第六章GMP中微生物檢驗(yàn)GMP（goodmanufacturingpractice）：生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范第1頁(yè)空氣中有大量微生物存在，種類(lèi)多，分布不均勻，通常宿舍空氣中含0個(gè)/m3，街道5000個(gè)/m3，是傳輸疾病主要媒介之一。室內(nèi)空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)夏季菌落總數(shù)小于1500個(gè)/m3，冬季少于4500個(gè)/m3。溶血性鏈球菌和綠色鏈球菌夏季少于26/m3，冬季少于36/m3。第2頁(yè)當(dāng)前潔凈廠房已成為食品和藥品生產(chǎn)基本要求，測(cè)定它們物理和微生物環(huán)境條件，已成為質(zhì)量控制組成原因。微生物經(jīng)常是黏附在10—20微米粒子上。所以，潔凈廠房微生物學(xué)評(píng)定是對(duì)生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控不可缺乏指標(biāo)，它包括到潔凈情況，滅菌消毒情況有效性。經(jīng)過(guò)對(duì)廠房環(huán)境微生物監(jiān)督和物理分析結(jié)果，可判斷在該環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn)活動(dòng)可靠性。本章主要介紹GMP中空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)、空氣潔凈度微生物檢測(cè)技術(shù)，包含采樣計(jì)劃制訂、采樣位置確實(shí)定、浮游菌測(cè)試、沉降菌測(cè)試第3頁(yè)209E空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別級(jí)別限值（μm/ft3）0.10.20.30.551357.53.01103507530.010100750300100100010007100001000070100000100000700一、空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)1英制（粒/ft3）

：美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209E是國(guó)際上最通行最著名潔凈室標(biāo)準(zhǔn)，許多國(guó)家潔凈度分級(jí)基本參考美國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)。第4頁(yè)2公制（粒/L）：原蘇聯(lián)、澳大利亞標(biāo)準(zhǔn)，分三級(jí)。級(jí)別最大濃度粒徑/μm濃度（粒/L）3.5≥0.53.5350≥0.53503500≥0.53500第5頁(yè)3國(guó)際公制（粒/米3）：采取國(guó)際公制有世界衛(wèi)生組織（WHO）、歐共體（EEC）、德、日、英、中國(guó)。

WHO和EEC標(biāo)準(zhǔn)分四級(jí)級(jí)別大于0.5μm（個(gè)/m3）大于5μm（個(gè)/m3）浮游菌（個(gè)/m3）（A）100≤35000<1（B）100≤35000<5（C）1萬(wàn)≤35萬(wàn)<<100（D）10萬(wàn)≤350萬(wàn)<<500第6頁(yè)我國(guó)級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局)級(jí)別塵埃最大允許數(shù)（個(gè)/m3）微生物最大允許數(shù)≥0.5μm≥5μm浮游菌（個(gè)/m3）沉降菌90mm平板[個(gè)/（皿·30min）]100350005110000350000100310000035000000500103000001050000061800NA15即使國(guó)際公制粒/米3最有通用性，不過(guò)在計(jì)量監(jiān)測(cè)儀器方面，當(dāng)前還需用英制中每立方英尺顆粒數(shù)（ft3）乘35倍，或用公制中每升顆粒數(shù)乘以1000來(lái)?yè)Q算。第7頁(yè)

即使，潔凈室內(nèi)空氣含塵量與含菌量沒(méi)有一定百分比關(guān)系，但普通認(rèn)為微粒少潔凈室，微生物量也較少。所以，制藥工業(yè)為降低微生物污染，各工序、各品種采取了不一樣潔凈度級(jí)別。我國(guó)GMP藥品生產(chǎn)各工序空氣清潔度級(jí)別主要是：不能終端高壓滅菌注射劑調(diào)配室，100級(jí)；能終端高壓滅菌注射劑調(diào)配室，1萬(wàn)級(jí)；粉針劑原料藥調(diào)配室,100級(jí)；口服液調(diào)配室,1萬(wàn)級(jí)。第8頁(yè)二、潔凈環(huán)境中微生物學(xué)

警告水平和行動(dòng)水平建立許多制藥廠對(duì)潔凈環(huán)境微生物污染監(jiān)督參數(shù)使用兩個(gè)水平：一個(gè)是警告水平（alertlevel），一個(gè)是行動(dòng)水平(actionlevel)。兩個(gè)水平是依據(jù)經(jīng)驗(yàn)資料積累形成。以這兩個(gè)水平條件下進(jìn)行無(wú)菌生產(chǎn)藥品，其微生物學(xué)質(zhì)量不會(huì)有任何問(wèn)題，假如超出這兩個(gè)要求水平，就要判定會(huì)造成什么影響。第9頁(yè)1警告水平

是依據(jù)從各個(gè)凈化廠房或生產(chǎn)步驟得到經(jīng)驗(yàn)和資料，一個(gè)適當(dāng)數(shù)值是95%置信值（即每20個(gè)結(jié)果有一個(gè)結(jié)果超出此程度），意義是生產(chǎn)中凈化廠房和生產(chǎn)步驟情況發(fā)生改變，但還未造成直接影響時(shí)發(fā)出警告。超出警告水平程度要及時(shí)監(jiān)督調(diào)查，找出微生物數(shù)量增加原因，但無(wú)須進(jìn)行校正工作。許多廠商制訂警告水平可分為兩級(jí),而且不一樣設(shè)備警告水平也可不一樣。第10頁(yè)2行動(dòng)水平是同意產(chǎn)品發(fā)放水平。超出此程度將表示用這么生產(chǎn)步驟生產(chǎn)藥品，微生物質(zhì)量得不到確保，超出行動(dòng)水平需馬上調(diào)查，并進(jìn)行校正。不一樣廠房和設(shè)備行動(dòng)水平都是相同。目標(biāo)是確保控制環(huán)境一致性。但因?yàn)椴蓸酉到y(tǒng)、培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫度不一樣，所得出微生物水平數(shù)據(jù)會(huì)不一樣。第11頁(yè)三、模擬生產(chǎn)操作步驟微生物學(xué)評(píng)定模擬生產(chǎn)操作步驟微生物學(xué)評(píng)定可采取培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)。必須在無(wú)菌生產(chǎn)批結(jié)束時(shí)馬上進(jìn)行，以證實(shí)批生產(chǎn)中無(wú)菌確保條件情況。培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)經(jīng)過(guò)3次模擬運(yùn)轉(zhuǎn)合格，該潔凈室或控制環(huán)境生產(chǎn)線微生物情況就算合格。普通采取大豆消化酪素肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行灌封試驗(yàn)。在20-25℃及30-35℃，各培養(yǎng)7天。潔凈室最主要污染源是人員，污染率取決于無(wú)菌操作區(qū)操作者操作活動(dòng)第12頁(yè)四、空氣潔凈度檢測(cè)方法1、制訂采樣計(jì)劃和采樣位置關(guān)鍵原因可能與產(chǎn)品接觸空氣和表面區(qū)域關(guān)鍵區(qū)域要比非產(chǎn)品接觸區(qū)域有較嚴(yán)格監(jiān)督；高數(shù)量人員活動(dòng)處有較嚴(yán)格監(jiān)督非腸道使用藥瓶裝置運(yùn)作區(qū)域，如瓶塞碗中瓶塞裝置，藥瓶灌注線上瓶子補(bǔ)充，人員常規(guī)操作包括瓶子消毒建立定時(shí)微生物學(xué)監(jiān)督程序：工作人員接觸產(chǎn)品可能性大區(qū)域，無(wú)菌產(chǎn)品無(wú)菌操作過(guò)程，終端滅菌產(chǎn)品定時(shí)監(jiān)督第13頁(yè)采樣區(qū)域采樣頻率100級(jí)潔凈室每次換班100級(jí)潔凈室供給區(qū)域(1萬(wàn)級(jí))天天產(chǎn)品、容器接解區(qū)域（10萬(wàn)級(jí)）每七天2次非產(chǎn)品接觸區(qū)每七天1次終端滅菌藥品：產(chǎn)品接觸區(qū)每七天1次非產(chǎn)品接觸區(qū)兩周1次終端滅菌醫(yī)用裝置：產(chǎn)品接觸區(qū)兩周1次非產(chǎn)品接觸區(qū)三周1次無(wú)菌腸用具：產(chǎn)品接觸區(qū)兩周1次非產(chǎn)品接觸區(qū)三周1次2、采樣頻率

采樣頻率是由該控制區(qū)域主要性以及藥品加工步驟所決定。第14頁(yè)浮游菌測(cè)試最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積/m2潔凈度級(jí)別100100001000000驗(yàn)證監(jiān)測(cè)驗(yàn)證監(jiān)測(cè)驗(yàn)證監(jiān)測(cè)小于102-3121210-204221220-408321240-100164412100-20040103200-400802064001604010最小采樣量：日常監(jiān)測(cè)：100級(jí)600L/次，10000級(jí)400L/次，1000000級(jí)50L/次；環(huán)境驗(yàn)證：100級(jí)1000L/次，10000級(jí)500L/次，1000000級(jí)100L/次。第15頁(yè)3、我國(guó)相關(guān)要求我國(guó)對(duì)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和控制區(qū)，浮游菌（GB/T16293-1996）和沉降菌（GB/T16294-1996）測(cè)試國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求測(cè)試方法中制訂了測(cè)試規(guī)則，就測(cè)試狀態(tài)、測(cè)試人員要求、測(cè)試時(shí)間、采樣點(diǎn)數(shù)量及布置，最少采樣點(diǎn)數(shù)目，采樣次數(shù)都有明確要求。在滿(mǎn)足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)同時(shí)，滿(mǎn)足最少培養(yǎng)皿數(shù)（90mm），100級(jí)14個(gè)，10000級(jí)2個(gè)，1000000級(jí)2個(gè)第16頁(yè)3潔凈室采樣點(diǎn)布置：力爭(zhēng)均勻，防止采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過(guò)于稀疏?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。第17頁(yè)4、設(shè)備

撞擊式空氣微生物采樣器離心式空氣微生物采樣器狹縫式空氣微生物采樣器第18頁(yè)浮游菌空氣采樣器MAS-10087430

第19頁(yè)5測(cè)定方法（1）浮游菌測(cè)數(shù)采取計(jì)數(shù)濃度法，經(jīng)過(guò)搜集懸浮在空氣中生物性粒子于專(zhuān)門(mén)培養(yǎng)基經(jīng)要求時(shí)間培養(yǎng)，在適宜生長(zhǎng)條件下讓其繁殖到可見(jiàn)菌落時(shí)計(jì)數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中活微生物數(shù)。被測(cè)潔凈室各項(xiàng)狀態(tài)指標(biāo)必須在要求值內(nèi)，且已消過(guò)毒不論靜態(tài)和動(dòng)態(tài)測(cè)試，都必須符合生產(chǎn)要求。第20頁(yè)用計(jì)數(shù)法得出各個(gè)培養(yǎng)皿菌落數(shù)。平均濃度（個(gè)/m3）=菌落數(shù)/采樣量如在某測(cè)點(diǎn)采樣400L，菌落數(shù)為1，則：平均濃度=1/0.4=2.5（個(gè)/m3）如某測(cè)點(diǎn)采樣2m3，菌落數(shù)為3，則平均濃度=1.5（個(gè)/m3）培養(yǎng)溫度在30-35度，48h。每個(gè)測(cè)點(diǎn)浮游菌平均濃度判斷潔凈廠房空氣中微生物數(shù)。若某測(cè)點(diǎn)浮游菌平均濃度超出評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果必須合格。第21頁(yè)(2)沉降菌測(cè)試在靈敏度方面，采取14c