生化技術(shù)考試題庫及答案生化技術(shù)考試試卷一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.下列哪種方法不屬于蛋白質(zhì)分離純化的方法（）A.鹽析法B.離子交換層析C.凝膠過濾D.分光光度法2.核酸分子雜交技術(shù)的基本原理是（）A.抗原抗體反應(yīng)B.堿基互補配對C.蛋白質(zhì)核酸相互作用D.酶促反應(yīng)3.常用于測定蛋白質(zhì)分子量的方法是（）A.聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）B.等電聚焦電泳C.紙電泳D.醋酸纖維素薄膜電泳4.以下哪種酶在DNA復(fù)制中起重要作用（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA聚合酶C.RNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶5.凝膠過濾層析中，最先從層析柱流出的是（）A.分子量最小的蛋白質(zhì)B.分子量最大的蛋白質(zhì)C.帶電荷最多的蛋白質(zhì)D.帶電荷最少的蛋白質(zhì)6.親和層析的原理是（）A.根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同B.根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷不同C.根據(jù)蛋白質(zhì)與配體的特異性結(jié)合D.根據(jù)蛋白質(zhì)的溶解度不同7.下列關(guān)于PCR技術(shù)的描述，錯誤的是（）A.需要模板DNAB.需要引物C.不需要DNA聚合酶D.需要dNTP8.蛋白質(zhì)等電點是指（）A.蛋白質(zhì)溶液的pH值等于7時溶液的pHB.蛋白質(zhì)分子呈正離子狀態(tài)時溶液的pHC.蛋白質(zhì)分子呈負離子狀態(tài)時溶液的pHD.蛋白質(zhì)分子的凈電荷為零時溶液的pH9.核酸的紫外吸收峰在（）A.220nmB.260nmC.280nmD.340nm10.下列哪種物質(zhì)可用于沉淀核酸（）A.乙醇B.丙酮C.氯仿D.異戊醇11.離子交換層析中，若要分離帶正電荷的蛋白質(zhì)，應(yīng)選擇（）A.陽離子交換樹脂B.陰離子交換樹脂C.凝膠過濾介質(zhì)D.親和介質(zhì)12.基因工程中常用的載體不包括（）A.質(zhì)粒B.噬菌體C.病毒D.染色體13.蛋白質(zhì)變性是由于（）A.一級結(jié)構(gòu)改變B.空間結(jié)構(gòu)破壞C.肽鍵斷裂D.氨基酸組成改變14.下列哪種方法可用于檢測蛋白質(zhì)的純度（）A.電泳法B.鹽析法C.透析法D.超濾法15.酶的活性中心是指（）A.酶分子上含有必需基團的肽段B.酶分子與底物結(jié)合的部位C.酶分子發(fā)揮催化作用的關(guān)鍵性結(jié)構(gòu)區(qū)域D.酶分子中心部位的一種特殊結(jié)構(gòu)二、多項選擇題（每題3分，共15分）1.以下屬于蛋白質(zhì)純化常用方法的有（）A.鹽析B.有機溶劑沉淀C.親和層析D.離子交換層析2.PCR反應(yīng)體系中包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.DNA聚合酶D.dNTP3.核酸提取過程中，常用的去除蛋白質(zhì)的方法有（）A.酚氯仿抽提B.蛋白酶K消化C.鹽析D.乙醇沉淀4.影響酶促反應(yīng)速度的因素有（）A.底物濃度B.酶濃度C.溫度D.pH值5.基因工程的基本操作步驟包括（）A.目的基因的獲取B.載體的選擇與構(gòu)建C.重組DNA分子的導(dǎo)入與篩選D.目的基因的表達與檢測三、判斷題（每題2分，共10分）1.蛋白質(zhì)的變性是不可逆的過程。（）2.核酸分子雜交只能在DNA與DNA之間進行。（）3.凝膠過濾層析中，分子越小的物質(zhì)在層析柱中停留時間越短。（）4.酶的活性可以通過改變溫度和pH值來調(diào)節(jié)。（）5.基因工程中，載體的作用是將目的基因?qū)胧荏w細胞。（）四、簡答題（每題10分，共30分）1.簡述蛋白質(zhì)分離純化的一般原則和常用方法。2.簡述PCR技術(shù)的原理和基本步驟。3.簡述核酸提取的基本步驟和注意事項。五、論述題（15分）論述基因工程在現(xiàn)代生物技術(shù)中的應(yīng)用及意義。答案一、單項選擇題1.D。分光光度法主要用于物質(zhì)的定量分析，不屬于蛋白質(zhì)分離純化的方法。鹽析法、離子交換層析、凝膠過濾都是常見的蛋白質(zhì)分離純化方法。2.B。核酸分子雜交技術(shù)是基于堿基互補配對的原理，使不同來源的核酸單鏈之間形成雙鏈。3.A。SDSPAGE常用于測定蛋白質(zhì)分子量，因為SDS能使蛋白質(zhì)變性并帶上相同密度的負電荷，在電場中遷移速度主要取決于分子量大小。4.B。DNA聚合酶在DNA復(fù)制中起重要作用，負責(zé)將脫氧核苷酸連接成新的DNA鏈。5.B。凝膠過濾層析中，分子量最大的蛋白質(zhì)不能進入凝膠顆粒內(nèi)部，沿凝膠顆粒間的空隙最先流出。6.C。親和層析是根據(jù)蛋白質(zhì)與配體的特異性結(jié)合來分離蛋白質(zhì)的方法。7.C。PCR技術(shù)需要模板DNA、引物、DNA聚合酶和dNTP等。8.D。蛋白質(zhì)等電點是指蛋白質(zhì)分子的凈電荷為零時溶液的pH。9.B。核酸的紫外吸收峰在260nm，這是由于核酸中的堿基對紫外光有吸收。10.A。乙醇可用于沉淀核酸，使核酸從溶液中析出。11.A。分離帶正電荷的蛋白質(zhì)，應(yīng)選擇陽離子交換樹脂，因為陽離子交換樹脂帶負電荷，可與帶正電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合。12.D?；蚬こ讨谐Ｓ玫妮d體有質(zhì)粒、噬菌體、病毒等，染色體不是常用載體。13.B。蛋白質(zhì)變性是由于空間結(jié)構(gòu)破壞，一級結(jié)構(gòu)一般不改變。14.A。電泳法可用于檢測蛋白質(zhì)的純度，若蛋白質(zhì)樣品在電泳中呈現(xiàn)單一的條帶，則說明純度較高。15.C。酶的活性中心是酶分子發(fā)揮催化作用的關(guān)鍵性結(jié)構(gòu)區(qū)域。二、多項選擇題1.ABCD。鹽析、有機溶劑沉淀、親和層析、離子交換層析都是蛋白質(zhì)純化常用的方法。2.ABCD。PCR反應(yīng)體系中包含模板DNA、引物、DNA聚合酶和dNTP。3.AB。酚氯仿抽提和蛋白酶K消化是核酸提取過程中常用的去除蛋白質(zhì)的方法。鹽析主要用于蛋白質(zhì)的分離，乙醇沉淀用于核酸的沉淀。4.ABCD。底物濃度、酶濃度、溫度、pH值都會影響酶促反應(yīng)速度。5.ABCD?；蚬こ痰幕静僮鞑襟E包括目的基因的獲取、載體的選擇與構(gòu)建、重組DNA分子的導(dǎo)入與篩選以及目的基因的表達與檢測。三、判斷題1.×。有些蛋白質(zhì)的變性是可逆的，如在一定條件下，某些蛋白質(zhì)變性后可復(fù)性。2.×。核酸分子雜交可以在DNA與DNA、DNA與RNA、RNA與RNA之間進行。3.×。凝膠過濾層析中，分子越小的物質(zhì)能進入凝膠顆粒內(nèi)部，在層析柱中停留時間越長。4.√。溫度和pH值會影響酶的活性，通過改變它們可以調(diào)節(jié)酶促反應(yīng)速度。5.√。基因工程中，載體的作用是將目的基因?qū)胧荏w細胞。四、簡答題1.一般原則：前處理：選擇合適的生物材料，進行破碎和提取，使目標(biāo)蛋白質(zhì)釋放到溶液中。粗分離：采用鹽析、有機溶劑沉淀等方法，除去大量雜質(zhì)，使目標(biāo)蛋白質(zhì)初步濃縮。細分離：利用各種層析技術(shù)（如離子交換層析、親和層析、凝膠過濾等）進一步純化蛋白質(zhì)，提高純度。純度鑒定：采用電泳、等電聚焦等方法檢測蛋白質(zhì)的純度。常用方法：鹽析法：通過向蛋白質(zhì)溶液中加入一定量的中性鹽，使蛋白質(zhì)溶解度降低而沉淀。有機溶劑沉淀法：利用有機溶劑降低蛋白質(zhì)的溶解度使其沉淀。離子交換層析：根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的不同進行分離。親和層析：利用蛋白質(zhì)與配體的特異性結(jié)合進行分離。凝膠過濾：根據(jù)蛋白質(zhì)分子量大小進行分離。2.原理：PCR技術(shù)是一種體外擴增DNA的技術(shù)，它基于DNA半保留復(fù)制的原理，在體外模擬細胞內(nèi)DNA復(fù)制的過程。通過高溫變性使雙鏈DNA解開成單鏈，低溫退火使引物與單鏈DNA模板結(jié)合，中溫延伸使DNA聚合酶在引物的引導(dǎo)下合成新的DNA鏈，經(jīng)過多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴增?；静襟E：變性：將反應(yīng)體系加熱至9495℃，使雙鏈DNA變性為單鏈。退火：將溫度降至引物的退火溫度（一般5065℃），引物與單鏈DNA模板互補結(jié)合。延伸：將溫度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP為原料，在引物的引導(dǎo)下合成新的DNA鏈。循環(huán)：重復(fù)變性、退火、延伸的過程，一般進行2535個循環(huán)。3.基本步驟：樣品處理：選擇合適的生物樣品，進行破碎，使核酸釋放出來。去除蛋白質(zhì)：可采用酚氯仿抽提、蛋白酶K消化等方法去除蛋白質(zhì)。核酸沉淀：加入乙醇等沉淀劑，使核酸從溶液中析出。洗滌：用70%乙醇洗滌沉淀，去除雜質(zhì)。溶解：用適量的緩沖液溶解核酸沉淀。注意事項：防止核酸酶的污染：核酸酶會降解核酸，操作過程中要使用無核酸酶的試劑和器材，可加入核酸酶抑制劑。避免核酸的機械損傷：操作過程中要輕柔，避免劇烈振蕩和攪拌?？刂茰囟群蚿H值：不同的核酸提取方法對溫度和pH值有一定要求，要嚴格控制。防止交叉污染：不同樣品的操作要分開進行，避免交叉污染。五、論述題應(yīng)用：醫(yī)藥領(lǐng)域：生產(chǎn)基因工程藥物，如胰島素、生長激素、干擾素等，為疾病治療提供了新的手段?；蛟\斷，通過檢測特定基因的存在或變化，用于疾病的早期診斷和遺傳疾病的篩查?；蛑委?，將正常基因?qū)牖颊呒毎?，以糾正或補償基因缺陷，治療某些遺傳性疾病和癌癥等。農(nóng)業(yè)領(lǐng)域：培育轉(zhuǎn)基因作物，如抗蟲棉、抗除草劑大豆等，提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)，減少農(nóng)藥的使用。改良家畜品種，通過基因工程技術(shù)可以提高家畜的生長速度、抗病能力等。工業(yè)領(lǐng)域：利用基因工程改造微生物，生產(chǎn)工業(yè)用酶、生物燃料等，提高生產(chǎn)效率和降低成本。生物制藥工業(yè)中，基因工程技術(shù)用于生產(chǎn)疫苗、單克隆抗體等生物制品。意義：推動了生命科學(xué)的發(fā)展：基因工程技術(shù)為研究基因的結(jié)構(gòu)和功能提供