陜西pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.轉(zhuǎn)錄B.翻譯C.基因重組D.核酸復(fù)制答案：D2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.解旋酶B.RNA聚合酶C.Taq酶D.限制性內(nèi)切酶答案：C3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.催化反應(yīng)D.終止反應(yīng)答案：A5.下列哪項(xiàng)不是影響PCR反應(yīng)的因素（）A.模板濃度B.引物長(zhǎng)度C.大氣壓強(qiáng)D.鎂離子濃度答案：C6.PCR產(chǎn)物的特異性取決于（）A.引物B.模板C.Taq酶D.dNTP答案：A7.以下哪種PCR技術(shù)可用于定量分析（）A.普通PCRB.實(shí)時(shí)熒光定量PCRC.巢式PCRD.反向PCR答案：B8.在PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.合成原料C.調(diào)節(jié)pHD.穩(wěn)定結(jié)構(gòu)答案：B9.對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)室，以下哪個(gè)區(qū)域?yàn)楫a(chǎn)物分析區(qū)（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：D10.如果PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，可能的原因是（）A.引物設(shè)計(jì)不合理B.模板質(zhì)量好C.反應(yīng)溫度合適D.鎂離子濃度過(guò)低答案：A二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用包括（）A.基因診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.遺傳疾病研究答案：ABCD2.以下屬于PCR反應(yīng)體系組成成分的有（）A.模板B.引物C.Taq酶D.緩沖液答案：ABCD3.設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)應(yīng)遵循的原則有（）A.長(zhǎng)度合適B.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)C.引物間不能互補(bǔ)D.與模板特異性結(jié)合答案：ABCD4.PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD5.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物B.模板純度C.退火溫度D.循環(huán)次數(shù)答案：ABCD6.在PCR反應(yīng)中，鎂離子的作用有（）A.影響酶活性B.影響引物退火C.影響產(chǎn)物特異性D.影響反應(yīng)速度答案：ABCD7.以下哪些是實(shí)時(shí)熒光定量PCR的特點(diǎn)（）A.定量準(zhǔn)確B.靈敏度高C.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)D.不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線答案：ABC8.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，標(biāo)本采集需要注意（）A.采集部位準(zhǔn)確B.采集時(shí)間合適C.避免污染D.及時(shí)處理答案：ABCD9.PCR技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)包括（）A.更高的靈敏度B.更好的特異性C.更廣泛的應(yīng)用D.更簡(jiǎn)便的操作答案：ABCD10.以下關(guān)于PCR反應(yīng)循環(huán)次數(shù)的說(shuō)法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)過(guò)多會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增B.循環(huán)次數(shù)過(guò)少會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物量不足C.一般為20-30次D.根據(jù)具體情況確定答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，模板可以是DNA也可以是RNA。（）答案：正確2.Taq酶的最佳活性溫度為37℃。（）答案：錯(cuò)誤3.引物越長(zhǎng)，PCR反應(yīng)的特異性越高。（）答案：錯(cuò)誤4.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，不同區(qū)域的工作服可以通用。（）答案：錯(cuò)誤5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR只能用于絕對(duì)定量。（）答案：錯(cuò)誤6.PCR反應(yīng)中，緩沖液的pH對(duì)反應(yīng)結(jié)果沒(méi)有影響。（）答案：錯(cuò)誤7.巢式PCR是一種提高PCR特異性的方法。（）答案：正確8.只要有合適的引物，任何DNA樣本都能進(jìn)行成功的PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤9.產(chǎn)物分析區(qū)是PCR實(shí)驗(yàn)室中污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域。（）答案：正確10.PCR反應(yīng)中，提高退火溫度一定能提高特異性。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本步驟。答案：PCR技術(shù)基本步驟包括變性（將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈解開(kāi)為單鏈）、退火（降低溫度至引物的Tm值左右，引物與模板特異性結(jié)合）、延伸（在Taq酶作用下，以dNTP為原料，從引物的3'端開(kāi)始合成新的DNA鏈），如此循環(huán)多次。2.說(shuō)出至少三種PCR技術(shù)的常見(jiàn)類型及其特點(diǎn)。答案：普通PCR：簡(jiǎn)單，定性檢測(cè)DNA片段是否存在。實(shí)時(shí)熒光定量PCR：可定量，靈敏度高，能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。巢式PCR：特異性高，通過(guò)兩輪PCR反應(yīng)增加特異性。3.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)室防止污染的措施。答案：分區(qū)管理，不同區(qū)域的儀器設(shè)備、耗材等專用；嚴(yán)格的人員操作流程，如更換工作服、洗手等；實(shí)驗(yàn)用品的清潔消毒；合理的氣流組織，防止空氣交叉污染。4.在PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，如何避免引物二聚體的形成？答案：避免引物自身互補(bǔ)，尤其是3'端；使引物之間不能互補(bǔ)；合理設(shè)計(jì)引物長(zhǎng)度和GC含量。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何提高反應(yīng)的特異性。答案：可從引物設(shè)計(jì)方面保證特異性，如合適長(zhǎng)度、特異性結(jié)合等；控制退火溫度，優(yōu)化反應(yīng)條件；提高模板純度；控制循環(huán)次數(shù)不過(guò)多。2.闡述實(shí)時(shí)熒光定量PCR在疾病診斷中的優(yōu)勢(shì)。答案：能準(zhǔn)確定量病原體載量；靈敏度高，可早期檢測(cè)；可同時(shí)檢測(cè)多種病原體；不需要后續(xù)電泳等復(fù)雜操作，減少污染。3.分析PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制