體內(nèi)藥物分析z第1頁，共77頁。第一節(jié)體內(nèi)藥物分析概述——藥物分析的重要分支學科 ——研究生物機體中外源性藥物及其代謝物和內(nèi)源性活性物質(zhì)的質(zhì)與量的變化規(guī)律 ——綜合性較強的應用學科——分析方法學 ——治療藥物監(jiān)測研究的重要的實驗手段第2頁，共77頁。8/31/20252體內(nèi)藥物分析

藥物進入體內(nèi)后——經(jīng)過吸收、分布、代謝和排泄等動力學過程——化學結(jié)構(gòu)和存在狀態(tài)都可能發(fā)生變化——在不同個體中存在差異（個體差異）——進而直接影響到藥物在不同個體中的治療效應和毒副作用需對生物體內(nèi)藥物及其代謝物進行研究分析第3頁，共77頁。8/31/20253體內(nèi)藥物分析狹義：利用現(xiàn)代分析儀器和分離手段對人和動物血液、尿和組織等樣品進行定性定量的分析廣義：通過體內(nèi)藥物濃度的分析，了解藥物在體內(nèi)的數(shù)量和質(zhì)量的變化，獲得藥代動力學參數(shù)，為藥品的生產(chǎn)、臨床應用作出評價體內(nèi)藥物分析的定義第4頁，共77頁。8/31/20254體內(nèi)藥物分析一體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)體內(nèi)藥物分析是一門研究生物機體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學在探求科學用藥規(guī)律與安全、有效、合理用藥，在開發(fā)新藥、保障健康長壽方面具有重要作用第5頁，共77頁。8/31/20255體內(nèi)藥物分析二體內(nèi)藥物分析的作用和意義通過檢測人（或動物）的體液或組織（生物樣本）中的藥物或特定代謝物的濃度，為臨床藥學研究提供必要的數(shù)據(jù)和相關(guān)信息第6頁，共77頁。8/31/20256體內(nèi)藥物分析（一）在新藥評價和開發(fā)中的意義

大量事實證明，如無臨床藥理學和臨床藥學研究給新藥以確切的評價，要做到臨床安全、合理、有效地用藥將會遇到許多困難。因此，加強藥物在生物樣品內(nèi)作用機理的研究，以了解和闡明藥物藥物結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、劑型及生產(chǎn)工藝與藥物療效等關(guān)系，已成為評價藥品質(zhì)量的重要內(nèi)容和依據(jù)。體內(nèi)藥物分析的意義第7頁，共77頁。8/31/20257體內(nèi)藥物分析1．全面質(zhì)量控制2．新藥報批3．為設計新藥提供信息①從代謝產(chǎn)物中開發(fā)新藥保泰松→羥基保泰松（作用強、副作用?。┓悄俏鞫　鷵錈嵯⑼储谇八幵O計③新劑型的研究，緩控釋、經(jīng)皮制劑等以上內(nèi)容必須通過測定體內(nèi)藥物濃度得以解決第8頁，共77頁。8/31/20258體內(nèi)藥物分析（二）臨床合理用藥中的意義1．血藥濃度與藥理作用2.影響血藥濃度的因素（1）機體因素a．生理因素年齡、性別、生理狀況b．病理因素c．遺傳因素（2）藥物因素a．劑型因素（生物利用度問題）b．藥物合并使用（酶抑、酶促）c．時間因素第9頁，共77頁。8/31/20259體內(nèi)藥物分析（三）藥物中毒解救的意義藥物中毒的診斷和治療方案的確立（四）興奮劑檢測的意義包括麻醉藥精神藥品濫用，吸毒及運動員違禁藥品檢測第10頁，共77頁。8/31/202510體內(nèi)藥物分析3．從樣品的來源分1．從分析物分母體藥物代謝物內(nèi)源性物質(zhì)2．從生物樣品種類分均勻樣品非均勻樣品人體實驗動物三體內(nèi)藥物分析的對象

第11頁，共77頁。8/31/202511體內(nèi)藥物分析體內(nèi)藥物分析的對象研究對象

評價藥物的安全性（臨床前研究）—動物評價藥物的有效性（臨床研究）—人體（健康志愿者或患者）用藥的安全、有效與合理—人體（患者TDM）具體檢材

生物體的各種器官、組織和體液等第12頁，共77頁。8/31/202512體內(nèi)藥物分析四體內(nèi)藥物分析的任務1.分析方法學的研究和完善

——提供靈敏、專屬、準確可靠的分析方法與最佳的分析條件（首要任務）第13頁，共77頁。8/31/202513體內(nèi)藥物分析2.治療藥物監(jiān)測TDM，therapeuticalDrugMonitoring只有具有明確治療范圍，血藥濃度和藥效關(guān)系密切，且具有下列情況者，要求進行藥濃檢測：有效血藥濃度范圍窄，劑量小，毒性大的藥物；藥代動力學個體差異大、藥理作用強、不易估計給藥后的血藥濃度藥物；第14頁，共77頁。8/31/202514體內(nèi)藥物分析藥物的毒性反應與該藥治療的疾病癥狀相似，難以判斷是劑量不足還是藥物毒性所致；聯(lián)合用藥時，由于藥物相互作用產(chǎn)生不良反應，需要調(diào)整藥物劑量者；在短期內(nèi)難于判斷療效的藥物，預測藥物能否達到預防效果；判斷患者用藥的依從性等要求進行藥物濃度檢測。TDM第15頁，共77頁。8/31/202515體內(nèi)藥物分析

3.藥代動力學的研究藥物動力學參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結(jié)合率等基本數(shù)據(jù)——為新藥研究、老藥再評價、TDM、藥物濫用、司法鑒定等提供準確的體內(nèi)藥物濃度數(shù)據(jù)和合理解釋4.代謝分型的應用5.內(nèi)源性物質(zhì)測定——為某些疾病的診斷及治療提供重要信息第16頁，共77頁。8/31/202516體內(nèi)藥物分析五體內(nèi)藥物分析的特點——由分析對象的特點所決定

1．干擾物質(zhì)多，樣品一般均需經(jīng)過分離、凈化后才能進行分析

——生物樣品中含有大量的內(nèi)源性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，以及代謝物、結(jié)合物等干擾分析2．樣品量少、不能重復取樣

——生物樣品多數(shù)在特定條件下采集，無法再次取樣，且濃度低、變化幅度大——測定前需濃縮、富集以適應分析方法要求

第17頁，共77頁。8/31/202517體內(nèi)藥物分析3．被測藥物和代謝物的濃度或活性極低

——對方法的靈敏度及專屬性要求較高

4．要求分析方法簡便、快速

——藥物濃度監(jiān)測和藥物濫用及毒物分析中5.工作量較大，隨著工作的深入開展，會成倍地甚或按指數(shù)級數(shù)6.測定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時不太容易

第18頁，共77頁。8/31/202518體內(nèi)藥物分析六體內(nèi)藥物分析的一般步驟分析方法建立分析方法的驗證體內(nèi)藥物分析的實際應用第19頁，共77頁。8/31/202519體內(nèi)藥物分析（一）對分析方法的新要求藥物服用的劑量越來越小、體液中藥物濃度越來越低，對體內(nèi)藥物分析方法提出了新的要求：1.檢測方法的高靈敏度——最低檢測量10-9~10-7g或10-15~10-12g2.分離方法的高選擇性、高專屬性

第20頁，共77頁。8/31/202520體內(nèi)藥物分析1.色譜法——GC、HPLC、HPCE2.免疫分析法——RIA、EIA3.聯(lián)用技術(shù)——GC-MS、LC-MS為滿足各項要求，最常用的分析方法有第21頁，共77頁。8/31/202521體內(nèi)藥物分析（二）體內(nèi)藥物分析的常用分析方法1.光譜法分光光度法、紫外光度法、熒光光度法特點：操作簡便，所需儀器一般臨床實驗室都具備，檢測成本低，便于推廣適于對治療血藥濃度水平較高，經(jīng)適當處理方法用光譜法能滿足臨床需要的藥物如阿司匹林、對乙酰氨基酚、氨茶堿、苯妥英鈉、苯巴比妥鈉等第22頁，共77頁。8/31/202522體內(nèi)藥物分析氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)特點：特異性、靈敏度和重復性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測聯(lián)用技術(shù)

如

GC-質(zhì)譜、HPLC-質(zhì)譜聯(lián)機檢測，更拓展了這類分析手段的性能2.色譜法第23頁，共77頁。8/31/202523體內(nèi)藥物分析3.免疫化學法主要有放射免疫法(RIA)、熒光免疫法(FIA)和酶免疫法(EIA)根據(jù)抗原-抗體反應的特異性，應用免疫化學法檢測半抗原或抗原性藥物，TDM應用的免疫化學法一般都采用競爭性免疫分析只有具備完全或半抗原性的藥物，并能制備特異性抗體，才可用免疫化學法進行TDM第24頁，共77頁。8/31/202524體內(nèi)藥物分析特點：免疫化學法靈敏度極高，大多可達ng甚至pg檢測水平，可滿足所有藥物TDM的要求；所需標本量少，預處理及測定操作簡便，并可制成商品化試劑盒；可利用一般生化、熒光自動分析儀進行自動化操作在體內(nèi)幾乎不發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化而以原型排泄的藥物，較少代謝物干擾，尤其適用于免疫法檢測，如慶大霉素等氨基甙類抗生素第25頁，共77頁。8/31/202525體內(nèi)藥物分析在體藥物分析示意圖微透析系統(tǒng)活體實驗動物微透析探針管子微注射器灌注液微注射泵檢測系統(tǒng)分析儀器第26頁，共77頁。8/31/202526體內(nèi)藥物分析治療藥物監(jiān)測（therapeuticdrugmonitoring，TDM）是自本世紀60年代起，在臨床藥理學、藥代動力學和臨床化學基礎上，結(jié)合現(xiàn)代分析檢測技術(shù)，形成和發(fā)展的一門應用性邊緣學科第二節(jié)治療藥物監(jiān)測第27頁，共77頁。8/31/202527體內(nèi)藥物分析

TDM

對臨床藥物治療的指導，主要是指設計或調(diào)整合理的給藥方案，同時為藥物過量中毒的診斷和處理提供有價值的實驗依據(jù)近年來國外又將其統(tǒng)稱為臨床藥代動力學監(jiān)測（ClinicalPharmacokineticMornitoring,CPM）第28頁，共77頁。8/31/202528體內(nèi)藥物分析通過靈敏可靠的方法，檢測病人血液或體液中的藥物濃度，獲取有關(guān)藥動學參數(shù)，應用藥代動力學理論，指導臨床合理用藥方案的制定和調(diào)整，以及藥物中毒的診斷和治療，以保證藥物治療的有效性和安全性，實現(xiàn)合理的給藥方案個體化一治療藥物監(jiān)測的主要任務第29頁，共77頁。8/31/202529體內(nèi)藥物分析①治療藥物監(jiān)測的核心目的是實現(xiàn)合理的給藥方案個體化②協(xié)助診斷和處理藥物過量中毒，及進行其臨床藥理學研究③了解患者是否遵醫(yī)囑用藥，提高用藥依從性二治療藥物監(jiān)測的目的第30頁，共77頁。8/31/202530體內(nèi)藥物分析①血藥濃度結(jié)果用于調(diào)整劑量，設計個體化給藥方案②一般只監(jiān)測一次血藥濃度，不測藥物經(jīng)時變化濃度③監(jiān)測方法要求快速、簡便、準確，以適應臨床需求治療藥物監(jiān)測與臨床藥代動力學研究的區(qū)別第31頁，共77頁。8/31/202531體內(nèi)藥物分析治療藥物監(jiān)測（TDM）利用各種分析技術(shù)測定血漿或組織中藥物的濃度，并根據(jù)藥代動力學的原理和公式來指導個體化給藥方案，以提高療效，避免或減少毒副作用的發(fā)生；為藥物過量中毒的診斷和處理提供實驗室依據(jù)三治療藥物監(jiān)測的意義第32頁，共77頁。8/31/202532體內(nèi)藥物分析據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）及我國衛(wèi)生部藥物不良反應監(jiān)測中心的統(tǒng)計資料均顯示，因用藥不當而致死者遠遠高于同期死于各種傳染病的人數(shù)。而用藥不當死亡者中，大多是劑量不當所致。隨著醫(yī)療技術(shù)整體水平的提高，在TDM指導下制定和調(diào)整個體化的合理用藥方案，是藥物治療學發(fā)展的必然趨勢

第33頁，共77頁。8/31/202533體內(nèi)藥物分析臨床治療中的常規(guī)血藥濃度監(jiān)測是指測定規(guī)律服用某藥物5個半衰期后已達穩(wěn)定的血藥濃度用一般劑量或超過一般劑量仍不能控制病情時，通過監(jiān)測可以了解病人是否規(guī)律用藥、代謝率是否加快、有無耐藥現(xiàn)象等

四何時需要進行治療藥物監(jiān)測第34頁，共77頁。8/31/202534體內(nèi)藥物分析聯(lián)合應用藥物，有可能影響藥物代謝時或需要了解藥物間的相互作用時伴發(fā)其他疾病(如肝、腎、胃、腸道疾病和低蛋白血癥)時藥物的有效血藥濃度范圍狹窄（代表藥物地高辛、奎尼丁等），在臨床上不易區(qū)分毒性反應和確定劑量時，特別是有效量和中毒量接近的藥物，通過測定可以及時調(diào)整藥量

第35頁，共77頁。8/31/202535體內(nèi)藥物分析某些藥物的毒副作用表現(xiàn)與某些疾病本身的癥狀相似，不能明確辯別時（如地高辛、速尿等）長期用藥的患者，依從性差；或產(chǎn)生耐藥性；以及原因不明的藥效變化時

出現(xiàn)特殊的癥狀和反應，懷疑是藥物中毒時第36頁，共77頁。8/31/202536體內(nèi)藥物分析以下情況下無需TDM監(jiān)測藥物本身具有客觀有效的效應指標時血藥濃度不能預測藥理作用強度時有效血藥濃度范圍寬的藥物，一般也不需要做TDM第37頁，共77頁。8/31/202537體內(nèi)藥物分析患者接受監(jiān)測品種的藥物治療時，是否需要監(jiān)測血藥濃度，應根據(jù)臨床具體情況判斷。藥師應協(xié)助臨床嚴格把握TDM適應癥，避免不必要的TDM申請五進行治療藥物監(jiān)測應注意的問題1．嚴格把握TDM適應癥，避免不必要的血藥濃度測定第38頁，共77頁。8/31/202538體內(nèi)藥物分析2．快速提供準確的血藥濃度測定結(jié)果3．直接面對臨床開展TDM工作藥師往往同時承擔實驗室技術(shù)人員、臨床藥師的雙重任務，在做好實驗室工作的同時，應深入臨床，開展血藥濃度的解釋、利用工作4．具體工作中熟練運用專業(yè)技能第39頁，共77頁。8/31/202539體內(nèi)藥物分析六監(jiān)測的藥物種類

1）強心苷類 2）抗心律失常藥 3）抗癲癇藥 4）三環(huán)類抗抑郁藥、抗狂躁藥 5）抗哮喘藥 6）氨基糖苷類及其他抗生素、抗腫瘤藥 7）免疫抑制劑及抗風濕藥等需要指出的是，濫用TDM將造成不必要的浪費，應根據(jù)監(jiān)測的原則和臨床指征，確定有無必要進行常規(guī)化監(jiān)測第40頁，共77頁。8/31/202540體內(nèi)藥物分析需進行TDM的主要藥物分類藥品強心甙地高辛、洋地黃毒苷抗心律失常藥利多卡因、普魯卡因胺、奎尼丁、乙胺碘呋酮、因卡胺、異丙吡胺等抗癲癇藥苯妥英銨、苯巴比妥、乙琥胺、卡馬西平、丙戊酸鈉β受體阻斷劑普萘洛爾、美托洛爾、阿替洛爾平喘藥氨茶堿抗抑郁藥丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等抗躁狂癥藥碳酸鋰解熱鎮(zhèn)痛藥阿司匹林、對乙酰氨基酚抗生素慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素等抗惡性腫瘤藥甲氯蝶呤等免疫抑制劑環(huán)孢素利尿藥呋塞米（速尿）第41頁，共77頁。8/31/202541體內(nèi)藥物分析七治療藥物監(jiān)測與體內(nèi)藥物分析的關(guān)系治療藥物監(jiān)測的要求促進了體內(nèi)藥物分析學科的發(fā)展體內(nèi)藥物分析學為治療藥物監(jiān)測提供分析方法和技術(shù)支持體內(nèi)藥物分析的發(fā)展和技術(shù)進步反過來促進了治療藥物監(jiān)測的發(fā)展和完善第42頁，共77頁。8/31/202542體內(nèi)藥物分析一、生物樣品的種類、采集和制備

血液(血漿、血清)—體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系——最常用的生物樣本

生物樣品臟器組織體液血液、尿液、唾液、毛發(fā)、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、糞便等第三節(jié)生物樣品的預處理第43頁，共77頁。8/31/202543體內(nèi)藥物分析（一）樣品的采集1．血樣血樣濃度與作用點的濃度密切相關(guān)，可以反映靶器官的濃度。血細胞血漿（plasma）血小板血清（serum）血細胞測定血樣中平均分布于細胞內(nèi)和細胞外的藥濃抗凝自然全血血液第44頁，共77頁。8/31/202544體內(nèi)藥物分析

血樣主要應用于：

藥物動力學生物利用度臨床治療藥物濃度監(jiān)測第三章生物樣品與樣品制備第一節(jié)生物樣品的種類采集血樣的應用第45頁，共77頁。8/31/202545體內(nèi)藥物分析2．尿樣目的：藥物劑量回收，藥物清除率，生物利用度和，預測藥物代謝過程、類型體內(nèi)藥物清除主要是通過尿液排出，藥物以原型、Ⅰ相及Ⅱ相代謝物等多種形式排出特點：濃度高，易于收集，體內(nèi)代謝研究，應水解分離第46頁，共77頁。8/31/202546體內(nèi)藥物分析3．唾液一些藥物的唾液藥濃(S)與血漿游離藥濃(P)密切相關(guān)，因此： —TDM中利用對S的測定代替對P的監(jiān)測 —藥代動力學的研究

收集方法離心收集第47頁，共77頁。8/31/202547體內(nèi)藥物分析（二）樣品的貯藏1．血樣（血漿、血清）及時分離→冷藏，-70℃加入穩(wěn)定劑NaF2．尿樣①尿中水、無機鹽、尿素等細菌的生長，4℃保存②加入防腐劑a．1%甲苯b．飽和氯仿c．pH改變3．唾液：同血樣第48頁，共77頁。8/31/202548體內(nèi)藥物分析二、生物樣品的預處理（一）預處理的目的①存在形式的多樣性游離結(jié)合代謝物②濃度低，雜質(zhì)多（分離濃縮）③出現(xiàn)渾濁和沉淀④與試劑起反應⑤影響色譜柱壽命第49頁，共77頁。8/31/202549體內(nèi)藥物分析（二）處理方法選擇的一般原則1．藥物理化性質(zhì)pKa親脂性揮發(fā)性溶解度光譜特征穩(wěn)定性2．濃度范圍靈敏的方法3．測定的目的定性定量母體代謝4．生物樣品的種類5．樣品處理與分析方法的選擇①專一性②靈敏性第50頁，共77頁。8/31/202550體內(nèi)藥物分析（三）生物樣品去蛋白處理1．加入與水能混溶的有機溶劑及中性鹽甲醇乙腈甲醇1:2乙腈1:1.5（NH4）2SO4NaCl2．加入酸性沉淀劑三氯醋酸高氯酸苦味酸等使蛋白質(zhì)分子的陽離子形成不溶性鹽而↓，pH低于等電點第51頁，共77頁。8/31/202551體內(nèi)藥物分析3．組織酶消化法加入酶使蛋白質(zhì)水解優(yōu)點：①平衡條件下進行，可避免反應和降解②可改善對蛋白結(jié)合率強的藥物的回收率③不產(chǎn)生乳化4．其他加熱超濾第52頁，共77頁。8/31/202552體內(nèi)藥物分析（四）生物樣品中綴合物水解1．酸水解2．酶水解β-葡萄糖醛酸苷酶芳基硫酸酯酶混合酶pH4.5-7.037℃3．溶劑解某些藥物的硫酸酯，往往加入率取溶劑時發(fā)生分解，同時提取有機溶劑中第53頁，共77頁。8/31/202553體內(nèi)藥物分析（五）生物樣品的萃取1．液-液萃?。?）優(yōu)點：①與雜質(zhì)分離②簡便③濃集④提取率高（2）提取率：在有機相與水相中的溶解度的比值分配系數(shù)，一般少量多次，對生物樣品一般一次萃取，>70%重現(xiàn)性第54頁，共77頁。8/31/202554體內(nèi)藥物分析（3）影響提取率的因素①pH堿性藥物在堿性pH酸性酸性pH②提取溶劑相似相溶原理沸點低，不影響檢測,性質(zhì)穩(wěn)定，不起化學反應③離子強度加入中性鹽增加離子強度，與水結(jié)合強，便于有機溶劑提取第55頁，共77頁。8/31/202555體內(nèi)藥物分析（4）離子對提取對于離子性特強，水溶性極大的藥物，可采用離子對提?、僭恝趹藐庪x子：COOH+SO3H-反離子四丁基銨陽離子：NH2+反離子烷基或芳基磺酸鹽（5）提取技術(shù)一般在試管中進行,有機相與水相比1:1或2:1第56頁，共77頁。8/31/202556體內(nèi)藥物分析（6）乳化問題措施①輕緩振搖②含有分散度大或不溶物應過濾掉③避免在高pH條件下，從水中提取藥物④避免使用易發(fā)生乳化的溶劑⑤萃取劑水中加入少量NaCl第57頁，共77頁。8/31/202557體內(nèi)藥物分析破乳方法①機械法②加入少量高級脂肪醇改變表面張力③改善混合溶劑比例，增加分散相分數(shù)（7）藥物的吸附①玻璃容器吸附1%三甲一氯硅烷10%二甲二氯硅烷②血漿第58頁，共77頁。8/31/202558體內(nèi)藥物分析2．液固萃取固相萃取[solidphaseextractionSPE]針管式抽空減壓加壓過濾第59頁，共77頁。8/31/202559體內(nèi)藥物分析（1）固相萃取步驟①固相選擇樣品1ml1ml規(guī)格固相1~25ml3ml規(guī)格固相②固相處理反相C18固定相的6~10倍體積甲醇洗柱，使溶劑化；6~10倍水緩沖服液沖洗達分離狀態(tài)③上樣④分離用適當?shù)娜跞軇┫礈煜慈ルs質(zhì)，通N2干燥固相⑤洗脫待測物改變pH或極性第60頁，共77頁。8/31/202560體內(nèi)藥物分析（2）影響固相萃取的因素①流速流速快，按觸不充分，樣品流失回收率低柱處理5~10ml·min-1洗脫0.2~1ml·min-1（〈300mg〉2~5ml·min-1（>300mg）②裝樣過載突破性試驗已知濃度樣品液小體積上柱→洗脫回收百分率加大體積→洗脫回收百分率繪圖當回收率下降時為過載第61頁，共77頁。8/31/202561體內(nèi)藥物分析（六）生物樣品的組分濃集（七）衍生化處理GC衍生化HPLC衍生化第62頁，共77頁。8/31/202562體內(nèi)藥物分析第四節(jié)體內(nèi)藥物分析方法的建立與評價一、分析方法靈敏度專屬性光譜法++剛開始應用較多雙波長，導數(shù)色譜法++++++HPLCGC免疫法++++++免疫交叉反應，重現(xiàn)性差根據(jù)藥物理化性質(zhì)，結(jié)構(gòu)特征，藥物濃度，干擾成分大小，實驗目的第63頁，共77頁。8/31/202563體內(nèi)藥物分析二、分析方法的設計依據(jù)方法的建立原始方法改進→創(chuàng)新創(chuàng)立方法第64頁，共77頁。8/31/202564體內(nèi)藥物分析1．做好文獻總結(jié)2．充分了解藥物特征及體內(nèi)狀況pH、親脂性、溶解度、極性、光譜特征、藥動學參數(shù)、體內(nèi)代謝情況3．明確測定目的、要求目的藥濃監(jiān)測藥代動力學研究母體藥物和代謝物4．結(jié)合實驗室條件設備條件預處理方法第65頁，共77頁。8/31/202565體內(nèi)藥物分析三、分析方法的建立1．純品進行測定確定線性范圍、靈敏度、反應條件（pH、t、T）2．空白樣品測定確定空白樣品是否有干擾3．以水代替空白樣品，加標準液后測定了解提取率、檢測濃度確定萃取條件、pH、揮發(fā)濃縮等4．空白樣品加入標準液測定標準曲線建立回歸方程回收率5．實驗樣品測定第66頁，共77頁。8/31/202566體內(nèi)藥物分析四、分析方法的評價可行性和可靠性1．準確度accuracy測定結(jié)果與真實性的差異用回收率表示①接近100%②相對恒定第67頁，共77頁。8/31/202567體內(nèi)藥物分析①絕對回收率也稱萃取回收率、提取回收率測定血漿樣品中藥物濃度/相同濃度的標準液=絕對回收率考慮3個濃度（高、中、低）分布在標準曲線成上、中、下一般要求絕對回收率在≥70%一般方法 HPLC內(nèi)標內(nèi)標法時注意：藥物與內(nèi)標用各自外標法測定回收率應相近，差值<10%第68頁，共77頁。8/31/202568體內(nèi)藥物分析②相對回收率方法回收率藥物系列濃度+血樣→標準曲線取高、中、低三濃度加入到空白血漿中，處理后測定，與加入標準量相比，得方法回收率，測定值<15%，定量限<20%注意問題：