生物醫(yī)藥抗體純化技術員崗位考試試卷及答案單項選擇題（每題2分，共10題）1.以下哪種層析方法常用于抗體純化？（）A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.親和層析D.以上都是2.抗體的基本結構單位是（）A.輕鏈B.重鏈C.二硫鍵相連的四條肽鏈D.可變區(qū)3.蛋白質(zhì)在280nm波長處有特征吸收峰，主要是因為含有（）A.色氨酸和酪氨酸B.苯丙氨酸和亮氨酸C.半胱氨酸和蛋氨酸D.組氨酸和精氨酸4.以下哪種緩沖液常用于抗體純化過程？（）A.Tris-HClB.PBSC.Glycine-HClD.以上都有可能5.超濾的主要作用是（）A.去除小分子雜質(zhì)B.濃縮樣品C.分離不同大小的蛋白質(zhì)D.以上都是6.親和層析中，與抗體特異性結合的配體是（）A.蛋白質(zhì)AB.肝素C.鎳離子D.以上都可以7.抗體純化過程中，常用來檢測抗體純度的方法是（）A.SDSB.WesternblotC.ELISAD.以上都是8.以下哪種物質(zhì)可以作為離子交換層析的洗脫劑？（）A.氯化鈉B.乙醇C.甘油D.丙酮9.凝膠過濾層析分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是（）A.蛋白質(zhì)的電荷性質(zhì)B.蛋白質(zhì)的大小C.蛋白質(zhì)的等電點D.蛋白質(zhì)的親和力10.在抗體純化中，去除內(nèi)毒素常用的方法是（）A.超濾B.離子交換層析C.親和層析D.活性炭吸附多項選擇題（每題2分，共10題）1.抗體純化常用的層析技術有（）A.離子交換層析B.親和層析C.凝膠過濾層析D.疏水相互作用層析2.影響抗體穩(wěn)定性的因素有（）A.溫度B.pH值C.離子強度D.光照3.以下屬于蛋白質(zhì)分離純化方法的有（）A.離心B.過濾C.透析D.電泳4.親和層析的優(yōu)點包括（）A.特異性高B.純化倍數(shù)高C.條件溫和D.成本低5.抗體的功能區(qū)包括（）A.可變區(qū)B.恒定區(qū)C.鉸鏈區(qū)D.跨膜區(qū)6.用于檢測抗體活性的方法有（）A.ELISAB.WesternblotC.免疫熒光D.比色法7.離子交換層析中，影響蛋白質(zhì)吸附與洗脫的因素有（）A.蛋白質(zhì)的電荷性質(zhì)B.緩沖液的pH值C.離子強度D.溫度8.超濾過程中，影響超濾效率的因素有（）A.壓力B.溫度C.料液濃度D.膜的孔徑9.蛋白質(zhì)復性的方法有（）A.稀釋復性B.透析復性C.柱上復性D.超濾復性10.在抗體純化車間，需要遵循的規(guī)范有（）A.無菌操作B.清潔消毒C.儀器維護D.記錄完整判斷題（每題2分，共10題）1.所有抗體都可以用同樣的純化方法。（）2.親和層析的配體與抗體的結合是不可逆的。（）3.蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最大。（）4.超濾可以完全去除樣品中的所有雜質(zhì)。（）5.離子交換層析中，陰離子交換樹脂結合帶正電荷的蛋白質(zhì)。（）6.抗體的可變區(qū)決定了其與抗原結合的特異性。（）7.凝膠過濾層析中，大分子蛋白質(zhì)先被洗脫下來。（）8.ELISA只能用于檢測抗體的含量，不能檢測其活性。（）9.蛋白質(zhì)復性是將變性的蛋白質(zhì)恢復到天然狀態(tài)的過程。（）10.抗體純化過程中，不需要考慮內(nèi)毒素的影響。（）簡答題（每題5分，共4題）1.簡述親和層析純化抗體的原理。2.離子交換層析中，如何選擇合適的離子交換樹脂？3.說明超濾在抗體純化中的作用及操作要點。4.列舉兩種檢測抗體純度的方法并簡述其原理。討論題（每題5分，共4題）1.在抗體純化過程中，如何保證抗體的活性和純度？2.當抗體純化過程中出現(xiàn)雜質(zhì)超標時，可能的原因有哪些及如何解決？3.討論不同層析方法在抗體純化中的優(yōu)勢和局限性。4.談談你對生物醫(yī)藥抗體純化技術員崗位的理解及未來發(fā)展方向。答案單項選擇題1.C2.C3.A4.D5.D6.A7.A8.A9.B10.D多項選擇題1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABC6.ABC7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABCD判斷題1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.×9.√10.×簡答題答案1.親和層析基于抗體與特定配體之間高度特異性的相互作用，如抗體與抗原、蛋白質(zhì)A等的特異性結合。將配體固定在層析介質(zhì)上，當含有抗體的樣品通過層析柱時，抗體與配體特異性結合，其他雜質(zhì)不結合而直接流出，再用適當?shù)南疵撘簩⒔Y合的抗體洗脫下來，從而實現(xiàn)抗體純化。2.選擇離子交換樹脂要考慮蛋白質(zhì)的電荷性質(zhì)。先確定蛋白質(zhì)在純化條件下的帶電情況，若帶正電，選陽離子交換樹脂；帶負電選陰離子交換樹脂。還要考慮樹脂的交換容量、顆粒大小、交聯(lián)度等，交換容量要滿足純化需求，顆粒大小影響分離效果，交聯(lián)度影響樹脂的物理化學性質(zhì)。3.超濾作用：濃縮抗體溶液，去除小分子雜質(zhì)和緩沖液中的鹽分等。操作要點：選擇合適孔徑的超濾膜，根據(jù)抗體大小和雜質(zhì)情況確定；控制操作壓力，避免壓力過高損壞膜和抗體；保持合適溫度，防止溫度影響抗體活性；注意料液濃度和流速，保證超濾效率和效果。4.SDS：原理是根據(jù)蛋白質(zhì)分子的大小在電場作用下進行分離。蛋白質(zhì)在SDS作用下變性并帶上負電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中遷移，不同大小蛋白質(zhì)遷移速率不同，通過與標準蛋白對比可判斷抗體純度。HPLC：利用不同物質(zhì)在固定相和流動相之間的分配系數(shù)差異進行分離，檢測抗體在特定條件下的出峰情況，根據(jù)峰的數(shù)量和面積判斷純度。討論題答案1.保證抗體活性要控制整個純化過程的條件溫和，如合適的溫度、pH值，避免劇烈攪拌和過高壓力。使用的緩沖液和添加劑要有利于維持抗體結構穩(wěn)定。保證純度則要合理選擇純化方法，如先粗分再細分，多種層析方法聯(lián)用；嚴格控制操作過程，防止交叉污染；利用多種檢測手段實時監(jiān)測純度，不達標準時及時調(diào)整純化步驟。2.雜質(zhì)超標原因：原料本身雜質(zhì)多，可能來源生物樣本處理不當；純化方法選擇不合適，不能有效去除雜質(zhì)；操作過程污染，如儀器未清潔、環(huán)境不無菌。解決方法：優(yōu)化原料處理流程；重新評估和改進純化方法，增加純化步驟或更換層析介質(zhì)；加強操作規(guī)范，嚴格儀器清潔消毒，保證操作環(huán)境無菌。3.親和層析優(yōu)勢是特異性高，能從復雜體系中快速分離出目標抗體，純化倍數(shù)高，條件溫和；局限性在于配體昂貴，柱子使用壽命有限，對抗體種類有選擇性。離子交換層析優(yōu)勢是分離效率高，可根據(jù)電荷性質(zhì)分離多種蛋白質(zhì)，成本相對低；局限性在于對緩沖液要求高，蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)受多種因素影響，可能導致分離效果不穩(wěn)定。凝膠過濾層析優(yōu)勢是分離過程溫和，可按大小分離蛋白質(zhì)；局限性在于分離效率相對低，柱子體積大，處理量有限。4.生物醫(yī)藥抗體純