2025年ELISA實(shí)驗(yàn)?zāi)M操作技能考核答案及解析一、單項(xiàng)選題1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的封閉是為了（）A.減少非特異性吸附B.增加特異性結(jié)合C.提高酶活性D.降低背景吸收2.ELISA實(shí)驗(yàn)中，HRP標(biāo)記的二抗主要用于（）A.直接檢測(cè)抗原B.檢測(cè)抗體C.增強(qiáng)信號(hào)強(qiáng)度D.封閉非特異性位點(diǎn)3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌步驟的主要目的是（）A.增加結(jié)合量B.減少背景吸收C.提高酶活性D.促進(jìn)顯色反應(yīng)4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，TMB顯色反應(yīng)的最佳pH值是（）A.2.0-3.0B.6.0-7.0C.9.0-10.0D.12.0-13.05.ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液的主要作用是（）A.增強(qiáng)信號(hào)強(qiáng)度B.停止酶促反應(yīng)C.提高背景吸收D.降低非特異性吸附6.ELISA實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度通常是（）A.0.1ng/mLB.1.0ng/mLC.10.0ng/mLD.100.0ng/mL7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)儀的檢測(cè)波長(zhǎng)通常是（）A.450nmB.600nmC.750nmD.900nm8.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本稀釋的主要目的是（）A.增加結(jié)合量B.減少背景吸收C.提高檢測(cè)靈敏度D.降低非特異性吸附9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA主要用于檢測(cè)（）A.多克隆抗體B.單克隆抗體C.抗原D.標(biāo)記物10.ELISA實(shí)驗(yàn)中，間接ELISA主要用于檢測(cè)（）A.抗原B.抗體C.標(biāo)記物D.標(biāo)準(zhǔn)品二、多項(xiàng)選題1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的洗滌液成分包括（）A.PBSB.TBSC.Tween-20D.SDS2.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的封閉液成分包括（）A.牛血清白蛋白B.小牛血清C.明膠D.乳清蛋白3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物包括（）A.HRPB.APC.ALPD.辣根過氧化物酶4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的終止液成分包括（）A.HClB.NaOHC.SDSD.無水乙醇5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的標(biāo)準(zhǔn)品來源包括（）A.市售標(biāo)準(zhǔn)品B.自制標(biāo)準(zhǔn)品C.國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品D.參考品三、填空題1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的封閉時(shí)間為_____小時(shí)。2.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的洗滌次數(shù)為_____次。3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的顯色劑為_____。4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的終止液濃度為_____mol/L。5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的檢測(cè)波長(zhǎng)為_____nm。四、判斷題（√/×）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉不完全會(huì)導(dǎo)致背景吸收增加。2.ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致信號(hào)強(qiáng)度降低。3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的孔間距應(yīng)均勻一致。4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本稀釋倍數(shù)應(yīng)適當(dāng)。5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液應(yīng)避免使用過濃。五、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)的基本步驟。六、論述題1.論述ELISA實(shí)驗(yàn)中，如何提高檢測(cè)靈敏度和特異性。七、案例分析1.患者主訴：反復(fù)發(fā)熱，持續(xù)1周。現(xiàn)病史：患者一周前無明顯誘因出現(xiàn)發(fā)熱，體溫最高38.5℃，伴有乏力、頭痛，自行服用退燒藥后體溫有所下降，但仍有反復(fù)發(fā)熱。體征：體溫38.2℃，心率100次/分，呼吸20次/分，血壓120/80mmHg，全身淺表淋巴結(jié)無腫大，心肺腹檢查無異常。關(guān)鍵輔助檢查結(jié)果：血常規(guī)示白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，中性粒細(xì)胞比例增高。問題1：初步診斷。問題2：進(jìn)一步檢查。2.患者主訴：咳嗽，咳黃痰，伴發(fā)熱3天?，F(xiàn)病史：患者3天前出現(xiàn)咳嗽，咳黃痰，發(fā)熱，體溫最高39℃，自行服用抗生素后癥狀無緩解。體征：體溫39.2℃，心率110次/分，呼吸22次/分，血壓110/70mmHg，雙肺呼吸音粗，可聞及濕啰音。關(guān)鍵輔助檢查結(jié)果：血常規(guī)示白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，中性粒細(xì)胞比例增高，C反應(yīng)蛋白升高。問題1：鑒別診斷。問題2：治療原則。試卷答案一、單項(xiàng)選題（答案）1.答案：A解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉是為了減少非特異性吸附，提高實(shí)驗(yàn)的特異性。2.答案：B解析：HRP標(biāo)記的二抗主要用于檢測(cè)抗體，增強(qiáng)信號(hào)強(qiáng)度。3.答案：B解析：洗滌步驟的主要目的是減少背景吸收，提高實(shí)驗(yàn)的特異性。4.答案：B解析：TMB顯色反應(yīng)的最佳pH值是6.0-7.0，此時(shí)顯色效果最佳。5.答案：B解析：終止液的主要作用是停止酶促反應(yīng)，終止顯色過程。6.答案：C解析：標(biāo)準(zhǔn)品的濃度通常是10.0ng/mL，便于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.答案：A解析：酶標(biāo)儀的檢測(cè)波長(zhǎng)通常是450nm，此時(shí)TMB顯色反應(yīng)的信號(hào)最強(qiáng)。8.答案：C解析：樣本稀釋的主要目的是提高檢測(cè)靈敏度，減少干擾因素。9.答案：C解析：競(jìng)爭(zhēng)性ELISA主要用于檢測(cè)抗原，通過競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合原理進(jìn)行檢測(cè)。10.答案：B解析：間接ELISA主要用于檢測(cè)抗體，通過間接標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測(cè)。二、多項(xiàng)選題（答案）1.答案：A,B解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的洗滌液成分包括PBS和TBS，這些緩沖液能提供適宜的pH環(huán)境。2.答案：A,B,C解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的封閉液成分包括牛血清白蛋白、小牛血清和明膠，這些成分能減少非特異性吸附。3.答案：A,B,D解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物包括HRP、AP和ALP，這些酶能催化顯色反應(yīng)。4.答案：A,B解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的終止液成分包括HCl和NaOH，這些強(qiáng)酸強(qiáng)堿能終止酶促反應(yīng)。5.答案：A,B,C解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的標(biāo)準(zhǔn)品來源包括市售標(biāo)準(zhǔn)品、自制標(biāo)準(zhǔn)品和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，這些標(biāo)準(zhǔn)品能提供準(zhǔn)確的濃度參考。三、填空題（答案）1.答案：2-4解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的封閉時(shí)間為2-4小時(shí)，封閉時(shí)間過長(zhǎng)或過短都會(huì)影響封閉效果。2.答案：5-6解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的洗滌次數(shù)為5-6次，洗滌次數(shù)過多或過少都會(huì)影響背景吸收。3.答案：TMB解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的顯色劑為TMB，TMB能產(chǎn)生藍(lán)色化合物，便于檢測(cè)。4.答案：2解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的終止液濃度為2mol/L，此時(shí)能有效地終止酶促反應(yīng)。5.答案：450解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的檢測(cè)波長(zhǎng)為450nm，此時(shí)TMB顯色反應(yīng)的信號(hào)最強(qiáng)。四、判斷題（答案）1.答案：√解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉不完全會(huì)導(dǎo)致背景吸收增加，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.答案：√解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致信號(hào)強(qiáng)度降低，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3.答案：√解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的孔間距應(yīng)均勻一致，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.答案：√解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本稀釋倍數(shù)應(yīng)適當(dāng)，過高或過低都會(huì)影響檢測(cè)靈敏度。5.答案：√解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液應(yīng)避免使用過濃，過濃的終止液會(huì)影響顯色反應(yīng)。五、簡(jiǎn)答題（答案）答：ELISA實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括：1.包被：將抗原或抗體包被在酶標(biāo)板上。2.封閉：用封閉液封閉酶標(biāo)板，減少非特異性吸附。3.結(jié)合：加入樣本和酶標(biāo)記物，進(jìn)行特異性結(jié)合。4.洗滌：用洗滌液洗滌酶標(biāo)板，減少背景吸收。5.顯色：加入顯色劑，進(jìn)行酶促反應(yīng)。6.終止：加入終止液，終止酶促反應(yīng)。7.檢測(cè)：用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值。六、論述題（答案）答：ELISA實(shí)驗(yàn)中，提高檢測(cè)靈敏度和特異性的方法包括：1.優(yōu)化包被條件：選擇合適的包被抗原濃度和包被時(shí)間，確保包被效果。2.優(yōu)化封閉條件：選擇合適的封閉液成分和封閉時(shí)間，減少非特異性吸附。3.優(yōu)化結(jié)合條件：選擇合適的樣本稀釋倍數(shù)和結(jié)合時(shí)間，提高結(jié)合效率。4.優(yōu)化洗滌條件：選擇合適的洗滌液成分和洗滌次數(shù)，減少背景吸收。5.優(yōu)化顯色條件：選擇合適的顯色劑濃度和顯色時(shí)間，提高顯色效