合成橡膠膠乳微生物的測定

編制說明

1工作簡況

1.1任務(wù)來源

根據(jù)國標(biāo)委發(fā)〔2023〕58號(hào)《國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第三批推薦性國

家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外文版計(jì)劃的通知》，國家標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目《合成橡膠膠乳微生物的

測定》（項(xiàng)目編號(hào)20231123-T-606），由中國石油和化學(xué)工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出，全國橡膠與橡膠制

品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)合成橡膠分技術(shù)委員會(huì)（以下簡稱全國橡標(biāo)委合成橡膠分技術(shù)委員會(huì)）

歸口，中國石油天然氣股份有限公司石油化工研究院所負(fù)責(zé)起草。

1.2制定背景

合成橡膠膠乳是我國重要的工業(yè)原材料，其產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用到日常生活的各個(gè)方面，

如紡織品，紙張，手套，涂層和膠黏劑等。合成橡膠膠乳在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中容易受到微

生物的污染。除非采取預(yù)防措施，例如保持高的pH、添加殺菌劑以及檢查和清潔儲(chǔ)罐，否

則這些微生物可能會(huì)大量繁殖，最終產(chǎn)生難聞的氣味，并改變膠乳的化學(xué)和物理性質(zhì)。因

此在膠乳發(fā)生上述變化之前能夠檢測到微生物的存在是非常必要的。

目前國際上測定合成橡膠膠乳微生物的標(biāo)準(zhǔn)是ISO20851:2017，該標(biāo)準(zhǔn)代替了ISO

9252:1989。ISO9252:1989規(guī)定的測定方法對人員及環(huán)境有較高的要求，操作人員需要接

受微生物技術(shù)培訓(xùn)并且具有一定的經(jīng)驗(yàn)，或需在專業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；且測試方法

復(fù)雜耗時(shí)，因而被廢止。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，先進(jìn)的微生物檢測方法不斷出現(xiàn)，基

于細(xì)菌菌落總數(shù)測試片的微生物測定方法在世界范圍內(nèi)得到廣泛應(yīng)用，ISO20851:2017就

是基于該方法進(jìn)行合成橡膠膠乳中微生物的測定，該方法能夠顯著減少實(shí)驗(yàn)前制備培養(yǎng)基

等大量的準(zhǔn)備工作及實(shí)驗(yàn)后的儀器清洗和滅菌工作，且不需配備專業(yè)人員和微生物實(shí)驗(yàn)室，

測試片可現(xiàn)場直接測定，因此較大程度的提高了工作效率。

我國作為合成橡膠膠乳生產(chǎn)大國，尚無測定合成橡膠膠乳微生物的標(biāo)準(zhǔn)。由于合成橡

膠膠乳受到微生物的污染后會(huì)影響橡膠膠乳的應(yīng)用，如在造紙工業(yè)中，會(huì)使紙張產(chǎn)生霉點(diǎn)；

在浸漬工業(yè)中，與身體接觸的制品，如手套等中的微生物可能會(huì)導(dǎo)致人體受到傷害。因此

膠乳中是否存在微生物以及其污染程度已經(jīng)引起了生產(chǎn)廠和用戶的廣泛關(guān)注。由此可見，

適時(shí)轉(zhuǎn)化國際標(biāo)準(zhǔn)為我國標(biāo)準(zhǔn)，為國內(nèi)用戶提供一種簡便，快速測定膠乳微生物的方法標(biāo)

準(zhǔn)是非常必要。此外，該標(biāo)準(zhǔn)的制定將進(jìn)一步完善我國標(biāo)準(zhǔn)體系，對我國標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)

接軌，減少技術(shù)性貿(mào)易壁壘，適應(yīng)國際貿(mào)易的需要具有重要意義。

1

1.3起草過程

1.3.1成立工作組

2023年12月，在國家標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目計(jì)劃下達(dá)后，成立了標(biāo)準(zhǔn)制定工作組，擬定工作方

案，進(jìn)行了任務(wù)分工。

1.3.2工作組討論稿階段

2024年1月，修改完善了工作組討論稿，制定了詳細(xì)的試驗(yàn)方案。

2024年2月，完成試驗(yàn)用設(shè)備和樣品的準(zhǔn)備。

2024年3-6月，完成驗(yàn)證試驗(yàn)工作并編寫試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告。

1.3.3征求意見階段

2024年6月，完成征求意見稿（包括標(biāo)準(zhǔn)文本、編制說明），提交全國橡標(biāo)委合成橡

膠分技術(shù)委員會(huì)秘書處。

1.4起草單位及起草人

1.4.1起草單位

中國石油天然氣股份有限公司石油化工研究院

1.4.2起草人及任務(wù)分工

起草人及任務(wù)分工見表1。

表1起草人及任務(wù)分工

起草人任務(wù)分工

2編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)

2.1編制原則

2.1.1按GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和

GB/T1.2—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件

起草規(guī)則》的規(guī)定編制，使標(biāo)準(zhǔn)在結(jié)構(gòu)、語言表述和編排格式上符合統(tǒng)一的要求。

2.1.2根據(jù)我國合成橡膠膠乳微生物測定的技術(shù)要求以及當(dāng)前技術(shù)水平，遵循科學(xué)性、合

理性、經(jīng)濟(jì)性和可操作性的原則進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的制定。

2.1.3在標(biāo)準(zhǔn)的名稱、技術(shù)要求結(jié)構(gòu)和內(nèi)容、用語等方面與橡膠和橡膠制品標(biāo)準(zhǔn)體系保持

一致。

2.2主要內(nèi)容

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了一種測定合成橡膠膠乳中是否存在好氧（活性需氧）和兼性厭氧微生物

及其近似計(jì)數(shù)的方法。

2

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于微生物的鑒定。

2.3確定主要內(nèi)容的依據(jù)

按照ISO20851:2017《合成橡膠膠乳微生物的測定》規(guī)定的技術(shù)內(nèi)容進(jìn)行本標(biāo)準(zhǔn)的制

定，規(guī)定了采用預(yù)先制備好的培養(yǎng)基測試片測定膠乳中微生物的相關(guān)技術(shù)內(nèi)容，包括術(shù)語

和定義、原理、對試劑、儀器以及取樣的要求、測試程序、微生物計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)、已用測試

片和設(shè)備的處置等技術(shù)內(nèi)容等。

3試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告、技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證以及預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益

3.1試驗(yàn)驗(yàn)證的分析和綜述報(bào)告

見附件：《合成橡膠膠乳微生物的測定》試驗(yàn)總結(jié)。

3.2預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益

合成橡膠膠乳作為橡膠產(chǎn)品重要的組成部分，與人們的日常生活息息相關(guān)，用途十分

廣泛。丁苯膠乳主要用于紙涂布和纖維（以地毯為主）處理；聚丁二烯膠乳主要用于抗沖

樹脂（ABS，HIPS等）的合成；丁腈膠乳主要用于以手套為代表的浸漬制品；氯丁膠乳主

要用于膠粘劑。因此，合成橡膠膠乳在橡膠工業(yè)中占有重要地位，未來前景也十分廣闊。

該項(xiàng)工作完成后，可為我國合成橡膠膠乳生產(chǎn)廠家、用戶，質(zhì)檢部門和科研機(jī)構(gòu)提供

一種快速簡便的微生物測定方法標(biāo)準(zhǔn)；生產(chǎn)廠和用戶能夠按照該標(biāo)準(zhǔn)方便的測定合成橡膠

膠乳中是否存在微生物及其數(shù)量，以便采取預(yù)防措施或處理措施，確保膠乳在儲(chǔ)存，運(yùn)輸

過程中不因微生物污染而變質(zhì)，從而節(jié)約成本；質(zhì)檢機(jī)構(gòu)可以按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)和仲

裁；科研單位可以按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行合成橡膠膠乳微生物污染機(jī)理的進(jìn)一步研究。此外，該標(biāo)

準(zhǔn)將為我國橡膠膠乳行業(yè)提供一個(gè)統(tǒng)一的、世界可比性的方法標(biāo)準(zhǔn)，與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌，從

而消除貿(mào)易壁壘。

4與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對比情況

目前國際上測定合成橡膠膠乳微生物的標(biāo)準(zhǔn)是ISO20851:2017。該標(biāo)準(zhǔn)采用細(xì)菌菌落

總數(shù)測試片測定合成橡膠膠乳中的微生物，其原理是將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在載

體上面，通過微生物在其上面的生長、顯色情況來測定微生物。目前菌落總數(shù)測試片除廣

泛應(yīng)用于食品和水質(zhì)的微生物檢驗(yàn)外；在化工領(lǐng)域也得到了大量應(yīng)用，如測定潤滑油、冷

卻液、涂料和燃油等產(chǎn)品中的微生物。該方法能夠顯著減少實(shí)驗(yàn)前制備培養(yǎng)基等大量的準(zhǔn)

備工作及實(shí)驗(yàn)后的儀器清洗和滅菌工作，具有節(jié)省時(shí)間、操作簡便、節(jié)省培養(yǎng)空間等優(yōu)點(diǎn)；

此外，該方法不需配備專業(yè)人員和微生物實(shí)驗(yàn)室，測試片可現(xiàn)場直接測定，因此較大程度

的提高了工作效率。

3

國內(nèi)采用細(xì)菌菌落總數(shù)測試片測定微生物的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)主要集中在食品領(lǐng)域，如GB

4789.2—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》及SN/T4544.1—

2016《商品化試劑盒檢測方法菌落總數(shù)方法一》；合成橡膠領(lǐng)域尚無相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，因此可

以修改采用ISO20851:2017制定國家標(biāo)準(zhǔn)。

5以國際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況，以及是否合規(guī)引用或者采用國際國外標(biāo)準(zhǔn)

本文件修改采用ISO20851:2017《合成橡膠膠乳微生物的測定》，符合國際標(biāo)準(zhǔn)修改

采用規(guī)則。本文件與ISO20851:2017的具體差異如下：

（1）技術(shù)性差異及其原因

a)用規(guī)范性引用的GB/T8290代替了ISO123，刪除了ISO7218，以適應(yīng)我國對膠乳

取樣的規(guī)定；

b)增加了無菌水的制備，便于標(biāo)準(zhǔn)的使用；

c)更改了取樣設(shè)備的滅菌要求，采用高壓滅菌后的設(shè)備取樣，以適應(yīng)我國測定膠乳微

生物的情況；

d)增加了樣品需要稀釋的情況：當(dāng)樣品微生物計(jì)數(shù)大于107CFU/mL，則用無菌水稀

釋，便于確定微生物污染情況；

e)更改了36℃下培養(yǎng)微生物的時(shí)間：根據(jù)微生物培養(yǎng)情況，培養(yǎng)時(shí)間由24h可延長

至36h，便于標(biāo)準(zhǔn)的使用。

（2）結(jié)構(gòu)調(diào)整

a)將資料性附錄B“微生物計(jì)數(shù)的說明”移至9.2，并修改9.2條名稱“說明”為“微

生物計(jì)數(shù)說明”。

（3）編輯性修改

a)增加了稀釋樣品后，實(shí)際微生物計(jì)數(shù)結(jié)果如何表述的示例。

6與有關(guān)的法律、行政法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

本標(biāo)準(zhǔn)是對已有橡膠類國家標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充、完善，與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章及相關(guān)

標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。

7重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)

本標(biāo)準(zhǔn)在制定過程中未出現(xiàn)重大意見分歧。

8涉及專利的有關(guān)說明

本標(biāo)準(zhǔn)修訂的內(nèi)容未涉及專利。

9實(shí)施國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，以及組織措施、技術(shù)措施、過渡期和實(shí)施日期的建議等措施建議

4

9.1建議本文件批準(zhǔn)發(fā)布6個(gè)月后實(shí)施

9.2本標(biāo)準(zhǔn)宣貫時(shí)應(yīng)包括下列內(nèi)容

（1）介紹本標(biāo)準(zhǔn)制定的原因、意義及過程；

（2）介紹和解釋本標(biāo)準(zhǔn)的主要技術(shù)內(nèi)容；

（3）本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施過程中可能遇到的問題及解決辦法。

9.3本標(biāo)準(zhǔn)宣貫時(shí)建議采用下列形式

（1）舉辦有關(guān)生產(chǎn)，使用企業(yè)和檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的有關(guān)人員參加的標(biāo)準(zhǔn)宣貫培訓(xùn)班；

（2）由本標(biāo)準(zhǔn)起草人員到有關(guān)企業(yè)和檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，對相關(guān)人員進(jìn)行現(xiàn)場宣講、示范操作。

10其他應(yīng)當(dāng)說明的事項(xiàng)

無。

5

附件

合成橡膠膠乳微生物的測定

試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告

1、前言

按照ISO20851:2017“Syntheticrubberlatex—Examinationformicroorganisms”，開展了

6種不同膠乳的微生物測定驗(yàn)證試驗(yàn)，并考察了添加殺菌劑，提高pH對合成橡膠膠乳中微

生物生長的抑制作用。

2、樣品、試劑與儀器

2.1樣品

收集了6種合成橡膠膠乳，其黏度，pH及污染情況等基本信息見表1。

表1試驗(yàn)樣品基本信息

膠乳編號(hào)黏度pH膠乳污染情況

SBRL-14.86.771被污染-未添加殺菌劑

XNBRL-143.48.256被污染-添加殺菌劑，過期膠乳

XNBRL-247.58.975未污染-添加殺菌劑

被污染-添加殺菌劑，使用和儲(chǔ)存過

XSBRL-147.17.016

程中污染

XSBRL-232.67.142未污染-添加殺菌劑

CRL-1（陰離子型）30.513.507未污染-未添加殺菌劑

2.2試劑和材料

2.2.1Easicult?TTC培養(yǎng)基測試片。

2.2.21mol/LNaOH溶液。

2.2.3蒸餾水。

2.3儀器

2.3.1培養(yǎng)箱：溫度能夠保持在36℃±1℃。

2.3.2高壓蒸汽滅菌器：可在121℃，103.43kPa的條件下工作。

2.3.3pH計(jì)：測量范圍0.001~14.000。

2.3.4燒杯。

2.3.5吸水紙。

2.3.6一次性滴管。

3、試驗(yàn)內(nèi)容

3.1被污染膠乳微生物的測定

3.2稀釋對膠乳微生物培養(yǎng)結(jié)果的影響

6

3.3pH對膠乳微生物培養(yǎng)結(jié)果的影響

3.4未被污染膠乳微生物的測定

4、膠乳微生物的測定及檢驗(yàn)

4.1試驗(yàn)準(zhǔn)備

對燒杯，吸水紙，稀釋用蒸餾水等進(jìn)行高壓滅菌：121℃滅菌20min。

4.2操作步驟

見標(biāo)準(zhǔn)草案第8章。

4.3微生物計(jì)數(shù)規(guī)則

將培養(yǎng)完成的測試片與商品自帶標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行比較，對微生物計(jì)數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)。比較測

試片兩側(cè)的計(jì)數(shù)，并報(bào)告較高的計(jì)數(shù)。結(jié)果以少于103、103、104、…~107等系列給出。標(biāo)

準(zhǔn)模板見圖1。

圖1標(biāo)準(zhǔn)模板

污染程度說明：

a）<103的計(jì)數(shù)：表明沒有明顯的微生物污染；

b）介于103到106的計(jì)數(shù)：說明輕微到中度污染；

c）>106的計(jì)數(shù)：表明受到嚴(yán)重污染。

4.4結(jié)果和討論

4.4.1被污染膠乳微生物的測定

在36℃培養(yǎng)被污染膠乳中的微生物12h~36h。培養(yǎng)結(jié)果及污染程度見表2。

7

表2被污染膠乳微生物培養(yǎng)結(jié)果

培養(yǎng)時(shí)間/h

膠乳編號(hào)

122436

SBRL-1

104CFU/mL>106CFU/mL>106CFU/mL

輕度污染嚴(yán)重污染嚴(yán)重污染

XSBRL-1

106CFU/mL107CFU/mL

中度污染嚴(yán)重污染

XNBRL-1

106CFU/mL

中度污染

由表2可知，3種被污染的膠乳在培養(yǎng)12h~36h后均有微生物生成。但3種膠乳中微

生物的生長趨勢有所差別，可以分為以下3種情況：

8

（1）嚴(yán)重污染膠乳，培養(yǎng)12h即有微生物生長，24h微生物計(jì)數(shù)已超過107CFU/mL。

如SBRL，由于其污染程度較為嚴(yán)重，在36℃培養(yǎng)12h時(shí)即已出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。當(dāng)培養(yǎng)24h

后，紅色占據(jù)整個(gè)測試片。

（2）輕度或中度污染膠乳，培養(yǎng)12h未見微生物生長，培養(yǎng)24h時(shí)微生物明顯生長，

并隨著培養(yǎng)時(shí)間增長，微生物就計(jì)數(shù)增加。如XSBRL，隨著培養(yǎng)時(shí)間增長，微生物計(jì)數(shù)由

106CFU/mL增至107CFU/mL。

（3）部分膠乳在36℃培養(yǎng)24h時(shí)仍未出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，但繼續(xù)培養(yǎng)至36h時(shí)，明顯觀

察到了大量紅色斑點(diǎn)。如XNBRL，這可能是因?yàn)槠渲幸恍┥L緩慢的機(jī)體在培養(yǎng)24h還

不能被觀察到。

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，對微生物培養(yǎng)不同時(shí)間，微生物計(jì)數(shù)可能不同。大部分細(xì)菌在

36℃時(shí)，培養(yǎng)24h~48h為其繁殖期最旺盛的狀態(tài)，最有利于觀察菌數(shù)及菌落形態(tài)。而超

過這個(gè)時(shí)間過長，一方面菌落可能枯萎（衰亡期），不能觀察正常的菌落形態(tài)，影響計(jì)數(shù)；

另一方面如果有霉菌，會(huì)出現(xiàn)孢子飛散，孢子又萌發(fā)成新的菌落，導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果虛高，不

準(zhǔn)確。因此需規(guī)定一個(gè)培養(yǎng)時(shí)間以確定微生物計(jì)數(shù)。國際標(biāo)準(zhǔn)要求在36℃±2℃培養(yǎng)24h±2

h，但部分膠乳在36℃培養(yǎng)24h沒有微生物生長，這不代表其未被污染，因此在36℃培

養(yǎng)時(shí)，若24h未出紅色斑點(diǎn)，可將培養(yǎng)時(shí)間延至36h。

此外，3種被污染的膠乳區(qū)別為：SBRL未添加殺菌劑，XSBRL和XNBRL添加殺菌

劑，其中，XSBRL在使用和儲(chǔ)存的過程中受到污染，XNBRL為過期膠乳。由表2結(jié)果可

知，添加殺菌劑的膠乳較未添加殺菌劑的膠乳，微生物生長明顯受到抑制，SBRL在培養(yǎng)

24h后，出現(xiàn)了菌落融合生長的情況，呈現(xiàn)出了均勻的紅色表面層形態(tài)，為嚴(yán)重污染膠乳，

而XSBRL和XNBRL盡管受到污染，但僅為中度污染，說明添加殺菌劑的確能夠抑制微生

物的繁殖。同時(shí)也應(yīng)注意，添加殺菌劑為預(yù)防微生物繁殖的措施，但當(dāng)使用和儲(chǔ)存過程中

不注意衛(wèi)生或膠乳放置時(shí)間較長，殺菌劑被消耗完后，依然會(huì)有微生物生長，因此在膠乳

儲(chǔ)存和使用過程中，應(yīng)避免污染膠乳。

4.4.2稀釋膠乳微生物的測定

如果膠乳樣品黏度較大或其中微生物濃度較高，應(yīng)該將樣品稀釋后再進(jìn)行測定。當(dāng)樣

品被稀釋時(shí)，應(yīng)在結(jié)果判斷時(shí)考慮稀釋因子F。實(shí)際結(jié)果應(yīng)按稀釋樣品的微生物計(jì)數(shù)

（CFU/mL）乘以F計(jì)算。稀釋時(shí)，可用一次性滅菌滴管將1mL膠乳樣品加入100mL已

滅菌的蒸餾水中，然后混合均勻，此時(shí)稀釋因子F應(yīng)為100。

4.4.2.1膠乳黏度對微生物培養(yǎng)結(jié)果的影響

9

如果膠乳黏度較大，可能會(huì)導(dǎo)致微生物計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確，一是膠乳在測試片上結(jié)皮，導(dǎo)致

部分需氧菌無法生長，二是位于上層的微生物不能很好的接觸測試片上的培養(yǎng)基，導(dǎo)致無

法生長。因此當(dāng)膠乳黏度較大時(shí)，可適當(dāng)稀釋膠乳后再進(jìn)行測定。

在36℃培養(yǎng)XSBRL-1及其稀釋后膠乳中的微生物24h，培養(yǎng)結(jié)果見表3。

表3膠乳黏度對微生物培養(yǎng)結(jié)果的影響

稀釋因子F1101001000

黏度47.12.82.22.0

培養(yǎng)結(jié)果

稀釋樣品微生物計(jì)

106105104103

數(shù)（CFU/mL）

樣品實(shí)際微生物計(jì)

106×1=106105×10=106104×100=106103×1000=106

數(shù)（CFU/mL）

由表3的培養(yǎng)結(jié)果可知，隨著稀釋因子的增大，微生物計(jì)數(shù)降低，但樣品實(shí)際的微生

物計(jì)數(shù)不變，將稀釋樣品的微生物計(jì)數(shù)乘以稀釋因子F，該XSBRL的微生物計(jì)數(shù)為106

CFU/mL，為中度污染。

4.4.2.2膠乳中微生物濃度對培養(yǎng)結(jié)果的影響

當(dāng)微生物濃度較高，污染較為嚴(yán)重時(shí)（微生物計(jì)數(shù)超過107CFU/mL），由于會(huì)出現(xiàn)菌

落融合生長，導(dǎo)致測試片呈現(xiàn)出均勻的紅色表面層，因此無法判讀準(zhǔn)確的微生物計(jì)數(shù)，此

時(shí)需對樣品進(jìn)行稀釋后再測定微生物計(jì)數(shù)。

在36℃培養(yǎng)SBRL-1及其稀釋后膠乳中的微生物24h，培養(yǎng)結(jié)果見表4。

由表4可知，如果不稀釋膠乳，按照產(chǎn)品說明書只能判讀微生物計(jì)數(shù)為>107CFU/mL，

無法給出確切的微生物計(jì)數(shù)。當(dāng)稀釋膠乳后，根據(jù)稀釋膠乳的微生物計(jì)數(shù)和稀釋因子，可

以換算出樣品實(shí)際的微生物計(jì)數(shù)為108CFU/mL。

10

表4膠乳中微生物濃度對培養(yǎng)結(jié)果的影響

稀釋因子F110100010000

培養(yǎng)結(jié)果

稀釋樣品的微生物

>107107105104

計(jì)數(shù)（CFU/mL）

樣品實(shí)際微生物計(jì)

108107×10=108105×1000=108104×10000=108

數(shù)（CFU/mL）

4.4.3pH對微生物培養(yǎng)結(jié)果的影響

微生物的生命活動(dòng)、物質(zhì)代謝與pH有密切關(guān)系。對于大多數(shù)微生物，適宜的生長環(huán)

境pH為6~8，可生存的pH范圍4~10，低于最低或超過最高pH時(shí)，微生物的生長受到抑

制或?qū)е滤劳?。因此采用SBRL-1，考察了pH對膠乳微生物生長的影響，培養(yǎng)結(jié)果見表5。

由于SBRL-1污染嚴(yán)重，此次培養(yǎng)試驗(yàn)是將其稀釋（稀釋因子F=1000）后進(jìn)行的，采

用1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)膠乳的pH，在36℃培養(yǎng)膠乳中的微生物24h。

表5pH對膠乳微生物的影響

pH7.5419.13611.00112.17213.113

培養(yǎng)結(jié)果

稀釋樣品的微生物

105105103<103<103

計(jì)數(shù)（CFU/mL）

11

由表5可知，當(dāng)膠乳pH小于9時(shí)，可觀察到明顯的微生物的生長；當(dāng)pH增至11時(shí)，

微生物生長已受到抑制；pH大于12時(shí)，微生物已經(jīng)死亡，說明提高pH能夠抑制微生物的

生長和繁殖。

4.4.4未被污染膠乳微生物的測定

確定了影響膠乳微生物生長和繁殖的因素后，考察了添加殺菌劑，或未添加殺菌劑但

pH較高的膠乳的微生物培養(yǎng)情況。在36℃培養(yǎng)膠乳中的微生物12h~36h。培養(yǎng)結(jié)果見表

6。

表6添加殺菌劑或pH大于11的膠乳微生物培養(yǎng)結(jié)果

培養(yǎng)時(shí)間/h

膠乳編號(hào)

122436

XNBRL-2

XSBRL-2

CRL-1

12

由表6可知，采取在膠乳出廠前加入殺菌劑或提高pH等這些預(yù)防措施，可以有效的抑

制細(xì)菌的生長，從而防止微生物大量繁殖。

一般陰離子氯丁膠乳的pH較高，pH在11以上時(shí)微生物生長受到抑制，因此陰離子氯

丁膠乳即使不加殺菌劑，也能夠防止微生物的繁殖。除陰離子型氯丁膠乳外，大部分膠乳

的pH在6~9之間，正好適合微生物的生長，因此建議在這些膠乳中適當(dāng)添加殺菌劑。

五、總結(jié)

（1）當(dāng)微生物計(jì)數(shù)小于103CFU/mL表明沒有明顯的微生物污染，樣品可以使用。

（2）在36℃時(shí)，培養(yǎng)微生物的時(shí)間在24h~36h為宜。對于大部分膠乳，其中一大

批變形桿菌和芽孢桿菌在培養(yǎng)24h就可以被看到，而一些生長緩慢的機(jī)體培養(yǎng)24h可能還

不能被觀察到，因此如果膠乳在24h未看到微生物生長，可將培養(yǎng)時(shí)間延至36h。

（3）如果樣品黏度較大或其中細(xì)菌濃度較高超過107CFU/mL，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋。

如果樣品被稀釋過，在結(jié)果判斷時(shí)必須要考慮到稀釋的因素，即稀釋樣品的微生物計(jì)數(shù)應(yīng)

乘以稀釋因子F。

（4）大多數(shù)膠乳的pH在微生物適宜生長的pH范圍內(nèi)，如有可能，適當(dāng)提高pH（pH>11）

能夠防止微生物的繁殖。

（5）在膠乳出廠前加入殺菌劑，可以有效的抑制細(xì)菌的生長。

13

國家標(biāo)準(zhǔn)

合成橡膠膠乳微生物的測定

編制說明

(征求意見稿)

標(biāo)準(zhǔn)起草工作組

2024年7月

合成橡膠膠乳微生物的測定

編制說明

1工作簡況

1.1任務(wù)來源

根據(jù)國標(biāo)委發(fā)〔2023〕58號(hào)《國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第三批推薦性國

家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外文版計(jì)劃的通知》，國家標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目《合成橡膠膠乳微生物的

測定》（項(xiàng)目編號(hào)20231123-T-606），由中國石油和化學(xué)工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出，全國橡膠與橡膠制

品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)合成橡膠分技術(shù)委員會(huì)（以下簡稱全國橡標(biāo)委合成橡膠分技術(shù)委員會(huì)）

歸口，中國石油天然氣股份有限公司石油化工研究院所負(fù)責(zé)起草。

1.2制定背景

合成橡膠膠乳是我國重要的工業(yè)原材料，其產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用到日常生活的各個(gè)方面，

如紡織品，紙張，手套，涂層和膠黏劑等。合成橡膠膠乳在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中容易受到微

生物的污染。除非采取預(yù)防措施，例如保持高的pH、添加殺菌劑以及檢查和清潔儲(chǔ)罐，否

則這些微生物可能會(huì)大量繁殖，最終產(chǎn)生難聞的氣味，并改變膠乳的化學(xué)和物理性質(zhì)。因

此在膠乳發(fā)生上述變化之前能夠檢測到微生物的存在是非常必要的。

目前國際上測定合成橡膠膠乳微生物的標(biāo)準(zhǔn)是ISO20851:2017，該標(biāo)準(zhǔn)代替了ISO

9252:1989。ISO9252:1989規(guī)定的測定方法對人員及環(huán)境有較高的要求，操作人員需要接

受微生物技術(shù)培訓(xùn)并且具有一定的經(jīng)驗(yàn)，或需在專業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；且測試方法

復(fù)雜耗時(shí)，因而被廢止。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，先進(jìn)的微生物檢測方法不斷出現(xiàn)，基

于細(xì)菌菌落總數(shù)測試片的微生物測定方法在世界范圍內(nèi)得到廣泛應(yīng)用，ISO20851:2017就

是基于該方法進(jìn)行合成橡膠膠乳中微生物的測定，該方法能夠顯著減少實(shí)驗(yàn)前制備培養(yǎng)基

等大量的準(zhǔn)備工作及實(shí)驗(yàn)后的儀器清洗和滅菌工作，且不需配備專業(yè)人員和微生物實(shí)驗(yàn)室，

測試片可現(xiàn)場直接測定，因此較大程度的提高了工作效率。

我國作為合成橡膠膠乳生產(chǎn)大國，尚無測定合成橡膠膠乳微生物的標(biāo)準(zhǔn)。由于合成橡

膠膠乳受到微生物的污染后會(huì)影響橡膠膠乳的應(yīng)用，如在造紙工業(yè)中，會(huì)使紙張產(chǎn)生霉點(diǎn)；

在浸漬工業(yè)中，與身體接觸的制品，如手套等中的微生物可能會(huì)導(dǎo)致人體受到傷害。因此

膠乳中是否存在微生物以及其污染程度已經(jīng)引起了生產(chǎn)廠和用戶的廣泛關(guān)注。由此可見，

適時(shí)轉(zhuǎn)化國際標(biāo)準(zhǔn)為我國標(biāo)準(zhǔn)，為國內(nèi)用戶提供一種簡便，快速測定膠乳微生物的方法標(biāo)

準(zhǔn)是非常必要。此外，該標(biāo)準(zhǔn)的制定將進(jìn)一步完善我國標(biāo)準(zhǔn)體系，對我國標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)

接軌，減少技術(shù)性貿(mào)易壁壘，適應(yīng)國際貿(mào)易的需要具有重要意義。

1

1.3起草過程

1.3.1成立工作組

2023年12月，在國家標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目計(jì)劃下達(dá)后，成立了標(biāo)準(zhǔn)制定工作組，擬定工作方

案，進(jìn)行了任務(wù)分工。

1.3.2工作組討論稿階段

2024年1月，修改完善了工作組討論稿，制定了詳細(xì)的試驗(yàn)方案。

2024年2月，完成試驗(yàn)用設(shè)備和樣品的準(zhǔn)備。

2024年3-6月，完成驗(yàn)證試驗(yàn)工作并編寫試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告。

1.3.3征求意見階段

2024年6月，完成征求意見稿（包括標(biāo)準(zhǔn)文本、編制說明），提交全國橡標(biāo)委合成橡

膠分技術(shù)委員會(huì)秘書處。

1.4起草單位及起草人

1.4.1起草單位

中國石油天然氣股份有限公司石油化工研究院

1.4.2起草人及任務(wù)分工

起草人及任務(wù)分工見表1。

表1起草人及任務(wù)分工

起草人任務(wù)分工

2編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)

2.1編制原則

2.1.1按GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和

GB/T1.2—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第2部分：以ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件

起草規(guī)則》的規(guī)定編制，使標(biāo)準(zhǔn)在結(jié)構(gòu)、語言表述和編排格式上符合統(tǒng)一的要求。

2.1.2根據(jù)我國合成橡膠膠乳微生物測定的技術(shù)要求以及當(dāng)前技術(shù)水平，遵循科學(xué)性、合

理性、經(jīng)濟(jì)性和可操作性的原則進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的制定。

2.1.3在標(biāo)準(zhǔn)的名稱、技術(shù)要求結(jié)構(gòu)和內(nèi)容、用語等方面與橡膠和橡膠制品標(biāo)準(zhǔn)體系保持

一致。

2.2主要內(nèi)容

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了一種測定合成橡膠膠乳中是否存在好氧（活性需氧）和兼性厭氧微生物

及其近似計(jì)數(shù)的方法。

2

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于微生物的鑒定。

2.3確定主要內(nèi)容的依據(jù)

按照ISO20851:2017《合成橡膠膠乳微生物的測定》規(guī)定的技術(shù)內(nèi)容進(jìn)行本標(biāo)準(zhǔn)的制

定，規(guī)定了采用預(yù)先制備好的培養(yǎng)基測試片測定膠乳中微生物的相關(guān)技術(shù)內(nèi)容，包括術(shù)語

和定義、原理、對試劑、儀器以及取樣的要求、測試程序、微生物計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)、已用測試

片和設(shè)備的處置等技術(shù)內(nèi)容等。

3試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告、技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證以及預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益

3.1試驗(yàn)驗(yàn)證的分析和綜述報(bào)告

見附件：《合成橡膠膠乳微生物的測定》試驗(yàn)總結(jié)。

3.2預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益

合成橡膠膠乳作為橡膠產(chǎn)品重要的組成部分，與人們的日常生活息息相關(guān)，用途十分

廣泛。丁苯膠乳主要用于紙涂布和纖維（以地毯為主）處理；聚丁二烯膠乳主要用于抗沖

樹脂（AB