組織因子PCPSPCaⅤⅧ血小板因子ThrombinPG.I2ⅤWFPAFThrombinⅪⅫⅦⅠ血小板FDPfibrinHCHTMPLGPlaPLGPAIt-PAⅩⅢaAT-Ⅲt-PAphosphollpldCa2+ⅩaⅤaⅡⅨaⅧaⅩ內皮細胞ⅩⅢ血管收縮性物質內皮素Ⅸ_激活的血小板釋放因子粘附：血小板附著在某物體的表面聚集：血小板相互間的粘附變形：血小板形態(tài)變化，白色血栓形成釋放：釋放血小板內容物，加強凝血因子、血小板、內皮細胞功能激活后血小板功能2血小板功能試驗臨床適用范圍血小板疾病診斷出血性疾病診斷血栓性疾病診斷抗血小板治療檢測手術前出血傾向篩查4特殊檢查血小板釋放血小板AA代謝：TXB2；丙二醛血小板膜蛋白：GPⅠ,GPⅡb/Ⅲa血小板內鈣流：鈣波動致密顆粒釋放a顆粒釋放血小板ATP釋放5-TH測定PF4β-TGGMp-140

一般檢查:

血小板計數;MPV;血塊回縮試驗。血小板功能

血小板粘附試驗:

血小板聚集試驗:(1)比濁集聚儀法

(2)

VerifyNow儀法

(3)流式細胞術聚集法血小板粘附集聚試驗:PF-100粘附集聚儀血栓彈力圖：血小板功能檢查

如何從循證醫(yī)學的理念，正確評價、合理使用血小板功能試驗是臨床工作中亟待解決的問題。血小板集聚儀工作原理血小板聚集VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)快速(1).3分鐘內出結果.(2)樣本采集后只需等10鐘

的樣本穩(wěn)定期.(3).有AA。ADP。GPⅡb/Ⅲa。三個受體檢查試劑盒簡便(1).全血樣本—無需樣本預處理.(2)無需專業(yè)培訓的操作人員.(3).全自動操作,包括取樣

廠家定標準確.(4).無需讓病人停藥檢測基礎值也能準確得出血小板抑制百分比資質認證

美國FDA認證P2Y12阻斷劑抗血小板治療監(jiān)測“PF-100”血小板儀檢測血小板粘附聚集功能PFA-100?的優(yōu)勢和缺點優(yōu)勢:1操作快速,簡便.易于質量控制2。單一試劑包3。已有不少的相關文獻發(fā)表缺點:1.很大程度上受vWF,PCT,HCT，PLT等參數的影響2.只有兩種試劑包，應用范圍窄注意:PFA-100馬上要更新換二代產品PFA-200,功能有一定改進流式細胞技術檢測血小板功能檢測血小板表面的抗原可區(qū)分激活狀態(tài)和非激活狀態(tài)的血小板.激活狀態(tài)標志物:CD62/P-Selectin儀器和試劑都比較昂貴操作復雜-需受過特別培訓的技術人員.不能作為快速檢測項目R凝血時間IIa生成的纖維蛋白形成凝血旁路參數r凝血狀況凝血成分低凝高凝-R(min)ˉR(min)K(min)ˉ

a(deg)ˉK(min)-a(deg)ˉMA-MA血塊穩(wěn)定性血塊強度的減弱纖維溶解血塊速率纖維蛋白X-聯結纖維蛋白

血小板凝血旁路血小板Ka最大血塊強度（血小板–纖維蛋白原)相互作用血小板(~80%)纖維蛋白原(~20%)MA30minLY30EPLLY30>E7.5%PL>15%N/A功能紊亂4-8min47°-74°1-4min55-73mm血栓彈力圖監(jiān)測血小板功能用于抗血小板藥物監(jiān)測方法評價血小板粘附試驗:

不易標準化已淘汰!血小板聚集試驗:1）血小板集聚儀法：最適常規(guī)用但標準化2）VerifyNow儀法：可床邊操作、易標準化，更適合ADP誘導劑?？捎糜贗ib/IIIa拮抗劑治療監(jiān)測3）流式細胞術聚集法：需要熟練流式細胞儀操作血小板粘附集聚試驗:PF-100血小板粘附集聚儀，不能進行AA誘導劑檢測血栓彈力圖：試劑昂貴，不易標準化三種方法對血小板功能檢測靈敏度比較0102030405060708024681012141618服藥后服開藥始后停4d藥服藥前停藥10d停藥2d停藥4d停藥6d停藥8dGMP-140TXB2AA血小板變形纖維蛋白原受體(Ⅱb/Ⅲa)血小板血栓血小板聚集原理誘導劑(ADP或AA)誘導劑受體ⅡbⅢaFiB血小板聚集率血小板濃度藥物干擾抗凝劑種類用量

PRP保存條件、時間血小板聚集儀工作狀態(tài)聚集劑種類、濃度、劑量與保存空腔對血小板功能影響血漿PH變化血小板聚集試驗標準化要素

PRP血小板濃度對AA、ADP誘導血小板聚集影響（%)血小板濃度300（n=20）AA%(不聚n)400（n=5）

AA%(不聚n)300(n=26)ADP%400(n=8)ADP%500.5±2.0**(20)0.0±0.0**(5)10.4±9.3**10.4±8.7**752.8±7.3**(18)1.2±0.8**(5)22.1±13.5**26.3±12.8**10016.1±20.6**(13)14.0±26.8**(4)32.1±15.9**34.5±15.9**15043.8±27.3**(5)42.2±37.2*(2)41.3±13.4**44.4±11.3*18059.3±17.257.6±32.0(1)45.1±12.2*46.9±9.520065.0±9.868.6±13.347.5±12.949.1±10.425068.5±8.773.8±11.349.6±13.352.6±14.330070.4±8.774.4±11.552.7±13.953.8±10.940075.2±10.155.3±9.9相關性P<0.05r=0.9238P<0.05r=0.84832.PRP血小板數量對ADP誘導血小板聚集的影響

PRP血小板數量對AA誘導血小板聚集的影響

標本取出后必須加塞保存，否則CO2擴散影響PRP的pH值，保存在5%CO2和95%空氣混合氣體中不受影響貯存時間(min)

標本PHAir5%CO2~95%Air

07.407.42457.747.461057.927.421658.057.411958.157.412558.307.47

ADPPHTime7.751108.302558.15207.5075標本的保存PH變化對血小板聚集率影響

標本室溫放置時間對血小板聚集的影響（%）分組PHADP%（n=36）AA%（n=30）1.0mmol/LAA%（n=30）0.5mmol/L1.5h7.8±0.0675.0±11.084.6±8.583.2±8.74h7.9±0.0772.1±11.381.2±8.778.7±17.16h8.1±0.0667.0±11.2**79.3±9.065.9±29.2**8h8.2±0.0664.4±11.7**77.4±16.931.9±35.3**10h8.3±0.0557.9±13.9**63.1±31.4**18.8±26.9**24h8.4±0.0928.7±11.5**11.2±16.7**6.7±10.4**注：隨標本放置時間延長、ADP、AA聚集率降低。低AA濃度誘導血小板聚集變化更為明顯或呈“全無”式聚集。標本室溫放置時間對血小板聚集的影響

時間、溫度對ADP誘導血小板聚集率（%)的影響分組34℃組ADP聚集率25℃組ADP聚集率4℃組ADP聚集率0h48.5±14.848.1±15.348.6±14.22h38.0±15.0**47.2±15.057.5±13.3**3h35.2±14.4**47.2±15.858.7±14.5**4h30.4±12.9**47.2±15.057.3±14.8**5h28.2±12.4**44.0±10.956.1±11.7**6h23.8±12.6**38.8±13.1**54.3±14.8*8h16.4±11.0**31.8±13.1**52.0±11.5p<0.01<0.01<0.01注：血小板聚集率都隨標本放置時間和放置溫度變化而降低，25℃組0h組與2h、3h、4h、5h組之間差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），與6h、8h組之間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

溫度對ADP誘導血小板聚集的影響溫度ADP聚集率（%，）34℃31.5±16.0**25℃43.5±14.64℃54.9±13.4**PT<0.01,TM<0.01,T*TM<0.05標本放置溫度對ADP誘導血小板聚集率有明顯的影響，標本放置時間和溫度之間存在交互效應（P<0.05）。34℃組血小板聚集率最低，4℃組血小板聚集率最高時間、溫度對ADP誘導血小板聚集的影響（4度）（室溫）（30度）

不同抗凝劑對血小板聚集率（%）的影響抗凝分組AA聚集率ADP聚集率枸櫞酸鈉47.8±37.460.9±24.7肝素47.3±37.367.7±19.7*EDTA6.4±6.6**4.1±3.1**7.不同抗凝劑對血小板聚集的影響：枸椽酸鹽抗凝劑用量對血小板聚集的影響血液1ml1ml1ml1ml1ml抗凝劑0.0970.1110.1330.1550.177試劑/血1:101:91:7.51:6.51:5.6abcde機制:抗凝劑的增加活性鈣減少;游離鈣++減少,影響血小板聚集Ab

取血量與抗凝劑不同比例對血小板的聚集影響

血量鈣濃度AA聚集率ADP聚集率3.0(1:10)0.1181.1±3.967.3±17.82.7(1:9)0.1081.4±4.6968.4±18.42.4(1:8)0.0980.3±4.4866.2±17.02.1(1:7)0.0880.3±5.5956.6±21.7**1.5(1:5)0.0669.1±22.5838.4±23.3**0.9(1:3)0.0426.4±27.01**8.6±11.1**注：AA、ADP誘導血小板聚集都受Ca2+明顯影響。血漿Ca2+濃度在0.04～0.11mmol/L時，血小板聚集率隨鈣離子濃度的增高而增高。32不同Hct的抗凝血對血小板聚集率的影響20%壓積,枸櫞酸鈉濃度0.442%45%壓積,枸櫞酸鈉濃度0.642%60%壓積,枸櫞酸鈉濃度0.883%80%壓積,枸櫞酸鈉濃度1.767%20406080

70

5030血小板聚集率花生四烯酸誘導ADP誘導膠原誘導根據Hct變化抗凝劑用量效正圖33八一

紅細胞比積1.51.41.31.21.11.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10.01.51.41.31.21.11.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10.020304050607080試管內枸櫞酸鈉量ml抗凝劑的校正抗凝劑的校正公式34解放軍總醫(yī)院

八一

采血,并使血漿中枸櫞酸鈉的濃度低至正常水平.也可使用如下三種方法確定在收集高比積血標本時所用枸櫞酸鹽的體積:(1)使用公式計算用量;抗凝劑用量=

0.00185×血量(ml)×(100-病人紅細胞壓積）；

不同鈣離子濃度對血小板聚集率（%）的影響加鈣量ul鈣濃度mmol/LADP聚集率（n=29）AA聚集率（n=13）058152030651001201500.10.40.51.42.14.417.428.733.739.051.8±9.653.0±8.164.1±13.1**72.4±11.3**75.9±10.4**79.8±12.3**80.3±11.7**89.2±7.2**94.7±4.8**9.1±5.3**64.4±12.269.2±12.475.2±13.6**83.9±13.4**83.7±13.9**85.0±12.2**84.5±9.3**91.7±5.3**93.2±5.5**11.1±4.5**低鈣對血小板的聚集的影響血漿鈣對血小板聚集的影響

-50℃儲存AA7月、ADP13月對血小板聚集的影響

AA儲存0月、7月對血小板聚集率的影響（n=29）儲存期（月）

AA聚集率（%）

0

47.8±37.6

7

47.6±37.1P>0.05ADP儲存0、13月對血小板聚集的影響（n=29）儲存期（月）

ADP聚集（%）

0

66.3±15.8

13

67.8±17.0P>0.05注：配對t檢驗，-50℃儲存AA7月、ADP13月對血小板聚集結果無影響。-50℃AA、ADP解凍后又儲存于5℃冰箱

0h、24h對血小板聚集的影響

分組AA聚集率（n=14）ADP聚集率（n=11）0h47.6±38.967.5±25.524h46.2±38.068.1±25.6P>0.05注：配對t檢驗，0h與24h組值之間差異無統(tǒng)計學意義。含“死