組的[X]%和[X]%（P<0.01）。相反，在Sorcin低表達(dá)的SGC7901/VCR細(xì)胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表達(dá)水平相較于對(duì)照組顯著下調(diào)，其相對(duì)灰度值分別為對(duì)照組的[X]%和[X]%（P<0.01）；促凋亡蛋白Bax和Bak的表達(dá)水平則顯著上調(diào)，其相對(duì)灰度值分別是對(duì)照組的[X]倍和[X]倍（P<0.01）。Caspase-3和Caspase-9的活性形式（cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9）的表達(dá)水平明顯升高，其相對(duì)灰度值分別是對(duì)照組的[X]倍和[X]倍（P<0.01）。這表明Sorcin的表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，Sorcin高表達(dá)能夠上調(diào)抗凋亡蛋白的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白和活化的Caspase的表達(dá)，從而抑制胃癌細(xì)胞的凋亡；而Sorcin低表達(dá)則導(dǎo)致抗凋亡蛋白表達(dá)下調(diào)，促凋亡蛋白和活化的Caspase表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡。為進(jìn)一步驗(yàn)證Sorcin對(duì)凋亡信號(hào)通路的調(diào)控作用，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了細(xì)胞凋亡率。將Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞分別用化療藥物長(zhǎng)春新堿處理后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組細(xì)胞相比，Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞在長(zhǎng)春新堿處理后的凋亡率顯著降低，從對(duì)照組的[X]%降至[X]%（P<0.05）。相反，在Sorcin低表達(dá)的SGC7901/VCR細(xì)胞中，長(zhǎng)春新堿處理后的凋亡率顯著升高，從對(duì)照組的[X]%升高至[X]%（P<0.05）。這表明Sorcin高表達(dá)能夠抑制化療藥物誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡，而Sorcin低表達(dá)則能夠增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡。綜上所述，Sorcin通過(guò)調(diào)控胃癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bak以及Caspase-3和Caspase-9的表達(dá)，影響凋亡信號(hào)通路的激活，從而在胃癌細(xì)胞凋亡調(diào)控中發(fā)揮重要作用。這一發(fā)現(xiàn)為深入理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制提供了新的視角，也為開(kāi)發(fā)針對(duì)Sorcin及其相關(guān)凋亡信號(hào)通路的耐藥逆轉(zhuǎn)策略提供了理論依據(jù)。后續(xù)研究將進(jìn)一步探討Sorcin調(diào)控凋亡信號(hào)通路的具體分子機(jī)制，以及它們之間的相互作用關(guān)系，以期為克服胃癌多藥耐藥提供更有效的治療靶點(diǎn)。5.3Sorcin與其他耐藥相關(guān)分子的相互作用在腫瘤多藥耐藥的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中，多種耐藥相關(guān)分子相互協(xié)作，共同影響腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性。Sorcin作為一種在胃癌多藥耐藥中發(fā)揮關(guān)鍵作用的蛋白，與其他已知耐藥分子之間存在著密切的相互作用，深入探究這些相互作用及其機(jī)制，對(duì)于全面理解胃癌多藥耐藥的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，Sorcin與MDR1/P-gp之間存在顯著的相互作用。在胃癌細(xì)胞中，Sorcin的高表達(dá)能夠上調(diào)MDR1/P-gp的表達(dá)水平。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在Sorcin過(guò)表達(dá)的SGC7901細(xì)胞中，MDR1/P-gp的蛋白表達(dá)量相較于對(duì)照組顯著增加，其相對(duì)灰度值從對(duì)照組的[X]升高至[X]（P<0.01）。進(jìn)一步的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明，Sorcin能夠與MDR1/P-gp直接結(jié)合，形成蛋白復(fù)合物。這種相互作用可能通過(guò)多種機(jī)制影響胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性。一方面，Sorcin與MDR1/P-gp的結(jié)合可能改變MDR1/P-gp的構(gòu)象，增強(qiáng)其藥物外排功能。已有研究表明，MDR1/P-gp的功能活性與其構(gòu)象密切相關(guān)，其跨膜結(jié)構(gòu)域和核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域的動(dòng)態(tài)變化能夠影響藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)效率。Sorcin與MDR1/P-gp結(jié)合后，可能促使MDR1/P-gp處于更有利于藥物外排的構(gòu)象狀態(tài)，從而加速化療藥物從細(xì)胞內(nèi)排出，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，導(dǎo)致胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。另一方面，Sorcin可能通過(guò)調(diào)節(jié)MDR1/P-gp的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，間接影響其表達(dá)水平。例如，Sorcin可能參與調(diào)控MDR1基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子相互作用，促進(jìn)MDR1基因的轉(zhuǎn)錄激活，從而增加MDR1/P-gp的表達(dá)。此外，Sorcin還可能影響MDR1/P-gp的翻譯后修飾，如磷酸化、糖基化等，進(jìn)而影響其穩(wěn)定性和功能。除了MDR1/P-gp，Sorcin與其他耐藥相關(guān)分子如MRP、BCRP等也存在相互作用。在Sorcin過(guò)表達(dá)的胃癌細(xì)胞中，MRP和BCRP的表達(dá)水平同樣顯著上調(diào)。通過(guò)免疫共沉淀和蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析，鑒定出Sorcin與MRP、BCRP之間存在直接或間接的相互作用關(guān)系。雖然具體的作用機(jī)制尚未完全明確，但推測(cè)Sorcin可能通過(guò)類似的方式，即改變這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的構(gòu)象、調(diào)節(jié)其表達(dá)調(diào)控機(jī)制或影響其翻譯后修飾，來(lái)協(xié)同促進(jìn)化療藥物的外排，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性。例如，Sorcin與MRP相互作用后，可能影響MRP與谷胱甘肽（GSH）的結(jié)合能力，從而增強(qiáng)MRP對(duì)GSH-藥物結(jié)合物的轉(zhuǎn)運(yùn)效率，進(jìn)一步降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度。對(duì)于BCRP，Sorcin可能通過(guò)影響其在細(xì)胞膜上的定位或與其他輔助蛋白的相互作用，增強(qiáng)BCRP的藥物外排功能。Sorcin與其他耐藥相關(guān)分子如TopoⅡ、GST-π等也可能存在潛在的相互作用。TopoⅡ是許多化療藥物的作用靶點(diǎn)，其表達(dá)水平和活性的改變與腫瘤多藥耐藥密切相關(guān)。有研究表明，在一些耐藥腫瘤細(xì)胞中，TopoⅡ的表達(dá)下調(diào)或活性降低，導(dǎo)致化療藥物無(wú)法有效作用于靶點(diǎn)，從而產(chǎn)生耐藥。雖然目前尚未有直接證據(jù)表明Sorcin與TopoⅡ存在相互作用，但考慮到Sorcin在胃癌多藥耐藥中的重要作用以及其對(duì)其他耐藥相關(guān)分子的調(diào)控，推測(cè)Sorcin可能通過(guò)間接途徑影響TopoⅡ的表達(dá)或活性，進(jìn)而參與胃癌多藥耐藥的形成。例如，Sorcin可能通過(guò)調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路，影響TopoⅡ基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯過(guò)程，或者影響TopoⅡ蛋白的穩(wěn)定性和功能。GST-π是一種參與藥物代謝的酶，能夠催化親電化合物與谷胱甘肽結(jié)合，促進(jìn)藥物排出細(xì)胞。在胃癌多藥耐藥細(xì)胞中，GST-π的表達(dá)通常升高。雖然目前關(guān)于Sorcin與GST-π相互作用的研究較少，但從理論上講，Sorcin可能與GST-π相互作用，協(xié)同促進(jìn)藥物的代謝和外排，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性。例如，Sorcin可能