病理組織標本檢驗醫(yī)學細則一、病理組織標本檢驗醫(yī)學概述

病理組織標本檢驗醫(yī)學是醫(yī)學診斷領(lǐng)域中不可或缺的組成部分，主要通過對患者組織、細胞樣本進行系統(tǒng)性檢查，以輔助臨床醫(yī)生進行疾病診斷、鑒別診斷及預后評估。本細則旨在規(guī)范病理組織標本的檢驗流程，確保檢驗結(jié)果的準確性和可靠性。

（一）檢驗目的

1.確定病變性質(zhì)，如炎癥、腫瘤等。

2.明確腫瘤的良惡性及分期。

3.為臨床治療方案提供依據(jù)。

4.監(jiān)測疾病進展及治療效果。

（二）檢驗范圍

1.常見組織病理學檢查。

2.免疫組化檢測。

3.特殊染色及分子病理檢測。

二、標本采集與處理

規(guī)范的標本采集和處理是保證檢驗結(jié)果準確性的前提。

（一）標本采集要點

1.選擇合適的組織部位，避免壞死或污染區(qū)域。

2.使用無菌器械進行取樣，減少人為污染。

3.標本尺寸應滿足檢驗需求，一般不小于0.5cm×0.5cm。

4.及時固定，避免標本自溶或干燥。

（二）標本固定與保存

1.固定液選擇：常用10%中性甲醛溶液，固定時間一般4-6小時。

2.固定注意事項：

(1)標本與固定液體積比例至少為1:10。

(2)避免標本重疊，確保充分浸泡。

3.保存條件：

(1)短期保存：4℃冰箱冷藏。

(2)長期保存：-20℃冷凍保存。

（三）標本送檢要求

1.標本容器：使用帶塞子的標本瓶，防止漏液。

2.標本標簽：清晰注明患者信息、采集時間及部位。

3.送檢時效：盡量在2小時內(nèi)送至實驗室，避免延遲固定。

三、檢驗流程與技術(shù)

檢驗流程分為樣本接收、制備及檢測三個主要階段。

（一）樣本接收與登記

1.核對標本標簽信息與申請單。

2.檢查標本完整性，記錄異常情況（如出血、污染）。

3.登記系統(tǒng)，分配檢驗編號。

（二）組織切片制備

1.石蠟包埋：

(1)標本修塊，厚度3-4mm。

(2)浸漬脫水，梯度乙醇系列（70%-100%）。

(3)透明、浸蠟、包埋，確保組織切片平整。

2.切片與染色：

(1)切片厚度4-5μm，使用切片機均勻切片。

(2)常規(guī)染色：HE染色（蘇木精-伊紅染色）。

(3)特殊染色：根據(jù)需求選擇特殊染色方法（如嗜銀染色、膠原染色）。

（三）免疫組化檢測

1.操作步驟：

(1)切片脫蠟至水。

(2)抗體孵育，溫度37℃，時間30分鐘。

(3)顯色反應，常用DAB顯色。

(4)復水、封片。

2.質(zhì)量控制：

(1)使用陽性對照和陰性對照。

(2)定期校準儀器，確保結(jié)果一致性。

四、檢驗結(jié)果報告與解讀

檢驗結(jié)果報告是臨床決策的重要依據(jù)，需確保信息的準確性和完整性。

（一）報告內(nèi)容

1.基本信息：患者姓名、年齡、標本編號。

2.檢驗項目：組織學診斷、免疫組化結(jié)果等。

3.診斷結(jié)論：良惡性判斷及分級。

4.備注：特殊發(fā)現(xiàn)或建議。

（二）結(jié)果解讀要點

1.組織學診斷：根據(jù)細胞形態(tài)、排列特征判斷病變性質(zhì)。

2.免疫組化結(jié)果分析：

(1)陽性表達部位及強度。

(2)結(jié)合臨床信息綜合判斷。

3.報告審核：由資深病理醫(yī)師復核，確保診斷準確性。

（三）報告時效

常規(guī)病理報告時效：24-48小時；特殊檢測（如分子病理）可延長至3-5天。

五、質(zhì)量控制與持續(xù)改進

為確保檢驗質(zhì)量，需建立完善的質(zhì)量控制體系。

（一）室內(nèi)質(zhì)量控制

1.定期進行盲法切片、染色，評估操作一致性。

2.使用質(zhì)控片（如已知陽性/陰性對照片）監(jiān)測方法學穩(wěn)定性。

（二）室間質(zhì)量評價

1.參加行業(yè)組織（如病理學會）的質(zhì)評活動。

2.對比外部實驗室結(jié)果，分析差異原因。

（三）持續(xù)改進措施

1.定期培訓檢驗人員，更新技術(shù)知識。

2.引入自動化設(shè)備，減少人為誤差。

3.收集臨床反饋，優(yōu)化檢驗流程。

---

三、檢驗流程與技術(shù)

檢驗流程分為樣本接收、制備及檢測三個主要階段。每個階段都有其特定的操作規(guī)范和質(zhì)量控制要點，以確保最終檢驗結(jié)果的準確性和可靠性。

(一)樣本接收與登記

1.標本抵達與初步檢查：

樣本到達實驗室后，檢驗人員首先核對送檢容器是否完好無損，確認無泄漏風險。

快速評估標本的整體狀況，包括大小、顏色、是否新鮮、有無明顯污染（如膿液、壞死組織覆蓋）等，并初步記錄觀察到的異?，F(xiàn)象。

檢查標本是否符合基本要求，例如是否有足夠的組織量（通常建議至少0.5cmx0.5cmx0.5cm），是否包含合適的切面（例如，對于腫瘤標本，應包含至少一個切面暴露出腫瘤邊緣）。

2.信息核對與確認：

仔細核對標本標簽上的信息（如患者標識碼、姓名、性別、年齡、采樣部位）與檢驗申請單上的信息是否完全一致。

確認申請單上填寫的檢驗項目與標本類型是否匹配（例如，是組織塊、細胞涂片還是細針穿刺物）。

如有疑問（如標簽不清、信息不符），應立即與送檢方溝通，確認無誤后方可進行后續(xù)處理。

3.系統(tǒng)登記與編號：

在實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS）或?qū)Ｓ玫怯洷局杏涗洏颖拘畔ⅰ?/p>

為每個樣本分配一個唯一的實驗室內(nèi)部編號，確保樣本從接收至報告發(fā)出的全程可追溯。

記錄樣本接收的具體日期和時間，以及送檢者信息（如科室、姓名等，根據(jù)實驗室規(guī)定決定是否記錄）。

對于需要特殊處理或保存條件的樣本（如需要快速檢驗、冷凍保存等），在登記時特別注明。

(二)組織切片制備

組織切片制備是連接原始組織樣本與顯微鏡檢視的關(guān)鍵橋梁，其技術(shù)細節(jié)直接影響病理診斷的準確性。

1.組織修塊與固定：

修塊：對于較大的標本，根據(jù)需要將其切割成適當大?。ㄍǔ?-2cm邊長）的小塊。修塊時盡量保留有代表性的組織區(qū)域，特別是腫瘤標本應包含邊緣、中心和可疑區(qū)域。修去明顯壞死、出血或污染的部分。

固定：這是至關(guān)重要的一步，目的是使組織細胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，防止自溶和腐敗。

固定液選擇：最常用的是10%中性緩沖甲醛溶液。選擇依據(jù)包括組織類型（如脂肪組織可能需要更長時間固定）、檢驗目的（如免疫組化通常需要較好的固定）。特殊情況下可能使用Bouin's液（適用于神經(jīng)組織、肌肉組織染色）等。

固定時間與溫度：常規(guī)組織固定時間建議為10-24小時，確保組織充分滲透。固定溫度通常為室溫（約20-25°C）。對于大型標本，可能需要適當延長固定時間。

固定液體積：建議標本與固定液體積比至少達到1:10，確保所有組織成分都能被充分浸泡。

注意事項：確保標本放入固定液中后沒有氣泡附著，避免影響固定效果。標記固定開始的時間。

2.組織處理流程（脫水、透明、浸蠟、包埋）：

脫水：目的是將組織中的水分逐漸置換出來，使其能夠被石蠟浸透。通常使用梯度乙醇系列進行脫水，步驟為：70%乙醇（過夜或數(shù)小時）、85%乙醇、95%乙醇（兩次，每次數(shù)小時）、純無水乙醇（兩次，每次數(shù)小時）。脫水過程需確保充分，否則后續(xù)石蠟浸入困難，切片易碎。

透明：使用二甲苯或苯甲苯等透明劑，使組織透明，與石蠟的密度接近，便于浸蠟。通常需要兩次透明，每次數(shù)小時至過夜。

浸蠟與包埋：將透明后的組織依次浸入不同濃度石蠟（如parcinawax）中，最后浸入熔化的全蠟中。使用模具將組織塊固定，然后緩慢冷卻至室溫，使石蠟完全凝固，完成包埋。包埋塊應堅實，無氣泡，便于切片。

3.切片與貼片：

切片：使用輪轉(zhuǎn)式切片機進行切片。根據(jù)需要調(diào)整切片厚度，常規(guī)組織病理學為4-5μm。切片時保持切片刀鋒銳利，確保切面平整、連續(xù)。對于特殊部位（如腦、腎上腺）或特殊要求（如連續(xù)切片），需特別操作。

取片與貼片：將切下的組織片小心取下，放置于經(jīng)過處理（如60°C烤箱預熱或使用特殊處理的載玻片）的玻璃載玻片上。使用專用粘貼劑（如蛋白膠、細胞貼）或直接利用高溫使蠟質(zhì)熔化粘附，確保組織片牢固地固定在載玻片上。

編號與標記：在貼好組織片的同時，在載玻片周圍相應位置放置帶有樣本編號的記號紙或直接在玻片邊緣做出標記，確保切片與原始樣本編號一一對應，防止混淆。

4.染色：

常規(guī)染色（HE染色）：這是最基本和最常用的染色方法，使用蘇木精（嗜堿性染料，使細胞核著色）和伊紅（嗜酸性染料，使細胞質(zhì)、肌纖維等著色）。染色過程包括脫蠟至水、入蘇木精染液（不同時間，根據(jù)組織類型調(diào)整）、分化（用酒精或鹽酸酒精溶液使細胞核著色均勻）、入伊紅染液、脫水（梯度酒精）、透明（二甲苯）、封片（用中性樹膠封片劑）。染色結(jié)果需達到細胞核染色清晰、細胞結(jié)構(gòu)顯示良好。

特殊染色：根據(jù)臨床診斷需要或特殊研究目的，選用特定的染色方法來顯示細胞內(nèi)的特殊成分或結(jié)構(gòu)。

酶染色：如堿性磷酸酶、酸性磷酸酶染色，用于識別某些細胞類型。

特殊蛋白質(zhì)染色：如波形蛋白（肌肉）、S-100蛋白（神經(jīng)、黑色素細胞）、結(jié)蛋白（骨骼肌）等，用于輔助鑒別診斷。

糖原染色（如PAS染色）：顯示細胞內(nèi)的糖原或某些多糖。

膠原纖維染色（如vanGieson染色、Masson染色）：用于觀察結(jié)締組織成分。

嗜銀染色（銀染）：用于顯示神經(jīng)內(nèi)分泌細胞、黑色素細胞、肌纖維等。

(三)免疫組化檢測

免疫組化（Immunohistochemistry,IHC）是一種利用抗體與組織細胞中特定抗原發(fā)生結(jié)合反應，并通過顯色劑顯色，從而在細胞水平上檢測特定蛋白質(zhì)或其他生物分子的技術(shù)，對于腫瘤的分子分型、預后評估及指導治療具有重要意義。

1.操作步驟：

切片處理：從已制備好的石蠟切片上取下載玻片，進行脫蠟至水的過程，這一步是確保抗體能夠進入組織的關(guān)鍵。

抗原修復：目的是使組織細胞內(nèi)的抗原決定簇暴露出來，增強抗體結(jié)合能力。常用方法有熱修復（微波或高壓鍋）和酶修復（如用胰蛋白酶消化）。修復條件需根據(jù)抗體說明書和抗原特性優(yōu)化。

封閉：為了阻斷非特異性抗體的結(jié)合，減少背景染色，使用封閉液（如含牛血清白蛋白BSA或脫脂奶粉的溶液）處理切片，通常在室溫下進行。

抗體孵育（primaryantibodyincubation）：將特異性針對目標抗原的單克隆或多克隆抗體滴加到切片上，置于濕盒中，在特定的溫度（通常是37°C）和濕度條件下孵育一定時間（如30分鐘至過夜），使抗體與組織中的抗原結(jié)合。有時需要使用抗體稀釋液進行稀釋。

洗滌：使用磷酸鹽緩沖液（PBS）或Tris緩沖液等洗脫掉未結(jié)合的游離抗體，通常需要洗滌3-5次，每次5-10分鐘。

生物素化二抗/酶標二抗孵育（secondaryantibodyincubation）：由于直接使用primaryantibody效率不高，通常需要加用二抗。二抗是能與primaryantibody特異性結(jié)合的抗體，且其上標記有生物素或酶（如辣根過氧化物酶HRP、堿性磷酸酶AP）。孵育條件與primaryantibody類似。如果是酶標二抗，則此步完成后即可以進行顯色。

洗滌：同樣需要洗滌，去除未結(jié)合的二抗。

顯色：

酶法顯色：如果使用的是酶標二抗，則加入相應的底物溶液（如DAB底物試劑盒用于HRP，產(chǎn)生棕黃色顯色；FastRed底物試劑盒用于AP，產(chǎn)生紅色顯色）。顯色反應在室溫避光條件下進行，時間需根據(jù)說明書和切片情況調(diào)整，直至達到滿意的顯色強度。反應結(jié)束后需用緩沖液充分洗滌終止反應。

化學發(fā)光法顯色：使用化學發(fā)光底物（如ECL底物），在加入底物后，發(fā)光信號會逐漸增強，可用成像系統(tǒng)捕捉圖像。該方法靈敏度較高，但信號持續(xù)時間相對較短。

復水與封片：洗去多余的底物或顯色產(chǎn)物，使切片重新回到水相。最后使用合適的封片劑（如中性樹膠）封片，保護染色結(jié)果，便于觀察和長期保存。

2.質(zhì)量控制：

陽性對照與陰性對照：每一批次的免疫組化檢測都必須包含已知陽性的陽性對照（PositiveControl）和已知陰性的陰性對照（NegativeControl）。

陽性對照：通常使用已知表達目標抗原的細胞系切片或已知陽性標本，用于確認整個檢測系統(tǒng)的有效性，即抗體和顯色系統(tǒng)是否能正常工作。

陰性對照：使用不加primaryantibody或用非特異性IgG替代primaryantibody的切片，用于排除非特異性染色，判斷背景染色水平是否在可接受范圍內(nèi)。

內(nèi)參照物（InternalPositiveControl）：有時也會使用內(nèi)參照物，如細胞角蛋白（CK，用于確認細胞成分）或核抗原（如DAPI復染確認細胞核），以確保染色過程中的技術(shù)環(huán)節(jié)沒有問題。

儀器校準：定期校準顯微鏡、成像系統(tǒng)等設(shè)備，確保觀察和記錄的準確性。

結(jié)果審核：由經(jīng)驗豐富的檢驗人員對免疫組化結(jié)果進行判讀和審核，確保染色質(zhì)量合格，結(jié)果判讀合理。對于疑難病例或結(jié)果可疑時，可能需要重復檢測或采用其他方法驗證。

一、病理組織標本檢驗醫(yī)學概述

病理組織標本檢驗醫(yī)學是醫(yī)學診斷領(lǐng)域中不可或缺的組成部分，主要通過對患者組織、細胞樣本進行系統(tǒng)性檢查，以輔助臨床醫(yī)生進行疾病診斷、鑒別診斷及預后評估。本細則旨在規(guī)范病理組織標本的檢驗流程，確保檢驗結(jié)果的準確性和可靠性。

（一）檢驗目的

1.確定病變性質(zhì)，如炎癥、腫瘤等。

2.明確腫瘤的良惡性及分期。

3.為臨床治療方案提供依據(jù)。

4.監(jiān)測疾病進展及治療效果。

（二）檢驗范圍

1.常見組織病理學檢查。

2.免疫組化檢測。

3.特殊染色及分子病理檢測。

二、標本采集與處理

規(guī)范的標本采集和處理是保證檢驗結(jié)果準確性的前提。

（一）標本采集要點

1.選擇合適的組織部位，避免壞死或污染區(qū)域。

2.使用無菌器械進行取樣，減少人為污染。

3.標本尺寸應滿足檢驗需求，一般不小于0.5cm×0.5cm。

4.及時固定，避免標本自溶或干燥。

（二）標本固定與保存

1.固定液選擇：常用10%中性甲醛溶液，固定時間一般4-6小時。

2.固定注意事項：

(1)標本與固定液體積比例至少為1:10。

(2)避免標本重疊，確保充分浸泡。

3.保存條件：

(1)短期保存：4℃冰箱冷藏。

(2)長期保存：-20℃冷凍保存。

（三）標本送檢要求

1.標本容器：使用帶塞子的標本瓶，防止漏液。

2.標本標簽：清晰注明患者信息、采集時間及部位。

3.送檢時效：盡量在2小時內(nèi)送至實驗室，避免延遲固定。

三、檢驗流程與技術(shù)

檢驗流程分為樣本接收、制備及檢測三個主要階段。

（一）樣本接收與登記

1.核對標本標簽信息與申請單。

2.檢查標本完整性，記錄異常情況（如出血、污染）。

3.登記系統(tǒng)，分配檢驗編號。

（二）組織切片制備

1.石蠟包埋：

(1)標本修塊，厚度3-4mm。

(2)浸漬脫水，梯度乙醇系列（70%-100%）。

(3)透明、浸蠟、包埋，確保組織切片平整。

2.切片與染色：

(1)切片厚度4-5μm，使用切片機均勻切片。

(2)常規(guī)染色：HE染色（蘇木精-伊紅染色）。

(3)特殊染色：根據(jù)需求選擇特殊染色方法（如嗜銀染色、膠原染色）。

（三）免疫組化檢測

1.操作步驟：

(1)切片脫蠟至水。

(2)抗體孵育，溫度37℃，時間30分鐘。

(3)顯色反應，常用DAB顯色。

(4)復水、封片。

2.質(zhì)量控制：

(1)使用陽性對照和陰性對照。

(2)定期校準儀器，確保結(jié)果一致性。

四、檢驗結(jié)果報告與解讀

檢驗結(jié)果報告是臨床決策的重要依據(jù)，需確保信息的準確性和完整性。

（一）報告內(nèi)容

1.基本信息：患者姓名、年齡、標本編號。

2.檢驗項目：組織學診斷、免疫組化結(jié)果等。

3.診斷結(jié)論：良惡性判斷及分級。

4.備注：特殊發(fā)現(xiàn)或建議。

（二）結(jié)果解讀要點

1.組織學診斷：根據(jù)細胞形態(tài)、排列特征判斷病變性質(zhì)。

2.免疫組化結(jié)果分析：

(1)陽性表達部位及強度。

(2)結(jié)合臨床信息綜合判斷。

3.報告審核：由資深病理醫(yī)師復核，確保診斷準確性。

（三）報告時效

常規(guī)病理報告時效：24-48小時；特殊檢測（如分子病理）可延長至3-5天。

五、質(zhì)量控制與持續(xù)改進

為確保檢驗質(zhì)量，需建立完善的質(zhì)量控制體系。

（一）室內(nèi)質(zhì)量控制

1.定期進行盲法切片、染色，評估操作一致性。

2.使用質(zhì)控片（如已知陽性/陰性對照片）監(jiān)測方法學穩(wěn)定性。

（二）室間質(zhì)量評價

1.參加行業(yè)組織（如病理學會）的質(zhì)評活動。

2.對比外部實驗室結(jié)果，分析差異原因。

（三）持續(xù)改進措施

1.定期培訓檢驗人員，更新技術(shù)知識。

2.引入自動化設(shè)備，減少人為誤差。

3.收集臨床反饋，優(yōu)化檢驗流程。

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三、檢驗流程與技術(shù)

檢驗流程分為樣本接收、制備及檢測三個主要階段。每個階段都有其特定的操作規(guī)范和質(zhì)量控制要點，以確保最終檢驗結(jié)果的準確性和可靠性。

(一)樣本接收與登記

1.標本抵達與初步檢查：

樣本到達實驗室后，檢驗人員首先核對送檢容器是否完好無損，確認無泄漏風險。

快速評估標本的整體狀況，包括大小、顏色、是否新鮮、有無明顯污染（如膿液、壞死組織覆蓋）等，并初步記錄觀察到的異?，F(xiàn)象。

檢查標本是否符合基本要求，例如是否有足夠的組織量（通常建議至少0.5cmx0.5cmx0.5cm），是否包含合適的切面（例如，對于腫瘤標本，應包含至少一個切面暴露出腫瘤邊緣）。

2.信息核對與確認：

仔細核對標本標簽上的信息（如患者標識碼、姓名、性別、年齡、采樣部位）與檢驗申請單上的信息是否完全一致。

確認申請單上填寫的檢驗項目與標本類型是否匹配（例如，是組織塊、細胞涂片還是細針穿刺物）。

如有疑問（如標簽不清、信息不符），應立即與送檢方溝通，確認無誤后方可進行后續(xù)處理。

3.系統(tǒng)登記與編號：

在實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS）或?qū)Ｓ玫怯洷局杏涗洏颖拘畔ⅰ?/p>

為每個樣本分配一個唯一的實驗室內(nèi)部編號，確保樣本從接收至報告發(fā)出的全程可追溯。

記錄樣本接收的具體日期和時間，以及送檢者信息（如科室、姓名等，根據(jù)實驗室規(guī)定決定是否記錄）。

對于需要特殊處理或保存條件的樣本（如需要快速檢驗、冷凍保存等），在登記時特別注明。

(二)組織切片制備

組織切片制備是連接原始組織樣本與顯微鏡檢視的關(guān)鍵橋梁，其技術(shù)細節(jié)直接影響病理診斷的準確性。

1.組織修塊與固定：

修塊：對于較大的標本，根據(jù)需要將其切割成適當大?。ㄍǔ?-2cm邊長）的小塊。修塊時盡量保留有代表性的組織區(qū)域，特別是腫瘤標本應包含邊緣、中心和可疑區(qū)域。修去明顯壞死、出血或污染的部分。

固定：這是至關(guān)重要的一步，目的是使組織細胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，防止自溶和腐敗。

固定液選擇：最常用的是10%中性緩沖甲醛溶液。選擇依據(jù)包括組織類型（如脂肪組織可能需要更長時間固定）、檢驗目的（如免疫組化通常需要較好的固定）。特殊情況下可能使用Bouin's液（適用于神經(jīng)組織、肌肉組織染色）等。

固定時間與溫度：常規(guī)組織固定時間建議為10-24小時，確保組織充分滲透。固定溫度通常為室溫（約20-25°C）。對于大型標本，可能需要適當延長固定時間。

固定液體積：建議標本與固定液體積比至少達到1:10，確保所有組織成分都能被充分浸泡。

注意事項：確保標本放入固定液中后沒有氣泡附著，避免影響固定效果。標記固定開始的時間。

2.組織處理流程（脫水、透明、浸蠟、包埋）：

脫水：目的是將組織中的水分逐漸置換出來，使其能夠被石蠟浸透。通常使用梯度乙醇系列進行脫水，步驟為：70%乙醇（過夜或數(shù)小時）、85%乙醇、95%乙醇（兩次，每次數(shù)小時）、純無水乙醇（兩次，每次數(shù)小時）。脫水過程需確保充分，否則后續(xù)石蠟浸入困難，切片易碎。

透明：使用二甲苯或苯甲苯等透明劑，使組織透明，與石蠟的密度接近，便于浸蠟。通常需要兩次透明，每次數(shù)小時至過夜。

浸蠟與包埋：將透明后的組織依次浸入不同濃度石蠟（如parcinawax）中，最后浸入熔化的全蠟中。使用模具將組織塊固定，然后緩慢冷卻至室溫，使石蠟完全凝固，完成包埋。包埋塊應堅實，無氣泡，便于切片。

3.切片與貼片：

切片：使用輪轉(zhuǎn)式切片機進行切片。根據(jù)需要調(diào)整切片厚度，常規(guī)組織病理學為4-5μm。切片時保持切片刀鋒銳利，確保切面平整、連續(xù)。對于特殊部位（如腦、腎上腺）或特殊要求（如連續(xù)切片），需特別操作。

取片與貼片：將切下的組織片小心取下，放置于經(jīng)過處理（如60°C烤箱預熱或使用特殊處理的載玻片）的玻璃載玻片上。使用專用粘貼劑（如蛋白膠、細胞貼）或直接利用高溫使蠟質(zhì)熔化粘附，確保組織片牢固地固定在載玻片上。

編號與標記：在貼好組織片的同時，在載玻片周圍相應位置放置帶有樣本編號的記號紙或直接在玻片邊緣做出標記，確保切片與原始樣本編號一一對應，防止混淆。

4.染色：

常規(guī)染色（HE染色）：這是最基本和最常用的染色方法，使用蘇木精（嗜堿性染料，使細胞核著色）和伊紅（嗜酸性染料，使細胞質(zhì)、肌纖維等著色）。染色過程包括脫蠟至水、入蘇木精染液（不同時間，根據(jù)組織類型調(diào)整）、分化（用酒精或鹽酸酒精溶液使細胞核著色均勻）、入伊紅染液、脫水（梯度酒精）、透明（二甲苯）、封片（用中性樹膠封片劑）。染色結(jié)果需達到細胞核染色清晰、細胞結(jié)構(gòu)顯示良好。

特殊染色：根據(jù)臨床診斷需要或特殊研究目的，選用特定的染色方法來顯示細胞內(nèi)的特殊成分或結(jié)構(gòu)。

酶染色：如堿性磷酸酶、酸性磷酸酶染色，用于識別某些細胞類型。

特殊蛋白質(zhì)染色：如波形蛋白（肌肉）、S-100蛋白（神經(jīng)、黑色素細胞）、結(jié)蛋白（骨骼?。┑?，用于輔助鑒別診斷。

糖原染色（如PAS染色）：顯示細胞內(nèi)的糖原或某些多糖。

膠原纖維染色（如vanGieson染色、Masson染色）：用于觀察結(jié)締組織成分。

嗜銀染色（銀染）：用于顯示神經(jīng)內(nèi)分泌細胞、黑色素細胞、肌纖維等。

(三)免疫組化檢測

免疫組化（Immunohistochemistry,IHC）是一種利用抗體與組織細胞中特定抗原發(fā)生結(jié)合反應，并通過顯色劑顯色，從而在細胞水平上檢測特定蛋白質(zhì)或其他生物分子的技術(shù)，對于腫瘤的分子分型、預后評估及指導治療具有重要意義。

1.操作步驟：

切片處理：從已制備好的石蠟切片上取下載玻片，進行脫蠟至水的過程，這一步是確保抗體能夠進入組織的關(guān)鍵。

抗原修復：目的是使組織細胞內(nèi)的抗原決定簇暴露出來，增強抗體結(jié)合能力。常用方法有熱修復（微波或高壓鍋）和酶修復（如用胰蛋白酶消化）。修復條件需根據(jù)抗體說明書和抗原特性優(yōu)化。

封閉：為了阻斷非特異性抗體的結(jié)合，減少背景染色，使用封閉液（如含牛血清白蛋白BSA或脫脂奶粉的溶液）處理切片，通常在室溫下進行。

抗體孵育（primaryantibodyincubation）：將特異性針對目標抗原的單克隆或多克隆抗體滴加到切片上，置于濕盒中，在特定的溫度（通常是37°C）和濕度條件下孵育一定時間（如30分鐘至過夜），使抗體與組織中的抗原結(jié)合。有時需要使用抗體稀釋液進行稀釋。