ICS13.080

CCSZ10

DB42

湖北省地方標準

DB42/T2032—2023

土壤中4種有效砷和4種有效硒的測定

液相色譜-原子熒光法

Determinationof4availablearsenicand4availableseleniumin

soils—Liquidchromatography-atomicfluorescencespectrometry

2023-05-16發(fā)布2023-07-16實施

湖北省生態(tài)環(huán)境廳

聯(lián)合發(fā)布

湖北省市場監(jiān)督管理局

DB42/T2032—2023

目次

前言.................................................................................................................................................III

1范圍...............................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件...........................................................................................................................1

3術語和定義...................................................................................................................................1

4方法原理.......................................................................................................................................1

5試劑和材料...................................................................................................................................1

6儀器和設備...................................................................................................................................3

7樣品...............................................................................................................................................3

8分析步驟.......................................................................................................................................4

9結果計算與表示...........................................................................................................................5

10準確度..........................................................................................................................................6

11質量保證和質量控制.................................................................................................................6

12廢物處理.....................................................................................................................................7

13注意事項.....................................................................................................................................7

附錄A（資料性）方法的檢出限和測定下限..............................................................................8

附錄B（資料性）不同酸度土壤采用的浸提液pH值...............................................................9

附錄C（資料性）準確度...........................................................................................................10

I

DB42/T2032—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。

本文件由湖北省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心站提出。

本文件由湖北省生態(tài)環(huán)境廳歸口。

本文件起草單位：湖北省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心站、中南民族大學、華中農(nóng)業(yè)大學、恩施市環(huán)境監(jiān)測站、

湖北省標準化與質量研究院、湖北省地質局地球物理勘探大隊、湖北省地質實驗測試中心、湖北省農(nóng)業(yè)

科學院農(nóng)業(yè)質量標準與檢測技術研究所、湖北省地質科學研究院。

本文件主要起草人：賀小敏、范俊楠、田文娟、施敏芳、張勝花、涂書新、楊登、游狄杰、杜維、

黃榮、李明、梁龍飛、石若峰、張明杰、姚晶晶、楊軍、閆加力、龍淵、王卉。

對本文件的有關修改意見，請反饋至湖北省生態(tài)環(huán)境廳，聯(lián)系電話郵箱：

369374583@；本文件實施應用中的疑問，可咨詢湖北省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心站，聯(lián)系電話：027-

87614789，郵箱：39208454@。

III

DB42/T2032—2023

土壤中4種有效砷和4種有效硒的測定液相色譜-原子熒光法

警告：本方法所使用的試劑和標準溶液具有腐蝕性或有毒有害物質特性，試劑配制和樣品前處理過

程應在通風櫥中進行；操作時應按要求佩戴防護器具，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。

1范圍

本文件規(guī)定了測定土壤中4種有效砷和4種有效硒的液相色譜-原子熒光方法原理、試劑和材料、

儀器和設備、樣品、分析步驟、結果計算與表示、準確度、質量保證和質量控制、廢物處理、注意事項

等內(nèi)容。

本文件適用于土壤中砷酸根、亞砷酸根、一甲基砷酸、二甲基砷酸等4種有效砷和硒酸根、亞硒酸

根、硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸等4種有效硒的測定，方法檢出限詳見附錄A。其他有效砷和有效硒經(jīng)

過方法確認，各項性能指標符合要求，也可采用本方法進行測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范

HJ613土壤干物質和水分的測定重量法

HJ962土壤pH值的測定電位法

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4方法原理

以磷酸二氫鉀溶液為提取劑，振蕩提取土壤中4種有效砷和4種有效硒，將提取液離心、過濾后經(jīng)

液相色譜分離，4種有效砷和4種有效硒在酸性條件下分別被硼氫化鉀還原成砷和硒的氫化物，在空心

陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強度與被測溶液中4種有效砷和4種有效硒的濃度成正

比，以保留時間定性，外標法定量。

5試劑和材料

1

DB42/T2032—2023

5.1除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新制備的不含目標物的純

水。

5.2鹽酸：優(yōu)級純。

5.3硝酸：優(yōu)級純。

5.4甲酸。

5.5氨水。

5.6氫氧化鉀。

5.7碘化鉀。

5.8硼氫化鉀。

5.9磷酸氫二銨。

5.10磷酸二氫鉀。

5.11石英砂。

5.12鹽酸溶液：7+93（v+v）。

5.13鹽酸溶液：5+95（v+v）。

5.14硝酸溶液：1+4（v+v）。

5.15氫氧化鉀溶液（5mol/L）：稱取28.00g氫氧化鉀（5.6），溶于約90mL水中，靜置冷卻，用水

定容至100mL，混勻。此溶液用于調(diào)節(jié)pH值，儲存于塑料瓶中。

5.16碘化鉀溶液（10g/L）：稱取5.00g氫氧化鉀（5.6）于1L水中，完全溶解，加入10.0g碘化鉀

（5.7），混勻。此溶液用于4種有效硒的測定，臨用現(xiàn)配。

5.17硼氫化鉀溶液（20g/L）：稱取5.00g氫氧化鉀（5.6）于1L水中，完全溶解，加入20.0g硼氫

化鉀（5.8），混勻。此溶液用于4種有效硒的測定，臨用現(xiàn)配。

5.18磷酸氫二銨溶液（15mmol/L）：稱取1.98g磷酸氫二銨（5.9）溶于1L超純水中，完全溶解，

滴加甲酸（5.4）或氨水（5.5），調(diào)節(jié)pH值至6.00±0.02，水相過濾膜抽濾，超聲30min。此溶液用于

液相色譜流動相，臨用現(xiàn)配。

5.19磷酸氫二銨溶液（40mmol/L）：稱取5.28g磷酸氫二銨（5.9）溶于1L超純水中，完全溶解，

滴加甲酸（5.4）或氨水（5.5），調(diào)節(jié)pH值至6.00±0.02，水相過濾膜抽濾，超聲30min。此溶液用于

液相色譜流動相，臨用現(xiàn)配。

5.20磷酸二氫鉀溶液（0.5mol/L）：準確稱取68.00g磷酸二氫鉀（5.10），溶于約950mL水中，用

鹽酸溶液（5.13）或氫氧化鉀溶液（5.15）調(diào)節(jié)溶液pH值至附錄B中相應的pH值，用水定容至1L。

此溶液用于有效砷的提取，臨用現(xiàn)配。

5.21磷酸二氫鉀溶液（0.1mol/L）：準確稱取13.60g磷酸二氫鉀（5.10），溶于約950ml水中，用

鹽酸溶液（5.13）或氫氧化鉀溶液（5.15）調(diào)節(jié)溶液pH值至附錄B中相應的pH值，用水定容至1L。

此溶液用于有效硒的提取，臨用現(xiàn)配。

5.22砷酸根標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.23亞砷酸根標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.24一甲基砷酸標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

2

DB42/T2032—2023

5.25二甲基砷酸標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.26有效砷混合標準使用液：準確移取適量體積的砷酸根（5.22）、亞砷酸根（5.23）、一甲基砷酸

（5.24）、二甲基砷酸（5.25）標準貯備液，用水稀釋使砷酸根和一甲基砷酸濃度為200μg/L，亞砷酸

根和二甲基砷酸濃度為100μg/L，臨用現(xiàn)配。

5.27硒酸根標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.28亞硒酸根標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.29硒代胱氨酸標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.30硒代蛋氨酸標準貯備溶液：直接購買有證標準溶液，按照證書要求進行保存。

5.31有效硒混合標準使用液：準確移取適量體積的硒酸根（5.27）、亞硒酸根（5.28）、硒代胱氨酸

（5.29）、硒代蛋氨酸（5.30）標準貯備液，用水稀釋使硒酸根和亞硒酸根濃度為100μg/L，硒代胱氨

酸200μg/L，硒代蛋氨酸300μg/L，臨用現(xiàn)配。

5.32氬氣：純度≥99.999%。

6儀器和設備

6.1液相色譜-原子熒光聯(lián)用儀：配砷空心陰極燈、硒空心陰極燈。

6.2色譜柱：陰離子交換色譜柱或其它等效色譜柱。

6.3分析天平：感量分別為0.01g和0.001g。

6.4恒溫振蕩器：溫控應滿足（25±5）℃，振蕩頻率應滿足（350±10）r/min。

6.5抽濾裝置：玻璃材質，可配套使用0.22μm孔徑水系微孔濾膜。

6.6離心機：最大轉速不低于3000r/min。

6.7采樣瓶：廣口棕色玻璃瓶或聚四氟乙烯襯墊螺口玻璃瓶。

6.8pH計：精度±0.01pH單位或更高精度。

6.9一般實驗室常用儀器和設備。

7樣品

7.1樣品采集和保存

按照HJ/T166中的規(guī)定進行土壤樣品的采集。樣品采集后應保存于潔凈采樣瓶中（6.7）中，運輸

過程中應避光、密封、冷藏，盡快運回實驗室分析，如暫不能分析，應在4℃以下密封、避光并冷藏保

存，保存時間不超過7天。

7.2樣品的制備

按照HJ/T166的相關要求，將采集后的土壤樣品在實驗室內(nèi)風干、磨細、過60目篩并儲存在玻璃

瓶中。

3

DB42/T2032—2023

7.3干物質的測定

在稱取土壤浸提樣品時，另稱取一份土壤樣品，按照HJ613要求進行干物質含量的測定。

7.4pH值的測定

按照HJ962對土壤樣品進行pH值的測定。

7.5試樣的制備

7.5.1土壤有效砷或有效硒的浸提

準確稱取1.0g（精確到0.001g）過60目孔徑篩風干試樣于干燥的15mL具蓋聚乙烯或硬質玻璃

離心管中，加入10mL0.5mol/L磷酸二氫鉀（5.20）浸提液以提取有效砷或加入10mL0.1mol/L磷酸

二氫鉀（5.21）浸提液以提取有效硒（根據(jù)土壤樣品pH值，參考附錄B選擇浸提液pH值），將離心

管蓋緊，搖勻，置于恒溫振蕩器上于（25±5）℃條件下，以（350±10）r/min的速度振蕩120min，在

3000r/min轉速下離心15min，取上清液經(jīng)0.22μm水系微孔濾膜過濾于聚乙烯或硬質玻璃瓶中，4℃

以下冷藏保存，5天內(nèi)完成測定。

7.6空白試樣的制備

用石英砂（5.11）代替實際樣品，按照與試樣的制備（7.5）相同步驟進行空白試樣制備。

8分析步驟

8.1儀器參考工作條件

8.1.1液相色譜參考工作條件

色譜柱：陰離子交換色譜柱，250mm（柱長）×4.1mm（內(nèi)徑）×10μm（膜厚），或其它等效色譜

柱；流動相：15mmol/L磷酸氫二銨溶液（有效砷）或40mmol/L磷酸氫二銨溶液（有效硒），pH6.00±0.02，

等度洗脫；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進樣量：100μL。

8.1.2原子熒光參考工作條件

燈電流：砷空心陰極燈60～100mA，硒空心陰極燈80～100mA；負高壓：260～300V；原子化器

溫度：200℃；載流：鹽酸溶液（5.12）；載氣流量：400mL/min；屏蔽器流量：600mL/min。

8.2標準曲線的建立

8.2.1有效砷標準曲線的建立

分別移取一定量有效砷混合標準使用液（5.26），用水稀釋成至少5個濃度點的混合標準系列，使砷

酸根、一甲基砷酸濃度分別為0μg/L、40μg/L、80μg/L、120μg/L、160μg/L、200μg/L，亞砷酸根、二

甲基砷酸濃度分別為0μg/L、20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L。使用儀器參考工作條件

4

DB42/T2032—2023

（8.1），從低濃度到高濃度依次進樣分析，以標準系列溶液中目標化合物質量濃度（ρ）為橫坐標，以

其對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

8.2.2有效硒標準曲線的建立

分別移取一定量有效硒混合標準使用液（5.31），用水稀釋成至少5個濃度點的混合標準系列，使硒

酸根、亞硒酸根濃度分別為0μg/L、20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L，硒代胱氨酸濃度分

別為0μg/L、40μg/L、80μg/L、120μg/L、160μg/L、200μg/L，硒代蛋氨酸濃度分別為0μg/L、60μg/L、

120μg/L、180μg/L、240μg/L、300μg/L。使用儀器參考工作條件（8.1），從低濃度到高濃度依次進樣

分析，以標準系列溶液中目標化合物質量濃度（ρ）為橫坐標，以其對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲

線。

8.2.3標準樣品色譜圖

在本文件推薦的儀器參考條件下，4種有效砷和4種有效硒的液相色譜圖分別見圖1和圖2。

標引序號說明：標引序號說明：

1——亞砷酸根1——硒代胱氨酸

2——二甲基砷酸2——亞硒酸根

3——一甲基砷酸3——硒代蛋氨酸

4——砷酸根4——硒酸根

注：標準溶液的濃度ρ=100μg/L注：標準溶液的濃度ρ=500μg/L

圖14種有效砷標準樣品參考色譜圖圖24種有效硒標準樣品參考色譜圖

8.3試樣測定

在標準曲線建立（8.2）相同的分析條件下進行試樣（7.5）的測定。如果試樣濃度超出標準曲線范

圍，應適當稀釋后重測。以保留時間定性，外標法定量。

8.4空白試樣測定

使用與試樣測定（8.3）相同的儀器條件進行空白試樣（7.6）的測定。

9結果計算與表示

9.1定性分析

5

DB42/T2032—2023

以目標化合物的保留時間進行定性分析。應多次分析標準溶液得到目標化合物的保留時間均值，以

平均保留時間±3倍的標準偏差為保留時間窗口，樣品中目標化合物的保留時間應在其范圍內(nèi)。

9.2結果計算

土壤樣品中目標化合物的質量濃度按式（1）計算：

?3

??×??×10

??=×?………………（1）

??×???

式中：wi——土壤試樣中目標化合物i的含量，mg/kg；

ρi——由標準曲線所得試料中目標化合物i的質量濃度，μg/L；

Vi——試樣定容體積，mL；

mi——稱取土壤樣品的質量，g；

wdm——土壤樣品的干物質含量，%；

10-3——轉換系數(shù)；

f——稀釋倍數(shù)。

9.3結果表示

測定結果小數(shù)點后位數(shù)與方法檢出限保持一致，最多保留3位有效數(shù)字。

10準確度

10.1精密度

三家實驗室對實際土壤4種有效砷的加標樣品進行了6次重復測定和統(tǒng)計。其中，砷酸根和一甲基

砷酸分別加標0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg；亞砷酸根和二甲基砷酸分別加標0.3mg/kg、0.5mg/kg、

1.0mg/kg。實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：砷酸根2.5%～11.1%、亞砷酸根5.8%～25.8%、一甲基砷酸

6.0%～25.6%、二甲基砷酸3.7%～28.3%。實驗室間相對標準偏差分別為：砷酸根3.5%～8.9%、亞砷酸

根4.6%～10.0%、一甲基砷酸5.6%～10.4%、二甲基砷酸2.0%～14.2%。詳見附錄C。

三家實驗室對實際土壤4種有效硒的加標樣品進行了6次重復測定和統(tǒng)計。其中，硒酸根和亞硒酸

根分別加標0.2mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg；硒代胱氨酸加標0.4mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg；硒代

蛋氨酸加標0.4mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg。實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：硒酸根2.7%～13.5%、

亞硒酸根1.3%～11.5%、硒代胱氨酸2.7%～14.8%、硒代蛋氨酸4.6%～14.6%。實驗室間相對標準偏差

分別為：硒酸根6.3%～12.2%、亞硒酸根5.6%～9.9%、硒代胱氨酸6.5%～17.4%、硒代蛋氨酸2.0%～

13.6%。詳見附錄C。

10.2正確度

三家實驗室對實際土壤4種有效砷的加標樣品進行了6次重復測定和統(tǒng)計。其中，砷酸根和一甲基

砷酸分別加標0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg；亞砷酸根和二甲基砷酸分別加標0.3mg/kg、0.5mg/kg、

1.0mg/kg。實驗室加標回收率平均值分別為：砷酸根65.4%～81.2%、亞砷酸根66.6%～73.3%、一甲基

6

DB42/T2032—2023

砷酸72.2%～82.4%、二甲基砷酸75.4%～84.4%。詳見附錄C。

三家實驗室對實際土壤4種有效硒的加標樣品進行了6次重復測定和統(tǒng)計。其中，硒酸根和亞硒酸

根分別加標0.2mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg；硒代胱氨酸加標0.4mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg；硒代

蛋氨酸加標0.4mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg。實驗室加標回收率平均值分別為：硒酸根78.1%～94.3%、

亞硒酸根72.0%～90.1%、硒代胱氨酸90.1%～98.0%、硒代蛋氨酸61.8%～101%。詳見附錄C。

11質量保證和質量控制

11.1空白試驗

每批樣品（不超過20個）至少分析2個實驗室空白樣品，其目標化合物的測定值不得高于方法檢

出限。否則，應檢查試劑空白、儀器系統(tǒng)以及前處理過程。

11.2校準

標準曲線的相關系數(shù)應≥0.995。

每批樣品（不超過20個）需用標準曲線的中間濃度點進行1次校準。校準的相對誤差應在±15%之

內(nèi)，否則應重新建立標準曲線。

11.3平行樣品

每批樣品（不超過20個）應至少分析1對平行樣品。平行雙樣測定結果的相對偏差應≤30%。

11.4基體加標

每批樣品（不超過20個）應至少分析1個基體加標樣品，各組分的加標回收率應在60%～130%之

間。

12廢物處理

實驗中產(chǎn)生的所有廢液和廢物應分類收集，置于密閉容器中集中保管，粘貼明顯標識，委托有資質

的單位處置。

13注意事項

玻璃器皿均應以硝酸溶液（5.14）浸泡24h，再用自來水反復沖洗，最后用實驗用水沖洗干凈。

7

DB42/T2032—2023

附錄A

（資料性）

方法的檢出限和測定下限

表A.1給出了樣品量為1.0g，定容體積為10mL，進樣體積為100μL時，4種有效砷和4種有效硒的方

法檢出限、測定下限要求。

表A.1方法檢出限和測定下限

序號化合物名稱檢出限（mg/kg）測定下限（mg/kg）

1亞砷酸根0.070.3

2二甲基砷酸0.070.3

3一甲基砷酸0.20.8

4砷酸根0.20.8

5硒代胱氨酸0.10.4

6亞硒酸根0.050.2

7硒代蛋氨酸0.10.4

8硒酸根0.050.2

8

DB42/T2032—2023

附錄B

（資料性）

不同酸度土壤采用的浸提液pH值

不同酸度土壤采用的浸提液pH值見表B.1。

表B.1不同酸度土壤采用的浸提液pH值

土壤pH值浸提液pH值

＜4.04.0

4.0～5.05.0

5.0～6.06.0

6.0～7.07.0

7.0～8.08.0

＞8.09.0

9

DB42/T2032—2023

附錄C

（資料性）

準確度

表C.1和表C.2中列出了方法的精密度和正確度。

表C.1方法的精密度匯總表

實驗室內(nèi)相對標準偏差實驗室間相對標準偏差

序號化合物名稱加標濃度（mg/kg）

（%）（%）

0.38.8～21.14.6

1亞砷酸根0.55.8～10.73.8

1.09.6～25.810.0

0.36.3～19.98.0

2二甲基砷酸0.55.4～12.114.2

1.03.7～28.32.0

0.56.0～21.610.4

3一甲基砷酸1.011.8～14.55.6

2.08.0～25.66.5

0.55.6～8.33.5

4砷酸根1.06.1～8.64.0

2.02.5～11.18.9

0.44.8～11.417.4

5硒代胱氨酸1.02.7～8.06.5

2.06.2～14.810.2

0.21.8～11.55.6

6亞硒酸根0.51.3～7.58.5

1.05.3～8.59.9

0.44.6～5.02.0

7硒代蛋氨酸1.010.8～14.68.9

3.05.4～13.113.6

0.24.5～7.812.2

8硒酸根0.52.7～13.56.3

1.04.1～8.46.4

10

DB42/T2032—2023

表C.2方法的正確度匯總表

加標回收率平均值

序號化合物名稱加標濃度（mg/kg）加標回收率（%）

（%）

0.363.7～69.866.6

1亞砷酸根0.564.7～69.767.1

1.065.5～80.173.3

0.3