RPArapiddetectionmethodfor2025-04-25發(fā)布i 1 1 1 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 6 7T/SSESB13-2025.專利名稱：基于RPA技術(shù)現(xiàn)場檢測齊氏羅非魚的引物探針組合、試劑盒及.專利名稱：塔瑪亞歷山大藻RPA檢測試劑盒和RPA-LFD檢測系統(tǒng)及檢測方法1基于環(huán)境DNA技術(shù)的水生入侵物種RPA快速檢測方法本文件規(guī)定了利用環(huán)境DNA結(jié)合RPA技術(shù)檢測外來入侵水生生物紅耳彩龜zillii）和塔瑪亞歷山大藻（Alexandriumtamarense）的技術(shù)方法。DB32/T4539-2023淡水生物環(huán)HJ624-2011外來物種環(huán)境風(fēng)指存在于環(huán)境介質(zhì)(水、土壤、沉積物、生物膜、空氣等)或混合生物組織中的生物遺傳物質(zhì)(DNA)，包括但不限于生物體脫2T/SSESB13-2025外來入侵水生生物invasivealien物，經(jīng)側(cè)流層析遷移至檢測線（T線）時，生物素與固定化抗體結(jié)合顯紅色條帶；剩余復(fù)合物于質(zhì)控線（C線）被抗FAM抗體捕獲，驗證檢測有效性。該技術(shù)通過恒3食蚊魚（Gambusiaafinis）、齊氏羅非魚（Coptodonzillii）和塔瑪亞歷山大藻檢測對象名稱引物位置序列擴增長度擴增區(qū)域紅耳彩龜引物1上游引物5,-GCCCCTATCAATCAATTTAACCACGTAGCAT-3,268線粒體ND5-ND6下游引物5,-TGTATGTTATTCGTTTGGATTTTAGTGGAGTTTCA-3,探針5,-6-FAM-TATTGTCCTAGTTCAATGATGGCTACTGTT/dSpacer/TAAAATTAACCCACAA-C3Spacer-3,引物2上游引物5,-CGACAAATTCTTTAAATACCTACTAATCTTCC-3,249線粒體ND5下游引物5,-TTTAATGAGTTTGTTTTTGAAATGAGTCAGACC-3,探針5,-6-FAM-GATGGTGACGCGGCCGAGAAGATACACTCG/dSpacer/CATCAGCCTTAATAGC-C3Spacer-3,食蚊魚引物1上游引物5,-TGAAGCTACGAATACACAGACTATGAAGACTTAAA-3,217線粒體COX2下游引物5,-GTCCTGGCACTGCGTCTATTTTGATTCCGAGGGAG-3,探針5,-6-FAM-TTCGACTCATATATAGTCCCCACCCAAGAA/dSpacer/CTCACCCCTGGCCAAT-C3Spacer-3,引物2上游引物5,-AACTATTCTTTGACCGGACTCTGCCCCCCTAAAGG-3,238線粒體tRNA-Thr-D-loop下游引物5,-AATGAGAGTTATGATAGGACAATTCAATTTCGTCA-3,探針5,-6-FAM-TAAAATAGTGTATCCCTACATTAATGAAAT/dSpacer/TTCAAAATTGTAGGA-C3Spacer-3,齊氏羅非魚引物1上游引物5,-CCTACTTGTACAAAGAAACATGAAACATTGGGGTG-3,203線粒體CYTB下游引物5,-TGCGTTATCTACAGAGAAGCCCCCTCAGATTCACT-3,探針5,-6-FAM-CATCTCCACAGCCTTCTCCTCCGTGGCCCAT/dSpacer/ATCTGCCGAGATGTA-C3Spacer-3,塔瑪亞歷藻引物1上游引物5,-TGTTGTGAACAATAAAGGTCAATGTTTTGCATTG-3,核糖體下游引物5,-ATTCAGCAGGTTTATGTGCTTCACTTCACG-3,探針5,6-FAM-CGTGGGGCAGACCTGTTTCGTCATTTGATGTTGATATTTGTAAAT-C3Spacer-3,T/SSESB13-2025推薦采用0.45μm混合纖維素酯膜真空抽濾≥500mL水樣，同步設(shè)置陰性對照5T/SSESB13-2025生物廢棄物在處理之前應(yīng)采用高壓滅菌、消毒或灼燒等7紅耳彩龜擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：NC_011573.1）：GCCCCTATCAATCAATTTAACCACGTAGCATAAATAATCATAATTAAGAGAGGACGTTTATTGTCCTAGTTCAATGATGGCTACTGTTTAAAATTAACCCACAACATCTAACCCCTAATAGAATGCAACGTCCCACAAGACAAGCCTCGAACCATCTCCAGCACAACAAATAATGTTAACAACAACCCTCAACCAGAAATCAAAAACATCACACTACCATAATAATAAAACCATGAAACTCCACTAAAATCCAAACGAATAACATACA紅耳彩龜擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：NC_011573.1）：CGACAAATTCTTTAAATACCTACTAATCTTCCTAATAGCCATAATAATTTTAATCACATCTAACAATCTATTCCAATTTTTCATTGGCTGGGAAGGAGTAGGAATCATATCCTTCTTACTCATTGGATGGTGACGCGGCCGAGAAGATACACTCGCATCAGCCTTAATAGCCATTATCTACAACCGCATTGGTGACTTAGGGTTATATATCGGCATGGTCTGACTCATTTCAAAAACAAACTCATTAAA食蚊魚擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：NC004388.1）：TGAAGCTACGAATACACAGACTATGAAGACTTAAACTTCGACTCATATATAGTCCCCACCCAAGAACTCACCCCTGGCCAATTTCGACTACTAGAAACAGATCACCGCATGGTAGTCCCCCTAGAATCCCCTATTCGTGTCTTAATCTCTGCTGATGACGTCCTCCACTCCTGAGCAGTTCCCTCCCTCGGAATCAAAATAGACGCAGTGCCAGGAC食蚊魚擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：NC004388.1）：AACTATTCTTTGACCGGACTCTGCCCCCCTAAAGGACATGTATGTATTATCCCCATTAATCTATTTTAACCATTTAAAATAGTGTATCCCTACATTAATGAAATTTCAAAATTGTAGGAATTTAATAACATTAAACATATCAAATAATCAATAAGGTAGACAAAAACCACTATATTAAAATTCCAACACTCCTGTAAATAACATGACGAAATTGAATTGTCCTATCATAACTCTCATT齊氏羅非魚擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：NC026110.1）：CCTACTTGTACAAAGAAACATGAAACATTGGGGTGATCCTCCTCCTCCTGACCATAATAACAGCCTTCGTGGGCTACGTCCTTCCCTGAGGACAAATATCATTCTGAGGTGCAACCGTCATCACAAATCTTCTCTCTGCAGTTCCCTACATCGGCAACTCTCTAGTCCAGTGAATCTGAGGGGGCTTCTCTGTAGATAACGCA塔瑪亞歷山大藻擴增靶標(biāo)參考序列（GenBank：JX173249.1）：TGTTGTGAACAAT