代替GB/T31270.9-2014

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

本文件是GB/T31270《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》的第23部分。GB/T31270已經(jīng)發(fā)布了以下

部分：

——第1部分：土壤代謝試驗(yàn)；

——第2部分：水解試驗(yàn)；

——第3部分：水中直接光解試驗(yàn)；

——第4部分：土壤吸附/解吸試驗(yàn)；

——第5部分：土壤淋溶試驗(yàn)；

——第6部分：揮發(fā)性試驗(yàn)；

——第7部分：生物富集試驗(yàn)；

——第8部分：水-沉積物系統(tǒng)代謝試驗(yàn)；

——第9部分：鳥類短期飼喂毒性試驗(yàn)；

——第10部分：蜜蜂急性毒性試驗(yàn)；

——第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)；

——第12部分：魚類急性毒性試驗(yàn)；

——第13部分：溞類急性活動抑制試驗(yàn)；

——第14部分：藻類生長抑制試驗(yàn)；

——第15部分：蚯蚓急性毒性試驗(yàn)；

——第16部分：土壤微生物毒性試驗(yàn)；

——第17部分：天敵赤眼蜂急性毒性試驗(yàn)；

——第18部分：天敵兩棲類急性毒性試驗(yàn)；

——第19部分：非靶標(biāo)植物影響試驗(yàn)；

——第20部分：家畜短期飼喂毒性試驗(yàn)；

——第21部分：大型甲殼類生物毒性試驗(yàn)；

——第22部分：土壤表面光解試驗(yàn)；

——第23部分：鳥類急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)。

本文件代替GB/T31270.9-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第9部分：鳥類急性毒性試驗(yàn)》，

與GB/T31270.9-2014相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：

a)修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱；

b)刪除了鳥類急性飼喂試驗(yàn)的相關(guān)要求（2014版的3.3、4.2.2）；

I

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c)增加了規(guī)范性引用文件一章（見第2章）；

d)更改了試驗(yàn)步驟（見第4章、9.5，2014版的3.2、4.2.1）；

e)更改了受試鳥的要求（見第6.2，2014版的附錄A）；

f)更改了觀察時間（見9.3.1，2014版的3.2）；

g)增加了受試鳥大體解剖的要求（見9.3.4）；

h)更改了試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)方法（見10.2，2014版本的4.3）；

i)更改了質(zhì)量控制指標(biāo)要求（見第11章，2014版4.4）；

j)刪除了鳥類推薦物種及推薦測試條件（2014版的附錄A）；

k)刪除了農(nóng)藥對鳥類的毒性等級劃分標(biāo)準(zhǔn)（2014版的附錄B）；

l)增加了試驗(yàn)流程圖（見附錄A）；

m)增加了根據(jù)限度試驗(yàn)結(jié)果估算LD50的方法（見附錄B）；

n)增加了序貫法試驗(yàn)時間線示例（見附錄C）；

o)增加了確定部分死亡和逆轉(zhuǎn)個數(shù)的示例（見附錄D）。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。

本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。

本文件起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所。

本文件主要起草人：周艷明、曲甍甍、陳朗、袁善奎、趙學(xué)平、宋偉華、趙常升、劉偉、武祥杰、

閆新利、徐漫。

本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：

——2014年首次發(fā)布為GB/T31270.9-2014。

——本次為第一次修訂。

II

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化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第23部分：鳥類急性毒性試驗(yàn)

警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問

題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了用序貫法測定化學(xué)農(nóng)藥鳥類急性經(jīng)口毒性的試驗(yàn)條件、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣品、

試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、質(zhì)量控制以及試驗(yàn)報(bào)告等的基本要求。

本文件適用于為化學(xué)農(nóng)藥登記而進(jìn)行的鳥類急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T2882.3農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估指南第3部分：鳥類

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

逆轉(zhuǎn)reversal

在2個相鄰的處理組中，低劑量組的死亡率高于高劑量組的現(xiàn)象。

3.2

部分死亡partialkill

多只受試鳥給予同樣劑量的被試物，死亡率介于0和100%之間的現(xiàn)象。

4原理

試驗(yàn)由多個階段組成，每個階段將被試物按設(shè)計(jì)劑量經(jīng)口灌喂至受試鳥嗉囊或腺胃。給藥后，觀察

14d，通常根據(jù)給藥后3d各處理組受試鳥的死亡情況估算半致死劑量（LD50）并設(shè)置下一階段的試驗(yàn)

劑量。以全部階段的試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算被試物對受試鳥的LD50及其95%置信區(qū)間。

5試驗(yàn)條件

3

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每只鳥最小棲息面積為：原鴿3333cm2、綠頭鴨2000cm2、鵪鶉和山齒鶉1000cm2、斑胸草雀和

虎皮鸚鵡500cm2。

試驗(yàn)可在人工控制的環(huán)境下進(jìn)行，也可在符合要求的自然溫度和濕度下進(jìn)行。鵪鶉、山齒鶉和綠

頭鴨的試驗(yàn)溫度應(yīng)為15℃~27℃，試驗(yàn)期間波動應(yīng)盡可能小。

觀察室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好，空氣每小時至少交換10次。

鵪鶉、山齒鶉和綠頭鴨每日光照時間為8h，其他鳥類可延長至10h。

應(yīng)提供充足的飼料和水，并及時更換。可使用商品飼料和維生素，但應(yīng)符合受試物種的營養(yǎng)需求。

飼料和水應(yīng)定期測定重金屬（如砷、鎘、鉛、汞、硒等）和持久性農(nóng)藥（如有機(jī)氯農(nóng)藥等）等污染物。

6試劑或材料

試劑

6.1.1玉米油等載體。

6.1.2亮藍(lán)（C37H34N2Na2O9S3，CAS號：3844-45-9）。

供試生物

6.2.1宜選擇吐食習(xí)性低的鳥類，如雞形目的鵪鶉（Coturnixjaponica，曾用名：日本鵪鶉）或山齒鶉

（Colinusvirginianus）；為開展物種敏感性分布或在風(fēng)險(xiǎn)評估中使用毒性終點(diǎn)的幾何平均值，可選擇雁

形目的綠頭鴨（Anasplatyrhynchos）、鴿形目的原鴿（Columbalivia）、雀形目的斑胸草雀（Taeniopygia

guttata，曾用名：Poephilaguttata）、鸚形目的虎皮鸚鵡（Melopsittacusundulatus）等鳥類。宜使用野生

表型的鳥類，不能使用野生表型時應(yīng)選擇不同表型雜交的鳥類；應(yīng)選擇人工繁育的鳥類，并定期遠(yuǎn)親交

配以保持遺傳異質(zhì)性，不應(yīng)使用野生鳥類。供試鳥在本實(shí)驗(yàn)室中的自然死亡率應(yīng)≤1%。

6.2.2受試鳥應(yīng)滿足以下要求：

a)來源一致且來自同一繁殖種群；

b)為不處于繁殖期的成鳥；

c)日齡大致相同；

d）可使用單一性別受試鳥，也可雌鳥和雄鳥混用；

e)試驗(yàn)開始前應(yīng)在試驗(yàn)條件下馴養(yǎng)至少14d，馴養(yǎng)期間死亡率≤5%；

f)試驗(yàn)期間和給藥前14d應(yīng)避免藥物治療。

7儀器設(shè)備

7.1鳥籠。底部應(yīng)為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)眼大小應(yīng)能使糞便落下且不影響鳥類活動。原鴿、斑胸草雀和虎皮鸚

鵡的鳥籠中應(yīng)設(shè)置棲木。

7.2微量移液器。

7.3電子天平。

4

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7.4溫濕度計(jì)。

8樣品

被試物為農(nóng)藥原（母）藥或制劑。試驗(yàn)開始前，應(yīng)了解被試物的以下信息：

a)水中溶解度；

b)有機(jī)溶劑中的溶解度；

c)飽和蒸氣壓；

d)已知的對鳥類或哺乳動物的毒性；

e）農(nóng)藥的使用范圍、施用方法、劑量、次數(shù)和施藥間隔等。

9試驗(yàn)步驟

受試鳥準(zhǔn)備

試驗(yàn)開始前對每只受試鳥單獨(dú)標(biāo)識，隨機(jī)分配至各處理組和對照組。根據(jù)已知數(shù)據(jù)，對于鳥類可能

存在雌雄敏感性差異的被試物，試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)能分別計(jì)算對雌性和雄性的LD50，例如將每個處理組受試

鳥數(shù)量翻倍，雌雄各半。給藥前1晚受試鳥應(yīng)禁食12h~15h，鵪鶉等較大的受試鳥宜整夜禁食，體重

≤50g的受試鳥應(yīng)禁食2h。

給藥方法

9.2.1被試物置于膠囊中或溶解、分散于合適的載體后，經(jīng)口灌喂至受試鳥嗉囊或腺胃；對于液體制

劑，也可直接經(jīng)口灌喂至受試鳥嗉囊或腺胃。首選水作為載體，將被試物溶解或分散在水中；其次可將

被試物溶解或乳化于玉米油等食用油中；均不可行時再使用其他載體。使用水以外的載體時，應(yīng)了解載

體的毒性，載體不應(yīng)引起吐食。

注：可用食用色素亮藍(lán)等與糞便顏色明顯不同的無毒染料將飼料染色，以觀察是否出現(xiàn)吐食現(xiàn)象。吐食可能與給

藥技術(shù)或被試物性質(zhì)有關(guān)，減少給藥體積、使用膠囊或更換載體可能消除或降低吐食頻率。特別是使用雀形目鳥類時，

宜先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)來評估受試鳥的吐食習(xí)性，如存在吐食現(xiàn)象應(yīng)考慮更換另一種鳥類。受試鳥存在吐食現(xiàn)象時不能精確計(jì)

算出LD50，僅能得出被試物的LD50大于引發(fā)吐食和死亡的最低劑量。

9.2.2每只受試鳥的給藥劑量應(yīng)根據(jù)給藥前24h內(nèi)所測個體體重確定。給藥體積應(yīng)盡量小，不應(yīng)超過

1mL/100g體重，處理組和對照組的所有受試鳥的給藥體積/體重比應(yīng)相同。

培養(yǎng)與觀察

9.3.1每處理1只受試鳥時，應(yīng)單籠飼養(yǎng)；每處理多只受試鳥時，至少在給藥后前3d應(yīng)單籠飼養(yǎng)以

便觀察并記錄每只受試鳥的中毒癥狀。對斑胸草雀等群居物種，鳥籠應(yīng)緊靠在一起，其他物種如未出現(xiàn)

攻擊行為，也宜將鳥籠緊靠在一起。應(yīng)提供充足的飼料和水，并及時更換。

9.3.2給藥后按以下要求確定觀察頻率和時間：

a)給藥后0h~2h應(yīng)持續(xù)觀察受試鳥的中毒癥狀及是否出現(xiàn)吐食；

b)給藥后2h~1d應(yīng)在光照期內(nèi)至少等間隔觀察3次中毒癥狀；

5

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c)給藥后1d~14d每日應(yīng)至少觀察1次中毒癥狀；

d)給藥后14d仍能觀察到中毒癥狀或死亡時，應(yīng)延長觀察時間至無中毒癥狀，某1試驗(yàn)階段延長

觀察時間，后續(xù)試驗(yàn)階段也應(yīng)相應(yīng)延長觀察時間。

9.3.3應(yīng)觀察記錄每只受試鳥的吐食、中毒癥狀及其緩解表現(xiàn)、異常行為，受試鳥出現(xiàn)死亡時應(yīng)記錄

死亡時間。

9.3.4應(yīng)在給藥前及給藥后3d、7d和14d測定受試鳥的體重；每次添加飼料時記錄飼料添加量和前

次剩余飼料量，試驗(yàn)結(jié)束時記錄飼料剩余量，并計(jì)算給藥后0d~3d每日食物消耗量以及3d~7d和7

d~14d的食物消耗量。若延長觀察時間，最后1次體重和食物消耗量應(yīng)在試驗(yàn)結(jié)束時測定。

9.3.5所有死亡受試鳥應(yīng)進(jìn)行大體解剖。試驗(yàn)結(jié)束時對存活的受試鳥實(shí)施安樂死，并進(jìn)行大體解剖以

鑒別偶然死亡和中毒癥狀，處理組和對照組均未出現(xiàn)死亡和明顯中毒癥狀時可不解剖。

9.3.6試驗(yàn)期間，受試鳥有明顯疼痛或處于瀕死狀態(tài)時，經(jīng)評估繼續(xù)觀察不能得出對試驗(yàn)有用信息的，

可實(shí)施安樂死并將其計(jì)入死亡數(shù)。

限度試驗(yàn)

9.4.1對毒性可能較低的被試物，宜開展限度試驗(yàn)。按NY/T2882.3計(jì)算出的鳥類PEDacute的10倍或

2000mg被試物/kg體重（取高值）設(shè)置限度試驗(yàn)劑量，處理組和對照組各5只鳥，給藥后觀察14d。若處理

組受試鳥均未死亡，可結(jié)束試驗(yàn)，不再進(jìn)行序貫法試驗(yàn)。限度試驗(yàn)的流程按附錄A的A.1操作。

9.4.2若處理組中有1只受試鳥死亡，其他受試鳥未出現(xiàn)中毒癥狀，可再用5只鳥按限度劑量給藥并

觀察14d。若整個處理組10只受試鳥中僅有1只死亡且其他受試鳥未出現(xiàn)中毒癥狀，可結(jié)束試驗(yàn)，不

再進(jìn)行序貫法試驗(yàn)。也可不進(jìn)行第2次限度劑量給藥，直接進(jìn)行序貫法第2階段試驗(yàn)。第2次限度劑量

給藥或序貫法試驗(yàn)可在第1次限度劑量給藥后的14d觀察期內(nèi)開始。

9.4.3若處理組受試鳥全部死亡，進(jìn)行序貫法第1階段試驗(yàn)。

9.4.4若5只受試鳥的處理組中有1只受試鳥死亡且其余受試鳥出現(xiàn)中毒癥狀，或有2~4只受試鳥死

亡，或兩次限度劑量給藥的10只受試鳥中出現(xiàn)2只或2只以上死亡時，進(jìn)行序貫法第2階段試驗(yàn)。按

附錄B估算LD50，限度劑量為2000mg被試物/kg體重時可按表1估算。

表1根據(jù)限度試驗(yàn)死亡率估算LD50

死亡率（%）102030405060708090

預(yù)估LD50（mg被試物/kg體重）360629442541224420001782157413581109

序貫法試驗(yàn)

9.5.1概述

對毒性可能較高的被試物，可直接開展序貫法試驗(yàn)。序貫法試驗(yàn)流程按附錄A的A.2，典型

的4個階段試驗(yàn)、14天觀察期的時間線示例見附錄C的C.1。

6

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當(dāng)試驗(yàn)?zāi)康氖菫殚_展物種敏感性分布而獲得LD50時，可僅進(jìn)行第1階段和第2階段的試驗(yàn)，

并計(jì)算LD50。

當(dāng)2個以上處理組出現(xiàn)部分死亡或逆轉(zhuǎn)時，采用最大似然法計(jì)算被試物對受試鳥的LD50。判

斷部分死亡和逆轉(zhuǎn)的示例見附錄D的D.1。

9.5.2第1階段試驗(yàn)

確定劑量

按以下要求確定第1階段試驗(yàn)的試驗(yàn)劑量：

a)根據(jù)被試物對嚙齒類動物或其他鳥類的試驗(yàn)結(jié)果，或限度試驗(yàn)結(jié)果預(yù)估LD50；

b)最低劑量（劑量1）=0.1414×預(yù)估LD50、最高劑量（劑量4）=7.071×預(yù)估LD50；

c)最高劑量>3330mg被試物/kg體重時，最高劑量設(shè)定為3330mg被試物/kg體重并重新計(jì)算最低劑量（最低

劑量=最高劑量/50）；

d)公比為3.679；

e)根據(jù)最低劑量和公比計(jì)算劑量2和劑量3，劑量2=劑量1×公比，劑量3=劑量2×公比。

給藥

根據(jù)計(jì)算的劑量，按9.2的要求給藥，每劑量1只鳥。

觀察和計(jì)算

按9.3的要求觀察一段時間（通常為3d），并按表2估算LD50，繼續(xù)觀察至14d。若觀察到延遲

效應(yīng)，應(yīng)延長觀察時間。若根據(jù)第3d的情況判斷仍可能出現(xiàn)受試鳥死亡，應(yīng)待所有存活受試鳥恢復(fù)后

再估算LD50。若估算LD50前的觀察期延長，后續(xù)階段估算LD50時也應(yīng)相應(yīng)延長觀察期。

表2根據(jù)第1階段結(jié)果估算LD50的方法

劑量1劑量2劑量3劑量4估算的LD50

OaOOO（劑量4×劑量5c）1/2

OOOXb（劑量3×劑量4）1/2

OOXO（劑量3×劑量4）1/2

OXOO劑量3

XOOO（劑量2×劑量3）1/2

OOXX（劑量2×劑量3）1/2

OXXO劑量3

XXOO（劑量2×劑量3）1/2

OXOX（劑量2×劑量3）1/2

XOXO（劑量2×劑量3）1/2

XOOX劑量2

OXXX（劑量1×劑量2）1/2

7

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XOXX（劑量1×劑量2）1/2

XXOX劑量2

XXXO（劑量2×劑量3）1/2

XXXX（劑量0d×劑量1）1/2

a：“O”代表受試鳥存活；

b：“X”代表受試鳥死亡；

c：僅用于估算LD50，劑量5=劑量4×公比；

d：僅用于估算LD50，劑量0=劑量1/公比。

9.5.3第2階段試驗(yàn)

確定劑量

按以下要求確定第2階段試驗(yàn)的試驗(yàn)劑量：

a)根據(jù)第1階段試驗(yàn)結(jié)果或出現(xiàn)部分死亡的限度試驗(yàn)結(jié)果估算LD50；

b)最低劑量（劑量1）=0.3425×預(yù)估LD50、最高劑量（劑量10）=2.919×預(yù)估LD50；

c)當(dāng)最高劑量>3330mg被試物/kg體重時，最高劑量設(shè)定為3330mg被試物/kg體重并重新計(jì)算最低劑量（最

低劑量=最高劑量/8.5）；

d)公比=（最高劑量/最低劑量）1/9；

e)按公式（1）計(jì)算8個中間劑量，i=2~9。

??1

?????=?????×????···············································(1)

式中：

dosei——第i個劑量；

ldose——最低劑量；

step——公比。

給藥

根據(jù)計(jì)算的劑量，按9.2的要求給藥，每劑量1只鳥。

觀察和計(jì)算

.1觀察一段時間（通常為3d，但若第1階段延長觀察時間時，應(yīng)相應(yīng)延長），記錄受試鳥死

亡情況、統(tǒng)計(jì)逆轉(zhuǎn)數(shù)，用限度試驗(yàn)、第1階段和第2階段的數(shù)據(jù)用概率單位法估算LD50及劑量-效應(yīng)曲

線的斜率（以下簡稱“斜率”），繼續(xù)觀察至14d。若14d后觀察到延遲效應(yīng)，應(yīng)延長觀察時間。若根

據(jù)第3d的情況判斷仍可能出現(xiàn)受試鳥死亡，應(yīng)待所有存活受試鳥恢復(fù)后再估算LD50。若估算LD50前

的觀察期延長，后續(xù)階段也應(yīng)在估算LD50前相應(yīng)延長觀察期。若逆轉(zhuǎn)≥2，進(jìn)行第3a階段試驗(yàn)，否則進(jìn)

行第3b階段試驗(yàn)。

.2當(dāng)試驗(yàn)?zāi)康氖菫殚_展物種敏感性分布而獲得LD50時，觀察至14d，用限度試驗(yàn)、第1階段

和第2階段的數(shù)據(jù)用概率單位法計(jì)算LD50，試驗(yàn)結(jié)束。

9.5.4第3a階段試驗(yàn)

8

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確定劑量

按以下要求確定第3a階段試驗(yàn)的試驗(yàn)劑量：

a)第2階段試驗(yàn)估算出的斜率>15時，斜率設(shè)定為15；斜率<1時，斜率設(shè)定為1；不能計(jì)算斜率

時，斜率設(shè)定為5；

（-1.036/斜率）（1.036/斜率）

b)低劑量=10×預(yù)估LD50，高劑量=10×預(yù)估LD50；

c)當(dāng)高劑量>3330mg被試物/kg體重時，高劑量設(shè)定為3330mg被試物/kg體重并重新計(jì)算低劑量（低劑量=

高劑量/10（2.072/斜率））。

給藥

根據(jù)計(jì)算的劑量，按9.2的要求給藥，每劑量5只鳥。

觀察

觀察至14d（若第1階段或第2階段延長觀察時間，應(yīng)相應(yīng)延長觀察時間），試驗(yàn)結(jié)束。

9.5.5第3b階段試驗(yàn)

確定劑量

按以下要求確定第3b階段試驗(yàn)的試驗(yàn)劑量：

a)最低劑量（劑量1）=0.6205×預(yù)估LD50、最高劑量（劑量5）=1.6113×預(yù)估LD50；

b)當(dāng)最高劑量>3330mg被試物/kg體重時，最高劑量設(shè)定為3330mg被試物/kg體重并重新計(jì)算最低劑量（最

低劑量=最高劑量/2.6）；

c)公比=（最高劑量/最低劑量）1/4

d)按公式（1）計(jì)算3個中間劑量，i=2~4。

給藥

根據(jù)計(jì)算的劑量，按9.4的要求給藥，每劑量2只鳥。

觀察和計(jì)算

觀察一段時間（通常為3d，但若第1、2階段延長觀察時間應(yīng)相應(yīng)延長觀察時間），記錄受試鳥死

亡情況，用限度試驗(yàn)、第1、2、3b階段的數(shù)據(jù)用概率單位法估算LD50及斜率，繼續(xù)觀察至14d。若14

d后觀察到延遲效應(yīng)，應(yīng)延長觀察時間。若根據(jù)第3d的情況判斷仍可能出現(xiàn)受試鳥死亡，應(yīng)待所有存

活受試鳥恢復(fù)后再估算LD50。若估算LD50前的觀察期延長，后續(xù)階段也應(yīng)在估算LD50前相應(yīng)延長觀

察期。若逆轉(zhuǎn)≥2或部分死亡≥2，無需進(jìn)行第4階段試驗(yàn)，觀察至14d，試驗(yàn)結(jié)束；否則進(jìn)行第4階段

試驗(yàn)。

9.5.6第4階段試驗(yàn)

確定劑量

按以下要求確定第4階段試驗(yàn)的試驗(yàn)劑量：

——最低劑量（劑量1）=0.6205×預(yù)估LD50、最高劑量（劑量5）=1.6113×預(yù)估LD50；

9

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——當(dāng)最高劑量>3330mg被試物/kg體重時，最高劑量設(shè)定為3330mg被試物/kg體重并重新計(jì)算最低劑量

（最低劑量=最高劑量/2.6）；

——公比=（最高劑量/最低劑量）1/4

——按公式（1）計(jì)算3個中間劑量，i=2~4。

給藥

根據(jù)計(jì)算的劑量，按9.2的要求給藥，每劑量2只鳥。

觀察

觀察至14d，若14d后觀察到延遲效應(yīng)，應(yīng)延長觀察時間。

對照組

9.6.1對照組應(yīng)使用5只與處理組同批孵化的鳥，采用與處理組相同的載體（或膠囊）虛擬給藥，并

在與處理組相同的條件下觀察，觀察頻率與處理組一致。虛擬給藥應(yīng)安排在處理組第1次給藥當(dāng)天。

9.6.2出現(xiàn)以下情況時，對照組應(yīng)再增加5只鳥：

a)新試驗(yàn)階段受試鳥與試驗(yàn)最初受試鳥不是同批孵化的，應(yīng)以新批次受試鳥增設(shè)對照；

b)新試驗(yàn)階段給藥體積不同時，應(yīng)以新階段給藥體積增設(shè)對照；

c)各階段觀察時間延長或有明顯區(qū)別時，應(yīng)在相應(yīng)階段（如第2階段或第3階段）開始時增設(shè)對

照；

d)對照組出現(xiàn)物理損傷等明顯不是被試物導(dǎo)致的偶然死亡時，應(yīng)增加對照組的受試鳥數(shù)量。

10試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)整理

應(yīng)以表格形式記錄并報(bào)告受試鳥的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括劑量、受試鳥數(shù)量、中毒癥狀、死亡數(shù)和實(shí)施安

樂死的數(shù)量、每只受試鳥的死亡時間、中毒癥狀出現(xiàn)和終止的時間、體重、食物消耗量、大體解剖結(jié)果。

物理損傷等明顯不是被試物導(dǎo)致的偶然死亡應(yīng)在結(jié)果計(jì)算中排除。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

10.2.1應(yīng)使用概率單位法計(jì)算LD50和斜率。若第4階段試驗(yàn)結(jié)果不能得出最大似然估計(jì)結(jié)果，應(yīng)在

報(bào)告中予以說明，并以死亡率最接近50%的劑量（低于50%和高于50%各1個）的幾何平均值作為LD50，

也可用插值法或移動平均法估算LD50。

10.2.2使用Fieller定理、似然比法或二項(xiàng)式法計(jì)算LD50的置信區(qū)間。

10.2.3當(dāng)試驗(yàn)?zāi)康氖菫殚_展物種敏感性分布而獲得LD50，僅進(jìn)行至第2階段試驗(yàn)的，也應(yīng)使用概率

單位法計(jì)算LD50，無需提供劑量-效應(yīng)曲線的斜率和LD50的置信區(qū)間。

10.2.4可使用序貫設(shè)計(jì)計(jì)算器（SequentialDesignCalculator，SEDEC）設(shè)計(jì)給藥劑量并統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果。

11質(zhì)量控制

10

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對照組受試鳥死亡率≤10%。

12試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a)被試物：

1)通用名、化學(xué)名、化學(xué)文摘登錄號（CAS號）、結(jié)構(gòu)式、純度；

2)來源、批號、有效期、穩(wěn)定性；

3)物理性狀、水中溶解度及其他相關(guān)的理化性質(zhì)。

b)試驗(yàn)方法和試驗(yàn)體系：

1)試驗(yàn)類型；

2)受試鳥的物種、品系、來源、日齡、體重及健康狀況；

3)試驗(yàn)方法的詳細(xì)描述。

c)試驗(yàn)過程：

1)試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)（處理組和重復(fù)的數(shù)量、是否單籠飼養(yǎng)）；

2)受試鳥馴養(yǎng)時間和分配程序；

3)給藥方法（是否采用膠囊、采用的載體、單位體重給藥體積）；

4)受試鳥飼養(yǎng)條件（鳥籠的規(guī)格和材料、溫度、濕度、光照時間、光照強(qiáng)度）；

5)飼料和飲用水（適用性、標(biāo)識、來源、組成、熱量值、污染物測定結(jié)果）；

6)觀察的頻率、時間和方法（健康/死亡、體重、食物攝入量）；

7)統(tǒng)計(jì)方法。

d)試驗(yàn)結(jié)果：

1)死亡（死亡時間、中毒癥狀）；

2)分別以mga.i./kg體重和mg被試物/kg體重計(jì)的LD50、劑量-效應(yīng)曲線的斜率、置信區(qū)間；

3)回歸模型擬合度的指標(biāo)描述；

4)癥狀出現(xiàn)和終止的時間（記錄時間應(yīng)精確到分鐘）；

5)大體解剖檢查結(jié)果；

6)每只受試鳥的體重?cái)?shù)據(jù)；

7)飼料消耗量數(shù)據(jù)。

11

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

試驗(yàn)流程

A.1限度試驗(yàn)流程

見圖A.1，圖中僅顯示了處理組。

5只受試鳥按限度劑量給藥

0死亡1只死亡2只~4只死亡5只死亡

其余受試鳥有是

中毒癥狀？

否

選擇

再用5只受試鳥按限度劑量給藥

是否序貫法試驗(yàn)序貫法試驗(yàn)

LD>限度劑量總死亡率=10%？

50第2階段第1階段

圖A.1限度試驗(yàn)流程圖

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A.2序貫法試驗(yàn)流程

序貫法試驗(yàn)流程見圖A.2，圖中僅顯示了處理組。

依據(jù)限度試驗(yàn)或其他試驗(yàn)結(jié)第1階段

果等現(xiàn)有資料預(yù)估LD504個處理組，每組1只鳥

根據(jù)第1階段試驗(yàn)結(jié)果預(yù)

估LD50

計(jì)算LD50，試驗(yàn)結(jié)束第2階段

（試驗(yàn)結(jié)果僅用于物種敏感性分布）10個處理組，每組1只鳥

當(dāng)逆轉(zhuǎn)≥2時：用第1、2當(dāng)逆轉(zhuǎn)<2時：用第1、2

階段結(jié)果預(yù)估LD50階段結(jié)果預(yù)估LD50

第3a階段第3b階段

2個處理組，每組5只鳥5個處理組，每組2只鳥

逆轉(zhuǎn)≥2或逆轉(zhuǎn)<2且部分死亡<2：用第

部分死亡≥21、2、3b階段結(jié)果預(yù)估LD50

第4階段

計(jì)算LD、斜率、置信區(qū)間，試驗(yàn)結(jié)束

505個處理組，每組2只鳥

圖A.2序貫法試驗(yàn)流程圖

13

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B

B

附錄B

（規(guī)范性）

根據(jù)限度試驗(yàn)結(jié)果估算LD50的方法

按公式（C.1）估算LD50。

???????5

(+??(??))

??50=105···························································(C.1)

式中：

probit——概率單位，根據(jù)限度試驗(yàn)受試鳥死亡率按表B.1選擇；

ld——限度劑量，單位為毫克被試物每千克體重（mg被試物/kg體重）。

表B.1概率單位的選擇

死亡率（%）102030405060708090

probit3.724.164.484.7555.255.525.846.28

14

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C

C

附錄C

（資料性）

序貫法試驗(yàn)時間線示例

序貫法試驗(yàn)時間線示例見圖C.1，圖中僅顯示了處理組。

第1階段試驗(yàn)的受試鳥處于觀察期

第2階段試驗(yàn)的受試鳥處于觀察期

第3b階段試驗(yàn)的受試鳥處于觀察期

第4階段試驗(yàn)的受試鳥處于觀察期

天

03691215182123

第9d，用限度試驗(yàn)、第1階段、第2階段、

第3b階段的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)第4階段的試驗(yàn)劑量

第6d，用限度試驗(yàn)、第1階段、第2階段的

數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)第3b階段的試驗(yàn)劑量

第3d，用限度試驗(yàn)、第1階段的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)

第2階段的試驗(yàn)劑量

圖C.14階段序貫法試驗(yàn)時間線示例

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D

D

附錄D

（資料性）

確定部分死亡和逆轉(zhuǎn)個數(shù)的示例

本附錄給出判斷部分死亡和逆轉(zhuǎn)個數(shù)的示例。其中，劑量從左至右依次增加，部分死亡用“*”標(biāo)記，

逆轉(zhuǎn)用“#”標(biāo)記。

示例1：

第1階段使用4只鳥，第2階段使用10只鳥，共14只鳥、14個劑量。共有0個部分死亡、2個逆

轉(zhuǎn)，進(jìn)行第3a階段試驗(yàn)，見表D.1。

表D.1完成第2階段進(jìn)行第3a階段試驗(yàn)的示例

死亡數(shù)量00000101101111

鳥類數(shù)量11111111111111

死亡率（%）000001000#1001000#100100100100

示例2：

第1階段使用4只鳥，2階段使用10只鳥，共14只鳥；兩個階段最低和最高劑量相同，共12個

劑量。共有0個部分死亡、1個逆轉(zhuǎn)，進(jìn)行第3b階段試驗(yàn)，見表D.2。

表D.2完成第2階段進(jìn)行第3b階段試驗(yàn)的示例

死亡數(shù)量000001011112

鳥類數(shù)量211111111112

死亡率（%）000001000#100100100100100

示例3：

第1階段使用4只鳥，第2階段使用10只鳥，第3階段使用10只鳥，共24只鳥、19個劑量。共

有2個部分死亡、3個逆轉(zhuǎn)，試驗(yàn)結(jié)束，見表D.3。

表D.32個部分死亡、3個逆轉(zhuǎn)的示例

死亡數(shù)量0001000110211201111

鳥類數(shù)量1112121211211211111

死亡率（%）00050*0#0050*1000#1001001001000#100100100100

示例4：

第1階段使用4只鳥，第2階段使用10只鳥，第3階段使用10只鳥，共24只鳥、19個劑量）。

共有1個部分死亡、2個逆轉(zhuǎn)，試驗(yàn)結(jié)束，見表D.4。

表D.41個部分死亡、2個逆轉(zhuǎn)的示例

死亡數(shù)量0000000110211201111

鳥類數(shù)量1112121211211211111

死亡率（%）000000050*1000#1001001001000#100100100100

示例5：

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第1階段使用4只鳥，第2階段使用10只鳥，第3階段使用10只鳥，共24只鳥、19個劑量）。

共有1個部分死亡、1個逆轉(zhuǎn)，進(jìn)行第4階段試驗(yàn)，見表D.5。

表D.51個部分死亡、1個逆轉(zhuǎn)的示例

死亡數(shù)量0000011211211201111

鳥類數(shù)量1112121211211211111

死亡率（%）0000050*1001001001001001001001000#100100100100

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代替GB/T31270.9-2014

參考文獻(xiàn)

[1]OECD（2016）.GuidelinefortheTestingofChemicalsNo.223AvianAcuteOralToxicityTest

[2]OECD（2000）.OECDSeriesonTestingandAssessment,No.19GuidanceDocumentOnthe

Recognition,Assessment,andUseofClinicalSignsAsHumaneEndpointsforExperimentalAnimalsUsedIn

SafetyEvaluation

[3]USEPA（2012）.EcologicalEffectsTestGuidelinesOCSPP850.2100:AvianAcuteOralToxicity

Test

[4]OECD（2009）.SequentialDesignCalculatoraToolforUsewithOECDTG223:AvianAcuteOral

ToxicityTest./env/ehs/testing/softwaretobeusedwithtg223.htm

__________________________

_______

18

ICS65.100

CCSB13

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31270.23—XXXX

代替GB/T31270.9-2014

化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第23部分：鳥類急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides——Part

23:Avianacuteoraltoxicitytest

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

代替GB/T31270.9-2014

化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第23部分：鳥類急性毒性試驗(yàn)

警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問

題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了用序貫法測定化學(xué)農(nóng)藥鳥類急性經(jīng)口毒性的試驗(yàn)條件、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣品、

試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、質(zhì)量控制以及試驗(yàn)報(bào)告等的基本要求。

本文件適用于為化學(xué)農(nóng)藥登記而進(jìn)行的鳥類急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T2882.3農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估指南第3部分：鳥類

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

逆轉(zhuǎn)reversal

在2個相鄰的處理組中，低劑量組的死亡率高于高劑量組的現(xiàn)象。

3.2

部分死亡partialkill

多只受試鳥給予同樣劑量的被試物，死亡率介于0和100%之間的