ICS65.020.01CCSB05DB23黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2922-2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由黑龍江省林業(yè)和草原管理局提出。本文件起草單位：東北林業(yè)大學(xué)、巴彥縣雙鴨山林場(chǎng)、綏棱縣國(guó)有林場(chǎng)三吉臺(tái)林場(chǎng)、黑龍江省山河屯林業(yè)局黑龍江省葦河林業(yè)局、哈爾濱市林業(yè)工作管理總站、黑龍江省慶安國(guó)有林場(chǎng)管理局、哈爾濱市呼蘭區(qū)黃土山林場(chǎng)、黑龍江省應(yīng)急救援保障中心、黑龍江省林業(yè)和草原第二調(diào)查規(guī)劃設(shè)計(jì)院、五常市森林病蟲(chóng)防治檢疫站、五常市林業(yè)工作總站、五常市勝利林場(chǎng)。本文件主要起草人：詹亞光、齊鳳慧、于磊、車(chē)德軍、林顯峰、曾凡鎖、薛文輝、劉林、何利明、謝春風(fēng)、趙曉軍、張連生、李云慶、馮丹、代文棟、王培強(qiáng)、鄭宏、王麗娜、李軼男、高群、夏晨、于航、高航、李曉彬。DB23/T2922-20211水曲柳腋芽微繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了水曲柳（FraxinusmandshuricaRupr.）腋芽微繁的外植體采集與表面消毒、培養(yǎng)基選擇及配制、組織培養(yǎng)程序、組培苗移栽、苗期管理和生產(chǎn)檔案。本文件適用于水曲柳腋芽微繁。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1000容器育苗技術(shù)LY/T1671水曲柳林人工培育技術(shù)規(guī)程LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4外植體采集與表面消毒4.1外植體采集水曲柳優(yōu)樹(shù)當(dāng)年生穗條上帶有頂芽或者腋芽的莖段作為組織培養(yǎng)的外植體。4.2消毒按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。5培養(yǎng)基選擇及配制5.1初代培養(yǎng)基WPM固體培養(yǎng)基，附加20g.L-1蔗糖、7g.L-1瓊脂和1mg.L-16-BA（6-芐基腺嘌呤pH=5.8~6.0。5.2繼代和分化培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)基1為WPM液體培養(yǎng)基，附加30g.L-1蔗糖和0.6mg/LTDZ（噻苯隆pH=5.8~6.0繼代培養(yǎng)基2為WPM固體培養(yǎng)基，附加30g.L-1蔗糖、0.05mg·L-1TDZ、0.6mg·L-1BA和7g.L-1瓊脂（pH=5.8~6.0）；DB23/T2922-20212芽分化增殖培養(yǎng)基為WPM固體培養(yǎng)基，附加30g.L-1蔗糖、1.0mg·L-1ZT（玉米素）和7g.L-1瓊脂（pH=6.0~6.5）。5.3生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)為WPM固體培養(yǎng)基，附加20g.L-1蔗糖、1.4mg·L-1IBA（吲哚丁酸）、0.7mg·L-1NAA（萘乙酸）和7g·L-1瓊脂（pH=5.8~6.0）。5.4培養(yǎng)基母液的配制及保存按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。5.5培養(yǎng)基的滅菌按LY/T1882的規(guī)定執(zhí)行。6組織培養(yǎng)6.1條件溫度25±2℃,濕度60%~70%，光照16h無(wú)光8h交替培養(yǎng)，光照強(qiáng)度40μmol.m-2.s-1~80μmol.m-2.s-1；在無(wú)光條件下液體培養(yǎng)時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速60rpm.min-1。6.2初代培養(yǎng)取滅菌（121℃滅菌20min）的刀具、鑷子、培養(yǎng)皿，將消毒的莖段放入培養(yǎng)皿中，切去莖節(jié)兩端變褐部分露出新鮮組織，接入初代培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)20d~30d，至芽萌發(fā)和生長(zhǎng)。6.3繼代和分化增殖培養(yǎng)萌發(fā)芽接種到繼代培養(yǎng)基1中液體培養(yǎng)20d~30d，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基2中，光照培養(yǎng)20d~30d，再轉(zhuǎn)入芽分化增殖培養(yǎng)基，在光照條件下培養(yǎng)25d~35d，直至新芽分化。6.4壯苗生根培養(yǎng)新芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20d~30d后，待芽長(zhǎng)至3cm~5cm長(zhǎng)，基部形成不定根時(shí)，切下單個(gè)芽再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至根長(zhǎng)約1cm。7組培苗移栽7.1基質(zhì)配置按LY/T1000的規(guī)定執(zhí)行。7.2環(huán)境要求溫度23℃~27℃、濕度60%~90%的溫室內(nèi)自然光照。7.3移栽將滅菌的基質(zhì)，裝入口徑6cm~8cm的無(wú)紡布育苗袋中，用不含蔗糖和瓊脂的生根培養(yǎng)基澆透。將帶有3個(gè)以上根的組培苗栽植于育苗袋，空氣濕度80%~90%；移栽7d后濕度控制在60%~70%。