新冠疫情核酸檢測質量控制操作規(guī)范1引言新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）核酸檢測是新冠疫情防控的核心技術手段，其結果的準確性直接影響病例診斷、疫情溯源及防控策略制定。為確保核酸檢測質量，規(guī)范實驗室操作流程，依據《中華人民共和國傳染病防治法》《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南》《醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊》等法律法規(guī)及技術規(guī)范，制定本操作規(guī)范。本規(guī)范旨在明確核酸檢測各環(huán)節(jié)的質量控制要求，保障檢測結果的真實性、可靠性和重復性。2適用范圍本規(guī)范適用于所有開展新冠病毒核酸檢測的醫(yī)療機構、第三方醫(yī)學檢驗實驗室、疾病預防控制機構等（以下簡稱“實驗室”），涵蓋樣本采集、運輸、接收、處理、檢測、結果報告及質量改進等全流程。3術語和定義3.1新冠病毒核酸檢測試劑指經國家藥品監(jiān)督管理部門批準，用于檢測SARS-CoV-2核酸的試劑，包括核酸提取試劑、擴增試劑（含引物探針）等。3.2室內質量控制（IQC）實驗室為保證每一批次檢測結果的準確性，在檢測過程中加入已知濃度的陽性對照、陰性對照及空白對照，通過分析對照結果判斷檢測系統(tǒng)穩(wěn)定性的過程。3.3室間質量評價（EQA）由外部機構（如國家/省級臨床檢驗中心）發(fā)放統(tǒng)一樣本，實驗室獨立檢測后反饋結果，通過與參考結果比較，評價實驗室檢測能力的活動。3.4Ct值（CycleThreshold）實時熒光定量PCR反應中，熒光信號達到設定閾值時的循環(huán)次數(shù)，用于判斷樣本中是否存在目標核酸及相對濃度。4樣本采集質量控制4.1采集人員要求采集人員應具備醫(yī)學檢驗或護理專業(yè)資質，接受過新冠病毒核酸檢測采樣培訓（包括生物安全、采樣方法、樣本保存等），考核合格后方可上崗。采集時應佩戴醫(yī)用防護口罩（N95及以上）、護目鏡/面屏、手套、隔離衣等個人防護裝備，嚴格執(zhí)行手衛(wèi)生。4.2采集方法規(guī)范4.2.1咽拭子采集受檢者取坐位，頭后仰，張口發(fā)“啊”音，充分暴露咽后壁。采集者用無菌植絨拭子越過舌根，擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁各3-5次，動作輕柔，避免觸及舌頭、牙齒、牙齦等部位。拭子取出后，立即放入含病毒保存液的采樣管中，折斷拭子桿（留取長度不超過采樣管刻度），旋緊管蓋。4.2.2鼻拭子采集受檢者取坐位，頭部微仰。采集者用無菌植絨拭子沿一側鼻孔下鼻道底部向后緩慢深入1-1.5cm（約鼻尖至耳垂距離的1/2），旋轉拭子3-5次，停留時間不少于10秒。換另一側鼻孔重復操作，將拭子放入同一采樣管中，處理方式同咽拭子。4.2.3注意事項采樣前30分鐘內，受檢者應避免吸煙、飲酒、嚼口香糖或進食。每例受檢者使用新的采樣拭子，避免交叉污染。采樣管上應標注受檢者姓名、性別、年齡、樣本類型、采集時間、采集人員等信息，信息應與申請單一致。4.3樣本保存與運輸采集后應盡快送檢（2小時內優(yōu)先），無法及時送檢的樣本需置于2-8℃冰箱保存，保存時間不超過24小時；如需長期保存，應置于-20℃以下（1周內）或-70℃以下（長期）。運輸時使用符合生物安全要求的轉運箱（如UN2814類包裝），加入冰袋或干冰保持低溫，轉運箱外標注“新冠病毒檢測樣本”“生物危險”等標識。運輸過程中避免劇烈震蕩，防止樣本泄漏。5樣本接收與處理質量控制5.1樣本接收核對實驗室接收樣本時，應核對以下信息：（1）樣本標識：受檢者信息、樣本類型、采集時間等與申請單一致；（2）樣本狀態(tài)：采樣管無泄漏、無破損，保存液無渾濁或沉淀；（3）保存條件：運輸溫度符合要求（如2-8℃或-20℃以下）。不符合要求的樣本應拒收，并向采集單位反饋原因（如標識不清、樣本泄漏、保存溫度異常等）。5.2樣本處理操作樣本處理應在生物安全二級（BSL-2）實驗室的生物安全柜內進行，處理前需對生物安全柜進行清潔消毒（75%乙醇擦拭）。滅活處理：如需滅活，可采用56℃孵育30分鐘或化學滅活（如含氯消毒液），滅活后樣本需充分混勻。核酸提?。喊凑仗崛≡噭┱f明書操作，提取過程中避免交叉污染（如使用帶濾芯吸頭、定期更換手套）。提取后的核酸應立即進行擴增，或置于-20℃以下保存（24小時內）。6試劑與耗材質量控制6.1試劑選擇與驗證試劑應選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準的新冠病毒核酸檢測試劑，且在有效期內。每批試劑到貨后，需進行驗證：（1）靈敏度驗證：用已知弱陽性質控品（如Ct值30-35）檢測，應能檢出；（2）特異性驗證：用其他呼吸道病毒（如流感病毒、腺病毒）陽性樣本檢測，應無交叉反應；（3）重復性驗證：用同一批試劑檢測同一陽性樣本3次，Ct值變異系數(shù)（CV）應≤5%。6.2試劑儲存與有效期管理試劑應按照說明書要求儲存（如擴增試劑需-20℃保存，提取試劑需4℃保存），冰箱溫度應每日記錄（至少2次），避免溫度波動。試劑開啟后，應標注開啟時間，在有效期內使用（如擴增試劑開啟后可在-20℃保存1個月）。6.3耗材質量檢查耗材（如采樣拭子、采樣管、吸頭、PCR反應管）應符合醫(yī)療器械標準，無破損、無污染。帶濾芯吸頭應定期檢查濾芯完整性，避免氣溶膠污染；PCR反應管應密封良好，防止蒸發(fā)。7儀器設備質量控制7.1主要儀器校準與維護實時熒光定量PCR儀：每6個月進行一次溫度校準（用溫度校準儀檢測加熱模塊的溫度準確性和均一性，誤差≤0.5℃）；每3個月清潔一次光路系統(tǒng)（用無水乙醇擦拭透鏡）。核酸提取儀：每3個月檢查一次提取效率（用標準品檢測，提取后核酸濃度應符合試劑要求）；每月清潔一次樣本倉（75%乙醇擦拭）。生物安全柜：每6個月進行一次性能檢測（包括風速、過濾效率、氣流方向等），符合GB____《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》要求。7.2日常使用前檢查PCR儀：開機后檢查溫度顯示是否正常，有無error提示；核酸提取儀：檢查耗材放置是否正確，液體通道是否通暢；生物安全柜：開啟后運行15分鐘，檢查風速是否符合要求（平均風速0.38-0.52m/s）。8檢測過程質量控制8.1室內質量控制（IQC）質控品設置：每一批次檢測（≤24個樣本）應加入以下質控：（1）陽性對照：弱陽性質控品（Ct值30-35），用于驗證檢測系統(tǒng)的靈敏度；（2）陰性對照：無模板對照（NTC，用生理鹽水代替樣本），用于監(jiān)測交叉污染；（3）空白對照：提取空白（用生理鹽水代替樣本進行提?。?，用于監(jiān)測提取過程中的污染。結果判斷：（1）陽性對照：應出現(xiàn)典型的擴增曲線，Ct值在預期范圍（如30-35）；（2）陰性對照、空白對照：無擴增曲線（Ct值＞40或無Ct值）；（3）若質控結果異常，該批次檢測無效，需查找原因（如試劑污染、儀器故障）并重新檢測。8.2室間質量評價（EQA）實驗室應參加國家衛(wèi)健委臨檢中心或省級臨檢中心組織的新冠病毒核酸檢測EQA計劃，每年至少2次。接收EQA樣本后，應按常規(guī)檢測流程獨立檢測，不得與其他實驗室核對結果。若EQA結果不合格（如假陽性、假陰性），應立即分析原因（如試劑選擇不當、操作誤差），制定整改措施（如更換試劑、加強人員培訓），并在規(guī)定時間內提交整改報告。9人員質量控制9.1人員資質與培訓檢測人員應具備醫(yī)學檢驗專業(yè)初級及以上職稱，持有《臨床檢驗資格證書》。新入職人員需接受崗前培訓，內容包括：新冠病毒生物學特性、核酸檢測技術流程、生物安全防護、質量控制要求等，培訓時間不少于40學時，考核合格后方可獨立操作。在職人員每年應接受繼續(xù)教育，內容包括：新出臺的技術規(guī)范、試劑/儀器更新、質量改進案例等，培訓時間不少于20學時。9.2定期考核與能力評估實驗室每季度對檢測人員進行一次能力評估，包括：（1）理論考核：新冠病毒檢測相關知識（如試劑原理、質控要求、異常結果處理）；（2）操作考核：樣本處理、核酸提取、PCR擴增等操作的規(guī)范性；（3）結果分析：對質控結果、異常結果的判斷能力。評估不合格者，應暫停檢測工作，重新培訓考核，合格后方可恢復。10異常結果與質量問題處理10.1陽性結果復核初篩陽性樣本（Ct值≤40且有典型擴增曲線）應立即進行復核：（1）用另一種不同靶基因的試劑（如同時檢測ORF1ab和N基因的試劑，換用檢測E基因的試劑）進行檢測；（2）若復核結果仍為陽性，應將樣本送疾控中心進行確認（如測序）；（3）確認陽性后，應在2小時內報告臨床及疾控部門，并做好樣本留存（-70℃以下保存1個月）。10.2陰性結果質疑處理若臨床醫(yī)生對陰性結果提出質疑（如患者有典型癥狀但檢測陰性），實驗室應：（1）回顧檢測過程：檢查樣本采集方法（如是否為深部氣道樣本）、保存條件、檢測試劑及儀器狀態(tài)；（2）建議重新采樣：優(yōu)先采集痰、支氣管肺泡灌洗液等深部樣本；（3）必要時采用其他檢測方法（如抗原檢測、血清學檢測）輔助診斷。10.3質控不合格處理若室內質控結果異常（如陽性對照未檢出、陰性對照出現(xiàn)擴增），應立即停止檢測，查找原因：（1）試劑問題：檢查試劑有效期、儲存條件，重新驗證試劑；（2）操作問題：檢查吸頭是否帶濾芯、生物安全柜是否正常運行，加強人員培訓；（3）儀器問題：檢查PCR儀溫度、核酸提取儀效率，聯(lián)系廠家維修。原因排查后，重新進行質控檢測，合格后方可恢復樣本檢測。11質量改進與持續(xù)優(yōu)化11.1質量分析會議實驗室每月召開一次質量分析會議，參會人員包括檢測人員、質量負責人、實驗室主任等，內容包括：（1）匯總當月檢測數(shù)據：樣本量、陽性率、質控合格率、EQA結果；（2）分析質量問題：如質控不合格次數(shù)、異常結果原因、客戶投訴情況；（3）提出改進建議：如優(yōu)化操作流程、更換試劑、加強培訓。11.2糾正與預防措施（CAPA）對質量問題（如EQA不合格、客戶投訴），應制定CAPA計劃：（1）糾正措施：立即解決當前問題（如重新檢測樣本、更換試劑）；（2）預防措施：防止問題再次發(fā)生（如修訂操作規(guī)范、增加質控頻率）。CAPA計劃應明確責任人員、完成時間，實施后需驗證效果（如再次進行EQA檢測）。11.3技術更新與培訓關注新冠病毒變異情況（如奧密克戎毒株），及時更新檢測試劑（如針對變異株的引物探針）；跟蹤新的檢測技術（如數(shù)字PCR、快速核酸檢測），評估其適用性，必要時引入實驗室；對新試劑、新技術，應組織人員培訓，確保掌握