公司46003小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽本發(fā)明公開小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃相色譜法進行測定，采用AgilentZ0RBAX酸二氫鈉溶液-甲醇為流動相A,0.002~洗脫梯度為0～10min,流動相A90～100v/v%,~100v/v%降至10～0v/v%,流動相B由10～0v/21.小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，采用高效液相色譜法進行測定，其特征在于，色譜條件為：固定相：AgilentZORBAX流動相A:0.01～0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇；流動相B:0.002～0.004mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇；洗脫梯度：0～10min,流動相A90～100v/v%,流動相B10～0v/v%;10～30min,流動相A由90～100v/v%降至10～0v/v%,流動相B由10～0v/v%升至90～100v/v%。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，其特征在于，檢測波長為225～235nm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，其特征在于，色譜柱填料粒徑5μm,內(nèi)徑4.6mm,長度150mm。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，其特征在于，流速0.8～1.2mL/min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方6.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，其特征在于，流動相A為體積比70～80:20～30的0.01～0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，其特征在于，流動相B為體積比20～30:70～80的0.002～0.004mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇。3小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于藥物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。背景技術(shù)支氣管肺炎屬痰熱壅肺證者。[0003]麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf、中麻黃EphedraintermediaSchrenketC.A.Mey.或木賊麻黃EphedraequisetinaBge.的干燥草質(zhì)莖。麻黃中含有生堿、偽麻黃堿、麻黃次堿、麻黃惡烷等，其中麻黃堿和偽麻黃堿是小兒肺熱咳喘顆粒中平喘功能的有效成分。麻黃堿(又稱麻黃素)是左旋體或消旋體，而偽麻黃堿(又稱偽麻黃素)則是麻黃堿的右旋體，二者互為異構(gòu)體，二者溶解性、酸堿性等方面的性質(zhì)不同。鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分別是麻黃堿、偽麻黃堿的鹽酸鹽。[0004]麻黃堿與偽麻黃堿為麻黃中比重較大的生物堿，二者在小兒肺熱咳喘顆粒等復(fù)方制劑中會同時出現(xiàn)。而復(fù)方制劑的組分復(fù)雜，在同時檢測麻黃堿和偽麻黃堿時其他共存組分會對檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。因此，若能提供一種可同時檢測小兒肺熱咳喘顆粒中麻黃堿和偽麻黃堿又能有效屏蔽其他共存組分干擾的方法，這對于小兒肺熱咳喘顆粒的質(zhì)量控制具有重要的促進作用。[0005]經(jīng)檢索，發(fā)現(xiàn)涉及小兒肺熱咳喘顆粒中麻黃堿和偽麻黃堿含量測定的相關(guān)報道并不多見，其中“HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量”(太成梅等，2010)采用AgilentXDB-C18柱，流動相為乙腈-0.2%磷酸(3:97),檢測波長210nm。結(jié)果顯示該方法可用于該制劑的質(zhì)量控制。但其樣品圖譜中顯示存在明顯的雜質(zhì)峰，且與功效成分的色譜峰較為接近，這些雜質(zhì)峰的存在將會影響麻黃堿和偽麻黃堿含量檢測的準前尚未發(fā)現(xiàn)能夠使用C8柱進行小兒肺熱咳喘顆粒中麻黃堿和偽麻黃堿含量測定的例子。發(fā)明內(nèi)容[0006]鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種采用HPLC進行小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。[0007]本發(fā)明技術(shù)方案主要包括以下內(nèi)容：[0008]小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法，采用高效液相4[0010]流動相A:0.01～0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇；[0011]流動相B:0.002～0.004mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇；[0012]洗脫梯度：0～10min,流動相A90～100v/v%,流動相B10～0v/v%;10～30min,流動相A由90～100v/v%降至10～0v/v%,流動相B由10～0v/v%升至90～100v/v%。完成以上程序后為使系統(tǒng)重新恢復(fù)初始平衡以便進下一針樣品，在上述梯度之后可繼續(xù)進行如下程序30～35min,流動相A由0～10v/v%升至90～100v/v%,流動相B由90～100v/v%降至0~10v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min可進下一針樣品。[0013]優(yōu)選的，檢測波長為225～235nm。[0017]優(yōu)選的，流動相A為體積比70～80:20～30的0.01～0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇。[0018]優(yōu)選的，流動相B為體積比20～30:70～80的0.002～0.004mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇。[0020]本發(fā)明提出一種全新的色譜條件，首次采用AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱，以0.01～0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇為流動相A,0.002～0.004mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇為流動相B,并通過梯度洗脫的方式進行小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定。結(jié)果顯示麻黃堿、偽麻黃堿主峰與其前后雜質(zhì)峰的分離度高，各峰之間實現(xiàn)完全分離，理論板數(shù)均大于10000,鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量無明顯變化，能夠?qū)崿F(xiàn)麻黃堿與偽麻黃堿的有效檢測。附圖說明[0021]圖1為實施例1供試品檢測的HPLC圖具體實施方式[0022]為了更好理解本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容，下面提供具體實施例，對本發(fā)明做進一步的說明。[0023]鹽酸麻黃堿對照品：批號：171241-201007;規(guī)格：約100mg;含量：99.7%;由中國藥品生物制品檢定所提供。[0024]鹽酸偽麻黃堿對照品：批號：171237-200807;規(guī)格：約100mg;含量：99.9%;由中國藥品生物制品檢定所提供。[0025]儀器及試劑：島津高效液相色譜儀：LC-20AT流動相輸送泵，SPD-20A紫外檢測器，SIL-10A自動進樣器，LCsolution工作站。島津高效液相色譜儀：LC-10AT流動相輸送泵，[0026]供試小兒肺熱咳喘顆粒的處方：5生石膏金銀花知母麥冬魚腥草制成1000袋[0028]以上十一味中藥，加水煎煮二次，每次1h,合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度約為1.17(60～70℃)的清膏，噴霧干燥，取細粉，加蔗糖粉適量，混勻，制成顆粒，干燥，混勻，制成4000g,即得。[0029]混合對照品溶液的配制：取50μg/mL鹽酸麻黃堿對照品水溶液10mL,置25mL量瓶中，加入0.025g/mL高碘酸溶液1mL和0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5mL,搖勻，放置30min,用0.5M鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH7.0,加甲醇定容，搖勻，即得鹽酸麻黃堿對照品溶液。同法配制鹽酸偽麻黃堿對照品溶液。鹽酸麻黃堿對照品溶液和鹽酸偽麻黃堿對照品溶液等體積混合，得混合對照品溶液。[0030]供試品溶液的配制：取小兒肺熱咳喘顆粒細粉6.0g,加5mol/L氫氧化鈉溶液120mL,搖勻，加氯化鈉7.5g,蒸餾，用預(yù)先盛有0.5mol/L鹽酸溶液5mL的100mL量瓶收集蒸餾液95mL,加水定容，搖勻，量取10mL,置25mL量瓶中，加入0.025g/mL高碘酸溶液1mL和0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5mL,搖勻，放置30min,用0.5M鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH7.0,加甲醇定容，搖勻。[0031]實施例1小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0032]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0033]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0034]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0035]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0036]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0037]檢測波長：230nm;6[0040]實施例2小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0041]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0042]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0043]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(70:30);[0044]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(20:70);[0045]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0046]檢測波長：230nm;[0049]實施例3小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0050]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0051]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0052]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(80:20);[0053]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(30:70);[0054]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0055]檢測波長：230nm;[0058]實施例4小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0059]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0060]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0061]流動相A:0.01mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0062]流動相B:0.004mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0063]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0067]實施例5小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0068]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0069]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);7[0070]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0071]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0072]洗脫梯度：0～10min,流動相A90v/v%,流動相B10v/v%;10～30min,流動相A由90v/v%降至10v/v%,流動相B由10v/v%升至90v/v%,30～35min,流動相A由10v/v%升至90v/v%,流動相B由90v/v%降至10v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0076]實施例6小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0077]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0078]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0079]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0080]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0081]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0085]實施例7小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0086]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0087]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0088]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0089]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0090]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0094]實施例8小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0095]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0096]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0097]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0098]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0099]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v/v%,流動相BOv/v%;10～30min,流動相A由CN113687005A說明書6/9頁8100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0100]檢測波長：230nm;[0101]流速：0.8mL/min;[0103]實施例9小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0104]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0105]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm);[0106]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0107]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0109]檢測波長：230nm;[0110]流速：1.2mL/min;[0112]實施例10小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0113]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0114]固定相：Waters[0115]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0116]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0118]檢測波長：230nm;[0119]流速：1.0mL/min;[0121]實施例11小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0122]采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件為：[0123]固定相：AgilentZORBAXEclipseXDB-C8色譜柱(4.6×150m[0124]流動相A:0.02mol·L?1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(75:25);[0125]流動相B:0.002mol·L?1磷酸二氫鈉液-甲醇(25:75);[0126]等度洗脫，流動相A:流動相B=50:50。[0127]檢測波長：230nm;[0128]流速：1.0mL/min;9[0130]實施例12小兒肺熱咳喘顆粒中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法[0133]流動相A:25%甲醇水；[0134]流動相B:75%甲醇水；[0135]洗脫梯度：0～10min,流動相A100v100v/v%降至0v/v%,流動相B由0v/v%升至100v/v%,30～35min,流動相A由0v/v%升至100v/v%,流動相B由100v/v%降至0v/v%,35min后繼續(xù)運行至少10min使系統(tǒng)平衡后可進下一針樣品。[0139]方法學(xué)研究：[0140]1.耐用性試驗[0141]分別考察檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20%以及不同色譜柱、不同流動相、不同洗脫程序進行測定時，儀器色譜行為的變化。具體的試驗方法見表1,試驗結(jié)果見表[0142]測定法：分別采用前述實施例的色譜條件進行測定。按外標法計算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。[0143]表1耐用性試驗條件變化范圍波長的變化225nm～235nm(實施例6、7)流速的變化0.8～1.2ml/min(實施例8、9)色譜柱的變化實施例10實施例5、11流動相的變化實施例2～4、12[0145]注：以上變化均以實施例1為對比[0146]表2耐用性試驗結(jié)果鹽酸