綿羊細(xì)管冷凍精液操作規(guī)程2018-05-30實(shí)施2018-05-30實(shí)施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I標(biāo)準(zhǔn)下載本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求編制。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站提出。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站、新疆天山畜牧生物工程股份有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：耿娟、衛(wèi)新璞、譚世新、王玉欽、楊楠、王愛芳、孫巖、鄧強(qiáng)、熱孜亞·買買提、程黎明、賈旭升、田曉陽、王永力、陳蕾。標(biāo)準(zhǔn)下載1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了綿羊細(xì)管冷凍精液(以下簡稱細(xì)管凍精)制作前的準(zhǔn)備、采精、精液品質(zhì)外觀檢查、件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。采集精液所用玻璃器具(集精杯、溫度計(jì))、假陰道充氣活塞、鑷子等都必須用洗滌液熱水清洗后用75%酒精棉球擦洗消毒，再用蒸餾水沖洗3遍后置于烘箱中加熱至(1)將羊用集精杯插入假陰道一段；(2)用0.9%氯化鈉溶液沖洗假陰道內(nèi)壁2次；(3)假陰道夾層注入50℃~60℃溫水，水量控制在150mL～180mL。添加假陰道內(nèi)壁的水溫應(yīng)根據(jù)季節(jié)的變化調(diào)整溫度，內(nèi)胎溫度保持在38℃~40℃用于采精。(4)通過假陰道夾層開關(guān)出口處吹氣，使內(nèi)胎形成三角形；(5)凡士林涂抹假陰道內(nèi)壁整體面積的2/3處待用。待采。采精用的臺(tái)羊一般選擇發(fā)情旺盛的健康母羊(也可采用臺(tái)羊)。2莖),公羊射精動(dòng)作很快，發(fā)現(xiàn)抬頭、挺腰、前沖，表示射精完畢。隨著公羊從臺(tái)羊身上滑下時(shí)，緩慢配種季節(jié)，成年種公羊每周采精4次～6次，也可一天采精2次(間隔時(shí)間為10min～15min)休息幾乎無空隙者評為“密”,每毫升約30億～60億精子；精子間隙大約為一個(gè)精子距離者評為“中”,每35.3精液活力顯微鏡檢查方法評定精子活力的顯微鏡載物臺(tái)溫度為37℃~38℃為宜，也可利用自制保溫箱38℃~40℃檢查活力。5.3.2活力檢查方法在載玻片上滴一滴精液，然后用蓋玻片均勻蓋著整個(gè)液面，做成壓片檢查標(biāo)本，在200倍～400倍顯微鏡下觀察活力。在蓋玻片上滴一滴精液，然后再凹玻片上的凹窩中作成懸滴狀檢查標(biāo)本，置于顯微鏡下放大400倍進(jìn)行觀察。5.4精子活力評定方法5.4.1蓋玻片和載玻片要事先洗凈擦干，檢查活力時(shí)應(yīng)預(yù)熱。5.4.2評定精液活力時(shí)水浴鍋的溫度須保持在32℃~38.5℃溫度下檢查活力為宜。有條件的單位可用帶有恒溫裝置的顯微鏡或在顯微鏡的載物臺(tái)上裝一個(gè)恒溫器觀察活力。5.4.3每個(gè)滴片要觀察三個(gè)以上視野，不同層面的精子運(yùn)動(dòng)狀況，所呈現(xiàn)的前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)所占的百分率并給予評定。種公羊的新鮮精液應(yīng)符合下列質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方可凍精，對其中任何一項(xiàng)不符合標(biāo)準(zhǔn)的，不得用于制作冷凍精液。a)原精液精子活力：即呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子活力≥65%;b)原精液精子密度≥10×10?個(gè)/mL;c)原精液精子畸形率≤15%。6精液稀釋保護(hù)液與配制配制凍精用的稀釋保護(hù)液，必須使用雙重蒸餾水、新鮮的卵黃和化學(xué)分析純試劑等，所用器具保證清潔、干燥、無菌。6.1配制要求6.1.1所有稀釋溶液(除卵黃外)都必須經(jīng)過濾后并在水浴中煮沸消毒，冷卻至35℃~38℃,再加卵黃和抗菌素，甘油單獨(dú)水浴蒸煮消毒30min～45min。6.1.2配制好的稀釋液應(yīng)做好標(biāo)記，并將三角瓶口蓋用濾膜封好后放入4℃的冰箱冷藏。6.1.3稀釋保護(hù)劑必須現(xiàn)用現(xiàn)配。6.2配方成分Tirs檸檬酸鈉果糖抗菌素甘油蛋黃雙蒸水4稀釋后的精液在30℃~35℃范圍采用逐漸降溫法，在1h～2h內(nèi)使稀釋后的精液溫度降至4℃,并著裝要求進(jìn)行無菌操作，嚴(yán)格禁止異味存在(酒味、煙味)。5標(biāo)準(zhǔn)下載8.2.1將液氮閥、增壓閥打開進(jìn)行增壓，待液氮壓力(不能超過0.3MPa)平穩(wěn)后開始冷凍操作。8.2.2開啟冷凍程序，將冷凍儀預(yù)冷至4℃,按照9.2.1每一劑量細(xì)管凍精中總精子數(shù)≥5000萬，每一劑量細(xì)管凍精中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)≥1500萬。9.2.2解凍后的精子活力≥35%以上。9.2.3解凍后的精子畸形率≤20%。9.2.4解凍后的每一細(xì)管精液中菌落數(shù)≤800個(gè)。恒溫水浴鍋溫度和相差顯微鏡恒溫板溫度均調(diào)整至37℃~38.5℃為宜。布擦干水漬，雙手搓動(dòng)數(shù)下使其均勻，用細(xì)管剪刀6參見附錄A)。7(資料性附錄)綿羊公羊品種代號(hào)A.1導(dǎo)言本附錄給出了最簡稱的綿羊公羊品種代號(hào)。A.2原則和方法以綿羊品種英譯漢的漢語名稱第一和第二個(gè)字的漢語拼音的第一字母組合；同一品種毛色不同的，在該品種代號(hào)前加該毛色的漢語拼音的第一字母；涉及國家為多字的，以該國的第一字和品種第一字的漢語拼音第一字母組合；如仍不能區(qū)分則再加上區(qū)分性狀的第一字的漢語拼音的第一字母；如品種代號(hào)按照上述規(guī)則簡寫后仍有重號(hào)，則品種分布較為廣泛性的取漢語名稱第一和第二個(gè)字的漢語拼音的第一字母組合；其它取第一、第二和第三個(gè)字的漢語拼音的第一字母組合；示例1:陶賽特羊的品種代號(hào)以“陶”和“塞”兩個(gè)漢語拼音第一字母組合為TS;示例2:中國美利奴羊(軍墾型)的品種代號(hào)以“中”、“美”和“軍”三個(gè)漢語拼音第一字母組A.3不同品種公羊代號(hào)不同品種公羊代號(hào)見表A.3公羊品種公羊品種阿勒泰羊羅布羊白頭杜泊羊黑頭薩?？搜虬蜖柍搜虬褪舶菅蛱召愄匮虬最^薩?？搜虬鸵舨剪斂搜蛲卖敺谘虿呃蘸谘蛐∥埠蚝陬^杜泊羊