DB36江西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 2規(guī)范性引用文件 4主要設備 5樣品采集與分離 附錄A（資料性）20屬常見作物寄生線蟲的主要寄主、常見種及為害癥狀 附錄B（規(guī)范性）20屬常見作物寄生線蟲形態(tài)學特征 附錄C（資料性）19屬常見作物寄生線蟲形態(tài)特征圖 本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江西省農業(yè)農村廳提出并歸口。本文件起草單位：江西省農業(yè)科學院農業(yè)應用微生物研究所、吉安市農業(yè)科學研究所、吉安市永豐縣蔬菜產業(yè)發(fā)展中心、吉安市泰和縣塘洲鎮(zhèn)人民政府。本文件主要起草人：范琳娟、徐雪亮、劉子榮、喻吉生、涂年生、康宏波、胡平華、姚英娟。常見作物寄生線蟲形態(tài)學鑒定方法本文件規(guī)定了常見作物上包括墊刃目、滑刃目、矛線目、三矛目等4個目20屬寄生線蟲有關的樣品采集與分離、形態(tài)學鑒定方法和結果判定。本文件適用于常見作物的4個目20屬寄生線蟲形態(tài)學鑒定。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4主要設備生物顯微鏡、離心機、解剖鏡。5樣品采集與分離5.1采集主要檢查植物材料地上部分葉片顏色、株高、莖粗等生長指標是否異常，根部是否有根結、褐化或發(fā)黑等癥狀，收集上述可疑材料及根際土壤帶回實驗室檢驗。具體采樣特征見附錄A。5.2.1要求將植物材料輕輕沖洗干凈后，于吸水紙上吸掉表面水后，然后用刀片切成約0.5mm厚的薄片用貝爾曼漏斗法或淺盤法分離線蟲。將分離獲得的線蟲液通過沉淀或離心濃縮后，制成臨時玻片，于10×40倍下進行鏡檢，觀察線蟲的形態(tài)學特征。5.2.2貝爾曼漏斗法在口徑為20cm的漏斗末端接一段橡皮管，在橡皮管末端用彈簧夾夾緊，在漏斗上方放置一層紗布和一層線蟲濾紙，將土樣或者切碎的植物材料均勻鋪在濾紙上，緩慢加水至浸沒樣品，室溫下放置48h后，打開夾子，收集橡皮管里的水樣，于解剖鏡下觀察是否有線蟲。若有線蟲，將水樣搖勻后，吸取100μL或200μL線蟲液，制成臨時玻片，進行鏡檢鑒定。5.2.3淺盤法2把網眼筐套放在塑料盆中，在網眼筐里放入一層紗布和一張等大的清風牌雙層面巾紙。將土樣或者切碎的植物材料輕輕倒在面巾紙上平攤開，用量杯輕輕地沿塑料盆壁往盆里加水直至水沒過土面2mm。靜置48h后，輕輕取出帶土的網眼盆，把塑料盆中的水樣(即線蟲懸浮液)倒入500mL量杯中，再用少量(約20mL)清水沖洗塑料盆，重復清洗2次，沖洗液繼續(xù)倒入500mL量杯中。量杯中的線蟲液靜置3h后，用橡皮管吸去上清液，留下約100mL，搖勻后倒入平底管中，并用5mL清水沖洗，重復清洗2次量杯，將附著在杯壁、杯底的線蟲沖洗入平底管中。靜置3h，用橡皮管輕輕吸取上層水留下約20mL，搖勻后倒入有刻度的試管中，再用少量清水沖洗平底管2次，沖洗液繼續(xù)倒入有刻度試管中。靜置3h或離心去上清后搖勻后制成臨時玻片，進行鏡檢鑒定。6鑒定方法6.1鑒定依據根據不同目、科、屬線蟲體形、唇區(qū)、口針、口針基部球、食道類型、背食道腺開口位置、中食道球大小及形狀、側尾腺口形狀、生殖器官位置及特征、尾部形狀及特征等主要形態(tài)特征進行鑒定。6.2鑒定特征三矛目包括1個屬，為毛刺線蟲屬(Trichodorus)。以上20屬線蟲具體形態(tài)學特征和形態(tài)特征圖分別詳見附錄B和附錄C。7結果判定依據附錄B和附錄C將測試線蟲判定到屬。20屬常見作物寄生線蟲的主要寄主、常見種及為害癥狀這類線蟲通常分布于許多植物的根系周圍，有些也存在于苔蘚根際，其寄生性尚不清楚。莖線蟲既可寄生植物地上部分，也可寄生地下部分，主要寄主有甘薯、馬鈴薯、起絨草、水稻等。為害癥狀：主要為害塊根、莖蔓及秧苗。秧苗根部受害，在表皮上生有褐色暈斑，秧苗發(fā)育不良、矮小發(fā)黃；莖部癥狀多在髓部，初為白色，后變?yōu)楹稚筛癄?；塊根癥狀有糠心型、糠皮型和混合型，糠心型，由染病莖蔓中的線蟲向下侵入薯塊，病薯外表與健康甘薯無異，但薯塊內部全變成褐白相間的干腐；糠皮型，線蟲自土中直接侵人薯塊，使內部組織變褐發(fā)軟，呈塊狀褐斑或小型龜裂；嚴重發(fā)病時，兩種癥狀可以混合發(fā)生，呈混合型。本屬線蟲為植物種子和莖部的代表寄生物，主要侵染禾本科單子葉植物。為害癥狀：病株葉片扭曲，抽穗增多，莖基部變粗，甚至使植物矮化與彎曲以致被害種粒形成蟲癭矮化線蟲寄主范圍很廣，主要包括煙草、棉花、燕麥、玉米、甘蔗、水稻、大豆和花生等重要經濟為害癥狀：主要取食于根毛細胞、表皮細胞，通常不會引起明顯的地上部癥狀，受害植物根系生長受到抑制而發(fā)育不良，株稍停止生長，植株矮化。A.5短體線蟲屬(根腐線蟲屬Pratylenchus)短體線蟲寄主范圍很廣，重要寄主有：咖啡、茶、香蕉、煙草、山藥、櫻桃、蘋西瓜、葡萄、柑桔、大豆、豌豆、綠豆及各種蔬菜等。4為害癥狀：本屬線蟲主要在根部皮層取食，引起根系不發(fā)達，根部組織變褐腐爛、壞死。由于其對根部造成傷口，往往與細菌、真菌導致復合侵染。潛根線蟲屬具有比較廣泛的寄主，最主要的寄主為水稻，也從芋、甘蔗、棉花、番茄、玉米、小麥等作物根部發(fā)現，野生寄主以禾本科和莎草科最重要。為害癥狀：受害水稻生長遲緩、植株矮小黃化、分蘗減少、抽穗和開花推遲，被侵染根變黃褐色和穿孔線蟲的一些種類是芭蕉、甘蔗、枇杷、咖啡樹和美人蕉等植物的重要病原線蟲。為害癥狀：根表面出現壞死斑，一般呈橘黃色、紫色或褐色，壞死斑外部形成裂縫，根腐爛；地上部一般表現為葉片縮小，變色，新枝生長弱等癥狀。某些盾線蟲可引起植物地下的肉質器官如薯蕷的塊莖和百合鱗莖等細胞的破壞。在熱帶，這類線蟲是貯藏薯蕷的嚴重病原線蟲，引起薯蕷干腐病。本屬線蟲是根部外寄生線蟲，偶爾也可侵入根內，主要為害豌豆、百合、胡蘿卜、萵苣和其他蔬菜作物的根系，以及許多觀賞的灌木和苗圃里的樹，特別是黃楊樹。為害癥狀：導致根系壞死或腐爛，地上部生長受阻，有時伴發(fā)失綠病。本屬線蟲能取食極為廣泛的植物種類，是我國大豆農田和果園的優(yōu)勢植物線蟲類群。為害癥狀：根系出現壞死病斑，地上部生長受阻。在我國南方主要為害雙子葉植物蔬菜的根部。為害癥狀：受害根系變小，多壞死斑，嚴重時腐爛死亡，地上部生長受阻。A.12孢囊線蟲屬(異皮線蟲屬Heterodera)孢囊線蟲病是發(fā)生在冷涼地區(qū)農業(yè)生產上的重要病害，一般寄主范圍都較狹窄，嚴格的專性寄生，存在生理小種。常為害馬鈴薯、大豆、茄子、番茄、甜菜、小麥等。為害癥狀：主要為害寄主的根系，地上部癥狀與缺水或缺氮肥相似，根系受害后發(fā)育較弱，表面出現褐色斑點，表皮龜裂，線蟲數量較大時，根系蟲體開始露出根表皮，根系開始變褐腐爛，造成地上部分黃化枯死。檢查根系可發(fā)現白色或淡黃色比小米粒易掉落土中。此病在田間分布初期僅局限于小面積上，使大田出現綠中帶黃，高矮相間的山丘狀，后期嚴重時大田病株呈帶狀枯死甚至全田枯死，似火燒狀。根結屬線蟲廣泛分布于世界各地，寄主植物3000余種，常為害煙草、各種蔬菜、瓜類、果樹及觀賞植物等，還能傳播一些細菌和真菌性病害。為害癥狀：主要為害植物的根部，表現為側根和須根較正常多，并在幼根上形成球形或圓錐形大小不等的根瘤。環(huán)線蟲屬廣泛分布于世界各地，主要從禾本科雜在我國主要采集于柑橘和梨等果樹根圍土，目前該屬對植物的為害性尚不十分清楚。針線蟲在各種植物根部出現比例都比較大，主要為害玉米、大豆、高粱、甜菜等大田作物，也為害蔬菜以及梨、核桃、櫻桃等各類果樹和其他禾本科植物。為害癥狀：許多植物能耐針線蟲的侵染，一般不造成明顯的癥狀。本屬線蟲分布較廣，多為半寄生性的線蟲或取食真菌的線蟲，多存在于腐爛的球莖、根莖、葉鞘和根部內外以及大多數植物的根際土壤。6滑刃線蟲病是一類植物地上部分的重要線蟲病害。這類線蟲抗逆性很強，寄主范圍十分廣泛，主要寄主有百合科、報春花科、毛茛科、蕨類植物、菊科、茄科、罌粟科、草莓、水稻等植物。為害癥狀：主要為害植物的葉、芽及生長點，受害葉片皺縮、變色扭曲，葉片較小，脈間出現褐色病斑；線蟲在芽上取食，有時能殺死生長點，導致不能開花，或產生畸形葉。劍線蟲屬已報道有200多種，大多數為植物外部的外寄生線蟲，有些種類可以傳播線傳病毒屬病毒，這些種類是我國禁止進境的檢疫性線蟲，主要依靠土壤、介質土和帶根苗木、球莖等寄主植物材料的調運傳播，與寄主之間非?；缘?，常發(fā)生在農業(yè)、園藝和森林土壤中的寄生蟲。為害癥狀：根系受到劍線蟲屬侵害的植物，在無病毒的情況下，地上部分一般不表現明顯的特異癥狀。在線蟲群體密度大時，一般長勢衰弱，該癥狀在田間呈現與線蟲最高群體密度相對應的小塊狀分布。根系嚴重受害時，根部近尖處膨脹。線蟲取食傳毒時，病毒在作物上的特異癥狀開始發(fā)展，在生長季節(jié)病毒傳至根部，癥狀首先表現在植物的地上部分。毛刺屬迄今已發(fā)現50多種，在植物根部遷徙性外寄生，能傳播煙草脆裂屬病毒Tobravirus，是我國禁止進境的檢疫性線蟲。一些種類破壞的植物范圍很廣，包括芹菜、番茄、洋蔥、玉米、甜菜和果樹等。為害癥狀：多數在根尖和細跟毛附近取食，被害根系小、側根短，成為“矬根線蟲”。長針線蟲屬已報道有100多種，在植物根部遷移外寄生，主要為害胡蘿卜、薄荷、紅漿果樹叢、懸鉤子、草莓和甜菜等，有一些種類可以傳播線傳病毒屬病毒，這些種類是我國禁止進境的檢疫性線蟲。為害癥狀：被害植株通常矮小，表現出生長受阻礙的表現，根畸形，粗短，側根消失。20屬常見作物寄生線蟲形態(tài)學特征雌雄異體，蟲體小到中等，大約0.3mm～1.3mm長，均為細長蠕蟲形，體長頭端部平圓，口針發(fā)達，長3μm～21μm，基部球明顯；典型的墊刃型食道，中食道球卵圓形、較小，直徑小于體寬的3/4，峽部長而細，下接梨形的后食道腺；尾均勻漸變細，呈細長絲狀，直或向腹部彎曲呈鉤狀、弓狀。墊刃屬線蟲的形態(tài)與裸矛屬線蟲十分相似，最主要的區(qū)別在于裸矛屬線蟲尾部細長，末端棒狀，不蟲體較大，有的可達2mm，唇區(qū)平，口針短細，長約7μm～11μm，有明顯的基部球；墊刃型食道，中食道球發(fā)達（偶爾無明顯的中食道球呈卵圓形；兩性尾形相似，呈尾長圓錐形到近柱形，偶有絲狀。雌蟲蟲體較大，雌雄異體。成熟雌蟲肥大，兩端狹小，呈螺旋形，體長大于1mm，有時可達4mm。唇區(qū)明顯縊縮，前端較短平，口針細小有發(fā)達的基部球；墊刃型食道，后食道腺膨大呈耳朵狀；雄蟲體細長，尾部較尖，精巢轉折而精母細胞呈軸對稱排列，交合傘幾乎包到尾端但不伸到尾端，有引帶。蟲體中等大小，長度0.5mm～1.7mm，頭部連續(xù)到略縊縮，口針強大，基部球大而明顯；墊刃型食道，食道腺發(fā)達呈梨形或長梨形；雌蟲尾部圓筒形或圓錐形，末端通常鈍圓，雄蟲尾部稍彎曲。有塊狀的基部球；墊刃型食道，中食道球圓球形或卵圓形，大于1/2的體寬，食道腺長葉狀通常從腹側在形態(tài)學上與穿孔線蟲屬線蟲極為相像，主要區(qū)別是：穿孔線蟲屬雌蟲具有雙卵巢，而短體線蟲屬雌蟲只具有單卵巢。中食道球發(fā)達；蟲體向后削尖，末端通常尖形，有微細的尾尖突。8長度通常短于1mm，雌蟲頭部扁平連續(xù)，口針粗短，有發(fā)達的基部球；墊刃型食道，中食道球發(fā)達，食道腺長葉狀從背部覆蓋腸；雄蟲頭部高，顯著縊縮呈球狀；雌、雄蟲尾部都呈長圓錐形，末端呈不規(guī)則的鈍圓到近尖。體長約1mm，蟲體形態(tài)與盤旋線蟲屬相似，區(qū)別在于其巨大的側尾腺開口呈盾狀。頭部前端平到圓，頭架粗大，口針基球大；背食道腺開口距口針基部的距離為小于或等于口針長度的1/4，墊刃型食線蟲經熱殺死后蟲體通常呈螺旋形或“C”形，蟲體略呈圓筒狀，頭部縊縮或連續(xù)，前端圓或平，口針強大，有寬闊而擴大的基部球；食道腺開口離口針基部的距離通常小于口針長度的1/4，墊刃型食道；雌蟲末端半圓形，在背后略有彎曲，雄蟲交合傘伸到尾端、不呈葉狀。線蟲形態(tài)與盤旋屬相似，經熱殺死后蟲體通常呈螺旋形或“C”形，頭部連續(xù)到略縊縮，頭端圓或平，口針強大，基部球明顯；本屬的特點在于其背食道腺開口離口針基部的距離等于口針長度的1/4或更長，墊刃型食道；雌蟲尾部通常向腹面明顯彎曲或具一短的腹面突起，尾端呈半球形、背弧大。雌雄異形，未成熟的雌蟲細長呈紡錘形，呈字母“C”形狀，頭部低圓或高平，口針強壯，背食道腺開口距口針基部的距離為口針長度的一半，墊刃型食道，尾長圓錐形；成熟雌蟲膨大呈具短尾的腎形；雄蟲蠕蟲形，口針很弱，食道退化，尾形似年輕雌蟲。B.12孢囊線蟲屬(異皮屬Heterodera)雌雄異形，成熟雌蟲大約0.5mm～1.0mm長，蟲體膨大呈梨形或檸檬形，有短頸，墊刃型食道，最初的雌成蟲是白色或淡黃色，死亡后表皮變褐色，連同其所含的具胚的卵共稱為“孢囊”。雄蟲：蟲體蠕蟲形、彎曲，體長1mm～2mm，尾部短圓。二齡幼蟲：蠕蟲形，長約0.5mm，口針粗壯，中食道球發(fā)達，尾圓錐形、末端尖。雌雄異形，在顯微鏡下經?？吹狡?齡幼蟲形態(tài)，口針纖細，有微弱的基部球；墊刃型食道，中食道球較發(fā)達，卵圓形，口針基部球與中食道球之間的食道前體部多次彎曲，身體細長，尾部呈圓錐形。在雌蟲尾末端的中央表皮上有一個環(huán)繞著肛門和陰門的特征性表皮花紋，叫作會陰花紋，可作為鑒定種的重要特征。雌成蟲膨大呈球形，具突出的頸。雄蟲，蠕蟲形，體長0.7mm～1.9mm，尾部常扭曲90°以上，尾短、鈍圓，無交合傘。蟲體小到中等，體長約0.24mm～0.74典型的環(huán)型食道；口腔內有延伸的口針，口針40～132μm長，在發(fā)育后期經蛻皮失去口針；尾尖錐形，末端尖或略圓；雄蟲交合傘小或缺。雌蟲蟲體一般小于0.5mm，蟲體略呈錐形，死亡時常彎曲呈“C”字形；唇區(qū)呈錐形，前端圓或平截；口針一般較長（12μm～40μm基部球明顯；墊刃型食道，食道腺呈圓梨形；尾部末端常呈錐形。雄蟲蟲體一般比雌蟲細，口針退化或缺，食道退化，交合刺略彎，無交合傘。幼蟲體形似雌蟲，無口針，或僅4齡幼蟲有弱的口針。線蟲熱殺死后蟲體略直到腹彎，蟲體長度中等到長，約0.5mm～1.2mm，蟲體近圓筒形，頭部低，略圓，略縊縮；口針較細，無口針基部球但基部略膨大；滑刃型食道，食道圓筒形，近食道球處變細，中食道球大而明顯，卵圓形具瓣門，約占體寬的3/4，食道腺葉狀從背面覆蓋腸；尾部圓柱形，末端鈍圓。雄蟲交合刺成對，弓形