(71)申請人廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所代理事務所(普通合伙)取，所述的提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為為提取溶劑，提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為21.一種ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，依次包括下述步1)準確稱取樣品1g置于10mL萃取池中，用正己烷對樣品進行除酯提取，所述的提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為5min,提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%,再以甲醇為提取溶劑，提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為8min,提取次數(shù)為3次；提取完成后將提取液定容至25mL,吸取1.5mL于裝有300mgPSA的2mL離心管中，漩渦2min,15000r/min離心3min,取上清液進行超高效液相分析；2)精密吸取0.3942g·L?1的1mL,采用體積比1:1000的鹽酸和甲醇溶液定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L?1的標準溶液，進樣量分別為0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行測定2次，以峰面積對質量濃度mg進行線性回歸，在2.根據(jù)權利要求1所述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的萃取儀為ASE350。3.根據(jù)權利要求1所述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的超高效液相色譜儀為Agilent1290超高效液相色譜儀。4.根據(jù)權利要求1所述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的分析柱ACEExcel2C18-PFP,流速0.5ml·min?1,柱溫35℃,檢測波長210nm,進樣量5.根據(jù)權利要求1所述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，其特征在于，所述的標準儲備液的制備方法是精密稱定鹽酸麻黃堿對照品19.77mg,用體積比1:1000的鹽酸和甲醇溶液定容至50mL容量瓶中，制成0.3942g·L?1的標準儲備液。3ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法[0001]本發(fā)明公開了一種鹽酸麻黃堿的測定方法，具體地說，是采用ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法；屬于化學檢測技術領域。背景技術黃堿?！吨袊幍洹?015年版一部規(guī)定通宣理肺[0003]快速溶劑萃取(ASE)是指在密閉容器內于高溫(50～200℃)和高壓(500~3000psi)條件下，在短時間內，用有機溶劑提取固體或半固體樣品的一種新型樣品前處理短、萃取效率高、操作簡單方便、安全和自動化程度高等優(yōu)點。國外已有學者將這項技術應用于植物藥定量和定性分析中樣品的前處理，但在中成藥有效成分的定量和定性分析中作為樣品的前處理方法應用較少，用于通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿提取的研究未見報道味。發(fā)明內容[0004]本發(fā)明的目的是提供一種提取時間短，且重現(xiàn)性好，提取完全并且可控性強的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法。[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案是這樣的：[0007]1)精密稱定鹽酸麻黃堿對照品19.77mg,用體積比1:1000的鹽酸和甲醇溶液定容[0008]2)準確稱取樣品1g置于10mL萃取池中，用正己烷對樣品進行除酯提取，所述的提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為5min,提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%,再以甲醇為提取溶劑，提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為8min,提取次數(shù)為3次；提取完成后將提取液定容至液進行超高效液相分析；[0009]3)精密吸取0.3942g·L?1的標準儲備液1mL,采用體積比1:1000的鹽酸和甲醇溶液定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L?1的標準溶液，進樣量分別為0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行測定2次，以峰面積對質量濃度mg進行線性回歸，在0.00315～0.0189g·L?1線性[0010]進一步的，上述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，所述的萃取儀[0011]進一步的，上述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，所述的超高效4液相色譜儀為Agilent1290超高效液相色譜儀。[0012]進一步的，上述的ASE-UPLC測定通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的方法，所述的分析柱ACEExcel2C18-PFP,流速0.5ml·min?1,柱溫35℃,檢測波長210nm,進樣量為1μL;流動相A為乙腈，流動相B為0.1%磷酸溶液；梯度洗脫程序：0～3.5min,2%A、98%B;3.5～4min,[0013]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的ASE法極大限度地節(jié)省了提取時間，由原來的48h以上，縮短為40min,且省略了繁瑣的萃取凈化步驟及揮干的過程，減少了鹽酸麻黃堿在提取和后處理中的降解及損失，保證結果的可靠性。ASE法提取通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿可行，適用于通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的提取。附圖說明[0014]圖1是標準品液相色譜圖；[0015]圖2通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿高效液相色譜圖。具體實施方式[0016]下面結合具體實施方式，對本發(fā)明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權利要求保護范圍所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權利要求保護范圍之內。[0017]本發(fā)明所涉及的到百分含量濃度，除特殊說明外，溶質為液體的均為體積濃度，溶質為固定的均為質量濃度。[0018]實施例1測器，二元梯度泵，自動進樣器(美國Agilent公司);XA205DU電子天平(瑞士梅特勒公司);3K15高速離心機(德國Sigma);ClassicUVF超純水器(英國ELGA)。[0021]鹽酸麻黃堿標準品(中國食品藥品檢定研究院，批號171241-201007);乙腈(色譜純，德國Merck公司),其余試劑均為分析純；[0022]2實驗部分[0023]2.1樣品來源[0024]通宣理肺丸(大蜜丸，由廣西梧州三鶴藥業(yè)有限公司生產，批號140201、140803、[0025]2.2標準溶液配制[0026]標準儲備液：精密稱定鹽酸麻黃堿對照品19.77mg,用鹽酸甲醇溶液(1→1000)定[0027]2.3色譜條件[0028]分析柱ACEExcel2C18-PFP(2.1mm×75mm,2μm),流速0.5ml·min?1,柱溫35℃,檢5[0029]2.4實驗方法[0030]ASE法：準確稱取樣品1g置于10mL萃取池中，用正己烷對樣品進行除酯(提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為5min,提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%)后以甲醇為提取溶劑，提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為8min,提取次數(shù)為3次。提取完成后將提取液定容至25mL,吸取1.5mL于裝有300mgPSA的2mL離心管中，漩渦2min,15000r/min離心3min,取上清液進行超高效液相分析。[0031]3結果與討論[0032]3.1液相色譜條件的選擇[0033]《中國藥典》一部中使用0.02mol·L?1磷酸二氫鉀(含0.2%三乙胺，磷酸調節(jié)PH至2.7)作為水相流動相，考慮到使用緩沖鹽以及調節(jié)流動相酸度的不便，嘗試用0.1%磷酸作為水相流動相，分別采用PhenomenexsynergiPolar-RP80A(4.6mm×250mm,4μm)、[0034]3.2單因素考察[0035]取批號為150702作為考察樣品，影響ASE效率的因素有提取溶劑、提取溫度、提取時間、提取次數(shù)等。本實驗考察了這些因素對通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿提取效率的影響，并采用正交實驗對提取條件進行優(yōu)化，當考察某個單因素時，只改變該因素的條件，其他條件不變。提取參數(shù)的考察均以鹽酸麻黃堿HPLC測定含量為評[0036]3.2.1提取溶劑和取樣量的選擇：準確稱取通宣理肺丸樣品2g,分別用正丁醇、乙酸乙酯、氨水-正丁醇、氨水-乙酸乙酯、氨水-乙醇-乙酸乙酯(3:10:90)、1.44%磷酸、堿性甲醇(pH8～9)、甲醇作為提取溶劑，在100℃下萃取5min,萃取3次，考察不同提取溶劑對鹽酸麻黃堿提取效果的影響。[0037]磷酸或堿性甲醇提取效率較高，但基質影響較大；氨水-乙醇-乙酸乙酯(3:10:90)條件下提取效率較高且基質影響較小，但考慮酸、堿溶劑對ASE儀器的影響，故選擇甲醇作為提取溶劑。[0038]由于實驗使用的10mL萃取池溶劑沖洗體積有限，對于2g樣品提取會不充分，因此選擇取樣量為1g。[0039]3.2.2提取溫度的選擇：準確稱取通宣理肺丸樣品1g,用甲醇作為提取溶劑，在80℃、100℃、120℃下分別提取3次，每次8min,考察不同提取溫度對鹽酸麻黃堿提取效果的影堿受熱易降解，考慮降低溫度以提高提取效率。[0040]由于甲醇的沸點約為64℃,結合ASE的高壓穿透性，故選擇70℃、80℃和90℃對提取方法進行摸索，考察提取溫度對通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的提取效率影響。準確稱取通宣理肺丸1g,用甲醇作為提取溶劑，在70℃、80℃和90℃下分別提取3次，每次8min,考察不同提取溫度對鹽酸麻黃堿提取效果的影響。結果見表1。[0041]表1不同提取溫度對鹽酸麻黃堿的提取效果6提取溫度/℃取樣量/g含量(mg/丸)由以上數(shù)據(jù)可見，溫度對提取效率的影響較大，在考慮鹽酸麻黃堿的提取效率時，應充分考慮其高溫降解的影響及其所使用溶劑的熔沸點。時間對提取效率也有一定的影甲醇可確定溫度在80℃左右，進一步優(yōu)化提取溫度與提取時間、循環(huán)次數(shù)、雜質凈化等因[0044]3.3ASE提取正交實驗結果：根據(jù)以上單因素試驗的結果，確定甲醇為提取溶劑，采用L?(3?)正交試驗，以提取溫度/℃(A)、提取時間/min(B)和提取次數(shù)/次(C)這3個因素對通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿提取含量的影響，每個因素三個水平，進行ASE法提取通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿的條件優(yōu)化。正交試驗結果見表2,方差分析結果見表3。[0045]表2L?(3?)正交試驗表及結果分析含量(mg/丸)ABC空白152128323434533584162275428823931R[0047]表3方差分析表7因素自由度提取溫度/℃(A)2提取時間/min(B)2提取次數(shù)/次(C)2誤差2[0049]由正交試驗結果可知，影響通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿ASE提取效果的各因素主次順序為：C(提取次數(shù))>B(提取時間)>A(提取溫度),得到最佳提取條件為：A?B?C?,即稱樣量為1g,甲醇作為提取溶劑，提取溫度為80℃,提取時間為8min,提取次數(shù)3次。[0050]3.4雜質凈化方法：由于樣品通宣理肺丸為大蜜丸，以甲醇作為提取溶劑，處方中極性小的酯類成分以及丸劑中糖類雜質溶出較多，基質對鹽酸麻黃堿液相分析干擾較大，需要前處理去掉相應的雜質干擾。[0051]3.4.1小極性雜質凈化方法考察：在《中國藥典》中鹽酸麻黃堿使用了乙醚進行脂溶性成分的去除，由于乙醚不能適用于ASE法，嘗試用正己烷對樣品進行預處理，提取溫度為80℃,靜態(tài)提取時間為5min,提取次數(shù)為1次，沖洗體積100%,結果發(fā)現(xiàn)部分小極性脂類物質被去除，且鹽酸麻黃堿在此條件下沒有損失。[0052]3.4.2糖類雜質凈化方法考察：嘗試在萃取池底部填充一定量的凈化材料，如硅增加，凈化效果越好，但中性氧化鋁和堿性氧化鋁對目標化合物對鹽酸麻黃堿有一定吸附作用，損失率約為15%～18%。PSA(N-丙基乙二胺)吸附糖類物質效果較好，且基本沒有損失，但考慮到在萃取池中直接加PSA的量較大，成本較高，故改用Quechers凈化方法。即對min離心3min,取上清液進行超高效液相分析。[0053]3.4.3凈化量考察：分別吸取1.5mLASE萃取液置于裝有50,100,200,300,400,500mgPSA的2mL凈化管中，漩渦2min,[0054]3.5方法學考察[0055]3.5.1線性關系精密吸取0.3942g·L?1的標準儲備液1mL,用鹽酸甲醇溶液(1→1000)定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L?1的標準溶液。進樣量分別為0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行測定2次，以峰面積(Y)對質量濃度mg(X)進行線性回歸，在0.00315~[0056]3.5.2方法重復性和回收率考察：準確稱取通宣理肺丸(批號：150702)1g共6份，再準確稱取通宣理肺丸(批號：150702)0.5g共6份，精確加入鹽酸麻黃堿標準溶液0.3mL(含鹽酸麻黃堿0.11826mg),按2.5.1方法進行提取及檢測。結果如表4,重復性RSD為3.0%,加標8回收率范圍為92%～102%,由于