2025第三人民醫(yī)院「熒光原位雜交」技術(shù)操作與報(bào)告解讀考核一、單選題（共10題，每題2分，計(jì)20分）1.熒光原位雜交（FISH）技術(shù)中，用于標(biāo)記探針的熒光染料不包括以下哪一種？A.蔥綠熒光染料（FAM）B.異硫氰酸熒光素（FITC）C.藻紅蛋白（TexasRed）D.地高辛標(biāo)記的熒光探針2.在FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交前對(duì)染色體進(jìn)行預(yù)處理的主要目的是什么？A.增加染色體的熒光強(qiáng)度B.使染色體分散均勻，提高雜交效率C.消除染色體的背景熒光D.保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)，避免損傷3.以下哪種情況不適合進(jìn)行FISH檢測(cè)？A.染色體數(shù)目異常的檢測(cè)B.特定基因片段的缺失或重復(fù)C.融合基因的檢測(cè)D.細(xì)胞凋亡的定量分析4.FISH報(bào)告中，"2q37.3deletion"表示什么？A.2號(hào)染色體長(zhǎng)臂37.3區(qū)帶缺失B.2號(hào)染色體短臂37.3區(qū)帶缺失C.2號(hào)染色體長(zhǎng)臂37.3區(qū)帶重復(fù)D.2號(hào)染色體短臂37.3區(qū)帶重復(fù)5.在FISH實(shí)驗(yàn)中，探針的特異性主要取決于？A.探針的熒光強(qiáng)度B.探針的長(zhǎng)度C.探針的序列與目標(biāo)DNA的互補(bǔ)性D.探針的標(biāo)記方式6.FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交后洗滌的主要目的是？A.增加背景熒光B.消除未結(jié)合的探針，提高信號(hào)特異性C.增加染色體的透明度D.保護(hù)熒光信號(hào)，延長(zhǎng)觀察時(shí)間7.FISH報(bào)告中，"gainof12p"表示什么？A.12號(hào)染色體短臂缺失B.12號(hào)染色體長(zhǎng)臂重復(fù)C.12號(hào)染色體短臂重復(fù)D.12號(hào)染色體長(zhǎng)臂缺失8.在FISH實(shí)驗(yàn)中，常用的雜交緩沖液成分不包括？A.formamideB.sodiumcitrateC.SDSD.dextransulfate9.FISH報(bào)告中，"interstitialdeletion5q13"表示什么？A.5號(hào)染色體長(zhǎng)臂13區(qū)帶缺失B.5號(hào)染色體短臂13區(qū)帶缺失C.5號(hào)染色體長(zhǎng)臂13區(qū)帶重復(fù)D.5號(hào)染色體短臂13區(qū)帶重復(fù)10.FISH實(shí)驗(yàn)中，熒光顯微鏡的設(shè)置主要影響？A.染色體的數(shù)量B.熒光信號(hào)的強(qiáng)度和特異性C.染色體的形態(tài)D.染色體的分布二、多選題（共5題，每題3分，計(jì)15分）1.FISH實(shí)驗(yàn)中，常用的熒光染料包括哪些？A.蔥綠熒光染料（FAM）B.異硫氰酸熒光素（FITC）C.藻紅蛋白（TexasRed）D.地高辛標(biāo)記的熒光探針E.藍(lán)色熒光染料（DAPI）2.FISH報(bào)告中，以下哪些情況可能提示染色體異常？A.探針信號(hào)缺失B.探針信號(hào)重復(fù)C.融合基因信號(hào)D.染色體數(shù)目正常E.背景熒光高3.在FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交前的染色體預(yù)處理包括哪些步驟？A.低滲處理B.蛋白酶K消化C.固定D.染色體顯帶E.高滲處理4.FISH報(bào)告中，以下哪些術(shù)語與染色體結(jié)構(gòu)異常相關(guān)？A.deletionB.duplicationC.translocationD.inversionE.polyploidy5.FISH實(shí)驗(yàn)中，影響雜交效率的因素包括哪些？A.探針的特異性B.雜交溫度C.雜交時(shí)間D.染色體預(yù)處理質(zhì)量E.熒光顯微鏡的設(shè)置三、判斷題（共10題，每題1分，計(jì)10分）1.FISH技術(shù)可以用于檢測(cè)活細(xì)胞中的基因表達(dá)。（×）2.FISH報(bào)告中，"3p25.3amplification"表示3號(hào)染色體短臂25.3區(qū)帶擴(kuò)增。（√）3.FISH實(shí)驗(yàn)中，探針的標(biāo)記方式會(huì)影響雜交效率。（√）4.FISH報(bào)告中，"lossof7q36"表示7號(hào)染色體長(zhǎng)臂36區(qū)帶缺失。（√）5.FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交緩沖液的主要成分是formamide。（√）6.FISH報(bào)告中，"balancedtranslocation"表示染色體平衡易位。（√）7.FISH技術(shù)可以用于檢測(cè)基因的拷貝數(shù)變異（CNV）。（√）8.FISH實(shí)驗(yàn)中，熒光顯微鏡的設(shè)置不會(huì)影響信號(hào)特異性。（×）9.FISH報(bào)告中，"inversion9p"表示9號(hào)染色體短臂倒位。（√）10.FISH技術(shù)可以用于檢測(cè)RNA的表達(dá)水平。（×）四、簡(jiǎn)答題（共5題，每題5分，計(jì)25分）1.簡(jiǎn)述FISH實(shí)驗(yàn)的基本步驟。2.解釋FISH報(bào)告中"gain"和"loss"的含義。3.FISH實(shí)驗(yàn)中，如何提高探針的特異性？4.簡(jiǎn)述FISH技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用。5.FISH報(bào)告中，"interstitialdeletion"和"terminaldeletion"有何區(qū)別？五、論述題（共2題，每題10分，計(jì)20分）1.結(jié)合第三人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述FISH技術(shù)在遺傳病診斷中的重要性。2.分析FISH實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的誤差，并提出相應(yīng)的改進(jìn)措施。答案與解析一、單選題1.D解析：FISH實(shí)驗(yàn)中，熒光染料主要包括FAM、FITC、TexasRed等，而地高辛標(biāo)記的熒光探針是核酸雜交的標(biāo)記物，不屬于熒光染料。2.B解析：FISH實(shí)驗(yàn)前，染色體需進(jìn)行低滲處理和固定，使染色體分散均勻，提高探針的雜交效率。3.D解析：FISH技術(shù)主要用于檢測(cè)染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常、基因片段的缺失或重復(fù)、融合基因等，不適用于細(xì)胞凋亡的定量分析。4.A解析："2q37.3deletion"表示2號(hào)染色體長(zhǎng)臂37.3區(qū)帶缺失。5.C解析：探針的特異性取決于其序列與目標(biāo)DNA的互補(bǔ)性，序列越匹配，特異性越高。6.B解析：雜交后洗滌的主要目的是消除未結(jié)合的探針，減少背景熒光，提高信號(hào)特異性。7.C解析："gainof12p"表示12號(hào)染色體短臂重復(fù)。8.C解析：FISH實(shí)驗(yàn)中常用的雜交緩沖液成分包括formamide、sodiumcitrate、dextransulfate等，SDS不是雜交緩沖液的主要成分。9.A解析："interstitialdeletion5q13"表示5號(hào)染色體長(zhǎng)臂13區(qū)帶缺失。10.B解析：熒光顯微鏡的設(shè)置主要影響熒光信號(hào)的強(qiáng)度和特異性，包括濾光片的選擇、曝光時(shí)間等。二、多選題1.A,B,C,D解析：FISH實(shí)驗(yàn)中常用的熒光染料包括FAM、FITC、TexasRed、地高辛標(biāo)記的熒光探針等，DAPI主要用于核染色，不屬于FISH探針的熒光染料。2.A,B,C解析：FISH報(bào)告中，探針信號(hào)缺失、重復(fù)、融合基因信號(hào)都可能提示染色體異常，染色體數(shù)目正常、背景熒光高不屬于異常情況。3.A,B,C解析：FISH實(shí)驗(yàn)前，染色體需進(jìn)行低滲處理、蛋白酶K消化和固定，以提高探針的雜交效率。4.A,B,C,D解析：FISH報(bào)告中，deletion、duplication、translocation、inversion都與染色體結(jié)構(gòu)異常相關(guān)，polyploidy屬于染色體數(shù)目異常。5.A,B,C,D,E解析：FISH實(shí)驗(yàn)中，探針的特異性、雜交溫度、雜交時(shí)間、染色體預(yù)處理質(zhì)量、熒光顯微鏡的設(shè)置都會(huì)影響雜交效率。三、判斷題1.×解析：FISH技術(shù)主要用于檢測(cè)DNA，不適用于檢測(cè)活細(xì)胞中的RNA表達(dá)。2.√解析："3p25.3amplification"表示3號(hào)染色體短臂25.3區(qū)帶擴(kuò)增。3.√解析：探針的標(biāo)記方式（如生物素、地高辛等）會(huì)影響雜交效率。4.√解析："lossof7q36"表示7號(hào)染色體長(zhǎng)臂36區(qū)帶缺失。5.√解析：FISH實(shí)驗(yàn)中，雜交緩沖液的主要成分是formamide。6.√解析："balancedtranslocation"表示染色體平衡易位。7.√解析：FISH技術(shù)可以用于檢測(cè)基因的拷貝數(shù)變異（CNV）。8.×解析：熒光顯微鏡的設(shè)置會(huì)影響信號(hào)特異性，如濾光片的選擇、曝光時(shí)間等。9.√解析："inversion9p"表示9號(hào)染色體短臂倒位。10.×解析：FISH技術(shù)主要用于檢測(cè)DNA，不適用于檢測(cè)RNA表達(dá)。四、簡(jiǎn)答題1.FISH實(shí)驗(yàn)的基本步驟-染色體制備：細(xì)胞低滲、固定、制片。-探針標(biāo)記：選擇特異性探針并進(jìn)行熒光標(biāo)記。-雜交：將標(biāo)記探針與染色體進(jìn)行雜交。-洗滌：去除未結(jié)合的探針，減少背景熒光。-封閉：使用封閉液封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。-顯色：使用熒光顯微鏡觀察雜交信號(hào)。2."gain"和"loss"的含義-"gain"表示某基因或染色體片段的拷貝數(shù)增加，可能提示基因擴(kuò)增或染色體重復(fù)。-"loss"表示某基因或染色體片段的拷貝數(shù)減少，可能提示基因缺失或染色體缺失。3.提高探針特異性的方法-選擇高特異性探針：確保探針序列與目標(biāo)DNA高度互補(bǔ)。-優(yōu)化雜交條件：控制雜交溫度、時(shí)間和緩沖液成分。-使用封閉液：封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少背景熒光。4.FISH技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用-染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常的檢測(cè)，如唐氏綜合征、平衡易位等。-基因片段的缺失或重復(fù)檢測(cè)，如脆性X綜合征等。-融合基因檢測(cè)，如慢性粒細(xì)胞白血病中的BCR-ABL融合基因。-腫瘤遺傳學(xué)檢測(cè)，如基因擴(kuò)增（如HER2）和缺失（如MLH1）。5."interstitialdeletion"和"terminaldeletion"的區(qū)別-"interstitialdeletion"表示染色體內(nèi)部片段缺失，即缺失片段位于兩條染色單體之間。-"terminaldeletion"表示染色體末端片段缺失，即缺失片段位于染色體末端。五、論述題1.FISH技術(shù)在第三人民醫(yī)院遺傳病診斷中的重要性第三人民醫(yī)院作為區(qū)域性大型醫(yī)院，遺傳病診斷需求較高。FISH技術(shù)具有以下重要性：-快速檢測(cè)染色體異常：FISH技術(shù)可以快速檢測(cè)染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常，如唐氏綜合征、平衡易位等，為臨床診斷提供重要依據(jù)。-基因定位和診斷：FISH技術(shù)可以精確定位特定基因的位置，幫助診斷遺傳病，如脆性X綜合征、遺傳性乳腺癌等。-腫瘤遺傳學(xué)檢測(cè)：FISH技術(shù)可以檢測(cè)腫瘤中的基因擴(kuò)增和缺失，如乳腺癌中的HER2擴(kuò)增、結(jié)直腸癌中的MLH1缺失等，為靶向治療提供依據(jù)。-產(chǎn)前診斷：FISH技術(shù)可以用于產(chǎn)前診斷胎兒染色體異常，如唐氏綜合征、無腦兒等，降低出生缺陷率。因此，F(xiàn)ISH技術(shù)在第三人民醫(yī)院遺傳病診斷中具有重要價(jià)值，能夠提高診斷效率和準(zhǔn)確性。2.FISH實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的誤差及改進(jìn)措施FISH實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的誤差包括：-探針特異性低：探針序列與目標(biāo)DNA不完全互補(bǔ)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合。-改進(jìn)措施：選擇高特異性探針，優(yōu)化雜交條件（如溫度、時(shí)間）。-雜交效率低：染色體預(yù)處理不當(dāng)或雜交條件不適宜，導(dǎo)致探針結(jié)合率低。-改進(jìn)措施：優(yōu)化染色體預(yù)處理步驟，控制雜交溫度和時(shí)間。-背景熒光高：未結(jié)合的探針或非特異性結(jié)合導(dǎo)