衣原體的基因檢測第1頁，共25頁。衣原體的基因檢測第2頁，共25頁。

第十章感染性疾病的分子診斷

陳沙第3頁，共25頁。第三節(jié)衣原體的基因檢測第4頁，共25頁。題名：超高倍顯微鏡與安圖生物檢驗試劑檢測衣原體和支原體的分析

作者：黃位強(qiáng)出處：《檢驗醫(yī)學(xué)與臨床》

2012年第17期摘要：目的探討超高倍鏡在檢測衣原體和支原體方面應(yīng)用的準(zhǔn)確度。了解健康人群的支原體和衣原體健康攜帶情況。方法對2011年4～11月到賀州市中醫(yī)醫(yī)院作婦科健康體檢的512例婦女進(jìn)行陰道分泌物超...第5頁，共25頁。題名：支原體衣原體感染在不孕癥中的影響

作者：張艷萍出處：《中國醫(yī)藥科學(xué)》

2012年第14期摘要：目的探討支原體和衣原體感染在不孕癥中的影響。方法選取2010年1月～2012年1月來筆者所在醫(yī)院就診的不孕癥婦女36例作為觀察組;另外選取同期的正常生育婦女36例作為對照組。支原體檢驗培…第6頁，共25頁。題名：淺談沙眼衣原體感染與母嬰傳播的關(guān)系

作者：韋新文出處：《求醫(yī)問藥：下半月刊》

2012

摘要：目的探討本地區(qū)泌尿生殖道感染患者支原體、衣原體感染狀況。方法衣原體抗原檢測采用單克隆抗體金標(biāo)法;支原體檢測采用液體培養(yǎng)法。結(jié)果1226例標(biāo)本中檢出支原體453例,總陽性率為36.9%,其...第7頁，共25頁。目錄衣原體（chlamydia）的定義衣原體特點衣原體結(jié)構(gòu)衣原體的分類衣原體的發(fā)展第8頁，共25頁。沒有肽聚糖，小基因組；能通過細(xì)胞濾器，有獨特發(fā)育周期、嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物在自然界中傳播廣泛；專性細(xì)胞內(nèi)寄生，一般寄生在動物細(xì)胞內(nèi)；一

、衣原體（chlamydia）的定義什么是衣原體第9頁，共25頁。二、衣原體特點具有DNA和RNA兩種核酸，二分裂增殖，有核糖體和黏肽組成的細(xì)胞壁；衣原體基因組的Mr為660×10６,比除支原體外的任何原核生物都??；其生活周期分為細(xì)胞外期（即有感染性的原體）和細(xì)胞內(nèi)期（即增殖性的始體）兩個時期；第10頁，共25頁。原體（elementarybody，EB）：有感染性，體積小，卵圓形，電子密度大，直徑為0.2～0.4微米，細(xì)胞壁厚，一種不能運動的球狀細(xì)胞，對外界不良環(huán)境抵抗力強(qiáng)。始體（initialbody）亦稱網(wǎng)狀體(reticulatebody，RB)無感染性：球狀細(xì)胞，形體較大,呈圓形或不規(guī)則形，電子密度較小，直徑約為0.3～0.5微米，細(xì)胞壁薄，壁中結(jié)構(gòu)松散以二分裂進(jìn)行繁殖，產(chǎn)生小細(xì)胞。

三、衣原體結(jié)構(gòu)中間體(Intermediatebody)：存在的一種過渡形態(tài)。第11頁，共25頁。衣原體與細(xì)菌的主要區(qū)別：缺乏合成生物能量來源的ATP酶，其能量完全依賴被感染的宿主細(xì)胞提供。衣原體和其他微生物的區(qū)別衣原體與病毒的主要區(qū)別：具有DNA、RNA兩種核酸、核糖體和一個近似細(xì)胞壁的膜，并以二分裂方式進(jìn)行增殖，能被抗生素抑制。第12頁，共25頁。四、衣原體分類沙眼衣原體(C.trachomatis)

肺炎衣原體(C.pneumoniae)鸚鵡熱衣原體(C.psitta)

反芻動物衣原體(C.pecorum)第13頁，共25頁。一、沙眼衣原體

不僅能引起眼科的感染性疾病，還可以引起泌尿生殖道、呼吸道感染等。其中以沙眼最常見。而且是致盲的首位因素。人類是其主要的自然宿主。第14頁，共25頁。①：CT血清型D基因組長1042519bp，含有894個蛋白編碼基因，G+C含量為41.3%，另一個是7493bp的隱蔽性質(zhì)?；?。（一）.沙眼衣原體（CT）基因組結(jié)構(gòu)②：根據(jù)CT的核酸組織具有真核樣特性和為適應(yīng)專性細(xì)胞內(nèi)寄生所進(jìn)行的復(fù)雜進(jìn)化。第15頁，共25頁。（二）診斷方法：一：傳統(tǒng)的實驗室檢測CT：①：細(xì)胞培養(yǎng)法檢測衣原體包涵體（缺點：費時費事，成本高，技術(shù)難度高，難以普及）②：血清學(xué)實驗:如熒光抗體法或酶標(biāo)抗體法（缺點：越來越不能滿足臨床要求）第16頁，共25頁。二：分子診斷方法1：PCRPCR的特異性主要取決于引物的特異性。PCR擴(kuò)增所選靶序列主要有主要外膜蛋白（MOMP）、隱蔽性質(zhì)粒和16SrRNA基因序列2：LCR

（ligasechainreaction）連接酶鏈反應(yīng)。其擴(kuò)增效率與PCR相當(dāng)，最大特點為可區(qū)分基因序列中的單個基因突變。由Landegree于1988年首次應(yīng)用于鐮刀形紅細(xì)胞貧血的分子診斷。第17頁，共25頁。什么是LCR？連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction）：是繼PCR后，新出現(xiàn)的一種更加完善的DNA體外擴(kuò)增和檢測技術(shù)，在檢測點突變等方面具有獨特的優(yōu)點。該技術(shù)是利用DNA連接酶構(gòu)建共價磷酸鍵，特異地連接雙鏈DNA，經(jīng)加熱變性、退火和連接等步驟后，再多次反復(fù)循環(huán)，從而使目的DNA得以大量擴(kuò)增。第18頁，共25頁。LCR主要用途：1：單堿基突變遺傳病的檢測2：病原微生物種和亞種的檢測3：進(jìn)行多位點同時定向誘變第19頁，共25頁。二、肺炎衣原體

肺炎衣原體（CP）是衣原體屬中的一個新種，只有一個血清型，其代表株為TW-183和AR-39。因兩株衣原體的血清型完全相同，合并稱TWAR組衣原體，98kD蛋白為其特異性抗原。第20頁，共25頁。（一）.肺炎衣原體（CP）基因組結(jié)構(gòu)ＣＰCWL-029株基因組含1230230bp，含有1073個蛋白編碼基因，G+C含量為40.6%，其中636個基因的功能已確定，251個基因和CT等同源，為蛋白編碼基因。ＣＰ有21個多形膜蛋白基因，比沙眼衣原體多12個。多集中于2個染色體區(qū)域，有三個則單獨存在。第21頁，共25頁。（二）診斷方法：一：傳統(tǒng)的實驗室檢測CP：細(xì)胞培養(yǎng)法檢測免疫學(xué)方法（缺點：陽性率低，特異性差，臨