廣西pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題，20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸雜交反應(yīng)C.基因測序反應(yīng)D.蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)答案：A2.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.60℃答案：B3.PCR反應(yīng)體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.dNTPC.限制性內(nèi)切酶D.引物答案：C4.引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B5.進(jìn)行PCR反應(yīng)時，變性的目的是（）A.使引物與模板結(jié)合B.使Taq酶發(fā)揮活性C.使雙鏈DNA解開成單鏈D.合成新的DNA鏈答案：C6.以下哪種疾病不能用PCR技術(shù)檢測（）A.艾滋病B.乙型肝炎C.闌尾炎D.禽流感答案：C7.PCR反應(yīng)的循環(huán)數(shù)一般為（）A.10-15次B.15-20次C.25-35次D.40-50次答案：C8.以下關(guān)于PCR引物的說法錯誤的是（）A.引物是人工合成的寡核苷酸序列B.引物與模板鏈的3’端互補C.引物的G+C含量應(yīng)盡量高D.引物自身不能有互補序列答案：C9.在PCR實驗中，污染主要來源于（）A.實驗器材B.操作人員C.擴增產(chǎn)物D.以上都是答案：D10.實時熒光定量PCR技術(shù)的原理是（）A.監(jiān)測PCR過程中熒光信號的變化B.對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析C.對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序D.對PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題，20分）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.動植物育種答案：ABCD2.PCR反應(yīng)體系中的主要成分有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD3.設(shè)計引物時需要考慮的因素有（）A.引物長度B.引物的Tm值C.引物的G+C含量D.引物之間的互補性答案：ABCD4.PCR反應(yīng)可能出現(xiàn)的問題有（）A.非特異性擴增B.引物二聚體形成C.擴增產(chǎn)物量過少D.擴增產(chǎn)物降解答案：ABCD5.以下哪些物質(zhì)可以作為PCR反應(yīng)的模板（）A.基因組DNAB.cDNAC.線粒體DNAD.病毒核酸答案：ABCD6.實時熒光定量PCR的優(yōu)點有（）A.靈敏度高B.特異性強C.能定量分析D.操作簡便答案：ABC7.PCR實驗室的分區(qū)包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD8.防止PCR污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期清潔實驗室C.使用帶濾芯的槍頭D.對實驗器材進(jìn)行高壓滅菌答案：ABCD9.Taq酶的特點包括（）A.具有5’→3’聚合酶活性B.具有3’→5’外切酶活性C.耐高溫D.對Mg2?濃度有一定要求答案：ACD10.以下屬于PCR相關(guān)技術(shù)的有（）A.RT-PCRB.MultiplexPCRC.巢式PCRD.原位PCR答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題，20分）1.PCR技術(shù)可以擴增任意長度的DNA片段。（）答案：錯2.引物的Tm值越高，其與模板的結(jié)合越穩(wěn)定。（）答案：對3.進(jìn)行PCR實驗時，模板DNA的濃度越高越好。（）答案：錯4.Taq酶沒有3’→5’外切酶活性，所以PCR擴增的準(zhǔn)確性相對較低。（）答案：對5.實時熒光定量PCR可以對基因表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。（）答案：對6.PCR實驗室只要做好清潔，不需要嚴(yán)格分區(qū)。（）答案：錯7.引物二聚體的形成會影響PCR擴增效果。（）答案：對8.非特異性擴增是PCR反應(yīng)中不可避免的問題，無法解決。（）答案：錯9.不同的Taq酶對Mg2?濃度的要求可能不同。（）答案：對10.只要引物設(shè)計合理，PCR反應(yīng)就一定能成功。（）答案：錯四、簡答題（每題5分，共4題，20分）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)以擬擴增的DNA為模板，在引物、dNTP、Taq酶等存在下，經(jīng)高溫變性使雙鏈DNA解開成單鏈，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環(huán)實現(xiàn)特定DNA片段的大量擴增。2.簡述引物設(shè)計的基本原則。答案：長度15-30bp；Tm值在55-65℃；G+C含量40%-60%；避免引物自身或引物之間互補形成二聚體；引物3’端堿基要與模板嚴(yán)格配對。3.列舉三種常見的PCR反應(yīng)問題及解決方法。答案：非特異性擴增，可調(diào)整退火溫度、優(yōu)化引物等；引物二聚體，重新設(shè)計引物、調(diào)整引物濃度；擴增產(chǎn)物量過少，增加模板量、優(yōu)化反應(yīng)條件。4.簡述實時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴增，熒光信號強度與擴增產(chǎn)物量成正比，通過監(jiān)測熒光信號變化，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對起始模板量進(jìn)行定量分析。五、討論題（每題5分，共4題，20分）1.討論PCR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢是靈敏度高、特異性強、快速，能早期診斷疾病。局限性在于易污染致假陽性，對實驗條件和技術(shù)要求高，且某些疾病難以靠它全面診斷，需結(jié)合其他方法。2.結(jié)合實際，談?wù)勅绾巫龊肞CR實驗室的質(zhì)量控制。答案：嚴(yán)格分區(qū)，防止交叉污染；規(guī)范實驗操作，如正確加樣、使用帶濾芯槍頭；定期校準(zhǔn)儀器；對實驗試劑進(jìn)行質(zhì)量檢測；做好人員培訓(xùn)和考核，保證操作規(guī)范。3.探討PCR技術(shù)在法醫(yī)鑒定中的應(yīng)用及意義。答案：可用于分析微量生物樣本DNA，如血液、毛發(fā)等，通過STR等技術(shù)進(jìn)行個體識