CCSZ.18物的測定液相色譜–三重四極桿質(zhì)譜法Soilandsediment—Determinationof2—Liquidchromatography–triplequadrupolemassspectrometryi前言 II1適用范圍 2規(guī)范性引用文件 3方法原理 4干擾和消除 5試劑和材料 26儀器和設備 37樣品 8分析步驟 49結果計算與表示 10準確度 911質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 12注意事項 附錄A（資料性）液相系統(tǒng)干擾消除 附錄B（資料性）方法的準確度 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心提出。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測協(xié)會歸口。本文件起草單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本文件主要起草人：鄒志芬、吳曉妍、楊利利、皮寧寧、劉敏、譚鈴、沈冬君、郭志順、孫靜、朱明吉、鄭璇、杜蘭、李文俊、唐思羽、劉丹。1土壤和沉積物2種鄰苯二甲酸酯類化合物的測定液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法警告：實驗中使用的標準物質(zhì)和有機溶劑均為有毒化合物，試劑配制和樣品前處理過程應在通風櫥內(nèi)進行；操作時應按要求佩戴防護器具，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。本文件規(guī)定了測定土壤和沉積物中2種鄰苯二甲酸酯類化合物的液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法。本文件適用于土壤和沉積物中鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、鄰苯二甲酸二異癸酯（DIDP）的測定。取樣量為5g，試樣定容體積為10.0mL，進樣體積為5μL時，DINP和DIDP的方法檢出限均為4μg/kg，測定下限均為16μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運輸GB17378.5海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分：沉積物分析HJ442.4近岸海域環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范第四部分近岸海域沉積物監(jiān)測HJ494水質(zhì)采樣技術指導HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測定重量法HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范3方法原理土壤和沉積物中的鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、鄰苯二甲酸二異癸酯（DIDP）經(jīng)乙腈振蕩提取、固相萃取柱凈化，用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測定，根據(jù)保留時間、特征離子豐度比定性，內(nèi)標法定量。4干擾和消除24.1樣品采集和保存過程中，使用金屬或木質(zhì)采樣器具，棕色具塞磨口玻璃瓶盛放，并用鋁箔(5.14)包裹以消除干擾。4.2稱取樣品時，剔除瓶口表層樣品來消除干擾。4.3進樣瓶(6.14)的瓶墊會對測定結果產(chǎn)生干擾，可通過在樣品瓶和瓶蓋間墊一層鋁箔(5.14)的方法來減少干擾。5試劑和材料除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新制備的不含目標化合物的純水。5.1乙腈（CH3CN色譜純。5.2丙酮（CH3COCH3色譜純。5.3二氯甲烷（CH2CL2色譜純。5.4異丙醇CH3）2CHOH色譜純。5.5甲酸（HCOOH色譜純。5.6甲酸溶液：φ(HCOOH)=0.1%。移取1mL甲酸（5.5）于預先加入適量實驗用水的1L容量瓶中，用實驗用水定容。5.7鄰苯二甲酸酯類化合物標準貯備液：ρ=100mg/L?？少徺I有證標準溶液，目標化合物包括鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）和鄰苯二甲酸二異癸酯（DIDP），溶劑為甲醇或正己烷。標準貯備液參照產(chǎn)品說明書保存，使用時應恢復至室溫并搖勻。5.8鄰苯二甲酸酯類化合物標準使用液：ρ=1mg/L。取適量鄰苯二甲酸酯類化合物標準貯備液（5.7）用乙腈（5.1）或丙酮（5.2）稀釋，4℃以下冷藏、密封、避光保存，保存期為3個月。5.9內(nèi)標貯備液：ρ=100mg/L可購買有證標準溶液，內(nèi)標物為鄰苯二甲酸二異壬酯-d4（DINP-d4溶劑為甲醇或正己烷，也可使用其他性質(zhì)相近的化合物做內(nèi)標。內(nèi)標貯備液參照產(chǎn)品說明書保存，使用時應恢復至室溫并搖勻。5.10內(nèi)標使用液：ρ=5mg/L。取適量內(nèi)標貯備液（5.9）用乙腈（5.1）或丙酮（5.2）稀釋，4℃以下冷藏、密封、避光保存，保存期為3個月。5.11凈化柱：材質(zhì)為玻璃，填料為氧化鋁柱或硅膠柱，規(guī)格為500mg/6mL，或其他等效凈化柱。5.12無水硫酸鈉（Na2SO4優(yōu)級純。使用前，在馬弗爐中450℃烘烤4h，稍冷后置于潔凈干燥器中備用。5.13石英砂：粒徑為150μm~250μm(100目～60目)。使用前，在馬弗爐中450℃烘烤4h，稍冷后置于潔凈干燥器中備用。經(jīng)450℃烘烤2h或用乙腈沖洗。35.15氮氣：純度≥99.99%。6儀器和設備6.1采樣瓶：棕色，具塞磨口玻璃瓶，250mL。6.2液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI具備流動相梯度洗脫和質(zhì)譜多反應監(jiān)測功能。6.3色譜柱：填料粒徑為2.6μm，柱長為100mm，內(nèi)徑為2.1mm的雙苯基色譜柱或其他等效色譜柱。6.4捕集柱：填料粒徑為3μm，柱長為50mm，內(nèi)徑為2.1mm的C18色譜柱或其他等效色譜柱。6.5冷凍干燥儀。6.7分析天平：實際分度值為0.01g。6.8提取裝置：水平振蕩儀或其他性能相當?shù)脑O備。6.9漩渦振蕩混勻器：轉(zhuǎn)速范圍為0~1000r/min。6.10離心機：最小離心力2000×g。6.12固相萃取裝置：手動或自動，流速可調(diào)節(jié)。6.13微量注射器：10μL、50μL、250μL、1000μL，玻璃材質(zhì)、金屬推桿。6.15一般實驗室常用儀器和設備。7.1樣品采集和保存按照HJ/T166、HJ/T91、HJ494、HJ442.4、GB17378.3的相關要求采集和保存土壤和沉積物樣品。樣品置于潔凈的采樣瓶（6.1）中，4℃以下冷藏、密封、避光保存，14d內(nèi)完成萃取分析，提取液保存時間不超過30d。7.2樣品的制備將樣品放在潔凈的鋪有鋁箔（5.14）的搪瓷盤或不銹鋼盤中，除去樣品中的異物（枝棒、葉片、石子等采用干燥劑法或冷凍干燥法對樣品進行干燥處理。樣品干燥后，研磨、均質(zhì)、過樣品篩（6.6）。方法一：干燥劑法。稱取5g(精確到0.01g)新鮮樣品，加入適量無水硫酸鈉(5.12)，研磨均化成細小顆粒，充分拌勻至散粒狀，待用。方法二：冷凍干燥法。稱取適量樣品，放入冷凍干燥儀(6.5)中進行干燥脫水。干燥后的樣品直接研磨、過樣品篩（6.6稱取5g(精確到0.01g)樣品，待用。47.3水分的測定按照HJ613測定土壤干物質(zhì)含量，按照GB17378.5測定沉積物含水率。7.4試樣的制備將樣品（7.2）全部轉(zhuǎn)移到離心管（6.11）中，加入10mL乙腈（5.1漩渦振蕩混勻器（6.9）混合1min后，用提取裝置（6.8）以200r/min常溫振蕩20min，離心機（6.10）以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取全部上清液凈化。），依次用5mL二氯甲烷（5.3）、5mL乙腈（5.1）活化凈化柱（5.11棄去流出液，收集流出液。移取1.0mL至進樣瓶（6.14）中，用微量注射器（6.13）移取10.0μL內(nèi)標使用液（5.10混勻，待測。7.5空白試樣的制備以石英砂（5.13）代替樣品，按照與試樣的制備（7.4）相同的步驟，制備空白試樣。8分析步驟8.1儀器參考條件8.1.1液相色譜參考條件流動相A：甲酸溶液；流動相B：乙腈；流速：0.4mL/min；柱溫：40℃；進樣體積：表1流動相梯度洗脫程序01305088.1.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI正離子模式；監(jiān)測方式：多反應監(jiān)測（MRM離子化電壓：5500V；離子源溫度：300℃；霧化氣壓力：50psi；輔助加熱氣壓力：50psi；氣簾氣壓力：40psi；目標化合物多反應監(jiān)測條件見表2。5表2目標化合物多反應離子監(jiān)測條件（V）（V）（s）DINP-d4/8.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書調(diào)諧儀器并確認儀器性能，儀器性能正常后測定樣品。8.2.1標準系列的配制取適量目標化合物標準使用液（5.8）和內(nèi)標使用液（5.10），用乙腈（5.1）配制至少5個濃度點的標準系列，質(zhì)量濃度分別為2.0μg和200μg/L（此為參考濃度1mL標準系列加入10μL內(nèi)標使用液，混勻，待測。8.2.2標準系列的測定按照儀器參考條件（8.1由低濃度到高濃度依次對進樣分析，目標化合物及內(nèi)標物總離子流色譜圖見圖1。312圖1目標化合物和內(nèi)標物的總離子流色譜圖(ρ=200μg/L）68.2.3用最小二乘法繪制標準曲線以標準系列溶液中目標化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標，以其對應峰面積與內(nèi)標物峰面積的比值和內(nèi)標物濃度的乘積為縱坐標，建立標準曲線。8.2.4平均相對響應因子計算標準系列中第j點目標化合物i的相對響應因子（RRFij按照公式（1）計算。式中：RRFij——標準系列中第j點目標化合物i的相對響應因子；Aij——標準系列中第j點目標化合物i定量離子的峰面積；Ais,ij——標準系列中第j點目標化合物i相對應的內(nèi)標物定量離子的峰面積；pis,ij——標準系列中第j點目標化合物i對應內(nèi)標物的質(zhì)量濃度，μg/L；pij——標準系列中第j點目標化合物i的質(zhì)量濃度，μg/L。標準系列中目標化合物i的平均相對響應因子（RRFi按照公式（2）計算。（2）式中：RRFi——標準系列中目標化合物i的平均相對響應因子；RRFij——標準系列中第j點目標化合物i的相對響應因子；n——標準系列點數(shù)。8.3試樣測定按照與標準系列測定（8.2.2）相同的儀器條件測定試樣（7.2）。8.4空白試驗按照與試樣測定（8.3）相同的儀器條件測定空白試樣（7.5）。9結果計算與表示9.1定性分析根據(jù)保留時間與離子對豐度比例定性分析。在相同的實驗條件下，試樣中目標化合物的保留時間與標準溶液中該目標化合物的保留時間比較，相差±0.2min以內(nèi)；樣品中各目標化合物定性離子的相對豐度（Ksam,i）與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子相對豐度（Kstd,i）進行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定樣品中存在該目標化合物。Kstd,i和Kstd,i分別按照公式（3）和公式（4）計算。7式中：Ksam,i——試樣中目標化合物i定性離子的相對豐度，%；Asam2,i——試樣中目標化合物i定性離子的響應值；Asam1,i——試樣中目標化合物i定量離子的響應值。式中：Kstd,i——標準溶液中目標化合物i定性離子的相對豐度，%；Astd2,i——標準溶液中目標化合物i定性離子的響應值；Astd1,i——標準溶液中目標化合物i定量離子的響應值。表3相對離子豐度的最大允許偏差Kstd（%）Ksam最大允許偏差（%）Kstd,i＞50±2020＜Kstd,i≤50±2510＜Kstd,i≤20±30Kstd,i≤10±509.2定量分析9.2.1平均相對響應因子法土壤樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（5）計算：式中：wi——樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度，μg/kg；Ac,i——樣品中目標化合物i定量離子的峰面積；ρis——內(nèi)標物的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣提取液的體積，mL；m——試樣稱樣量，g；wdm——試樣干物質(zhì)含量，%；D——稀釋倍數(shù)。8沉積物樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（6）計算：式中：wi——樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度，μg/kg；Ac,i——樣品中目標化合物i定量離子的峰面積；ρis——內(nèi)標物的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣提取液的體積，mL；m——試樣稱樣量，g；wH2O——試樣含水率，%；——內(nèi)標物定量離子的峰面積；RRFi——目標化合物i的平均相對響應因子；D——稀釋倍數(shù)。9.2.2最小二乘法土壤樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（7）計算：（7）式中：wi——試樣中的目標化合物含量，μg/kg；c——試樣提取液的體積，mL；ρc，i——試樣中目標化合物的質(zhì)量濃度，μg/L；m——試樣稱樣量，g；wdm——試樣干物質(zhì)含量，%；D——稀釋倍數(shù)。沉積物樣品中目標化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（8）進行計算：式中：wi——試樣中的目標化合物含量，μg/kg；c——試樣提取液的體積，mL；ρis——試樣中目標化合物的質(zhì)量濃度，μg/L；m——試樣稱樣量，g；wHO——試樣含水率，%；D——稀釋倍數(shù)。99.3結果表示測定結果小數(shù)點后位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的空白樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為7.7%～7.8%、5.8%～12%和6.7%～7.5%；實驗室間相對標準偏差分別為2.2%～13%、4.6%～12%和1.8%～4.5%；重復性限分別為3.5μg/kg～5.1μg/kg、均為20μg/kg和26μg/kg～32μg/kg；再現(xiàn)性限分別為9.2μg/kg～25μg/kg、26μg/kg~98μg/kg和87μg/kg～396μg/kg。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的土壤樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為8.3%～11%、8.0%～11%和6.4%～9.2%；實驗室間相對標準偏差分別為3.2%～18%、5.7%～16%和1.3%～5.0%；重復性限分別為4.5μg/kg～5.7μg/kg、27μg/kg～28μg/kg和26μg/kg～35μg/kg；再現(xiàn)性限分別為5.9μg/kg～9.1μg/kg、均為31μg/kg和63μg/kg～67μg/kg。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的沉積物樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為6.1%～10%、8.2%～8.6%和4.1%～7.8%；實驗室間相對標準偏差分別為0.8%～19%、5.3%～15%和2.2%～7.7%；重復性限分別為4.9μg/kg~7.6μg/kg、23μg/kg～24μg/kg和36μg/kg～48μg/kg；再現(xiàn)性限分別為5.6μg/kg～7.8μg/kg、29μg/kg～33μg/kg和56μg/kg～62μg/kg。精密度數(shù)據(jù)詳見附錄B.1。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的空白樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)加標回收率范圍分別為85.0%～105%、83.5%～94.6%和89.3%~90.8%，實驗室間加標回收率范圍分別為87.7%～129%、70%～90.2%和74.4%～103%，加標回收率最終值分別為104%±16.1%～103%±28.6%、82.4%±11.8%～78.6%±13.2%和92.5%±12.4%～89.2%±16.3%。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的土壤樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)加標回收率范圍分別為88.0%～98.7%、91.7%～92.4%和87.6%~89.1%，實驗室間加標回收率范圍分別為81%～112%、70.1%～95.9%和77.4%～102%，加標回收率最終值分別為100%±22.9%～97.1%±18.9%、84.6%±15.9%～80.6%±15.8%和61.1%±17.7%～89.2%±12.5%。六家實驗室分別對加標濃度為20μg/kg、100μg/kg和360μg/kg的沉積物樣品進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)加標回收率范圍分別為94.5%～105%、91.9%～101%和88.0%~98.2%，實驗室間加標回收率范圍分別為78.5%～116%、71.7%～98.4%和81.1%～98.5%，加標回收率最終值分別為102%±31.9%～98.9%±14.4%、83.4%±21.4%～81.4%±14.7%和90.7%±10.4%～88.4%±9.4%。正確度數(shù)據(jù)詳見附錄B.2。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制每20個樣品或每批次(≤20個樣品/批）至少測定1個實驗室空白，實驗室空白測定結果應低于方法檢出限。相對響應因子的相對標準偏差應≤25%或標準曲線的相關系數(shù)r≥0.995，否則應查找原因，重新建立標準系列。選擇標準系列的中間濃度點進行連續(xù)校準，每分析20個樣品或每批(≤20個樣品/批）進行1次連續(xù)校準，測定結果相對誤差應在±25%以內(nèi)。否則應查找原因，重新建立標準系列。每20個樣品或每批次(≤20個樣品/批）應