2025年安徽pcr考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的發(fā)明者是？A.穆利斯B.桑格C.吉爾伯特2.PCR反應(yīng)中常用的酶是？A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.限制性內(nèi)切酶3.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括？A.變性B.退火C.轉(zhuǎn)錄4.引物設(shè)計(jì)的原則不包括？A.長(zhǎng)度合適B.GC含量適當(dāng)C.隨意序列5.PCR反應(yīng)體系中模板的作用是？A.提供反應(yīng)場(chǎng)所B.提供反應(yīng)原料C.提供擴(kuò)增模板6.以下哪種不是PCR反應(yīng)的緩沖液成分？A.Tris-HClB.EDTAC.葡萄糖7.PCR擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度主要取決于？A.引物長(zhǎng)度B.模板長(zhǎng)度C.酶的活性8.實(shí)時(shí)熒光定量PCR主要用于？A.核酸定量分析B.蛋白質(zhì)定量分析C.細(xì)胞計(jì)數(shù)9.PCR技術(shù)可用于？A.基因克隆B.蛋白質(zhì)表達(dá)C.細(xì)胞培養(yǎng)10.以下關(guān)于PCR反應(yīng)條件說(shuō)法錯(cuò)誤的是？A.溫度需嚴(yán)格控制B.時(shí)間固定不變C.各成分比例要合適答案：1.A2.A3.C4.C5.C6.C7.A8.A9.A10.B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的特點(diǎn)包括？A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.操作簡(jiǎn)便D.可擴(kuò)增RNA2.PCR反應(yīng)體系包括？A.模板B.引物C.DNA聚合酶D.dNTP3.影響PCR反應(yīng)的因素有？A.溫度B.引物濃度C.模板濃度D.酶的用量4.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素有？A.特異性B.避免形成二聚體C.與模板互補(bǔ)性D.長(zhǎng)度一致5.PCR技術(shù)可應(yīng)用于？A.遺傳病診斷B.病原體檢測(cè)C.腫瘤診斷D.基因分型6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法有？A.SYBRGreen法B.TaqMan探針?lè)–.分子信標(biāo)法D.雙鏈DNA嵌入法7.PCR反應(yīng)的延伸溫度一般為？A.55℃B.72℃C.80℃D.95℃8.以下哪些是PCR儀的類型？A.普通PCR儀B.梯度PCR儀C.實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀D.恒溫PCR儀9.PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法有？A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.酶切分析10.提高PCR擴(kuò)增效率的方法有？A.優(yōu)化反應(yīng)體系B.選擇合適引物C.提高模板質(zhì)量D.增加酶量答案：1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABC7.B8.ABCD9.ABCD10.ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)只能擴(kuò)增DNA。（）2.引物濃度越高，PCR擴(kuò)增效果越好。（）3.PCR反應(yīng)中變性溫度越高越好。（）4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR不需要電泳檢測(cè)。（）5.模板DNA純度對(duì)PCR反應(yīng)影響不大。（）6.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可直接用于測(cè)序。（）7.不同TaqDNA聚合酶對(duì)PCR結(jié)果無(wú)影響。（）8.PCR反應(yīng)體系中的dNTP濃度越高越好。（）9.引物的3'端不能互補(bǔ)。（）10.PCR技術(shù)可用于檢測(cè)病毒核酸。（）答案：1.√2.×3.×4.√5.×6.×7.×8.×9.√10.√四、簡(jiǎn)答題（總4題，每題5分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。通過(guò)變性、退火、延伸三個(gè)步驟的循環(huán)，使模板DNA在DNA聚合酶作用下，以引物為起始點(diǎn)，利用dNTP合成新的DNA鏈，實(shí)現(xiàn)特定片段的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。2.引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)有哪些？長(zhǎng)度合適，一般15-30bp；GC含量適當(dāng)，40%-60%；特異性強(qiáng)，避免與非靶序列互補(bǔ)；避免形成二聚體；3'端不能互補(bǔ)且與模板緊密配對(duì)。3.影響PCR反應(yīng)的主要因素有哪些？溫度、引物濃度、模板濃度、DNA聚合酶用量、dNTP濃度、緩沖液成分等。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)是什么？可實(shí)現(xiàn)核酸的定量分析，靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速，無(wú)需后續(xù)電泳檢測(cè)，能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程。五、討論題（總4題，每題5分）1.如何優(yōu)化PCR反應(yīng)體系以獲得更好的擴(kuò)增效果？要選擇合適的引物、高質(zhì)量的模板，優(yōu)化各成分濃度，如引物濃度、DNA聚合酶用量、dNTP濃度等，還要注意緩沖液成分及反應(yīng)條件，如溫度、循環(huán)次數(shù)等，綜合考慮以提高擴(kuò)增效果。2.PCR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及局限性。應(yīng)用：可快速準(zhǔn)確檢測(cè)病原體核酸、進(jìn)行遺傳病診斷、腫瘤基因分型等。局限性：易出現(xiàn)假陽(yáng)性，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作要求高，可能因污染導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，且擴(kuò)增片段長(zhǎng)度有限。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果分析時(shí)應(yīng)注意什么？要注意標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及質(zhì)量，確保定量準(zhǔn)確；分析Ct值的可靠性，Ct值過(guò)高或過(guò)低可能提示異常；還要考慮樣本的重復(fù)性及與正常